OBJETIVOS

 Determinar la asociación directa que existe entre la concentración de la sustancia en

estudio y su absorbancia.
 Adquirir destrezas en el manejo de las fórmulas para la preparación y determinación
de concentración de una determinada sustancia.

Marco teórico

La espectrofotometría estudia los fenómenos de interacción de la luz con la materia.

En general, cuando una lámpara ilumina cualquier objeto, pueden ocurrir algunos
fenómenos: La luz puede ser emitida, reflejada, transmitida o absorbida. Desde que
sabemos que la energía no puede ser destruida, la cantidad total de luz debe ser similar al
100%; por lo tanto, cuando un objeto es iluminado, se puede calcular cuánta radiación ha
sido reflejada o transmitida y podemos concretar entonces cuánta fue absorbida, cuál es
la cantidad que ha interactuado con el objeto. (Arenas, López. 2004)
La absorbancia es una medida de la radiación que absorbe una sustancia cuando sobre
ésta incide las ondas electromagnéticas generalmente en la región visible de una
determinada longitud de onda (4-5), mientas que la transmitancia de una sustancia en
solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez
que ha atravesado la muestra, y la cantidad de luz que incidió sobre ella. (Universidad de
Córdoba, 2000)
La ley de Lambert establece que cuando pasa luz monocromática por
un medio homogéneo, la disminución de la intensidad
del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir que
la intensidad de la luz transmitida disminuye exponencialmente
al incrementar aritméticamente el espesor del medio absorbente y la ley de Beer dice que
la intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al aumentar
aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente, cuando este haz pasa a
través de un medio homogéneo, estas dos leyes unidas crean la ley de Lambert-Beer.
(Cozzolino, D. 2002)

La solución o disolución es la mezcla homogénea de dos o más sustancias. Las más

comunes, y a las que nos referiremos en lo sucesivo, son las disoluciones diluidas
consistentes en un componente mayoritario líquido, que es el solvente o disolvente, y
un componente minoritario, por lo común sólido o líquido (aunque también puede ser
gaseoso), que es el soluto. De particular relevancia son las disoluciones acuosas, esto es
aquellas en las que el disolvente es agua. La composición de una solución viene dada por
la cantidad de soluto diluido en una cantidad dada de disolución o de disolvente.
En laboratorio se utilizan técnicas semicuantitativas denominadas titulaciones, de gran
utilidad en pruebas serológicas si se quiere determinar el volumen de un anticuerpo en
una muestra clínica. Una dilución en serie constituye una sucesión de diluciones en las que
van siendo subsecuentemente menos concentradas que su anterior. En un sistema de n
diluciones en serie, la concentración de soluto en cada dilución sucesiva es de 1/n de la
anterior. Generalmente se efectúan al doble, es decir, que cada dilución tiene la mitad de
concentración que su antecesor. (Revista de la Facultad de Medicina, 1999)

En la mayoría de los casos, se trabaja con diluciones decimales. El caso más sencillo es la
preparación de 10 ml de la dilución 1/10 de la muestra. Para ello, se añade 1 ml de
muestra a 9 ml de diluyente; es decir de cada 10 ml de esta dilución 1/10, 1 ml
corresponde a la muestra. Expresándolo mediante una ecuación:

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Conclusiones

 Se determinó que lo mas importante en una solución es su concentración ya que la

absorbancia es proporcional al grosor de la muestra por la que la luz pasa, y entre más alta
la concentración mayor será la absorbancia de dicha sustancia, sin embargo, en esta
práctica no se pudo comprobar la ley de Beer-Lambert debido a errores humanos al
preparar la muestra.

Bibliografía

 Arenas, I. López, J. (2004) Espectrofotometría de absorción. Universidad nacional

autónoma de México. [Fecha de acceso: 19 de febrero de 2019] ] Disponible en
URL: http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_absorcion.pdf

 Díaz, N. A., Ruiz, J. A. B., Reyes, E. F., Cejudo, A. G.,

Novo, J. J., Peinado, J. P., ... & Fiñana, I. T. (2000).
Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas. Universidad de Córdoba.
[Fecha de acceso: 19 de febrero de 2019] Disponible en
URL: http://www. uco. es/dptos/bioquimica-
biolmol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR% C3% 8DA. pdf.
 Cozzolino, D. (2002). Uso de la espectroscopía de reflectancia en el infrarrojo
cercano (NIRS) en el análisis de alimentos para animales. Agrociencia-Sitio en
Reparación, 6(2), 25-32.
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