TRANSMITANCIA, ABSORBANCIA Y LEY DE LAMBERT-BEER

Imaginemos un dispositivo experimental como el de la siguiente Figura 3.

Disponemos de una fuente emisora de radiación electromagnética (lámpara), unos
sistemas de enfoque (rendijas) para hacer que la radiación incida
perpendicularmente a la muestra, un dispositivo que permita seleccionar la longitud
de onda que incide sobre la muestra (red de difracción) y un sistema electrónico de
medida de intensidad de luz.

Imaginemos también que hacemos dos medidas de la intensidad de luz:

1) La primera medida la muestra será una disolución con la misma matriz que el
analito que deseemos determinar pero en ausencia de éste (disolución blanco). La
intensidad de radiación (luz) que llega al lector será

2) La segunda medida se hará en presencia del analito (cromóforo) que deseemos

estudiar. En este caso la intensidad de luz que llega al lector será I. Como
trabajamos con analitos que absorben radiación a la longitud de onda que
selecciona la red de difracción, lógicamente

Existen dos maneras de expresar la relación entre I e Io. La relación directa se

denomina transmitancia (T), mientras que se denomina absorbancia al logaritmo
con signo cambiado de la transmitancia. La absorbancia es un término actualmente
mucho más utilizado que la transmitancia.

La expresión matemática de ambos parámetros es:

La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia está directamente relacionada

con las propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la longitud
de la trayectoria del haz de radiación al atravesar la muestra. La expresión
matemática de la ley de Lambert-Beer es:

A=C. .L

donde:
A = Absorbancia de la muestra

C = Concentración del cromóforo

L = Longitud del paso óptico que contiene la muestra

= Absorptividad molar. Depende del cromóforo en si mismo, de la y de las

condiciones de medida (pH, T...). Ya que la absorbancia es adimensional las
unidades son concentración-1 longitud-1.

Ejemplos de la aplicación de Lambert-Beer

1) Una disolución 100 µM de un determinado cromóforo tuvo una transmitancia a

525 nm de 0.5 cuando se midió en una celda 1.5 cm de longitud. Calcular: a) la
absorbancia de la disolución; b) la absorptividad molar del cromóforo

a) A = -log T = - log 0.5 = 0.301

b) A = C . . L Reordenando la ecuación obtendremos:

= A/(C x L) = 0.301 /(10-4 M x 1.5 cm) = 2 x 103 M-1 cm-1

2) Una disolución patrón de níquel 5.00 x 10-5 M se coloca en una cubeta de longitud
de paso 1 cm. La absorbancia a 592 nm es 0.446. a) ¿Cuánto vale a 592 nm?. b)
Si una disolución problema de níquel tiene una absorbancia de 0.125 a la
misma ¿cuál es la concentración de níquel en la muestra?.

a) Dado que A = C . . L. Entonces 0.446 = 5 x 10-5 M x 1 cm x y deducimos =

8920 M-1 cm-1

b) Aplicando que A = C . . L. 0.125 = 8920 M-1 cm-1 x 1 cm x C; y por lo tanto C=

14 µM