ANALISIS ELECTROFORESIS RNA

ALEGRE CORDOVA A., ESPINOZA FLORES K.

Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas,

Escuela Profesional Farmacia y Bioquímica

 RESUMEN:

La electroforesis en gel de agarosa es de las más utilizadas para analizar y caracterizar ácidos
nucleicos de distintas procedencias. Los geles se comportan como un tamiz molecular y permiten
separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así, moléculas de RNA de diferente
tamaño van a emigrar de forma distinta en una electroforesis en gel de agarosa. Además, si en
dicha electroforesis se aplican marcadores de peso molecular (fragmentos de RNA de tamaño
conocido) se puede calcular el tamaño aproximado del RNA en estudio. En esta práctica, se
pretende que el alumno comprenda el fundamento teórico de esta técnica y sus aplicaciones,
llevando a cabo la separación electroforética en gel de agarosa de RNA que el mismo alumno va a
aislar y purificar. A continuación, el RNA aislado se puede analizar mediante electroforesis en gel
de agarosa.

ABSTRACT: The agarose gel electrophoresis is one of the most used to analyze and characterize
nucleic acids from different origins. The gels behave like a molecular sieve and allow to separate
charged molecules according to their size and shape. Thus, RNA molecules of different sizes will
migrate differently in an agarose gel electrophoresis. In addition, if molecular weight markers
(RNA fragments of known size) are applied in said electrophoresis, the approximate size of the
RNA under study can be calculated. In this practice, it is intended that the student understand the
theoretical basis of this technique and its applications, carrying out the separation agarose gel
electrophoretic gel that the same student will isolate and purify. Next, the isolated RNA can be
analyzed by agarose gel electrophoresis.

 OBJETIVO:

 Separar electroforéticamente el RNA.

 Determinar la integridad del RNA.
 Realizar la corrida electroforética del ARN.
INTRODUCCION:

INTRODUCCIÓN La electroforesis del RNA se realiza utilizando geles de agarosa, que es el método

estándar para separar, identificar y purificar fragmentos de RNA. La técnica es simple y rápida de

llevar a cabo y capaz de separar fragmentos de RNA que no pueden ser separados adecuadamente

por otros procedimientos; tales como, centrifugación en gradientes de densidad. Los geles de

agarosa pueden tener una variedad de tamaños y porosidades y pueden ser corridos en diferentes

configuraciones. La elección dentro de estos parámetros depende primariamente de los tamaños

de los fragmentos que van a ser separados.

Los geles de agarosa tienen un amplio rango de separación y pueden separar fragmentos de 0.5-50

Kb utilizando diferentes concentraciones de agarosa. Los geles de agarosa normalmente son

corridos en forma horizontal en un campo eléctrico de fuerza y dirección constantes. Durante la

corrida electroforética se aplica un determinado voltaje a los extremos del gel de agarosa, lo cual

genera un campo eléctrico con una fuerza definida por la longitud del gel y por la diferencia de

potencial en los extremos del gel (V/cm). Las moléculas de RNA expuestas a este campo eléctrico

migran hacia el ánodo debido a los grupos fosfato cargado negativamente a lo largo de la molécula

de RNA. La velocidad de migración es limitada por la fuerza friccional impuesta por la matriz del gel.

La relación carga-masa es la misma para moléculas de RNA de diferentes longitudes; es el tamaño

del RNA lo que determina en realidad que moléculas de RNA pasan a través del gel produciéndose

de este modo una efectiva separación de fragmentos de RNA de diferentes longitudes a través de

una electroforesis. Al separar el RNA en un gel de agarosa al 1% en TBE 1X; si el RNA no está

degradado deben observarse los dos componentes del RNA ribosomal: 28 S(5.1 Kb) y 18S(1.9 kb),

con la banda 28 S del doble de densidad que la banda 18 S.

ETAPAS DE LA TECNICA

a) Obtención de las muestras de RNA

b) Preparacion del gel de agarosa

c) Preparación de las muestras con el

buffer de carga

d) Carga de las muestras

e) Corrida del gel

h) Visualización del gel con luz
f)
ultravioleta y análisis y resultados
g) Teñido del gel

 METODO
Se procedió a un análisis electroforético DNA, en gel de agarosa al 1.8% para
después visualizar en una lámpara UV

 PROCEDIMIENTO

a) Preparación del gel de agarosa

 Pesar 1g de agarosa
 TAE IX
 Calentarn 20 seg. Disolver.
 Enfriar 40°C
 Agregar colorante safe 2.5 uL.
 Verter la agarosa al molde 3-5mm.
 Gelificar por 15 min
 Retirar el peine

b) Preparación y cargado de la muestra

 10ul RNA
 2ul looding buffer
 10ul muestra pozo

c) Corrida electroforética
 Conectar a fuente de poder
 100V 40 min
 Finalizar y desconectar fuente de poder
 Retirar el gel y ver lámpara UV
 CONCLUSIONES

 En esta practicar de análisis electroforético hemos podido observar en la

lámpara de UV la corrida que se llevó acabo en el gel de agarosa y ver
resultados positivos observando las corridas del DNA

 La técnica de electroforesis de ADN, en especial en gel de agarosa es una

técnica muy básica que en cualquier laboratorio que utilice técnicas
moleculares con RNA .

 ANEXOS