Medio levadura manitol-agar (LMA) (Rhizobio)

1. Componentes
Manitol 10.0 g
Agua de levadura1 100.0 ml
6 Extracto de levadura 2 0,5 g
K2HPO4 0,5 g
MgSO 4 "711 2 0 0,1 g
NaCI 0,2 g
FeCl 3 "6H2 0 0,01 g
CaCl 2 0,15 g
Agar (Difco-Bacto):3
en medio neutro 15.0 g
en medio acido 20.0 g
Solucin indicadora de pH4 5.0 ml
solucin de rojo Congo5 10.0 ml
Agua destilada, agregar hasta 1000.0 ml

2. Preparacin

Se hierve el medio hasta disolver el agar agitando de vez en cuando. Despus se

esteriliza en el autoclave, y se corrige su pH a 6.8 con 0.8-1.0 ml de NaOH 0.5 N
estril, o se acidifica

1. Para preparar el agua de levadura, disolver 600 g de levadura (Fleischmann) en 5400

ml de agua y hervir durante una hora en la autoclave, sin presin. Dejar enfriar y
centrifugar; a falta de una centrifuga, dejar precipitar durante 2 a 4 das en el refrigerador.
Envasar volmenes de 100 ml del sobrenadante y guardarlos sin esterilizar en el
congelador.

2. Es preferible utilizar agua de levadura en aquellos lugares donde el extracto de

levadura est expuesto a la humedad, porque esta causa deterioro en su
composicin.

3. Para medio lquido, no se agrega el agar.

4. Azul de bromotimol 0.5% en 0,016 N NaOll, para pH 6.8 (ABT).

 Purpura de bromocresol 0.5% en 0.016 N NaOI, para p11 5.5 (PBC).
Verde de bromocresol 0.3% en 0,016 N NaOH, para pH 4.5
(VBC).
5. Solucin acuosa de rojo Congo: 1 g por 400 ml de H20.

Hasta el pH 5.5 con aproximadamente 1,7 ml de HCI 1.0 N estril. Se acidifica despus
de esterilizar porque la acidez, combinada con la alta temperatura del autoclave,
ocasionan la degradacin del agar; por esta razn se utiliza una concentracin mayor
de agar para el medio acido.

3. El uso de fungicidas en el LMA es til para los primeros aislamientos de ndulos y para
los recuentos. Si la muestra contiene muchos hongos, el fungicida no basta para
inhibirlos. Deben agregarse despus de la esterilizaci6n, porque se alteran en el
autoclave; es aconsejable disolverlos en agua estril y agregarlos inmediatamente
despus de disueltos, o esterilizarlos por filtracin. Cuando el medio se ha enfriado
hasta 50 C, se

Dosis: Nistatina 0,05 g/l, Actidiona 0,1 g/l.

4. Distribucin del medio en cajas Petri o en tubos

El medio LMA se deja enfriar hasta 50 C antes de distribuirlo en las cajas Petri
estriles, para evitar que se produzca demasiada agua de condensacin. El agar se
solidifica a 44 C. Una caja Petri de vidrio contiene de 30 a 40 ml del medio; una caja Petri
desechable contiene 25 ml.