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PRACTICA N° 01
Ayacucho-Perú
2019
I. OBJETIVOS
Conocer las técnicas de aislamiento de un agente biológico de uso en la ingeniería
de bioprocesos.
Preparar un medio de cultivo adecuado y selectivo para lavaduras de uso en
fermentaciones alimentarias.
II. FUNDAMENTO TEORICO
Para el aislamiento de las levaduras se utiliza el método de recuento en placa, para lo cual se
prepara diluciones de 10-1 a 10-7 en tubos con solución salina de peptona, sembrando 100
μL de las tres últimas diluciones por la técnica de extensión en placas con agar - agar y mosto
de jora. Se incuban las placas en posición invertida a 25ºC durante 3 a 5 días en condiciones
aerobias. De las placas que contengan aproximadamente 50 colonias se eligiran al azar 10
colonias (5 colonias de las placas con agar – agar y 5 colonias de las placas con agar mosto
de jora) que presentaban características similares al de la especie S. cerevisiae (cremas, lisas,
brillantes y/o opacas). Estas colonias elegidas tendrán que ser transferidas a viales con agar
agar inclinado y se dejan crecer por 24 h a 25ºC para luego ser conservados a 4ºC hasta ser
utilizadas en las posteriores pruebas (Chuco Morales F. 1971).
2.2 Levaduras
El término levadura no tiene significado taxonómico y sólo es utilizado para describir el
estado morfológico de un hongo. Así el término de levadura se emplea para denominar a los
hongos unicelulares, cuyo crecimiento vegetativo se produce en su mayoría a partir de la
gemación o fisión binaria y cuyas esporas sexuales no se forman en el interior de cuerpos
fructíferos. Por lo que respecta a la morfología, pueden presentar forma redondeada, ovoidea
o elongada los que varían de 3 a 15 μm de diámetro, siendo relativamente constante para la
misma especie. Macroscópicamente, las levaduras producen colonias pastosas y opacas en
medios sólidos y que generalmente llegan a 0,5 a 3 mm de diámetro. Unas pocas especies
son característicamente pigmentadas, pero muchas son de color crema. (Chuco Morales F.
1971).
2.3 Clasificación de las levaduras
Las levaduras pertenecen al reino Fungi y dentro de él a la división Eumicota que agrupa a
los denominados hongos verdaderos. Dentro de esta división las levaduras se incluyen en 2
de las 5 subdivisiones de los Eumicetos.
La Ascomycota representada por las levaduras capaces de producir ascosporas, llamadas por
ello esporógenos, y la Deuteromycotina representada por las levaduras incapaces de formar
esporas llamadas por ello asporógenas o no esporógenas. Los géneros de levaduras
esporógenas, englobados todos ellos en la familia Saccharomycetaceae se distribuyen en 3
subfamilias. (Chuco Morales F. 1971).
Las levaduras no esporógenas constituyen la familia Cryptoccocaceae. Esta clasificación se
muestra en la tabla n°01.
Tabla 01. Clasificacion de las levaduras.
El ciclo celular es una sucesión ordenada de procesos mediante los cuales una célula crece y
se divide en dos. Históricamente el ciclo celular se le ha dividido en cuatro fases: la fase S
(síntesis) durante la cual se replica el DNA, la fase M (mitosis) en la que se segregan los
cromosomas y se dividen las células, y dos fases G1 y G2 (gap) que separan el final de la 21
mitosis del inicio de la replicación (G1) y el final de la replicación del inicio de la mitosis
(G2) . Durante el ciclo vegetativo, S. cerevisiae se divide por gemación. (Espinoza Rosales
L. 1936)
La chicha de jora es una bebida alcohólica obtenida por fermentación de la materia azucarada
contenida en el mosto del maíz germinado. Esta bebida es oriunda del Perú y en la actualidad
se consume en otros países de América del Sur. Esta operación consiste en la germinación
del maíz y secado de los granos para dar lugar al producto final llamado “jora”, palabra
derivada de “sora” mencionada anteriormente. Este proceso tiene por objeto degradar el
endospermo por las enzimas propias del maíz que será bien aprovechado por los
microorganismos responsables de la fermentación.
Para obtener las muestras de chicha de Jora que se elabora se realizó un muestreo estratificado
en la que se consideró como estrato homogéneo a la población con continuidad y antigüedad
mayor a dos años en la producción de esta bebida. Se tomó al 100% de la población que
cumplía estas características ya que el objetivo es encontrar a las mejores cepas presentes en
la chicha de jora. (Espinoza Rosales L. 1936).
2.9 Análisis fisicoquímicos
El análisis fisicoquímico de las muestras de chicha de Jora para los análisis fisicoquímicos
de las muestras de chicha de jora recolectadas en el proceso de muestreo se emplearon los
siguientes métodos:
2.10 La uva
La uva negra (Vitis Vinifera) es una fruta que utiliza el resveratrol (fitoalexina) presente en
la piel y en las semillas de esta variedad de uva, para protegerse de ciertas plagas. (Florio,
1986)
3.1. Materiales
3.3. Reactivos
Vasos de precipitado de 250 ml.
Matraz Erlenmeyer de 250 ml.
Agar agar.
Mortero y pilon.
Pectona
Probetas de 100 ml.
Glucosa
Placas petri.
Mechero de bunsen.
3.4. Muestras
Asa de Kolle.
Chicha de jora
3.2. Equipos
Uva negra criolla
Balanza
Papel periódico
Estufa
Algodón
Autoclave
Figura 03. Muestra de zumo de uva. Figura 04. Muestra de chicha de jora.
IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Se pesó 2.5 g de peptona, 2.5 g de glucosa y 3.75 g de agar – agar y mezclar agitando
en un matraz de 250 mL.
Cubrir con el papel periódico el matraz toda la boca y hasta la parte media, hacer por
lo menos dos capas de papel y asegurarlo con pabilo.
Todas las placas petri envolverlos con el papel periódico.
figura 09. Disolviendo el agar. figura 10. Fraccionando el agar en placas petri.
RECUENTO CON
MUESTRA
CUENTACOLONIAS
UVA 151
CHICHA 1 432.9
CHICHA 2 1061.66
Nª colonias = ((CA+CM+CB)/3)*65
Nª colonias = ((19+17+12)/3)*65
VI. DISCUSIONES
Según (Espinoza Rosales L. 1936) el ciclo celular es una sucesión ordenada de procesos
mediante los cuales una célula crece y se divide en dos (por gemación), en efecto en
transcurso de los días después de realizar el cultivo las levaduras crecieron en mayor
cantidad, a medida que transcurre los días el ciclo celular también aumentara, en caso de la
chicha de jora 1 el crecimiento es notable, la chicha de jora 2 es aun mas notoria esta se
expandió por completo, en el mosto de la uva si hubo crecimiento de levadura en la figura
14 se aprecia que es diferente a las otras dos muestras.
Según (gózales, 1987) las prácticas de inoculación buscaban limitar las levaduras no
Saccharomyces porque se creía que eran propensas a elevar la cantidad de compuestos no
deseables como el ácido acético, acetaldehído, acetona y acetato de etilo. Posteriormente se
ha demostrado que las levaduras no Saccharomyces poseen actividades enzimáticas que
catalizan la formación de compuestos aromáticos volátiles a partir de precursores no
volátiles, en la tabla 05. Podemos ver el comportamiento de estas levaduras. En la figura 14,
15 se observa que son diferentes por el simple hecho de contener diferentes especies de
levaduras cada muestra (mosto de uva o chicha de jora) véase en la tabla 04.
VII. CONCLUSION
Se conoció las técnicas de aislamiento de un agente biológico de uso en la ingeniería
de bioprocesos, logrando contar las levaduras que crecieron en el transcurso de los
días (véase tabla 06).
Se logro preparar un medio de cultivo adecuado (siguiendo las indicaciones de la
guía de practica) y selectivo para lavaduras de uso en fermentaciones alimentarias,
se trabajo con los mostos de uva y chicha de jora.
VIII. RECOMENDACIÓN
o Realizar un seguimiento durante los dias transcurridos para tener mas detalles con
respecto al crecimiento de levaduras en cada muestra, ya que estas se pueden
contaminar e infestar el espacio donde se encuentren, representando un riesgo
para los individuos que hacen uso el espacio de practicas.
IX. CUESTIONARIO
Los antibióticos se usan de forma rutinaria en cultivos celulares para prevenir posibles
contaminaciones. Sin embargo, este uso tiene efectos secundarios: muchos estudios
científicos demuestran que su uso afecta al crecimiento y a la diferenciación celular. Con
buenas prácticas de laboratorio, el uso de antibióticos es necesarios para evitar que otros
microrganismos no crezcan en cultivo que se realiza. El estudio de la sensibilidad bacteriana
a los antibióticos es una de las funciones más importantes de los laboratorios de
microbiología clínica. Dentro de los beneficios que presenta se encuentran:
Dirigir la terapéutica una vez que el germen es conocido.
Generar una base de datos que permita seleccionar los antibióticos a utilizar en un tratamiento
empírico (aquel en que no conocemos el agente causal).
Desarrollar políticas de uso de antimicrobianos.
Vigilar la aparición de nuevos mecanismos de resistencia.
Detectar precozmente la diseminación epidémica de una cepa, tanto a nivel hospitalario como
comunitario Pero la determinación de la sensibilidad a antimicrobianos no implica solo
realizar un conjunto de técnicas y medir los resultados. Es necesario saber interpretar los
mismos y darles el significado que realmente tienen. Entre el médico clínico que tiene en sus
manos un paciente, y el microbiólogo que entre las suyas tiene las placas con el
microorganismo responsable de una infección, debe haber buena comunicación, lo cual
implica hablar el mismo idioma. Los parámetros que determinan los resultados de
sensibilidad o resistencia, cada vez más involucran información proveniente de ambos lados:
el paciente y el microorganismo.
Se suele decir que las cervezas elaboradas con brettanomyces tienen ‘levadura salvaje’ (o
“wild yeast”, el término en inglés), e incluso la levadura comercial de White Labs “WPL644
Trois” fue vendida al principio como una cepa brett, pero finalmente se descubrió que
era saccharomyces y ahora se vende como “saccharomyces salvaje”. La reflexión es que si
estás comprando una cepa de levadura salvaje a un laboratorio que la comercialice.
Si la compras, eres consciente de lo que estás comprando, así que hay pruebas previas y
sabes, en teoría, cómo se va a comportar y prever de algún modo los resultados que esa
levadura va a tener en tu mosto. Quizás la levadura en cuestión haya sido una levadura salvaje
en algún momento de su existencia, pero bajo este prisma, la conclusión de Matt es que ya
no lo es. Y por tanto, la definición más correcta según este bloguero es que “la levadura
salvaje es la levadura que viene directamente del medio salvaje”.
La utilización de estos cultivos debe tener en cuenta estos efectos, cumpliendo a su vez con
la exigencia la automatización del proceso, calidad del producto y reproducibilidad. Lo que
lleva consigo la producción de cultivos con una actividad definida en términos de
viabilidad, eficacia y vida útil.
Las levaduras Saccharomyce cervisiae, utilizadas en la elaboración del pan degradan los
azucares a una mezcla de alcohol y de dióxido de carbono gaseoso que queda retenido en la
masa. Con la excreción de compuestos como cisteína y glutatión que rompen los puentes
disulfuro intermoleculares y con la producción de gas, las levaduras actúa
modificando química y mecánicamente el gluten, que es la proteína mayoritaria del trigo.
X. BIBLIOGRAFIA
Chuco Morales F. 1971. Determinación de diacetilo en la chicha de jora por
cromatografía de gases y espectrofotometría. [Tesis pregrado]. Huancayo: Programa
Académico de Ingeniería Química, Universidad Nacional del Centro del Perú.
Espinoza Rosales L. 1936. La chicha como bebida, algunos análisis. [Tesis pre
grado]. Lima: Facultad de farmacia y bioquímica, Universidad Nacional Mayor de San
Marcos;
Florio Ramírez E. 1986. Estudio de la fermentación de chicha de jora. [Tesis pre
grado]. Tacna: Facultad de Ingeniería en Industrias Alimentarias, Universidad Nacional
Jorge Basadre;
Gonzáles Duarte G. 1987. Estudio químico bromatológico de la chicha de jora
elaborada en Catacaos y Sullana. [Tesis pre grado]. Lima: Facultad de farmacia y bioquímica,
Universidad Nacional Mayor de San Marcos;
Hough S. Biotecnología de la cerveza y de la malta. Zaragoza: Acribia S.A.; 1990.
Gutiérrez, I.H.: garcía-romero, e.; de calatrava, r. 2004.antocianos de variedades
tintas cultivadas en la mancha; perfiles varietales característicos de la uva y de los vinos
monovarietales, y evolución durante la maduración de la baya. Alimentaria, 127-140
XI. ANEXO
Figuras 17. Se muestra la materia prima, el procedimiento que se siguió y los
resultados finales.