Recuento de heterótrofos por placa vertida

 En el segundo método (extensión en placa), las muestras diluidas se siembrandirectamente en la

superficie de la placa de agar, extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. La
suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la superficie. En ambas
técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra
por estría, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por
extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos
axénicos hasta que se repita el proceso. Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la
ventaja de que permiten obtener un mayor número decolonias aisladas que el método de siembra
por estría, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con
varios tipos de microorganismos. Para obtener un cultivo axénico mediante este método:

  (a) Hacer diluciones seriadas de la suspensión bacteriana hasta obtener una muestra con sólo
unos pocoscientos de bacterias-

(b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusión, mezclar y verter el contenido en una placa
Petri.

(c) Después de la incubación, se desarrollan colonias en el agar (más pequeñas) y en su superficie

(más grandes).

Método de aislamiento por siembra por estría en placa: Para obtener un cultivo axénico:

(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero.

(b) introducirla en la suspensión bacteriana para recoger una muestra.

(c) sembrar haciendo estrías sobre la superficie de un medio sólido en una placa Petri, y

 (d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un segundo grupo
de estrías enuna región nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta
conseguir que los grupos de células se diluyan y se separen células aisladas.

 (e) Después de la incubación, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que el cultivo
es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estrías una
segunda placa.

Se realizó una dilución correspondiente de una muestra de agua estancada. A partir de dicha
dilución se realizaron diluciones . Se sembró 0.1 mL de muestra de cada dilución en agar nutritivo
y se incubó a 35ºC por 24 horas. Recuento de heterótrofos. Mohos y levaduras por siembra
por extensión con asa de vidrio Se utilizaron las diluciones realizadas en el procedimiento anterior
y se sembró 0.1 mL de muestra de cada dilución en agar PDA el cual se dejó a temperatura
ambiente por 24 horas.

Recuento Pseudomonas aeruginosa Se agitó la muestra de agua del rio Medellín, y se procedió a
realizar diluciones. Se transfirió 1 mL de la dilución a tres series cada una con 5 tubos con
caldo Asparagina y se incubaron a 35ºC - 37ºC por 24 horas. Los tubos que dieron positivos al ser
observados con una lámpara de luz UV, se clasificaron como presuntivos y para confirmar la
presencia de P. aeruginosa se tomó 0,1 mL de un tubo de cada serie y se inoculó en tubos con
Caldo Acetamida que se incubaron a 35ºC - 37ºC por 24 horas.

Recuento Coliformes totales y E. coli Se agitó la muestra de agua del rio Medellín, y se procedió a
realizar diluciones. Se transfirió 1 mL de la dilución a tres series cada una con 5 tubos con
Caldo Fluorocult LMX y se incubaron a 35ºC por 24 horas. Los tubos que dieron positivo al ser
observados con una lámpara de luz UV se clasificaron como presuntivos para E. coli.
Posteriormente, se les adicionó una gota el reactivo de Kovacs para confirmar la presencia de
E. coli

Las bacterias son organismos procarióticos, se encuentran ampliamente distribuidas en la

naturaleza, habitan enel agua, el suelo, en la superficie o en el interior de plantas y animales
incluyendo al hombre. Pueden vivir en forma libre o en simbiosis con otros organismos, ya sea
como parásitos, comensales o mutualistas.Fisiológicamente este grupo presenta características
muy variables, hay bacterias móviles e inmóvilesfotosintéticas y quimiotróficas, autótrofas y
heterótrofas; se desarrollan en un rango muy amplio de temperatura, pH y
condiciones gaseosas
Los medio solidos están presentes en la técnica de placas invertidas presentan
su crecimiento óptimo a temperaturas entre 20 y 25ºC se pueden incubar en la
gaveta o cajón del laboratorio, a temperatura ambiente. En general las incubadoras
microbiológicas satisfacen las necesidades en cuanto a los rangos de temperatura requeridas por
los microorganismos. La desventaja que tienen es que estos aparatos funcionan con aíre seco, lo
que determina la deshidratación de los medios de cultivo. Por lo tanto, el crecimiento de cualquier
cultivo experimental que se realice en incubadora no debe prolongare por más de nueve días.

Con relación a las necesidades gaseosas, no todos los microorganismo crecen en presencia de

cuando éste existe en concentraciones reducidas; a estos se les llama microaerofílicos.

El desarrollo de estos diferentes grupos se favorece mediante la agitación de los cultivos o

mediante la exclusión de oxígeno para lo que se emplean sustancias reductoras o
equipos especiales.. En el estudio de cultivos bacterianos algunos de los criterios que se emplean
para caracterizarlas incluyen: tamaño, morfología celular, forma de agrupación, reacción a la
tinción de Gram, formación de esporas, movilidad, presencia de inclusiones de reserva y
características culturales en medios líquidos y sólidos en los que presentan patrones de desarrollo
en cuanto a la forma, tamaño, elevación y color de las colonias.

Resultados
Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten
obtener un mayor numero de colonias aisladas que el método de siembra por
estría, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una
mezcla con varios tipos de microorganismos.

Los Humedales son ecosistemas acuáticos de agua dulce, salobre y marina de alta prioridad, que
influyen no solamente en la distribución de especies y la biodiversidad en general; sino en
asentamientos humanos y sus actividades. Debida a la gran importancia que presentan los
humedales, se han desarrollado recientemente cambios importantes en la política del agua y se
esta empezando a reconocer que estos ecosistemas requieren de un suministro adecuado de agua
para mantener sus funciones normales y la conservación de la biodiversidad, por ello desde 1992,
se han desarrollado varias políticas, participando entes como La Comisión de Desarrollo Sostenible
el cual resalta que muchos países carecen de una legislación adecuada y políticas para un uso
eficiente y equitativo de los recursos hídricos, otra ente en involucrarse con la conservacion de
estos ecosistemas es la firma de la Convención Ramsar en 1971, que consta en la actualidad de
133 partes contratantes y 1180 humedales, incluidos en la lista de Humedales de importancia
internacional Esta definición de Humedales ha sido adoptado para el caso Colombiano, donde se
ha podido establecer que en Colombia hay mas de 20.252.500 hectáreas de Humedales,
representados por pantanos, ciénagas, turberas, llanuras y bosques inundables. Debido a la gran
cantidad de Humedales en nuestro país y de sus importancia, se ha venido adelantando una
gestión sostenible de los mismos, que se fundamenta en la propuesta por la política para
Humedales interiores de Colombia, sustentada en el enfoque ecosistémico expresado en la
convención de Diversidad Biológica, ya que se considera como el marco mas apropiado para
integrar los objetivos de uso sostenible, con los de conservación ; a través de los factores
ecológicos, económicos y sociales, en un contesto geográfico especifico Por estas razones, se han
adoptado medidas cuyo objetivo es velar por el cumplimiento de la conservación de estos
ecosistemas; por lo que a continuación se reasaltan las principales normas nacionales e
internacionales que permiten lograr estos objetivos
Recuento de heterótrofos por placa vertida

Se realizó una dilución correspondiente a 10-1 de una muestra de agua estancada. A partir de
dicha dilución se realizaron diluciones de 10-2 y 10-3.

Se sembró 0.1 mL de muestra de cada dilución en agar nutritivo y se incubó a 35ºC por 24
horas.

Recuento de heterótrofos. Mohos y levaduras por siembra por extensión con asa de vidrio,

Se utilizaron las diluciones 10-2 y 10-3 realizadas en el procedimiento anterior y se sembró 0.1 mL
de muestra de cada dilución en agar PDA el cual se dejó a temperatura ambiente por 24 horas

Recuento Coliformes totales y E. coli

Se agitó la muestra del agua del humedal , y se procedió a realizar diluciones de 10-3 y 10-4.

Se transfirió 1 mL de la dilución a tres series cada una con 5 tubos con Caldo  basan estos
medios Fluorocult es que una enzima, que es característica del organismo de interés, rompe un
sustrato y se incubaron a 35ºC por 24 horas.

Los tubos que dieron positivo al ser observados con una lámpara de luz UV se clasificaron como
presuntivos para E. coli. Posteriormente, se les adicionó una gota el reactivo de Kovacs para
confirmar la presencia de E. coli

Recuento Pseudomonas aeruginosa

Se agitó la muestra y s del agua del humedal e procedió a realizar diluciones de 10-3 y 10-4.

Se transfirió 1 mL de la dilución a tres series cada una con 5 tubos con caldo Asparagina y se
incubaron a 35ºC - 37ºC por 24 horas.

Los tubos que dieron positivos al ser observados con una lámpara de luz UV, se clasificaron
como presuntivos y para confirmar la presencia de P. aeruginosa se tomó 0,1 mL de un tubo de
cada serie y se inoculó en tubos con Caldo Acetamida que se incubaron a 35ºC - 37ºC por 24
horas.

Útil para la técnica de vertido en placa o extensión de pleca se siembra volúmenes conocidos de
cada dilución luego se encuba a 35-37ºc durante ya dicho 24 horas

Al finalizar el tiempo de incubación, se realiza el recuentros toma en cuenta las únicas aquellas
cajas de Petri que tengan entre 30 y 300 colonias y las que no se reportan como INCONTABLES

Se realiza la sumatorio de los tres cuadrantes y se saca el promedio finalmente el promedio se

multiplican por

Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la siguiente formula para obtener el
no. de UFC/ML o UFC/G

Para obtener los resultados duplicaos se usa la siguiente formula

Realizar dilución seriada

Trasferir al primer tubo de solución salina estéril de 9 ml ( dilución 10.1)

Homogenizar la suspensión

Trasferir 1ml al siguiente tubo de dilución(dilución 10-2)

Repetir el paso anterior hasta obtener la disolución 10-6

Play con agar

Micropipeta de 1000 mililitros

Puntas azules estéril

Tubos con solución salina 1.85 estériles cada uno con (9ml)

Brotes

Asa de trisaste estériles

Un contador de unidades formadores de colonias

Materiales 
 Agar peptona
 Micropipeta de 1000 mililitros
 Puntas azules estéril
 Tubos con solución salina 1.85%  estériles cada uno con (9 ml)
 Brotes
 Asa  estériles
 Un contador de unidades formadoras de colonias 
 Pipetas Pasteur estériles  

 8 a 12 cajas Petri estériles