Cuantificación de proteínas

Integrantes:
María Fernanda Polo Polo
Deiver Alexander Perez Tapias
 Introducción
 Los seres vivos estamos formados, por muchos tipos de moléculas, dentro de las cuales se
destacan las proteínas por su importancia en casi todo el proceso biológico que hace nuestro
cuerpo, es tanto su grado de importancia que la determinación de las concentraciones de
estas es de mucha ayuda, ya sea para el diagnóstico de algunas enfermedades y para otros
propósitos.
 Las proteínas son moléculas esenciales en el funcionamiento de los organismos vivos, ya que
cumplen una amplia variedad de funciones, desde la estructural y de soporte hasta la
enzimática y de transporte. Analizar las proteínas es una técnica importante en diversas áreas
de investigación biomédica, incluyendo la biología molecular, la bioquímica, la farmacología y
la medicina. La cuantificación de proteínas se refiere a la medición de la cantidad de proteína
presente en una muestra biológica, lo que puede proporcionar información valiosa sobre el
estado de salud del organismo o el progreso de un tratamiento médico. En esta socialización
se abordará la clasificación de los métodos utilizados para la cuantificación de proteínas, así
como la importancia de la cuantificación de proteínas en la fisioterapia.
¿Qué es la cuantificación de proteínas?
 Determina la concentración de proteínas en una muestra biológica, es una
técnica de rutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de
una proteína.
 Los análisis de proteínas y de cuantificación de proteínas son cruciales para
la determinación precisa de la concentración de proteínas en una muestra.
Se dispone de una diversidad de métodos de cuantificación de proteínas,
entre ellos los ensayos de absorbancia ultravioleta, los análisis con reactivos
y las tecnologías de inmunoanálisis.
 Glosario de palabras en relación al tema
 Proteína: macromolécula compuesta por aminoácidos que cumple diversas funciones en el organismo.
 Cuantificación: proceso de determinar la cantidad de una sustancia presente en una muestra biológica.
 Espectrofotometría: técnica utilizada para medir la cantidad de luz absorbida por una muestra biológica, en este
caso para cuantificar proteínas.
 Folin-Ciocalteu: El método se basa en la reacción de los compuestos fenólicos con el reactivo de Folin-
Ciocalteu, que produce un cambio de color que se puede medir espectrofotométricamente.
 Enlaces peptídicos: son enlaces químicos que unen los aminoácidos entre sí en una cadena polipeptídica para
formar una proteína.
 Bicinchonínico ácido: es un reactivo utilizado para cuantificar la concentración de proteínas en una muestra. El
reactivo se une a los enlaces peptídicos presentes en las proteínas, produciendo un complejo coloreado que se
puede medir espectrofotométricamente.
 Acido fosfomolíbdico: es un reactivo utilizado para detectar la presencia de grupos fosfato en una muestra,
como en los ácidos nucleicos y algunas proteínas. El reactivo forma un complejo coloreado con los grupos
fosfato, que se puede medir espectrofotométricamente.
 Fosfotungstico: es un reactivo utilizado para teñir tejidos y células en histología y citología. El reactivo se une a
los componentes celulares, como proteínas y ácidos nucleicos, produciendo un colorante que se puede
visualizar mediante microscopía.
 Función de la cuantificación de proteínas
 La cuantificación de proteínas es una técnica esencial en bioquímica y biología molecular que se
utiliza para determinar la cantidad de proteínas presentes en una muestra biológica. Esta técnica se
utiliza comúnmente en muchos experimentos de investigación, incluyendo la purificación de
proteínas, la caracterización de proteínas y la determinación de la actividad enzimática.
 La cuantificación de proteínas es importante porque la cantidad de proteínas presentes en una
muestra biológica puede influir en la interpretación de los resultados de los experimentos. Además,
la cuantificación de proteínas es necesaria para la preparación de soluciones de proteínas con una
concentración conocida para su uso en experimentos y ensayos.
 Ensayos de actividad enzimática :
Métodos espectrofotométricos: Estos Estos métodos miden la actividad Métodos basados en la
métodos miden la absorbancia de las proteínas enzimática de una proteína específica. La
fluorescencia: Estos métodos
en una longitud de onda específica utilizando un cantidad de proteína se calcula en función
implican la emisión de fluorescencia por
espectrofotómetro. La cantidad de proteína se de la actividad enzimática medida.
las proteínas cuando se excitan con una
calcula en función de la relación entre la Ejemplos de ensayos de actividad
fuente de luz específica. La cantidad de
absorbancia y la concentración de proteína. enzimática incluyen el ensayo de la
proteína se calcula en función de la
Ejemplos de métodos espectrofotométricos fosfatasa alcalina y el ensayo de la lactato
intensidad de la fluorescencia medida.
incluyen el método de Bradford, el método de deshidrogenasa.
Ejemplos de métodos basados en la
Lowry y el método de Biuret. fluorescencia incluyen el ensayo de la
fluorescencia intrínseca de la proteína y
el ensayo de la fluorescencia de la
Métodos de la Cuantificación de proteínas
coomassie brillante azul.
Ensayos de unión de proteína:
Estos métodos implican la unión de una
sustancia con las proteínas, lo que Métodos electroforéticos: Estos métodos
genera una señal que se puede medir separan las proteínas por su carga eléctrica
para determinar la cantidad de proteína utilizando la electroforesis en gel. La cantidad
presente. Ejemplos de ensayos de unión de proteína se calcula en función de la cantidad
de proteína incluyen el ensayo BCA Métodos de espectrometría de masas: de proteína presente en la banda del gel.
(ácido bicinchonínico) y el ensayo de Estos métodos utilizan la espectrometría de masas Ejemplos de métodos electroforéticos incluyen
biotina de alta sensibilidad. para identificar y cuantificar proteínas en una la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE)
muestra. Ejemplos de métodos de espectrometría y la electroforesis capilar.
de masas incluyen la espectrometría de masas de
tiempo de vuelo (TOF) y la espectrometría de
masas en tándem (MS/MS).
 El método de Lowry
El método de Lowry se basa en la reacción de las proteínas con el reactivo de Folin-Ciocalteu, que contiene ácido
fosfomolíbdico y fosfotungstico. En presencia de una proteína, este reactivo forma un complejo de color púrpura,
que se puede medir mediante espectrofotometría a una longitud de onda de 750 nm. Esta coloración se atribuye a la
reducción del ácido fosfomolíbdico/fosfotúngstico a azul de heteropolimolibdeno de composición no definida, por
medio de los residuos tirosilos, triptofanilos, y en menor grado, cisteinilos e histidilos de las proteínas que forman el
complejo con el Cu 2+.
También tiene una amplia gama de linealidad y puede ser utilizado con diferentes tipos de proteínas. Sin embargo,
el método de Lowry puede verse afectado por la presencia de ciertos compuestos, como sales y detergentes, que
pueden interferir con la formación del complejo de Folin-Ciocalteu y dar lugar a una sobreestimación de la cantidad
de proteína.
Rango de detección de proteínas: 0,1-1mg/ml. Hasta 5 ug.
El método de Lowry es un método de referencia ampliamente utilizado para la cuantificación de proteínas y ha sido
utilizado en una variedad de campos, incluyendo la investigación biomédica y la producción de alimentos.
 Método de Biuret
Este método utiliza el reactivo de Biuret para medir la cantidad de proteína en una muestra. El reactivo de
Biuret se une a los enlaces peptídicos en las proteínas, lo que produce un cambio de color que se puede medir
con un espectrofotómetro. Es un método preciso y sensible, pero puede ser más costoso que otros métodos.
Este método se basa en la capacidad de las proteínas para formar complejos con el ion de cobre (II) en una
solución alcalina de hidróxido de sodio. Al formar complejos con los iones cúpricos con los enlaces peptídicos
de las proteínas se produce un color violeta-morado bajo condiciones alcalinas. La formación de este complejo
da lugar a una absorbancia característica a una longitud de onda de 540 nm. La intensidad de la absorbancia
está directamente relacionada con la cantidad de proteína presente en la muestra.
Rango de detección de proteínas: 0,05 a 2,5 mg/mL
El método de Biuret se utiliza comúnmente en laboratorios de bioquímica y biología molecular para cuantificar
la cantidad total de proteínas presentes en una muestra.
 El ensayo de BCA (bicinchonínico ácido)
Es un método de ensayo de colorimetría para la cuantificación de proteínas en muestras biológicas. El
ensayo se basa en la reacción del ácido bicinchonínico con los enlaces peptídicos de las proteínas, lo que
produce un complejo de color violeta que absorbe luz a una longitud de onda de alrededor de 562 nm.
Se basa en el principio de que las proteínas reducen los iones cúpricos a iones cuprosos bajo condiciones
alcalinas. Los iones cúpricos reaccionan con el BCA verdoso) para formar un color morado. El color
formado es proporcional al contenido proteico de la muestra.
Es más sensible y específico, y tiene un rango lineal de detección amplio, que puede detectar desde
microgramos a miligramos de proteína. Además, el ensayo es compatible con una amplia variedad de
muestras biológicas, incluyendo muestras complejas como suero, plasma y lisados celulares. El ensayo de
BCA se utiliza comúnmente en investigación biológica y en laboratorios clínicos para la cuantificación de
proteínas.
Rango de detección de proteínas: 20 a 2000 microgramos de proteína por mililitro
 Método de Bradford
Se basa en la reacción de las proteínas con el reactivo de Bradford, que es una solución de azul de Coomassie. El
método de Bradford se basa en que el Azul Brillante de Coomasie G-250 cambia de rojo a azul, al unirse a residuos
aromáticos y arginina en las proteínas. El máximo de absorción del colorante cambia a 465 A 595nm. El cambio en la
absorbancia a 595nm, es proporcional a la concentración de proteínas en la concentración de proteína en la muestra.
El azul de Coomassie en la solución de Bradford se une a las proteínas y forma un complejo de color azul intenso. La
cantidad de proteína presente en la muestra se puede cuantificar mediante espectrofotometría midiendo la
absorbancia del complejo a una longitud de onda de 595 nm.
Rango de detección de proteínas: 1-20 ug.
El método de Bradford es altamente sensible y puede detectar concentraciones de proteína tan bajas como 1 µg/mL.
También es más rápido y más fácil de realizar que el método de Lowry y se considera un método estándar en la
cuantificación de proteínas.
 Instrumentos
Espectrofotómetros UV-Vis Tubos de Ensayos de colorimetría

Son equipos ópticos que Los ensayos de colorimetría

permiten evaluar la luz que utilizan una reacción química
es absorbida, transmitida o específica para producir un
reflejada por un material cambio de color proporcional
sólido o líquido, para cada a la cantidad de proteína
longitud de onda. presente en la muestra.

La electroforesis
La electroforesis es una técnica que
separa las proteínas en función de su
carga y tamaño. Los analizadores de
proteínas por electroforesis se utilizan para
cuantificar la cantidad de proteína presente
en la muestra midiendo la altura o el área
del pico de proteína separado.
 Ejemplo con el método BCA
Preparar la muestra: Primero, se debe preparar la muestra biológica que se desea analizar. Esta puede ser una
solución proteica o una muestra de tejido. La muestra debe estar en un tampón adecuado que no afecte la
reacción de BCA.
Preparar las soluciones de reactivos: Se deben preparar soluciones de bicinchonínico ácido (BCA) y solución
de cobre (II) en tampón adecuado. La solución de BCA se prepara disolviendo 4 g de bicinchonínico ácido en 100
ml de una solución de NaOH 0,1 M. La solución de cobre (II) se prepara disolviendo 0,4 g de sulfato cúprico
pentahidratado en 100 ml de agua.
Mezclar la muestra con los reactivos: Se agrega una cantidad conocida de la muestra a una solución de BCA
y se mezcla. Luego, se agrega una cantidad conocida de solución de cobre (II) y se mezcla nuevamente.
Incubar la mezcla: La mezcla de muestra y reactivos se incuba a 37°C durante 30 minutos. Durante este
tiempo, el BCA reacciona con los grupos amino de las proteínas presentes en la muestra para formar un complejo
de color púrpura intenso.
Leer la absorbancia: Después de la incubación, se mide la absorbancia de la muestra a 562 nm utilizando un
espectrofotómetro. La cantidad de proteína presente en la muestra se determina comparando la absorbancia
medida con una curva de calibración preparada previamente con estándares de proteína de concentraciones
conocidas.
El rango de detección del ensayo de BCA depende de la sensibilidad del espectrofotómetro utilizado y del rango
de concentraciones de proteína en las soluciones estándar utilizadas para preparar la curva de calibración. Por lo
general, el rango de detección del ensayo de BCA es de 0.5 a 50 μg/mL de proteína.
 Interpretación medica:
En la sangre, los niveles de proteínas pueden ser utilizados para evaluar la función hepática, ya que el hígado es el principal
productor de proteínas plasmáticas. Los niveles de proteínas también pueden ser utilizados para evaluar la presencia de
inflamación o infección, ya que ciertas proteínas, como la proteína C-reactiva y la ferritina, aumentan en respuesta a estos
procesos.

En la orina, la cuantificación de proteínas puede ser utilizada para detectar la presencia de enfermedades renales, como la
nefritis, la nefrosis y la proteinuria. En algunos casos, la presencia de proteínas en la orina puede ser indicativa de una infección
urinaria o de una inflamación en el tracto urinario.

En el líquido cefalorraquídeo, la cuantificación de proteínas puede ser utilizada para diagnosticar enfermedades neurológicas,
como la meningitis, la encefalitis y la esclerosis múltiple. Los niveles de proteínas en el líquido cefalorraquídeo también pueden
ser utilizados para evaluar la presencia de tumores cerebrales y para monitorizar la respuesta al tratamiento.

En general, la cuantificación de proteínas es una herramienta importante en medicina para diagnosticar y monitorizar una
variedad de enfermedades y condiciones. La interpretación de los resultados debe ser realizada por un profesional de la salud
capacitado, quien podrá determinar el significado clínico de los valores obtenidos en cada caso específico.
 La cuantificación de proteínas y su
importancia en la fisioterapia
 Valuación del estado nutricional: Las proteínas son esenciales para la reparación y el mantenimiento
de los tejidos del cuerpo, incluyendo los músculos. La cuantificación de proteínas en el cuerpo puede
ayudar a los fisioterapeutas a evaluar el estado nutricional de sus pacientes, lo que es importante para
diseñar un plan de tratamiento adecuado.
 Evaluación del daño muscular: La cuantificación de proteínas también puede ser útil para evaluar el
grado de daño muscular en un paciente. Si hay una disminución en los niveles de proteína en el músculo,
esto puede indicar un daño muscular. Esto es importante para determinar el tiempo de recuperación y el
plan de tratamiento adecuado para el paciente.
 Prevención de lesiones: La cuantificación de proteínas también puede ser útil para prevenir lesiones. Si
se identifica una disminución en los niveles de proteína en el cuerpo, los fisioterapeutas pueden tomar
medidas para prevenir una lesión o para prevenir que una lesión existente empeore.
 Bibliográfica:
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