Introducción

Los virus son elementos genéticos que no pueden replicarse independientemente,

necesitan de una célula viva llamada célula hospedadora. Por lo tanto, los virus
son parásitos intracelulares obligados que tienen que infectar a una célula viva
adecuada para llevar a cabo su ciclo de replicación.

Existen virus que infectan exclusivamente a las bacterias y son llamados

bacteriófagos cuya estructura consta de proteínas dispuestas en una
nucleocapside, una vaina (esta puede ser contráctil o no) y pueden o no tener
cola. El material genético que contienen puede ser DNA o RNA.

Los tamaños de estos virus van de los 20nm a los 200nm. Los bacteriófagos son
inertes metabólicamente fuera de la bacteria, sin embargo, hay bacteriófagos que
contienen enzimas importantes para la infección, por ejemplo, la lisozima que
funciona para hacer un pequeño orificio en la pared celular bacteriana, esto
permite la entrada del DNA o RNA a la célula hospedadora. La lisozima también
es producida en etapas posteriores a la infección, esto para producir lisis en la
bacteria hospedadora.

La replicación es un paso vital para cualquier virus y se realiza con el fin de

producir más viriones. La replicación consta de cinco etapas:

1) Unión (adsorción) del virión; se une a la célula hospedadora susceptible, es

importante mencionar que esta unión es muy específica (receptores
específicos).
2) Penetración (entrada o inyección) del material genético del virus a la célula.
3) Síntesis del ácido nucleico y las proteínas del virus por el metabolismo
celular redirigido por el virus.
4) El ensamble de las cápsides (y los componentes de la membrana en los
virus recubiertos) empaquetamiento de los genomas víricos en nuevos
viriones. Este proceso, en conjunto se llama maduración.
5) Liberación de los viriones maduros de la célula.

Es importante mencionar que tras la infección el virus sufre lo que se conoce como
periodo de eclipse, en el cual las partículas infecciosas no pueden ser detectadas
en un medio de cultivo, el eclipse empieza tan pronto las partículas víricas
desaparecen del entorno por adsorción a las células hospedadoras. No obstante,
las partículas víricas no pueden detectarse a menos que las células sean lisadas
artificialmente para liberarlas. Puesto que los nuevos viriones sintetizados aún no
se encuentran en el exterior de la célula, los periodos de eclipse y maduración
reciben el nombre de periodo de latencia.
El número de viriones liberado se conoce como “tamaño de estallido” y varía en
función del virus y la célula hospedadora concretos y puede ir de unos pocos
hasta varios miles. El tiempo de replicación varía entre 20 y 60 minutos en la
mayoría de los virus bacterianos.

El ciclo de replicación es otro aspecto muy estudiado, pues así se pueden

clasificar los virus en virulentos y temperados los cuales tienen ciclos de
replicación diferentes; para los virulentos el ciclo de replicación consta de todas las
etapas anteriormente mencionadas y la lisis de la célula hospedadora.

Para los virus temperados el ciclo de replicación cambia pues ahora se integra
DNA del fago al cromosoma bacteriano convirtiéndose en profago y la célula
hospedadora en un lisógeno, lo importante de este ciclo es que el fago puede
cambiar el ciclo a lítico para replicarse dentro de la bacteria, esto ocurre la
mayoría de las veces por situaciones de estrés por radiación UV, altas
temperaturas, falta de factores de crecimiento (vitaminas, aminoácidos, dNTPs).

Objetivos

 Conocer algunos aspectos de la metodología empleada en el trabajo con

bacteriófagos.

 Establecer algunas de las propiedades de las partículas fágicas que

permiten su identificación.

 Aislar bacteriófagos a partir de muestras de aguas negras.

 Determinar la cantidad y ciclo de multiplicación de los fagos aislados con

base en su morfología de placa.

Resultados

Tabla 1. Prueba de gota del lisado fágico obtenido de la muestra de aguas negras
y títulos de fagos para las pruebas positivas.

Resultad Númer Título de

Descripción de
Equip Cepa o de Dilució o de bacteriófag
la morfología de
o indicadora prueba n placas os
placa lítica
de gota líticas UFP/mL
Escherichia No se
7 coli B 837 10 0
0 <10 observaron
placas
8 100 0 <10 No se
 observaron
placas
Clara, circular 3
9 100 6 60
mm diámetro
No se
10 100 0 <10 observaron
placas.
No se
11 100 0 <10 observaron
placas
No se
12 100 0 <10 observaron
placas.
7 100 19 190 Placas claras
Placas
8 100 65 650 claras,3mm,
circulares.
Clara, circular
9 100 4 40
5mm diámetro
No se
10 100 0 <10 observaron
Escherichia placas.
coli TG1 Placas
transparentes
circulares de
bordes
11 100 28 2.8X10 2

irregulares
aproximadame
nte de 0.1 cm
de diámetro
12 100 1 <10 Puntiforme.
Bacillus No se
7 subtilis SB19 100 0 <10 observaron
placas
No se
8 100 0 <10 observaron
placas.
No se
9 100 0 <10 observaron
placas.
No se
10 100 0 <10 observaron
placas.
11 100 0 <10 No se
 observaron
placas
No se
12 100 0 <10 observaron
placas
No se
7 100 0 <10 observaron
placas
No se
8 100 0 <10 observaron
placas.
9 Salmonella 100
typhimurium
No se
LT2
10 100 0 <10 observaron
placas.
No se
11 100 0 <10 observaron
placas
12 100 1 <10 Puntiforme.
No se
7 100 0 <10 observaron
placas
No se
8 100 0 <10 observaron
placas.
No se
9 Staphylococc 100 0 <10 observaron
us aureus placas.
No se
10 100 0 <10 observaron
placas.
11 100
No se
12 100 0 <10 observaron
placas
Klebsiella No se
7 pneumoniae 100 0 <10 observaron
placas
8 100 7 70 placas turbias.
No se
9 100 0 <10 observaron
placas.
10 100 0 <10 No se
observaron
 placas.
11 10 0

12 100 2 <10 Puntiforme.

Placas claras
7 100 9 90 con
microcolonias
60 Placas claras,
8 100 6
4mm, circulares.
No se
9 100 0 <10 observaron
placas.
Placas claras,
10 100 7 70
Silvestre redondas, 4mm.
Placas opacas
circulares de
bordes irregulares
11 100 3 30
aproximadamente
de 0.7 cm de
diámetro
No se
12 100 0 <10 observaron
placas.

Tabla 2. Descripción de los lugares donde se obtuvieron las muestras de aguas

negras de la sección 2

Equipo Características del Descripción del lugar Localización del lugar

. agua negra donde se obtuvo la de la toma de muestra
muestra
7 Color café claro, olor Río de aguas Colonias los pinos,
fétido, no contenía municipales, que Naucalpan, Edo Mex
lodo, piedras y atraviesa por varias
ramas. colonias.
8 Color negro, olor - -
fétido.
9 Color marrón- Río que atraviesa Río Mixcoac, Del.
verdoso, olor fétido, zona urbana y es Álvaro Obregón. Toma
sedimento negro. usado como drenaje y de muestra el 11 de
tiradero de desechos. octubre del 2018 a las
9:03 am.
10 Color marrón, olor Coladera del Plan de Agua Prieta
fétido. pocos alcantarillado público #97. col. Plutarco Elias
 residuos sólidos. Calles. Alc. Miguel
Hidalgo
11 Color negro, con un Se tomó del canal de Planta Dulces
olor fuerte a caño. entrada a 1 m de Nombres, N.L.
profundidad Monterrey
10 de octubre del 2018
1:00 p.m
12 Marrón arena, con Se tomó el agua de la Canal de la compañía.
aroma poco ribera, de agua Estado de México.
perceptible. superficial. 09 de octubre del
2018.
12:00 hrs.

Tabla 3. Amplitud de huésped de los fagos T4, M13 y λ.

E Fag Cepa indicadora
q. o E. coli E. E. B. S. S. aureus K.
W3110 coli coli subtil typhimuri pneumoni
(Silvestre) B83 TG is um LT2 ae
7 1 SB19

7 T4 + - - - - - -
8 + - - - - - -
9 λ - + - - + - -
10 - - - - - - -
11 M1 - - + - - - -
12 3 - - + - - - -
Tabla 4. Características generales de los bacteriófagos T4, M13 y λ y de las placas que
formas.

Fago Rasgo Característica Característica de placa

T4 Cápside alargada icosaédrica, vaina Placas claras
contráctil, placa base hexagonal con
Virión cola con fimbrias.
posee DNA de cadena lineal y de
doble cadena de aproximadamente
Ácido nucleico 170 Kpb

Receptor Lipopolisacárido. Porina OmpC

Ciclo explicativo Lítico

Huésped Escherichia coli

Periodo de 23 minutos
 latencia

Virión Filamentoso
DNA de cadena sencilla, circular de
Ácido nucleico 6,407 pb

Receptor Pili F
M13
Placas turbias
Ciclo replicativo No lítico homogéneas

Huésped Escherichia coli

Periodo de
latencia 30 minutos

Virión Cabeza eicosaédrica y cola

DNA de doble cadena, lineal de
Ácido nucleico 48,502 pb
Proteínas transportadoras de maltosa Placas turbias con zonas
Receptor LamB claras
λ
y microcolonias en el
Ciclo replicativo Lítico y lisogénico centro

Huésped Escherichia coli

Periodo de
latencia 35 minutos

Discusión de Resultados
Se realizó el aislamiento de bacteriófagos a partir de diferentes muestras de aguas
negras las cuales fueron colectadas de distintos lugares. En la tabla 2 se
describen las características particulares de cada sitio de muestreo, lo que permite
plantear una hipótesis sobre el tipo de bacterias que hay y el tipo de fagos que
pueden encontrarse en cada una de las muestras.

Amplitud de huésped

En la tabla 3 se encuentran los resultados para amplitud de huésped.

El fago T4 va a reconocer como su receptor a las porinas Omp C de la membrana

de las bacterias. Se esperaría que solo en aquellas que no presentaran estas
estructuras no hubiera infección, como en el caso de B. subtilis y S. aureus ya que
las porinas Omp C se encuentran en la membrana externa de las bacterias gram -
y de algunas gram + que pertenecen al grupo Mycolata. Para el caso de K.
pneumoniae (gram -) ocurre una excepción ya que posee porinas de tipo Omp K.
Sin embargo, hay resultados negativos en aquellas bacterias donde debía ocurrir
lo contrario. Esto puede deberse a que las colisiones entre el fago y el receptor de
la bacteria son altamente específicas. Debido a esta especificidad, el fago tiene
que estar en la orientación correcta para permitir la unión con la célula y que haya
una colisión efectiva. De no ser así, no ocurre la infección y, por lo tanto, se
obtienen falsos negativos.

El fago λ reconoce a la proteína LamB, una proteína transportadora de maltosa

que se encuentra presente en la membrana de externa de las gram (-). Tanto E.
coli como S. typhimurium dan positivo, pero en K. pneumonie no es así.
Probablemente debido a que su cápsula impide que el fago llegue hasta la
membrana de la bacteria.

El fago M13 infecta al linaje K de E. coli debido a que tienen una secuencia similar
en el material genético. El resto de las bacterias no serán afectadas.
Su modo de adsorción es reconociendo a la pilina, proteína que se encuentra en el
pili, es decir, en las bacterias donadoras del factor F. Por ello puede infectar a E.
coli TG1 (F’) que pertenece al linaje K. El resultado negativo será tanto para la
cepa B837 como para la cepa W3110, es F -. La primera pertenece al linaje B y la
segunda es una célula receptora (F-).

Conclusiones

- Los bacteriófagos presentan un alto grado de especificidad entre sus

estructuras de adsorción y el receptor de la célula hospedera.

Referencias

- Yu-Kuo Tsai, Chang-Phone Fung, Jung-Chung Lin, (et. al.), (2011).

Klebsiella pneumoniae Outer Membrane Porins OmpK35 and OmpK36 Play
Roles in both Antimicrobial Resistance and Virulence. Disponible en:
“https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3067157/”
(Consulta:22/2018).