UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES U.D.C.A.

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE MEDICINA

GUIA 12 V. Noy
BUFFER FLUIDOS BIOLOGICOS

I. OBJETIVOS

• Medir el pH de algunas muestras biológicas.

• Comprobar la capacidad amortiguadora de algunos fluidos biológicos.
• Interpretar y correlacionar los resultados obtenidos según el estado fisiológico o patológico de una
persona.

II. TEÓRIA
La regulación de la composición del ambiente interno en el organismo es esencial para la salud, esto incluye
procesos de control como: Distribución adecuada del agua en el organismo, mantenimiento de pH y
concentración normal de electrolitos.

Una muy limitada variación del medio acido básico es compatible con la vida ya que las variaciones en el
pH sanguíneo producen cambios en el pH intracelular que ocasionan alteraciones estructurales y metabólicas
relacionadas con la conformación proteica y actividad enzimática.
En individuos sanos el control del equilibrio hídrico, electrolítico y ácido básico es realizado por riñones y
pulmones.

a) ¿Qué es una solución tampón o amortiguadora y cuál es la función?

b) En que consiste la capacidad amortiguadora. Explique.
c) Establezca comparación entre la ecuación de Sorensen para calcular pH y la ecuación de Henderson
Hasselbalch
d) Explique los sistemas de amortiguación que utiliza el organismo para mantener el equilibrio ácido
base. ¿Dónde ocurre principalmente la acción amortiguadora de estos sistemas?

III. MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES REACTIVOS MUESTRAS

• Tubos de plástico de fondo • Buffers pH 4 y 7 para • Suero sanguíneo
cónico con tapa (tubos de calibrar pHmetro • Orina*
centrífuga) • Buffer acetato 0.5M pH=5 • Saliva
• Tubo de ensayo con tapa • HCl 0.05 M • Agua bidestilada*
• Bureta • NaOH 0.05 M • Suero fisiológico*
• Un cronómetro
• Un potenciómetro (pHmetro) *A cargo de los estudiantes
• Agitador de vidrio
• Gradilla
• Estuche de flebotomía*
• Marcador sharpie o cinta de
enmascar*
• Chicle sin azúcar*
IV. PROCEDIMIENTO
1. Obtención de muestras
a) Muestra de suero sanguíneo en ayunas.
• Utilice 1 tubo con anticoagulante y 2 tubos sin anticoagulante para la extracción de sangre humana
• Centrifugue los dos tubos con muestras de sangre sin anticoagulante.
• Separe el suero en un tubo de ensayo con tapa y haga un pool de suero. El tubo debe estar siempre
tapado.
b) Muestra de saliva.
• Obtener la muestra de saliva por lo menos una hora después de haber consumido alimentos, fumado
o tomado algún medicamento.
• Muerda y mastique el chicle hasta que quede blando. La primera colección de saliva debe ser
tragada o eliminada. No botar el chicle.
• Prenda el cronómetro y continúe con la masticación durante 3 a 5 minutos. Recolecte la saliva en un
tubo de plástico de fondo cónico con tapa.
• Repita el procedimiento anterior hasta obtener unos 10 mL y tape el tubo.
• Centrifugar por 5 minutos la muestra de saliva para que precipiten algunos sólidos.
• Separe la muestra de saliva en otro tubo de plástico de fondo cónico con tapa. Durante todo el
procedimiento debe estar siempre tapado.
c) Muestra de orina
• En un recipiente de plástico recolectar la orina, (volumen aproximado 3/4 partes del frasco).

2. Medición del pH de las muestras

• Calibre el pHmetro (potenciometro) entre los pH 4 y 7.
• Marque 7 tubos de plástico de fondo cónico así: Agua, buffer de acetato 0.5M pH=5, suero
fisiológico, sangre, suero sanguíneo, saliva y orina. Ver tabla.
• En cada tubo coloque 5 ml de la muestra correspondiente y tape.
• Mida directamente el pH en el tubo. Realice este procedimiento con cada muestra. Mantenga los
tubos tapados.
• Escriba el pH obtenido para cada muestra en la tabla de resultados.

3. Comprobación de la capacidad amortiguadora de las muestras biológicas

• Utilice las muestras del experimento anterior.
• Muestra de agua: Con la bureta agregue 1.0 mL de HCl 0.05M. Mezcle y mida el pH.
• Escriba el pH obtenido para cada muestra en la tabla de resultados.
• Repita el procedimiento con cada muestra: Buffer de acetato, suero fisiológico, sangre, suero
sanguíneo, saliva y orina.
• Realice el mismo experimento utilizando NaOH 0.05M.

V. RESULTADOS

Muestras pH teórico pH experimental Adición de 1 mL Adición de 1 mL

de HCl 0.05M NaOH 0.05M
Agua
Buffer Acetato
Suero Fisiológico
Sangre Completa
Suero Sanguíneo
Saliva
Orina
VI. CUESTIONARIO DE APLICACIÓN
1. Consulte los valores de pH para estas sustancias: agua, suero fisiológico, saliva, sangre, linfa, secreción
gástrica, bilis, leche materna, sudor, lágrima, orina, semen.
2. ¿Cuál es la capacidad buffer de la saliva y la orina?
3. ¿Qué es gasometría y cuáles son los componentes y valores de referencia?
4. Explique cuáles son las alteraciones del equilibrio ácido base en el organismo humano.
5. ¿Cuáles son las causas clínicas de las alteraciones del equilibrio ácido base?

VII. BIBLIOGRAFIA
1. Guyton,A.C.Tratado de Fisiología Médica
2. Baynes J.W., Dominiczak Marek H. Bioquímica médica
3. Castaño López M.A. Bioquímica clinica: de la patología al laboratorio. 2008*
4. Gutierrez P. S.J. Fundamentos de Ciencias Básicas aplicadas a la Odontología: Capítulo Aspectos
Bioquímicos de la saliva. Pontificia Universidad javeriana
5. Arronte C. Manual de Prácticas de Bioquímica. Universidad Veracruzana
6. http://www.sdpt.net/CAR/salivabuffe.htm
7. http://es.scribd.com/doc/58711917/Capacidad-Buffer-de-La-Saliva
8. http://www.ncl.ac.uk/dental/oralbiol/oralenv/tutorials/bicarbonate.htm