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AnexoMEdiosdeCultivo 19095 PDF
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Medios de Cultivo
NOTA
Agua Peptonada.
Peptona 1,0 g
Cloruro de sodio 8.5 g
Agua destilada 1,0 L
Peptona 10,0 g
Cloruro de sodio 10,0 g
Agua destilada 1,0 L
Principio de acción
Medio utilizado para enriquecimiento selectivo del género Vibrio ya que las
condiciones óptimas de desarrollo se favorecen por un pH alcalino.
Peptona 10,0 g
Cloruro Sódico 5,0 g
Fosfato sódico dibásico 3,5 g
Fosfato potásico monobásico 1,5 g
Agua destilada 1,0 L
Principio de acción
Almidón, agar.
Peptona 5,0 g
Extracto de carne 3,0 g
Cloruro de sodio 5,0 g
Almidón de maíz 10,0 g
Agar 20,0 g
Agua destilada 1,0 L
Principio de acción:
Suspender los ingredientes en agua destilada y hervir hasta disolución del agar;
envasar cantidades de 5,0 mL en tubos de 13 X 100 mm. Ajustar el pH entre 6.8 y
7,0, Esterilizar en autoclave a 121°C durante 10 a 12 minutos. Dejar solidificar el
medio inclinando los tubos.
Principio de acción:
Principio de acción:
Te4+ Te0
Principio de acción:
La bilis de buey que contiene una mezcla de sales biliares y que se encuentra en
el medio, inhibe el desarrollo de bacterias Gram positivas, permitiendo el
desarrollo de bacterias coliformes cuyo Gram es negativo. Las sales biliares se
presentan como derivados del ácido cólico y desoxicólico, su estructura química
básica es la del ciclo pentano perhidrofenantreno.
Principio de acción:
La bilis de buey que contiene el medio, inhibe el desarrollo de bacterias Gram
positivas, permitiendo el desarrollo de bacterias coliformes Gram negativas. Las
sales biliares son derivados del ácido cólico y desoxicólico, su estructura química
básica es la del ciclo pentano perhidrofenentreno. Salmonella, desarrolla bien en
este medio y presenta colonias rosas. Sus requerimientos nutricionales se
satisfacen con la lactosa y la peptona de gelatina.
Principio de acción:
Suspender 52,0 g del medio en 750,0 mL de agua, para humectar los polvos
insolubles, después adicionar el resto del agua y calentar a ebullición durante un
minuto, el pH final debe ser de 6.9. No esterilizar el medio y repartirlo en cajas
Petri.
Principio de acción:
En este medio se pueden distinguir las bacterias que fermentan la lactosa, las
cuales presentan colonias que viran el medio a color amarillo por la formación de
acidez a partir del azúcar. Las colonias rojas indican que los microorganismos no
fermentan la lactosa.
Principio de acción:
Principio de acción:
En este medio el sulfito de bismuto actúa con el verde brillante como agente
selectivo para la inhibición de coliformes, permitiendo el desarrollo de Salmonella.
Los compuestos de azufre funcionan como sustrato para la producción de ácido
sulfhídrico, mientras que la reducción de las sales de bismuto a bismuto metálico
tiñe las colonias de un brillo negro o café metálico por la reducción del sulfito a
sulfuro, produciendo ácido sulfhídrico.
Solución 1:
Peptona 10,0 g
Extracto de carne 5,0 g
Cloruro de sodio 20,0 g
Solución Stock de colorante 1000 X 1,0 mL
Agar 15,0 g
Agua destilada 0,9 L
Para obtener un color firme del medio, usar una solución colorante stock, en lugar
de estar pesando repetidamente los colorantes en polvo. Disolver los colorantes
en el alcohol etílico hasta obtener una concentración de 4% (peso/volumen); de
esta solución se toma un mililitro y se adiciona a un litro del medio mPCP (solución
1), que se encuentra enfriado entre 48 y 55°C.
Solución 2:
Celobiosa 10,0 g
Colistina 400000 UI
Polimixina B 100000 UI
Agua destilada 0,1 L
Principio de acción:
Principio de acción.
Los citocromos son hemoproteínas que contienen hierro y actúan como el último
eslabón de la cadena respiratoria aerobia, transfirió electrones al oxígeno con
formación de agua. El sistema citocromo se encuentra en oganismos aerobios y
anaerobios facultativos, lo que posibilita la identificación de aquéllos que carecen
de dicha enzima. El cianuro interrumpe el último eslabón de la cadena respiratoria,
sin embargo hay microorganismos que generan su energía metabólica por vías
alternas.
Disolver 23,0 g en 1 litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición para disolver
completamente los ingredientes. Distribuír en tubos y esterilizar en autoclave a
121°C durante 15 min. Inclinar los tubos después de esterilizar. Enfriar antes de su
uso y conservar en refrigeración (4-10 °C). La caducidad es aproximadamente de
6-8 semanas. Se inocula a partir de un cultivo en medio sólido (se recomienda
agar Kligler hierro); no se recomiendan las suspensiones en caldo. Estriar SOLO
EN EL PICO DE FLAUTA
Principio de acción.
Peptona 5,0 g
Extracto de levadura 3,0 g
Dextrosa (D-glucosa) 1,0 g
Púrpura de bromocresol 0,02 g
Agua destilada 1,0 L
Principio de acción
DNA, agar.
Principio de acción:
Principio de acción
Principio de acción:
La lactosa es hidrolizada por la enzima β-D-galactosidasa presente en las
bacterias coliformes, generándose como subproductos glucosa y galactosa que,
secuencialmente, son metabolizados hasta ácidos y CO2; este último se detecta
en las campanas de Durham. Cuando la fermentación de lactosa se lleva a cabo a
44.5 °C la prueba positiva indica presencia de Escherichia coli.
Principio de acción:
Alrededor del 97% de las cepas de E. coli (incluidas las no productoras de gas)
producen la enzima β -D-glucuronidasa (GUD), la cual escinde al sustrato MUG
dando como producto final la 4-metilumbelliferona; este último compuesto es
fácilmente detectable cuando se expone a una fuente de luz ultravioleta.
Peptona 10,0 g
Lactosa 10,0 g
Fosfato dibásico de potasio 2,0 g
Eosina Y 0,4 g
Azul de metileno 0,065 g
Agua destilada 1,0 L
Peptona 10,0 g
Lactosa 5,0 g
Sacarosa 5,0
K2HPO4 2,0 g
Eosina Yellow 0,4 g
Azul de metileno 0,065 g
Agar 13,5 g
Agua destilada 1,0 L
Principio de acción
pH final 7,5±0,2
Suspender los ingredientes en el agua destilada estéril, hervir con agitación hasta
la disolución completa del agar. No sobrecalentar. Dejar enfriar entre 55 y 60°C,
posteriormente distribuir en cajas de Petri estériles en condiciones asépticas.
Principio de acción
Principio de acción
Principio de acción:
Principio de acción
Principio de acción:
En el caso específico de la determinación de V. cholerae se utiliza este medio de
cultivo para purificación de colonias sospechosas provenientes de los medios de
cultivo TCBS o mCPC, utilizando el principio de la halofilia o halotolerancia.
Principio de acción:
Principio de acción:
Este medio se utiliza para observar la tolerancia al cloruro de sodio que presentan
algunos microorganismos.
Principio de acción
Peptona 2,0 g
Extracto de levadura 0,5 g
Cloruro de sodio 20,0 g
Dextrosa 10,0 g
Púrpura de bromocresol 0,015 g
Agar 3,0 g
Agua destilada 1,0 L
Principio de acción
Para cada carbohidrato, inocular un tubo con un cultivo puro del microorganismo
seleccionado como patrón positivo, la inoculación se hace por picadura hasta el
fondo de los tubos, después de lo cual un tubo se sella con parafina estéril y otro
no se sella. El microorganismo utilizado para la inoculación deberá estar en fase
logarítmica de desarrollo.
Infusión cerebro corazón, caldo. Infusión cerebro corazón, agar (BHI, caldo/
BHI, agar).
Principio de acción:
Principio de acción
Principio de acción:
Lactosa verde brillante bilis al 2%, caldo (Brila). Ver: Bilis verde brillante con
lactosa, caldo (Brila).
Lactosado, caldo.
Principio de acción
Principio de acción
Este medio se usa como prueba presuntiva en la detección del grupo coliforme. El
lauril sulfato de sodio, es un agente tensoactivo que inhibe el desarrollo de
bacterias Gram positivas, debido a los constituyentes de la membrana de éstos,
sin embargo sí se pueden desarrollar bacterias Gram negativas. La triptona
proporciona nitrógeno, azufre, carbono y algunos minerales que son esenciales
para el crecimiento microbiano. Los fosfatos funcionan como amortiguadores del
pH en el medio de cultivo y el cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico.
Principio de acción
Principio de acción
La lisina puede ser descarborxilada por los microorganismos y transformarla en la
amina cadaverina. Esto produce un viraje al violeta del indicador de pH púrpura de
bromocresol. Puesto que la descarboxilación sólo tiene lugar en medio ácido (pH
inferior a 6,0), es necesario que se produzca previamente la acidificación de medio
de cultivo, por fermentación de la glucosa. Por este motivo, este medio de cultivo
sólo puede utilizarse para la diferenciación de cultivos que fermentan la glucosa.
Los microorganismos que no descarboxilan la lisina, pero fermentadores de la
glucosa, producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio de cultivo. La
incubación prolongada puede ocasionar una alcalinización en la zona de la
superficie del medio de cultivo y en consecuencia, se produce un viraje al violeta. La
formación de HxS produce una coloración negra debida al sulfuro de hierro
producido.
Las cepas del grupo Proteus-Providencia, con excepción de algunas cepas de
Proteus morganii, desamina a la lisina a ácido α-cetocarbónico. Este último forma
compuestos pardo-rojizos en la región superficial del medio de cultivo con la sal de
hierro y bajo la influencia de oxígeno.
Solución de acriflavina
Clorhidrato de acriflavina 15,0 mg
Agua destilada 1.0 mL
Principio de acción
Principio de acción
Principio de acción
Malonato, caldo.
Principio de acción
Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada, calentar hasta ebullición para
disolver por completo y ajustar el pH a 7,0 0,2 a 25°C. Distribuir en tubos de
ensayo con tapón de rosca o en un matraz, después esterilizar a 121°C durante 15
minutos. Enfriar a 45-50°C y vaciar en cajas Petri. Puede volverse a fundir una sola
vez cuando se necesite.
Principio de acción
MTM, medio.
Nitratos, caldo.
Agregar los ingredientes a un litro de agua, agitar hasta disolución completa. Verter
en tubos de 13 x 100 mm con tapón de rosca. Esterilizar en autoclave a 121 ± 1°C
durante 15 minutos.
Principio de acción
Principio de acción:
Principio de acción
Principio de acción
Principio de acción
Prueba de Voges-Proskauer
Principio de acción
Principio de acción
Este medio detecta a los microorganismos que pueden lisar los eritrocitos,
pudiendo diferenciar las hemòlisis alfa o beta.
Selenito-cistina, caldo.
Principio de acción
Principio de acción
Sodio lauril sulfato de, caldo. Ver: Lauril sulfato de sodio, caldo.
Principio de acción
Agitar hasta disolver los ingredientes. Esterilizar a 121 ± 1ºC durante 15 minutos.
El pH final de la solución debe ser 7,3 ± 0,2.
Principio de acción
Principio de acción
Este medio es altamente nutritivo y versátil, es recomendado para uso en general.
Debido a la formulación de la triptona y la peptona de soya, el medio estimula el
crecimiento abundante de organismos fastidiosos sin la adición de suero, etc. El
caldo triptona soya es uno de los medios recomendados por la AOAC para el
preenriquecimiento de Salmonella.
Adicionar al caldo soya tripticaseína el sulfito de potasio por cada 1,0 L de medio,
de tal forma que la concentración final del sulfito de potasio sea 0,5%. Esterilizar a
121±1°C por 15 minutos.
Principio de acción
Surraco, caldo
Sacarosa 0,8 g
Urea 0,8 g
Azul de timol 4 gotas
Base caldo rojo de fenol 1,5 g
Agua destilada 100,0 mL
Disolver 1.5 g del medio base caldo rojo de fenol en 100 mL de agua destilada,
agregar 0,8 g de sacarosa y 4 gotas de azul de timol SI. De esta solución se
toman 10 mL en un matraz Erlenmayer de 10 mL. Esterilizar ambas soluciones en
autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 10 minutos (EVITAR
SOBRECALENTAMIENTO). Esterilizar un equipo de microfiltración, agujas y
jeringas. Una vez esterilizado el material y los médios, dejar enfriar. Al matraz con
los 10 mL de caldo sacarosa adicionar en condiciones de esterilidad 0,8 g de urea,
agitar para disolver completamente. En condiciones de esterilidad tomar el
contenido del matraz con una jeringa de 10 mL y pasar por el filtro (ya preparado)
al matraz que contiene los 90 mL restantes del medio. Agitar la mezcla estéril y
distribuir volúmenes de 3,0 mL en tubos de ensayo de 13 X 100 mm esterilizados
previamente.
Principio de acción.
Suspender los ingredientes en el agua y hervir hasta disolución del agar. En caso
de desearlo inclinado, distribuirlo en tubos y después de esterilizar en autoclave a
121°C durante 15 minutos, inclinarlos; el pH final deberá estar en 7.2±0,2. Para el
llenado de placas, dejar enfriar el medio a una temperatura entre 45 y 50°C antes
de llenar las cajas.
Principio de acción
Principio de acción
Disolver los ingredientes (para preparación del caldo omitir el agar) en el el agua
destilada, mezclar y calentar lentamente hasta su disolución completa. Esterilizar a
121 ± 1ºC durante 15 minutos.
Principio de acción.
El medio de triptosa es un medio para propósitos generales, no selectivo. La
triptosa es una mezcla de un hidrolizado enzimático con propiedades nutricionales
distintivas. El medio de triptosa posee péptidos de alto peso molecular adecuado
para requerimientos de amino ácidos de cadena larga. Proporciona nitrógeno,
amino ácidos y vitaminas.
Principio de acción
Tetrationato, caldo.
Principio de acción
Urea, caldo.
Fosfato monopotásico 9,1 g
Fosfato disódico 9,5 g
Extracto de levadura 0,1 g
Urea de alta pureza (20%) 20,0 g
Rojo fenol 0,01 g
Agua desionizada 1,0 L
pH 6,8
Pesar la cantidad con precisión según las directivas del rótulo. Rehidratar con el
agua desionizada. No calentar la solución, con el calor la urea se descompone.
Esterilizar el resto de los componentes del medio (medio base) a 121°C durante
15 minutos y enfriar. Esterilizar la urea por filtración en membrana y agregar al
medio base ya estéril y frío. De manera aséptica distribuír aproximadamente 3,0
mL en tubos de 13 x 100 con tapón de rosca.
Principio de acción
El sustrato urea, a menudo se designa como una carbamida. Todas las amidas
son hidrolizadas con facilidad. La urea es hidrolizada por una enzima específica, la
ureasa (o urea amidohidrolasa), para dar dos moléculas de amoniaco. En
solución, la urea se hidroliza a carbonato de amonio como producto final. La
ureasa es una enzima constitutiva microbiana importante relacionada con la
descomposición de compuestos orgánicos, clasificada como una amidasa. La
ureasa actúa en los compuestos a nivel de los puentes C-N, excepto en aquellos
que contienen puestes peptídicos. El indicador rojo de fenol virará a un colo rosa-
rojo intenso cuando la prueba sea positiva.
Principio de acción
Ver caldo urea. Para la prueba rápida de la urea el indicador virará a color cereza
(púrpura rojizo), en caso de ser positiva.
Solución A
Triptona 5,0 g
Cloruro de sodio 8,0 g
Fosfato monobásico de potasio 1,6 g
Agua destilada 1,0 L
Solución B
Cloruro de magnesio hexahidratado 400,0 g
Agua destilada 1,0 L
Solución C
Oxalato de verde de malaquita 0,4 g
Agua destilada 100,0 mL
Solución A 1000,0 mL
Solución B 100,0 mL
Solución C 10,0 mL
Preparar el medio completo con las proporciones descritas para cada una de las
soluciones. Distribuir antes de usar dentro de tubos estériles en cantidades de
10,0 mL. Esterilizar a 115°C durante 15 min. Ajustar el pH si es necesario para
que al final de la esterilización sea de 5.2. Almacenar en refrigeración.
Principio de acción
Principio de acción
Verde brillante bilis al 2 % lactosa, caldo. Ver: Bilis verde brillante con
lactosa, caldo (Brila).
Xilosa 3,75 g
L-lisina 5,0 g
Lactosa 7,5 g
Sacarosa 7,5 g
Cloruro de sodio 5,0 g
Extracto de levadura 3,0 g
Rojo de fenol 0,08 g
Agar 15,0 g
Desoxicolato de sodio 2,5 g
Citrato férrico amoniacal 0,8 g
Tiosulfato de sodio 6,8 g
Agua destilada 1,0 L
±0,2
Suspender los ingredientes en el agua destilada, y calentar en baño de agua a
55°C, agitando frecuentemente, hasta disolución completa. Ajustar el pH a 6.9
±0,2. Enfriar a 50°C y verter en cajas de Petri estériles. No se esterilice. El
sobrecalentamiento produce una precipitación, la reactividad del medio puede ser
satisfactoria, pero las colonias sueles ser muy pequeñas.
Principio de acción
Etanol 70 %.
70,0 mL
Alochol etílico absoluto
Agua destilada 100,0 mL
Reactivo de Kovac’s.
p-dimetilaminobenzaldehído 5,0 g
Alcohol amílico (normal) 75,0 mL
HCI concentrado 25,0 mL
Principio de acción
Reactivos
Realizar la prueba a partir de agar-hierro de Kligler (KIA) ó agar triple azúcar hierro
(TSI). Emulsificar un asa cargada de desarrollo bacteriano con 0,5 mL de solución
fisiológica hasta producir una suspensión abundante. Añadir a dicha suspensión
una gota de tolueno y mezclar enérgicamente unos segundos para liberar la
enzima de las células bacterianas. Añadir a la suspensión igual cantidad de
solución buffer de ONPG y colocar la mezcla en baño de agua a 37ºC.
Principio de acción
El ortonitrofenil galactósido (ONPG) es estructuralmente similar a la lactosa, salvo
que la glucosa ha sido substituida por el ortonitrofenil.
Reactivo de oxidasa.
N-Tetrametil-p-Fenilendiamina 0,5 g
Agua destilada 100,0 mL
Principio de acción
Los citocromos son hemoproteínas que contienen hierro y actúan como el último
eslabón de la cadena respiratoria aerobia, tranfiriendo electrones (hidrógeno) al
oxígeno, con formación de agua. El sistema citocromo se encuentra en los
microorganismos aerobios o anaerobios facultativos, de modo que la prueba de
oxidasa es importante para identificar a aquellos organismos que carecen de la
enzima o son anaerobios obligados.
La prueba de citocromo oxidasa utiliza el diclorhidrato de Tetrametil-p-
Fenilendiamina, que acúa como aceptor artifical de electrones, sustituyendo al
oxígeno. La p-fenilendiamina es incolora en estado reducido, pero en presencia de
citocromo oxidasa y oxígeno atmosférico se oxida formando azul de indofenol.
Plasma de Conejo.
Principio de acción
VP 1
alfa-naftol 5,0 g
Alcohol absoluto 100,0 g
VP 2
Reactivo A
Alfa-naftilamina 0,5 g
Àcido acètico 5N 100,0 mL
Reactivo B
Reactivo C
Alfa-naftol 1,0 g
Àcido acètico 5N 200,0 mL
Gram
Alcohol-acetona
Cristal violeta
Solución A
Cristal violeta 2,0 g
Etanol (95%) 20,0 mL
Solución B
Oxalato de amonio 0,8 g
Agua 80,0 mL
Solución de Yodo
Yodo 1,0 g
Yoduro de potasio 2,0 g
Agua 300,0 mL
Solución de Safranina
Safranina 0,25 g
Etanol (95%) 10,0 mL
Agua 100,0 mL
Disolver la safranina en el etanol, mezclar, agregar el agua y volver a agitar. Filtrar
la solución con papel filtro.
Impronta Húmeda