DOC316.53.

01474
TPH (hidrocarburos totales de petróleo)
inmunoensayo 1 10050 método

Alcance y aplicación: Para el suelo y el agua.

1 Esta prueba es semi-cuantitativo. Los resultados se muestran como más o menos que el valor umbral utilizado.

Examen de preparación

Antes de empezar

analiza Este método para TPH en muestras de suelo o de agua. Para análisis de suelos, hacer el procedimiento de extracción del suelo antes de que el procedimiento de inmunoensayo.
Para el análisis de agua, comenzar con el procedimiento de inmunoensayo. La prueba requiere aproximadamente 20 a 30 minutos para el análisis completo.

Los instrumentos de inmunoensayo dan una lectura en términos de absorbancia. Usar la lectura de la absorbancia para comparar muestras de los calibradores.

Antes de que el procedimiento se inicia, lea el procedimiento completo. Identificar y preparar todos los reactivos necesarios, cubetas y otros aparatos, a continuación, iniciar el
procedimiento.

El tiempo es muy importante en este procedimiento. Siga las instrucciones cuidadosamente.

Es muy importante utilizar una técnica consistente para mezclar la solución en las cubetas. Referirse a Uso de la cremallera microcubeta 12-mm en la página 6. Si las cubetas se

mezclan de forma individual, los resultados pueden ser menos consistente. Tenga cuidado con las cubetas. Un cero en las superficies de la cubeta interior o exterior puede causar

resultados incorrectos. Limpiar cuidadosamente las superficies exteriores con un paño limpio, absorbente o tejido antes del uso.

cubetas de anticuerpo y el conjugado de enzima se hacen en lotes emparejados. No mezclar lotes de reactivos. Mantenga la solución

de revelado de color de la luz solar directa para evitar el deterioro.

El bastidor de cubeta puede ser invertida con las cubetas en el bastidor. Esto permite al usuario preparar muchas muestras al mismo tiempo. Las cubetas se quedan en el bastidor
hasta que los resultados se leen en el instrumento.

La temperatura recomendada para almacenamiento de reactivos es de 4 ° C (39,2 ° F). Deje que el aumento de la temperatura de reactivo a la temperatura ambiente antes del análisis.

El suelo Extractante contiene alcohol metílico, que es venenoso e inflamable. Revisar las Hojas de Datos de Seguridad (MSDS / SDS) para los productos químicos que se utilizan.

Utilice el equipo de protección personal recomendado. Cada conjunto de reactivos tiene 20 cubetas de anticuerpos. Utilice una cubeta de anticuerpo para cada calibrador y cada

muestra. Las cubetas no son reutilizables.

Use guantes de nitrilo de protección para este procedimiento.

Revisar las Hojas de Datos de Seguridad (MSDS / SDS) para los productos químicos que se utilizan. Utilice el equipo de protección personal recomendado.

Disponer de soluciones reaccionar de acuerdo con las regulaciones locales, estatales y federales. Consulte las Hojas de Datos de Seguridad para información sobre cómo desechar los reactivos no

utilizados. Se refieren a la salud y seguridad del personal del medio ambiente, para su instalación y / o agencias reguladoras locales para obtener más información sobre cómo desechar.

Elementos que deben recogerse

Descripción Cantidad

TPH juego de reactivos 1

Gorras, boca de descarga basculante 1

Cilindro, graduado de 10 mL 1

Marcador, de laboratorio 1

Pipet, TenSette, 0,1-1,0 ml 1

puntas de pipeta, para pipeta TenSette, 0,1-1,0 ml 1

1
Artículos para recoger (continuación)

Descripción Cantidad

Estante, por 12 mm Micro Cubetas 1

Cucharada, 5 g 1

kit de extracción de suelos varía

Agua, desionizada varía

Wipes, desechable 1

pipeta Wiretrol 1

Referirse a Consumibles y artículos de reemplazo en la página 9 para obtener información de la orden.

recogida y almacenamiento de la muestra

• Analizar las muestras tan pronto como sea posible para obtener los mejores resultados.

• Si es necesario el almacenamiento de la muestra, recoger las muestras en recipientes de vidrio o de PTFE. Limpiar los recipientes
con agua y jabón, y luego enjuagar los recipientes con metanol. tapas Uso PTFE-rayado para los contenedores. Si las tapas de
PTFE forrado no están disponibles, use papel de aluminio como un revestimiento de la tapa sustituto. Enjuague el papel de aluminio
con metanol antes de su uso.

• Para las muestras de agua, llenar completamente el recipiente (sin espacio de cabeza) y apretar inmediatamente el tapón.

• Mantener muestras de suelo en almacenamiento a 6 ° C (43 ° F) para un máximo de 14 días.

• Mantener las muestras de agua en el almacenamiento durante un máximo de 24 horas. Coloque la muestra en un baño de hielo o un

refrigerador para limitar la pérdida de compuestos volátiles.

El uso de la pipeta Wiretrol

El Wiretrol Pipet mide con precisión pequeñas cantidades de líquidos. El Wiretrol Pipet tiene dos partes: un émbolo de
PTFE con punta y un tubo capilar calibrado. El émbolo puede ser utilizado muchas veces. Desechar los tubos capilares
después de un uso.

1. Asegúrese de que la punta del
émbolo está mojado con el líquido.
Con cuidado, inserte la punta del
émbolo en el extremo del tubo capilar
con la banda de color.
2. Empuje la punta del émbolo al otro
extremo del tubo capilar. Pare cuando la
punta del émbolo apenas se extiende
más allá del extremo del tubo capilar.
3. Insertar el tubo capilar por debajo de
la superficie del líquido. Lenta y
suavemente, tire del émbolo hacia arriba
hasta la parte inferior de la punta del
émbolo alcanza la línea de volumen
aplicable. Toca el extremo del tubo a un
lado del recipiente para liberar gotas que
quedan en la punta del tubo capilar.
4. Para liberar el líquido, inserte la
punta del tubo capilar por debajo de la
superficie de la solución de
recepción, y empuje el émbolo hacia
abajo con un movimiento suave.
Cambiar tubos capilares para cada
calibrador y muestra.

2 TPH en el suelo, método de inmunoensayo

procedimiento de extracción del suelo
1. Pesar 10 g de suelo en el bote de
plástico de pesaje.
5. Ponga la tapa en el frasco de extracción
con fuerza. Agitar vigorosamente durante 1
minuto.
TPH en el suelo, método de inmunoensayo
2. Con cuidado, vierta el suelo en un
vial de extracción.
6. Deje que las partículas se depositan durante
un mínimo de 1 minuto. abrir cuidadosamente
el frasco de extracción.
3. Utilice el 5 - gramo cucharada para
agregar una cucharada de sulfato de sodio
al vial de extracción.
7. Utilice la pipeta desechable para
eliminar la 1,0 a 1,5 ml de la parte
superior de la capa de líquido. Añadir
el líquido eliminado al barril filtración.
No utilice más de
De 1,5 ml. La pipeta puede
medir en 0,25 - incrementos
mL.
4. Utilice el cilindro graduado de añadir
10 ml de suelo Extractante en el vial de
extracción.
8. Ponga el émbolo de filtración en el barril
filtración. Ajuste el conjunto de filtración
sobre una mesa o superficie plana. Empuje
firmemente en el émbolo hasta que el
extracto de la muestra es forzado hacia
arriba en el centro del émbolo. Utilice el
filtrado resultante para el procedimiento de
inmunoensayo.
3
procedimiento de inmunoensayo
1. Poner marcas en las cubetas para
identificar las muestras y calibradores.
Seleccionar las concentraciones de
calibrador que son aplicables a la
concentración de muestra esperada.
5. Muestras de terreno: Usar una pipeta de
Wiretrol añadir 50 l de extracto filtrado
desde el procedimiento de extracción del
suelo. Referirse a procedimiento de
extracción del suelo
en la página 3. Utilizar un tubo capilar
separado para cada solución. Mezclar el
contenido de las cubetas después de cada
adición.
Las muestras de agua: Usar una pipeta
de Wiretrol añadir 50 l de metanol en
cada cubeta de muestra. Mezclar el
contenido de las cubetas después de
cada adición.
4 TPH en el suelo, método de inmunoensayo
2. Insertar las cubetas en el bastidor.
Asegúrese de que las cubetas son
seguras. No utilice la fuerza para
ponerlas en posición porque las
cubetas se derrame o pueden ser
difíciles de eliminar.
6. Inmediatamente use una pipeta para
añadir 0,5 ml de TPH conjugado
enzimático en cada calibrador y muestra
cubeta. La misma punta de la pipeta puede
ser utilizado para este paso.
3. Las muestras de suelo: Usar una pipeta
de añadir 0,5 ml de solución diluyente en
cada calibrador y muestra cubeta. La misma
punta de la pipeta puede ser utilizado para
este paso.
Las muestras de agua: Usar una pipeta de
añadir 0,5 ml de cada muestra de agua en una
cubeta de muestra. Utilice una nueva pipeta
para cada muestra.
7. Establecer e iniciar un temporizador de 10
minutos. A 10 - tiempo de reacción minutos
comienza.
4. Utilizar la pipeta Wiretrol añadir
50 l de cada
calibrador a la cubeta calibrador
aplicable. Mezclar las cubetas después
de cada adición. Use un tubo capilar
separado para cada solución.
Tener el aparato necesario listo
para este paso y los siguientes
cuatro pasos. No espere-hacer
estos pasos rápidamente.
8. Inmediatamente mezclar las cubetas
durante 30 segundos. Referirse a Uso de
la cremallera microcubeta 12-mm
en la página 6 para el procedimiento de
mezcla correcta.
9. Después de 5 minutos, mezclar el
contenido de la cremallera una segunda vez
durante 30 segundos.
13. Establecer e iniciar un temporizador de 10
minutos. A 10 - tiempo de reacción minutos
comienza.
17. Deslice la parrilla de ida y vuelta
durante 20 segundos. El color de la
solución cambia de azul a amarillo.
TPH en el suelo, método de inmunoensayo
10. Al final de la 10 - período de reacción
minutos, desechar el contenido de
todas las cubetas en un contenedor de
residuos para su eliminación.
14. Inmediatamente mezclar las cubetas
durante 30 segundos.
18. Coloque el instrumento en el canal
1 o el canal 2. Consulte la
documentación del instrumento.
Asegúrese de que el canal
seleccionado no tiene una calibración
introducida por el usuario.
11. enjuagar completamente cada cubeta con
agua desionizada cuatro veces. Desechar el
contenido en el contenedor de residuos para
su eliminación. A su vez las cubetas y la
cremallera en posición invertida sobre una
toalla de papel para secar. golpee suavemente
las cubetas en la toalla para eliminar el líquido.
15. Después de 5 minutos, mezclar el
contenido de la cremallera una segunda vez
durante 30 segundos.
19. Ponga una marca en una cubeta de
reducción a cero para identificarlo como el
blanco. Llenar la cubeta con agua desionizada.
12. Iniciar el desarrollo del color: El
tiempo es muy importante. Asegúrese de
que las cubetas se encuentran todavía en
posición en el rack. Use la pipeta para
agregar 0,5 ml de solución de revelado en
color en cada anticuerpo cubeta. Utilizar
una punta de pipeta para cada cubeta.
dieciséis. Cuando el temporizador expira,
utilizar una pipeta para añadir 0,5 ml de
solución de parada en cada cubeta con la
misma punta de la pipeta. técnica
consistente es muy importante. Añadir la
solución en la misma secuencia que se
utilizó para la solución de revelado en
color, además.
20. Limpiar todas las
cubetas.
5
21. Inserte el blanco en el soporte 22. Instalar la tapa del instrumento sobre 23. empujar CERO. En la pantalla 24. Limpiar la cubeta que contiene
de la celda. Apunte la flecha de la el soporte de la celda. aparece “0.000”. el primer calibrador.
cubeta hacia el teclado.

25. Inserte el primer calibrador en el 26. Instalar la tapa del instrumento sobre 27. Empuje LEER. Los resultados muestran 28. Leer los valores de absorbancia de
soporte celular. Apunte la flecha de el soporte de la celda. en unidades de absorbancia. Registrar los los restantes calibradores y muestras.
la cubeta hacia el teclado. resultados. Registrar los resultados. Referirse a

Interpretar e informar de los resultados en

la página 7.

interferencias

sustancia interferente nivel de interferencia

El cloro (sólo muestras de agua) Interfiere encima de 2 ppm. Para eliminar el cloro de la muestra, añadir 1 gota de
0,1 N de tiosulfato de sodio por 100 ml de muestra.

Uso de la cremallera microcubeta 12-mm

Usar la cremallera microcubeta para obtener resultados exactos y precisos para el procedimiento de inmunoensayo
durante el análisis de varias muestras a la vez. Referirse a Figura 1 .

Insertar las cubetas en el rack -Utilizar el bastidor microcubeta para sujetar cubetas que se establecen en el bastidor. Antes de que
el procedimiento se inicia, identificar cada cubeta con una muestra o un número calibrador. Inserte correctamente las cubetas en el
bastidor. No fuerce las cubetas en el bastidor debido a que la muestra se derrame o las cubetas puede ser difícil de eliminar. Las
cubetas deben permanecer en la posición que la cremallera se invierte y se dio unos golpecitos con cuidado.

Mezclar la muestra -Poner la rejilla sobre una superficie dura, plana que es al menos el doble de la longitud de la cremallera. Referirse a Figura 1 .

Mantenga un extremo del bastidor, a continuación, deslice vigorosamente el bastidor hacia atrás y adelante a lo largo de su eje durante 30

segundos. El bastidor se mueve a través de una distancia igual a su propia longitud en cada dirección.

6 TPH en el suelo, método de inmunoensayo

 Figura bastidor 1 microcubeta

Interpretar e informar de los resultados

Hay una relación inversa entre la concentración de TPH y la lectura de la absorbancia. En otras palabras, cuanto
mayor sea la lectura, más baja es la concentración de TPH. Referirse a tabla 1 .

Tabla 1 la concentración de TPH relativa

Si la lectura de absorbancia de la muestra es ... entonces la concentración de la muestra es ...

Más pequeña que la lectura del calibrador Mayor que la lectura del calibrador

Mayor que la lectura del calibrador Más pequeña que la lectura del calibrador

Por ejemplo, si las lecturas son:

• TPH Calibrador 1 (20 ppm como combustible diesel): 0,480 Abs

• TPH calibrador 2 (50 ppm como combustible diesel): 0,360 Abs

• Muestra 1: 0,200 Abs

• Muestra 2: 0,400 Abs
• Muestra 3: 0,550 Abs La interpretación

de una muestra de suelo:

• Muestra 1: La lectura de la muestra es más pequeña que las lecturas de los dos calibradores. La concentración de la muestra de
TPH es más grande que el combustible diesel 50 ppm.

• Muestra 2: La lectura de la muestra está entre las lecturas para los calibradores. La concentración de la
muestra de TPH es de entre 20 ppm y 50 ppm combustible diesel.
• Muestra 3: La lectura de la muestra es más grande que las lecturas de los dos calibradores. La concentración de la

muestra de TPH es menor que el combustible diesel 20 ppm. La interpretación de una muestra de agua:

• Muestra 1: La lectura de la muestra es más pequeña que las lecturas de los dos calibradores. La concentración de la muestra
de en la muestra es mayor que el combustible diesel 5 ppm.

• Muestra 2: La lectura de la muestra está entre las lecturas para los calibradores. La concentración de la
muestra de TPH es entre el combustible diesel 2 y 5 ppm.

TPH en el suelo, método de inmunoensayo 7

 • Muestra 3: La lectura de la muestra es más grande que las lecturas de los dos calibradores. La concentración de la muestra
de TPH es menor que el combustible diesel 2 ppm.

almacenamiento de reactivos y la manipulación

1. Siempre use guantes y gafas de protección.

2. Para el almacenamiento a largo plazo, asegúrese de que los reactivos no están en la luz solar directa. Mantener

el reactivo fijado en 4 ° C (39,2 ° F) cuando no está en uso. Calentar los reactivos a temperatura ambiente antes de
su uso.

3. Cuando no está en uso, sellar la bolsa de aluminio que contiene las cubetas de anticuerpos.

4. Si la solución de parada está en contacto con los ojos, enjuague completamente durante 15 minutos con agua fría y busque
atención médica inmediata.

Sensibilidad

Los anticuerpos utilizados en el kit de prueba de TPH reaccionan con una variedad de compuestos que se encuentran en los combustibles

derivados del petróleo. Cada calibrador TPH se formula para mostrar una concentración conocida de combustible diesel. Referirse a Tabla 2 y

Tabla 3 usar calibradores para otros compuestos de los TPH. Por ejemplo, para utilizar los calibradores de TPH para la gasolina, encontrar

"Gasolina" en la columna de la tabla correcta. Entonces, leer a través de la fila para encontrar el ppm de que hidrocarburo para cada

calibrador. Para la gasolina, TPH calibrador 1 = 15 ppm, TPH calibrador 2 = 35 ppm, etc.

Tabla 2 compuestos de los TPH en el suelo

Compuesto TPH calibrador 1 TPH calibrador 2 calibrador TPH 3 (ppm) calibrador TPH 4 (ppm)
(ppm) (ppm)

Combustible diesel 20 50 100 200

Gasolina 15 35 70 140

Queroseno 35 75 140 250

Benceno 20 45 85 160

tolueno 15 30 50 90

Etilbencina 5 15 35 75

m-xileno 9 20 35 70

o-Xileno 10 20 40 80

p-xileno 3 5 9 dieciséis

BTEX 5 15 25 45

Tabla 3 compuestos de los TPH en agua

Compuesto TPH calibrador 1 TPH calibrador 2 calibrador TPH 3 calibrador TPH 4

(ppm) (ppm) (ppm) (ppm)

Combustible diesel 2 5 10 20

Gasolina 1.5 3.5 4 14

Queroseno 3.5 7.5 14 24

Benceno 2 4.5 8.5 dieciséis

tolueno 1.5 3 5 9

Etilbencina 0.5 1.5 3.5 7.5

m-xileno 0.9 2 3.5 7

o-Xileno 1 2 4 8

p-xileno 0.3 0.5 0.9 dieciséis

BTEX 0.5 1.5 2.5 4.5

8 TPH en el suelo, método de inmunoensayo

Se diluye una muestra de agua

Para mayores niveles de TPH en agua que los que se muestran en Tabla 3 en la página 8, diluir la muestra con agua desionizada. Para
diluir una muestra, consulte Tabla 4 , A continuación, añadir que el volumen de muestra a un cilindro graduado y se diluye hasta 50 ml
con agua desionizada. Hacer la prueba. Referirse a Tabla 3 en la página 8 de nuevo para multiplicar los niveles de calibrador por el
multiplicador de dilución. Por ejemplo, si una muestra de agua 0,5 ml se diluye a 50 ml, los niveles de calibrador en Tabla 3

en la página 8 para el combustible diesel son de aproximadamente 200, 500, 1.000 y 2.000 ppm.

La Tabla 4 multiplicadores de dilución

ml de muestra multiplicador de dilución

0.5 100

1.0 50

2.0 25

5.0 10

10.0 5

25.0 2

Resumen de método
Este método es la proyección semi-cuantitativo para TPH basado en umbrales como el combustible diesel en las
concentraciones que siguen:

• Soil-20, 50, 100, 200 ppm como el combustible diesel

• Water-2, 5, 10, 20 ppm como el combustible diesel

pruebas de inmunoensayo utilizan reacciones antígeno / anticuerpo para detectar compuestos orgánicos específicos en el agua y el suelo.
Las paredes de las cubetas de plástico se colocan en capas con anticuerpos que son específicos para la atrazina. Los anticuerpos eliminan
selectivamente TPH a partir de matrices de muestras complejas. Una muestra preparada y un reactivo con moléculas de enzima-conjugado
(moléculas de analito unidas a moléculas de una enzima) se añaden al anticuerpo cubetas. Durante la incubación, moléculas de
enzima-conjugado y TPH compiten por los sitios de los anticuerpos. Las muestras con mayores niveles de analito tienen más sitios de
anticuerpos ocupados por el analito y un menor número de sitios de anticuerpos ocupados por las moléculas de enzima-conjugado. Después
de la incubación, la muestra y el conjugado enzima no unido se enjuagan de la cubeta y se añade un reactivo de revelado de color. La
enzima en el conjugado cataliza el desarrollo de color. Por lo tanto, hay una relación inversa entre la intensidad del color y la cantidad de TPH
en la muestra. El color resultante se compara entonces con un calibrador para determinar si la concentración de analito en la muestra es
mayor o menor que los niveles de umbral. La concentración de TPH es inversamente proporcional al desarrollo-el color más claro es el color,
mayor es la concentración de TPH. Los resultados del ensayo se miden a 450 nm. cuanto mayor es la concentración de TPH. Los resultados
del ensayo se miden a 450 nm. cuanto mayor es la concentración de TPH. Los resultados del ensayo se miden a 450 nm.

Consumibles y artículos de reemplazo

Descripción reactivos

requeridos Cantidad / Prueba Unidad Artículo No.

Kit de Extracción de suelos 1 cada 2775100

TPH juego de reactivos 1 20 cubetas 2774300

Agua, desionizada varía 500 ml 27248

TPH en el suelo, método de inmunoensayo 9

aparato requerido

Descripción Cantidad / prueba Unidad Artículo No.

Adaptador para cubetas de 12 mm 1 cada 5954610

Equilibrio, portable, 300 g de capacidad 1 cada 2796900

Caps, flip caño (para 500 ml botella de agua desionizada) 1 2 / PKG 2581802

Marcador, de laboratorio 1 cada 2092000

Guantes, nitrilo, medio 1 100 / PKG 2550502

Pipeta, TenSette ®, 0,1-1,0 ml 1 cada 1970001

puntas de pipeta, para TenSette ® Pipet, 0,1-1,0 ml 2 50 / PKG 2185696

Pipeta, Wiretrol ®, 10-50 l 1 cada 2852200

Pipeta, Wiretrol ®, 50-1000 l 1 cada 2568905

Estante, por 12 mm Micro Cubetas 1 cada 4879910

gafas de seguridad, ventilados 1 cada 2550700

cucharada del suelo, 5-g, 4,25-cc 1 20 / PKG 2657205

Temporizador, hablando 1 cada 2764400

Wipes, desechable 1 280 / PKG 2097000

Soil kit de extracción de recarga, por 2775100, incluye: 1 cada 2775200

Cuentagotas, LDPE, 0,5 y 1,0 ml 1 20 / PKG 2124720

El conjunto de filtro y el barril 1 20 / PKG 2567620

El sulfato de sodio, anhidro 1 250 g 709929

solución de extracción del suelo 1 200 ml 2567729

recipiente de la muestra del suelo 1 20 / PKG 2592920

recipiente pesado, de 8,9 cm cuadrados 1 20 / PKG 2179020

Espátula, desechable 1 2 / PKG 2569320

reactivos opcionales y aparatos

Descripción Unidad Artículo No.

Cilindro graduado, 10 ml cada 108138

Sodio solución de tiosulfato, 0,1 N 100 ml MDB 32332

ASISTENCIA FORTECHNICAL, información sobre los precios y el pedido: HACH EMPRESA SEDE MUNDIAL
En los EE.UU. - Fuera de
Allos
Llamada 800-227-4224
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