Determinación espectrofotométrica de nitritos en agua

5.1. Objetivos
Aplicar la colorimetría para la determinación de nitritos en una muestra de agua realizando un
calibrado para su determinación.

5.2. Introducción
La colorimetría es una espectrofotometría en la que se mide la absorbancia en la zona del
visible, por lo que es necesario que los compuestos a determinar tengan color. Por ello, puesto
que los nitritos son incoloros, para poder determinarlos hay que transformarlos en un
compuesto coloreado.
El método utilizado para la obtención de color es una modificación del propuesto por Griess.
Básicamente consiste en hacer reaccionar el NO2‘ (incoloro) presente en una muestra de agua
con la sulfanilamida en medio acido, produciéndose un diazocompuesto que, posteriormente,
mediante una reacción de copulación con la N(I-naftil)- etilendiamina dará un compuesto
coloreado.
Los niveles de nitrito que se encuentran en el agua varían mucho según la procedencia de
ésta.

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G mez Benito, C. y Torres Cartas, S. (2017). AnÆlisis instrumental: manual de laboratorio. Valencia, Spain: Editorial
 Anâtisfs instrumental. Manual de laboratorio

En el agua potable la legalidad, marca la ausencia de este compuesto. Sin embargo, en las
aguas vertidas por industrias podemos encontrar niveles muy variados, incluso su- periores a
20 mg/L.
El nitrito es un compuesto que se descompone con facilidad. Por ello, las muestras se han de
conservar en nevera y se les suelen añadir aditivos, como e1 HgCl2. para evitar su
degradaciñn. Ademas, cuando llega la muestra a1 laboratorio, su analisis se ha de realizar lo
antes posible.

5.3. Material
• 6 Matraces aforados de 50 mL
• 1 Matraces aforados de 50 mL
• Pipetas
• Vasos de precipitados
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• Espectrofotñmetro
• Balanza analitica

5.4. Reactivos
• Disolucidn patrñn de nitrito (NO2*) 100 mg/L. Se parte de NaNO2 (Mr 69,00)
patrñn, obtenido al secar la sal de calidad analitica durante 1 h a 110 °C en la estufa.
Conservar en nevera.
• Disolucion de trabajo. Preparar 100 mL de disolucion de 5 mg/L de nitrito. partir de
la disoluciñn patrñn de 100 mg/L.. No conservar esta disoluciñn para los siguientes
dras.
• Disolucion de Sulfanilamida. Pesar 5 g de sulfanilamida, añadirle 50 mL de HCI y
aforan a 500 mL con agua destilada. Se debe desechar cuando adquiere color,
normalmente tras varios meses.
• Disolucifin de N(1-naftil)-etilendiamina. Pesar 0,5 g del reactivo y llevarlo a 500 mL
con agua destilada. Este reactivo se debe conservar en nevera y reem- plazar cuando
cambia de color.

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 Determinaciân espectrofotométrica de nitrttos en
agua

5.5. Procedimiento experimental

5.5.1. Construcciân de la curva de calibrado

Preparar la disolucion de trabajo segñn se indica en el apartado de reactivos. Poste-riormente,
pipetear distintas cantidades de ésta disolucion de trabajo (0, 1, 3, 5, 7 mL) en sendos aforados
de 50 mL. No completar todavia el volumen con agua.

5.5.2. Preparaciân de lv muestra

La muestra, segun su procedencia, necesitara una diluciñn distinta. Asi, por ejemplo, si es
agua del rio o mar, no sera necesaria su dilucion, mientras que en el caso de vertidos habrâ
que probar distintas diluciones. Suponiendo este ultimo caso, comenzar tomando 10 mL de la
muestra y ponerlos en un aforado de 50 mL. No completar todavia el vo-lumen con agua.
Se han de realizar como minimo tres replicas de la dilucion de la muestra.
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5.5.3. Desarrollo del color

Es importante anadir los reactivos para el desarrollo del color a todas las disolucio- nes:
calibrado y diluciones de la muestra.
En primer lugar, añadir 1 mL de la soluciñn de sulfanilamida en todos los aforados, los de la
dilucion de la muestra y los de la curva de calibrado, agitar y dejar reaccionar entre 2 y 8
minutos.
Posteriormente, añadir 1 mL de la soluciñn de N-(I-naftil)-etilendiamina en todos los aforados.
Aparecera un color rojizo en aquello aforados en los que existan nitritos, es decir, en todos los
aforados menos en el blanco. Homogeneizar y deja reaccionar 10 minutos.
Por ultimo, completar ahora el volumen de todos los aforados con agua.

5.5.4. Medida en el espectrofotâmetro

Medir la absorbancia a 543 rim en el espectrofotdmetro de todas las disoluciones: los patrones
y las diluciones de la muestra. Anotar las medidas en vuestro cuaderno de laboratorio.
El color se mantiene estable unas 2 horas.

5.5.5. Tratamiento de dates

Representar los valores de absorbancia-concentraciân del calibrado en papel milime- trado o
en una hoja de calculo, y ajustarlos a una recta.
Calcular la concentracidn de nitritos en la muestra diluida a partir de la ecuacifin del calibrado y
su desviaciñn estandar (ver capitulo 4).

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 Anâtisfs instrumental. Manual de laboratorio

Después, obtener la concentraciñn de nitritos en el agua analizada y calcular su desvia- cion

estândar. Recordar, como se ha comentado en el capitulo 4, que para calcular la desviacidn
estandar de la muestra es necesario tener en cuenta el factor de dilucidn tanto para calcular la
concentraciñn de la muestra como su desviaciñn estandar:

Cmedida X medida ' C uestra X V uestra

Sj•{q uestra ' S medid X

Y el resultado se dard de la siguiente forma:

C muestra s uestra
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5.6. Cuestiones y resultados

l. Antes de poder medir en el espectrofotñmetro, hay que ajustarlo. Explica e1 pro-
cedimiento de ajuste.
2. Calcular la concentracifin de las disoluciones que forman el calibrado y anotar los
resultados experimentales en la siguiente tabla:

Volumen disolucion [NO2 1 Absorbancia

trabajo (mL) mg/L
0,0
1,0
3,0
5,0
7,0

3. Construir la recta de calibrado, representar los puntos y ajustarlos por minimos

cuadrados a la ecuacion de una recta.
4. A partir del valor del coeficiente de regresiñn, comentar si realmente la relaciñn
encontrada entre la concentracion y la absorbancia es lineal
5. Calcular la desviaciñn estandar de la pendiente (sb). Consultar la forma de reali- zarlo en
e1 capitulo 4 {Introducciân a los Métodos Instrumentales).
6. A partir de los datos de absorbancia obtenidos para la dilucion de la muestra, y utilizando
la ecuacion de la recta, calcular la concentracion de nitritos (mg/L).

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 Hclermiiuiciân e:s eclrn[olométrica dc niirilo.s eti aguu

7. Calcular la desviaciñn estandar de la concentracion anterior por dos métodos: a partir dc

los datos dc la rccta dc calibrado y a partir dc los distintos valores dc concentraciñn
obtenidos. (Consultar la forma de realizarlo en el capitulo 4 (/nfrp- due’c'iun a los
Métoâos Instrumvntales).
8. Determinar la concentracion de nitrito en el agua analizada teniendo en cuenta la
diluciñn realizada y calcular su correspondiente desviacisn estandar. Expresar los
resultados en mg/L de nitritos.
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