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SALUD
Preliminary identification of secondary metabolites from aqueous and ethanolic
extracts of the fruit and leaves of Morinda citrifolia L. "noni" and
spectrophotometric quantification of total flavonoids
RUÍZ REYES, Segundo Guillermo1; VENEGAS CASANOVA Edmundo Arturo2; CHÁVEZ GAONA
María Haydée3; EUSTAQUIO SALDARRIAGA Carol Lisset4
RESUMEN
Palabras clave: identificación preliminar, extractos, Morinda citrifolia L., flavonoides, cuantificación,
espectrofotometría.
ABSTRACT
This investigation was aimed at the preliminary identification of secondary metabolites from aqueous and
ethanolic extracts of the fruit and leaves of Morinda citrifolia L. "noni" and spectrophotometric
quantification of total flavonoids. The species was collected in the Botanical Garden of Medicinal Plants
“Rosa Elena de los Ríos Martínez” at the Faculty of Pharmacy and Biochemistry, National University of
Trujillo. The secondary metabolites found in the preliminary identification were: steroids, quinones,
flavonoids, and leucoanthocyanidins. In the spectrophotometric quantification of total flavonoids
expressed as quercetin, found that the extract with the highest percentage corresponded to reflux
extraction leaf with 0.191%, followed by the lyophilized aqueous and ethanol extracts of leaf with 0.114
and 0.115% respectively, Soxhlet extraction of leaf with 0.007% and aqueous extract of freeze dried fruit
with 0.032%. The results of the extracts were evaluated by Variance Analysis and Duncan test.
Key words: preliminary identification, extracts, Morinda citrifolia L., flavonoides, quantification,
spectrophotometry.
1
Dr. Quimico Farmaceutico.Docente. UNT. guille_ruiz2001@hotmail.com
2
Mg. Químico Farmacéutico. UNT. edmundo373@hotmail.com
3
Br. Universidad Nacional de Trujillo. lue_soul87@hotmail.com
4
Br. Universidad Nacional de Trujillo. carol27_cles@hotmail.com
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UCV - Scientia 2(2), 2010. Ruíz S, Venegas E, Chávez M, Eustaquio C.
INTRODUCCIÓN
El reino vegetal posee muchas especies de plantas son sus hojas y sus frutos. Empíricamente, las
que contienen sustancias de valor medicinal que hojas se aplican sobre la piel, después de
están por descubrir, y gran número de plantas son ablandarlas en una llama, para tratar tumores o
ensayadas constantemente respecto a su posible infecciones. En la actualidad, las hojas de “noni”
valor farmacológico. En las civilizaciones son incorporadas cada vez más en la industria de
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distribuidos de constituyentes naturales. Se conoce Los flavonoides presentes en el jugo del fruto de
como diez clases de flavonoides, todos contienen Morinda citrifolia L., poseen gran capacidad para
quince átomos de carbonos en su núcleo básico y neutralizar radicales libres responsables de la
están arreglados bajo un sistema C6-C3-C6, en el aparición de determinadas patologías o del
cual dos anillos aromáticos llamados A y B están agravamiento de las mismas. En un estudio
unidos por una unidad de tres carbonos que pueden realizado en ratas a partir del jugo del fruto de
o no formar un tercer anillo, que en caso de existir Morinda citrifolia L., administrado por vía oral
es llamado anillo C. estos flavonoides, suele durante una semana de tratamiento, determinó un
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encontrarse bajo la forma de glicósidos con una o efecto preventivo sobre los primeros estadíos de
tres unidades de azúcar, generalmente en los formación de células tumorales, lo cual se vincula al
carbonos 3 y/o 7, siendo los azúcares más comunes efecto antioxidante demostrado en el test de
la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa; hidroperóxidos lipídicos.7, 20
es frecuente que diferentes azúcares se hallen En un estudio realizado en Estados Unidos de
unidos a una misma aglicona y en diferentes América, utilizando como muestra “nonis”
posiciones lo que hace mayor el número de recolectados en Tahití, se lograron aislar dos
glicósidos conocidos. Los flavonoides se hallan nuevos lignanos, (+) -3,4,3 ', 4'-tetrahidroxi-9,
presentes en todas las partes de las plantas, 7'alpha-epoxylignano alfa-7 , 9'-lactona y (+) -3,3
algunas clases se encuentran más ampliamente '-bisdemethyltanegool, así como siete compuestos
distribuidas que otras, siendo más comunes las conocidos, (-)-pinoresinol, (-) -3,3'-
flavonas y flavonoles, y más restringidas en su bisdemethylpinoresinol, la quercetina, kaempferol,
ocurrencia las isoflavonas, las chalconas y auronas. scopoletin, isoscopoletin, y vainillina.21
17, 18
Un estudio informa que, en la hoja de “noni” se
La acción farmacológica es también extensa y identificaron: cinco glucósidos flavonoles y un
variada, se ha demostrado que los flavonoides glucósido iridoide. Además, se determinó que
modifican la reacción del cuerpo a los elementos todos estos compuestos tuvieron actividad
dañinos como alérgenos, virus y cancerinógenos; secuestradora de radicales libres, efecto
son bien conocidas sus actividades protectoras de antioxidante in vitro, en concentraciones de 30
la pared vascular o capilar (bioflavonoides del µM.21
género Citrus: rutina y derivados) dilatadores de Los antecedentes expuestos estimulan el interés en
las coronarias (proantocianidinas), espasmolítica, realizar el estudio fitoquímico del fruto y la hoja de
antihepatotóxica, estrógena y diurética. Así mismo Morinda citrifolia L. ya que hace posible la
la actividad antimicrobiana de flavonoides identificación de algunos de los componentes
prenilados y otros fenoles y la acción fungitóxica de químicos responsables de los efectos preventivos-
la isoflavonas. 17, 18 terapéuticos y con ello una base científica para su
Los flavonoides juegan un rol protector en el uso apropiado; contribuyendo a un mejor
desarrollo e inhibición de tumores. El mecanismo conocimiento de nuestra medicina tradicional.
de protección antitumoral de flavonoides ocurre a Además, estas investigaciones pueden ser
diferentes niveles del proceso carcinogénico. Se extendidas a estudios farmacológicos y también
han ensayado extractos del jugo del fruto de relacionados a ver la posibilidad de producción
Morinda citrifolia L. como también algunos industrial en los casos en que los principios activos
compuestos puros en una diversidad de modelos hallados lo justifiquen. Por otra parte, la
experimentales, tales como la línea celular de investigación contribuye a contrastar los datos
tumor ascítico Sarcoma 180 de ratón, obtenidos en nuestro estudio, con los realizados en
transactivación y activación celular de células otras realidades.
epidérmicas de ratón JB6, carcinoma de Lewis en Debido al interés actual de su uso dietético nos
pulmón de ratón y liberación de citocinas como el planteamos el siguiente objetivo: Identificar
factor necrosante tumoral alfa, interleucinas (IL- preliminarmente los metabolitos secundarios
10, IL-1á, exceptuando IL-2) e interferón gamma. presentes en los extractos acuosos y etanólicos del
La fracción de extracción alcohólica, del jugo del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. “noni”.
fruto de “noni”, es una de las que ha demostrado producidos en el Jardín Botánico de Plantas
buena acción antitumoral, como así mismo los Medicinales “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la
compuestos aislados ácido asperulosídico (iridiode) Facultad de Farmacia y Bioquímica de la
y los glicósidos de ácidos grasos.19 Universidad Nacional de Trujillo.
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MATERIAL Y MÉTODOS
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espectrofotométrica de
Concluido el tiempo de extracción, flavonoides 25, 26
cada una de las muestras se enfrió Se utilizó el método
y se filtró con ayuda de vacío. El espectrofotométrico para
residuo se lavó con 135 mL de cuantificar flavonoides totales
etanol al 50%V/V, se evaporó en expresados como quercetina,
baño de agua hasta la mitad del descrito por Kostennikova Z.,
volumen inicial, se enfrió sobre adaptado en la cátedra de
baño de hielo durante 30 minutos y Farmacognosia de la Facultad de
luego se filtró lavando el Farmacia y Bioquímica de la
precipitado formado con 4 Universidad Nacional de Trujillo.
porciones de 20 mL de agua Como patrón se empleó 0.04
destilada fría (10-15ºC). Se gramos de quercetina, los cuales
eliminó el filtrado y los lavados, y se disolvieron con etanol al
los residuos tanto del filtro como 96%V/V hasta completar un
del recipiente se disolvieron con 70 volumen de 50 mL; de esta
m L d e e t a n o l a l 9 6 % V / V, solución se tomó 1 mL, se colocó en
calentando previamente a una fiola de 100 mL y se aforó con
temperatura de 50ºC; la solución etanol al 50%V/V. El blanco fue una
se pasó a una fiola de 100 mL y se solución de etanol al 50%V/V.
aforó con etanol al 96%V/V.
Posteriormente se leyeron las La expresión matemática empleada para el
absorbancias a 258 nm en cálculo fue la siguiente:
espectrofotómetro Genesys 10 UV
Thermo Electron Corporation Serie
No. 2G2H118002
RESULTADOS
Liofilizado de Liofilizado de
Metabolitos
Extracto Ensayos Hoja extracto extracto
Secundarios
acuoso de hoja etanólico de hoja
Liebermann -
Esteroides - + +
Etéreo Burchard
Quinonas libres + + +
Bornträger
Liebermann-
Esteroides - + +
Burchard
Flavonoides + + +
Shinoda
Metanólico Taninos - - -
Gelatina
Alcaloides - - -
Dragendorff
Alcaloides - - -
Mayer
Dragendorff Alcaloides - - -
Acuoso/Ácido
Mayer Alcaloides - - -
Shinoda Flavonoides + + +
Rosenheim Leucoantocianidina + - -
Acuoso
Espuma Saponinas - - -
Gelatina Taninos - - -
Liofilizado de
Extracto etanólico de
Extracto Ensayos Metabolitos Secundarios extracto acuoso de
fruto
fruto
Liebermann-
Esteroides + +
Etéreo Burchard
Quinonas libres + +
Bornträger
Liebermann-
Esteroides + +
Burchard
Flavonoides - -
Shinoda
Metanólico Taninos - -
Gelatina
Alcaloides - -
Dragendorff
Alcaloides - -
Mayer
Dragendorff Alcaloides - -
Acuoso/Ácido
Mayer Alcaloides - -
Shinoda Flavonoides - -
Rosenheim Leucoantocianidina - -
Acuoso
Espuma Saponinas - -
Gelatina Taninos - -
SALUD
Etéreo Mayer Alcaloides -
Wagner -
Liebermann-Burchard Triterpenos - Esteroides -
Catequinas +
Resinas -
Baljet Lactonas -
Liebermann-Burchard Triterpenos – Esteroides -
Espuma Saponinas -
Tricloruro Férrico Fenoles y Taninos -
Etanólico Bornträger Quinonas +
Shinoda Flavonoides +
Kedde Cardenólidos -
Antocianidina +
Dragendorff -
Mayer Alcaloides -
Wagner -
Dragendorff +
Mayer +
Alcaloides
Wagner +
Tricloruro Férrico -
Taninos
Shinoda +
Flavonoides
Espuma -
Acuoso Saponinas
Mucílagos -
Principios Amargos -
Extracción
Continua 0.0546 0.0070
Soxhlet de
Hoja
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Liofilizado de
0.8886 0.1136
Extracto
Acuoso de Hoja
Liofilizado de
Extracto 0.8970 0.1147
Etanólico de
Hoja
Liofilizado de
Extracto 0.2498 0.0319
Acuoso de
Fruto
LEYENDA
LH: Liofilizado de extracto acuoso de hoja
LHH: Liofilizado de extracto etanólico de hoja
HR: Extracción a Reflujo de hoja
HS: Extracción continua Soxhlet de hoja
LF: Liofilizado de extracto acuoso de fruto
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Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de los extractos...
DISCUSIÓN
SALUD
tamizada y los liofilizados de sus extractos acuoso y Los flavonoides son metabolitos
etanólico; en el caso del fruto, con el extracto secundarios de una gran distribución en el reino
etanólico y el liofilizado de su extracto acuoso. vegetal y pueden estar presentes en todas las
Según el tamizaje fitoquímico de Migdalia Miranda, partes de las plantas. En éstas se encuentran
se realizaron los extractos: etéreo, etanólico y fundamentalmente en forma de glicósidos, esto les
acuoso para la muestra tamizada de hoja. Para la infiere una alta solubilidad en agua y disolventes
identificación preliminar de los metabolitos polares, lo cual se incrementa por la alta polaridad
secundarios se utilizaron solventes de polaridad de sus estructuras.27
creciente (éter, metanol, etanol, agua ácida y Los flavonoides han sido empleados para la
agua).22,23,24 reducción de la fragilidad capilar, protección frente
a estados tóxicos agudos, en terapéutica
Como podemos apreciar en las Tablas 1, 2 y estrogénica e inflamatoria por su acción similar a la
3 dentro de los metabolitos secundarios cortisona. Además son usados como antioxidantes,
encontrados en la identificación preliminar, antivirales, antidiarreicos, antihelmínticos y
discutimos la presencia de: citostáticos.1,2,17,18
La variación estructural de los flavonoides
Los Esteroides considerados como es inmensa, tanto por la naturaleza del azúcar
derivados de los Triterpenoides, poseen un como para la posición del enlace glicosídico.27
esqueleto tetracílico característico, el cual fusiona Las estructuras de los diversos tipos de
tres anillos de seis miembros y uno de cinco flavonoides, dependen de la naturaleza del oxígeno
miembros. Este núcleo de 17 átomos de carbono se heterocíclico, pues este deriva del pirano, del pirilo,
denomina gonano (ciclopentano perhidro o de la -pirona. La ciclización se acomete entre el
fenantreno). Este núcleo esteroide es alterado por tercer carbono de la cadena y un grupo OH del
transferencia de un átomo de oxígeno del carbono anillo A en posición orto a esta cadena, lo cual
12 al carbono 11 dentro de la molécula policíclica, conlleva a la formación de la estructura del
para utilizarlo como intermediario de la producción cromeno o cromona.27
de cortisona.2,18,27 La identificación de flavonoides fue positiva
en los extractos metanólico y acuoso de la hoja y en
En la naturaleza, ningún esteroide posee el los liofilizados de sus extractos acuoso y etanólico,
núcleo simple del gonano. El esteroide más simple según Olga Lock y en los extractos etanólico y
que se conoce, presenta 18 átomos de carbono, acuoso, según Migdalia Miranda, dando una
que corresponde al núcleo de estrano, alrededor coloración roja. En el caso del fruto, la reacción se
del cual se hayan las hormonas que caracterizan al consideró como negativa, ya que el color final fue
sexo femenino.27 verde, ésta se puede deber a factores que influyen
La identificación de esteroides se realizó en en la concentración de fitoconstituyentes de la
los extractos etéreo y metanólico de la hoja y en los planta como: época, clima, edad, suelo; aunque
liofilizados de sus extractos acuoso y etanólico, según bibliografía, algunas veces las coloraciones
según Olga Lock y en los extractos etéreo y azul o verde son consideradas positivas.29
etanólico, según Migdalia Miranda; siendo negativa En la reacción de Shinoda, el magnesio
en éstos, ya que fueron obtenidos por maceración metálico es oxidado por el ácido clorhídrico
en comparación con la extracción a reflujo concentrado, dando como productos al hidrógeno
realizada en la muestra tamizada según Prueba de molecular, que es eliminado en forma de gas y el
la Gota; a esa porción posiblemente estos cloruro de magnesio, que es el que forma
metabolitos existen, pero no hay la sensibilidad complejos con los flavonoides dando coloraciones
para desarrollo del color. Para los liofilizados de los características. El magnesio divalente, actúa sobre
extractos, la reacción fue positiva y ésta se puede el grupo carbonilo de dos flavonas, produciendo
deber a que existe una mayor cantidad de muestra. una coloración roja, este aumento de intensidad es
La reacción también fue positiva para el liofilizado debido a que el magnesio divalente intensifica la
de extracto acuoso de fruto y su extracto etanólico. coloración por estar doblemente coordinado29.
Las Quinonas comprenden un grupo de
La reacción de Liebermann-Burchard es productos muy distribuidos en la naturaleza y de
típica de los esteroides que contienen dos dobles estructuras relacionadas, en la mayoría de los
enlaces conjugados, en un mismo anillo, en dos casos, con pigmentos naturales. Son más comunes
anillos adyacentes o un doble en un anillo en vegetales, aunque algunas estructuras se han
adyacente con un grupo hidroxilo. La reacción debe obtenido de hongos, líquenes, insectos, o de
animales marinos. Por lo general, en dependencia
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de la LPL se exhibió en MLE (66% + / - 2,1%), que cebollas (3 a 500 mg/kg), bretones (100 mg/kg),
fue significativamente mayor que la mostrada con judías francesas (30 a 45 mg/kg) y brócolis (30
MFE (54,5% + / - 2,5%), extracto de té verde mg/kg). Entre las frutas examinadas según un
(GTE) (54,5% + / - 2,6%) y catequina (43,6% + / - estudio, la concentración de quercetina es en
6,1%).31 promedio de 15 mg/kg, teniendo las manzanas la
Los glicósidos flavonoides se extraen de concentración más elevada de 21 a 72 mg/kg. Los
forma eficiente con alcoholes de baja masa flavonol glicósidos están presentes en uvas y se
molecular, en particular metanol y etanol, cuando han registrado valores que van desde 8 a 97 mg/kg
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el material es seco, ofrece ventajas emplear una de peso en fresco.30
serie de extracciones con tres o cuatro disolventes, En las Tablas 4, 5 y 6 se observa que el
incrementando la polaridad. Todos los flavonoides contenido promedio de flavonoides totales
en etanol presentan una banda más o menos expresados como quercetina alcanzan valores de:
intensa a 200-270 nm, y otra de mayor intensidad a 1.9 g/kg y 70 mg/kg, para las extracciones a reflujo
mayor longitud de onda, donde pueden observarse y Soxhlet, respectivamente, en los liofilizados de
otras bandas de mayor intensidad.27 los extractos acuoso y etanólico de hoja 1.14 y 1.15
En las frutas y hortalizas sin tratar, los g/kg y en el fruto 319 mg/kg, lo que nos indica que
flavonoles se presentan como glicósidos y está Morinda Citrifolia L. contiene una alta
ausente la aglicona. El flavonol más abundante es concentración de flavonoides y comparando con las
la quercetina. Entre las hortalizas, la concentración hortalizas y frutas antes mencionadas, se
más alta de quercetina glicósidos se encuentra en encontraría entre las más altas.
CONCLUSIONES
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