UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUÍZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

FAMILIA
Bartonellaceae

AUTORA
Chozo Mestanza Selene Vanessa

DOCENTE
Dr. Olga Francia Arana

ASIGNATURA
Bacteriología

LAMBAYEQUE 5 DE DICIEMBRE 2018

1. CLASIFICACION TAXONOMICA

Hasta 1993 B. bacilliformis era la única especie de este género, miembro de la familia
Bartonellaceae que junto con las familias Rickettsiaceae y Anaplasmataceae
conformaban el orden de las Rickettsiales. La familia Bartonellaceae había sido
localizada dentro de la Rickettsiales sobre la base de características morfológicas,
asociación parasítica con células eucaríoticas y el modo de transmisión por artrópodos.
El primer estudio filogenético de B. bacilliformis demuestra la estrecha relación
filogenética y fenotípica entre B. bacilliformis y Rochalimaea quintana. la primera
propuesta que fue aceptada por la comunidad científica, de unir el género Rochalimaea al
de Bartonella y se removió la familia Bartonellaceae del orden de las Rickettsiales. De
esta unión surgieron las especies B. bacilliformis, B. quintana, B. vinsonii, B. elizabethae
y B. henselae. Posteriormente Birtles realiza una segunda propuesta para unir el género
Grahamella al de Bartonella, que también es aceptado, de esta unión surgen las especies
B. talpae, B. peromysci y otras nuevas Bartonellas que son B. grahamii, B. taylorii y B.
doshiae. Finalmente se reporta cuatro nuevas especies, B. clarridgeiae, B. tribocorum y
B. alsatica, B. koehlerae.

El género Bartonella ha sido clasificado de acuerdo a las características filogenéticas

basado en datos de hibridación DNA-DNA y secuencia genética del
16SrRNA.Actualmente el género Bartonella contiene 17 especies de los cuales 7 han sido
reportado en los últimos 5 años y siete son patógenas para el humano y producen diversas
enfermedades.
 *Según el Manual Determinativo de Bergey:

Categoría 1: Bacterias Gram negativos que tienen pared celular.

Grupo 4: Bacilos y cocos aerobios y microaerófilos gramnegativos.

*Según el Manual Sistemático Bacteriológico de Bergey

PHYLUM: Proteobacteria
CLASE: Alphaproteobacteria
ORDEN: Rhizobiales
FAMILIA: Bartonellaceae
GÉNERO: Bartonella
ESPECIES: B. bacilliformis
B. henselae
B. quintana
B. bovis
B. elizabethae

……….

2. CARACTERISITCAS GENERALES GENERO BARTONELLA

• Miembros del género Bartonella son bacterias gramnegativas, intracelulares facultativos,

considerados patógenos oportunistas.
• Algunos presentan flagelos unipolares de 2-16 en el caso de Bartonella bacilliformis y B.
clarridgeiae encontrados solamente en cultivos.
• Pleomorfismo que adopta formas cocoide, bacilar y coco-bacilar
• Se tiñen débilmente con colorantes de anilina, pero toman un color rojo brillante a púrpura
con los colorantes de Wright o Giemsa.
• No forman esporas.
• Aerobios
• Metabolismo oxidativo.
 • Catalasas variables, por lo general negativos.
• No son encapsulados.
• Oxidasas variables, por lo general negativos.
• O-F de la GLUCOSA: (negativo).
• Temperatura optima de crecimiento: Bartonella bacilliformis: 25-30 °C. Otros: 35-37°C.
• Exigentes nutricionalmente, se puede cultivar en el laboratorio.
• El porcentaje de G+C es de 37% - 41%
• Es trasmitida por insectos tales como garrapatas, pulgas, moscas de la arena y mosquitos.
Al menos ocho especies o subespecies de Bartonella infectan a los seres humanos. La
enfermedad de Carrión o fiebre de la oroya o verruga peruana causada por la infección de
la bacteria Bartonella bacilliformis y transmitida por Lutzomyia. La enfermedad por
arañazo de gato es una enfermedad extendida alrededor del mundo. Los gatos son el
principal reservorio de Bartonella henselae (agente etiológico) y la bacteria es transmitida
de gato a gato por la pulga del gato Ctenocephalides felis. La fiebre de las trincheras es
producida por la infección de Bartonella quintana y la bacteria es transmitida por el piojo
humano Pediculus humanus corporis. Los humanos son el único reservorio.

3. MEDIOS
• Cultivo en agar infusión de corazón que contiene sangre de caballo o de conejo al 5%.
• Los agares BHI suplementados con sangre, tripticasa de soja.
• Agar Columbia y el agar chocolate enriquecido también pueden favorecer el crecimiento.
• Los medios recién preparados son esenciales para un desarrollo óptimo.
• No existen medios selectivos y no se deben utilizar medios que contienen antibióticos.
• Las placas inoculadas se incuban a 35 °C a 37 °C como mínimo durante 21 días, aunque
algunas cepas de Bartonella pueden requerir hasta 45 días antes de que se aprecie la
proliferación.
4. MORFOLOGÍA DE LAS COLONIAS

En aislamiento primario, las especies de Bartonella aparecen inicialmente como pequeñas

colonias adherentes blancas que varían en tamaño y forma. Algunas cepas de B. henselae,
B. quintana y B. elizabethae pueden deprimir la superficie de agar durante su crecimiento.

- En forma característica, las colonias de B. henselae son blancas, secas, adherentes,

“similares a una coliflor’, están introducidas en el agar y son morfológicamente
heterogéneas. Con múltiples pasajes, las colonias se tornan menos secas, menos adherentes,
más grandes y tienden a proliferar más rápido.

- Las colonias de B. elizabethae se asemejan a B. henselae excepto en que se puede observar

una hemolisis débil o parcial alrededor de las colonias que crecen en agar infusión de
corazón con sangre de conejo al 5%.

- Las colonias de B. bacilliformis difieren de las otras especies en que son inicialmente
pequeñas, lisas y translucidas y se mantienen así en un subcultivo seriado.

Colonias de Bartonella henselae

5. ESPECIE
Bartonella bacilliformis

Bartonella bacilliformis es el agente etiológico de la Bartonelosis humana, enfermedad de

Carrión o Verruga Peruana. ha sido conocida desde tiempos Pre-Incas. Numerosas
representaciones artísticas en arcilla “huacos” representan la fase crónica de la enfermedad.
El cronista Garcilazo De La Vega describió una enfermedad con verrugas en las tropas
españolas que llegaron por primera vez a Coaque-Ecuador. Por mucho tiempo se pensó que
la enfermedad era endémica sólo en Perú y que tenía sólo una fase: “Verruga Peruana”.

La enfermedad fue llamada después de que un estudiante de medicina Daniel Alcides

Carrión (1857-1885), natural de Cerro de Pasco (Perú), describió la enfermedad después
de inocularse con la secreción de un paciente afectado (Carmen Paredes) de verruga
peruana, el 27 de agosto de 1885. El doctor Evaristo M. Chávez, un colega del Hospital
Dos de Mayo, ayudó en la inoculación y aproximadamente a los 21 días de la inoculación,
Carrión inició los primeros síntomas de la enfermedad. Él mismo describió de manera
meticulosa todos los pasos y síntomas hasta que ya no pudo hacerlo debido a la gravedad
de la enfermedad. Falleció el 5 de octubre de 1885. Gracias al sacrificio de Carrión, se pudo
probar que la «fiebre de la oroya» y la «verruga peruana» eran dos fases de la misma
enfermedad. En su honor, el día de su muerte (5 de octubre) se conmemora el Día de la
Medicina Peruana.

Posteriormente, en 1905, el microbiólogo peruano Alberto Barton en 1905 descubrió unos

cuerpos endoglobulares en pacientes afectados por la «fiebre de la oroya» y publicó sus
hallazgos en 1909. Barton originalmente identificó las estructuras endoglobulares en
pacientes en fase aguda, los cuales correspondían a las bacterias parasitando los glóbulos
rojos. Hasta 1993, el género Bartonella contenía solo una especie. En la actualidad hay más
de 23 especies identificada dentro de la familia Bartonellaceae.
 FUENTE: Revista Folia (1997) UNMSM, Lima
Esta es una enfermedad infecciosa, oriunda del Perú, Colombia y Ecuador, que se presenta
en los valles interandinos que se ubican entre los 500 a 3200 m.s.n.m., valles occidentales
entre los 800 a 3200 m.s.n.m. y valles orientales del norte, donde existen condiciones
ecológicas favorables que permiten que vectores del género Lutzomyia transmita la
enfermedad. Existen zonas endémicas en los Departamentos de Piura, La Libertad, Ancash,
Lima, Cajamarca, Amazonas, Junín, Huancavelica y se han reportado casos en Ayacucho
y el valle del Mantaro. El departamento de Ancash es la zona endémica de mayor
incidencia, reportándose casos en el Callejón de Huaylas y en el Callejón de Conchucos.
Zonas “nuevas” donde se han reportado brotes se encuentran en San Ignacio (Cajamarca),
Churuja (Amazonas) y en el valle de Urubamba, Calca y Quillabamba en Cuzco,
considerándose en la actualidad como una enfermedad reemergente. (Henríquez, 2002
p.59)

FUENTE: Intituto Nacional De Salud (INS) 2001.

5.1 CARACTERISTICAS MORFOLÓGICAS

• Es un bacilo gramnegativo pleomórfico, intracelular de las células endoteliales y

eritrocitos.
• Mide 0.2-0.5 por 1-2um
• Flagelo unipolar con 2 a 16 flagelos que le confiere alta movilidad, se tiñe de color rojo
con Giemsa.
• No forman esporas
 Bartonella baciliformis con flagelos unipolares. Microscopía electrónica. Cortesía: Dr. Luis Solano.
Instituto de Medicina Tropical «Daniel Alcides Carrión» Universidad Nacional Mayor de San Marcos.

5.2 CARACTERÍSTICAS FISIOLÓGICAS

• La temperatura óptima de crecimiento es 28ºC, no crece 37°C

• Aeróbico, no fermentativo
• Catalasa positiva
• Oxidasa negativa
• Crece lentamente en medios enriquecidos, exigente nutricional

5.3 ESTRUCTURA ANTIGENICA

Se han determinado 24 antígenos de B. bacilliformis por inmunoprecipitación y Western

blot usando sueros de conejos y de pacientes con anticuerpos antibartonella. Los
antígenos han sido designados de acuerdo a su peso molecular que varía de 16 a 160 kDa.
De estos, al menos seis (antígenos 18, 26, 36, 48, 65 y 75) son capaces de detectar
anticuerpos especifico en sueros de pacientes bartonelósicos. Los antígenos 50, 65 y 75
pueden detectar anticuerpos persistentes.
 Se han identificado seis probables antígenos de la pared celular, de los cuales los
antígenos 65 y 75 son considerados como los principales antígenos, debido a que siempre
presentan fuerte reactividad demostrado por inmunoensayo. Los antígenos proteicos de
Bartonella reaccionan específicamente con la especie cuando se usa western blot o
inmunoprecipitación. Las proteínas de la membrana externa de B. bacilliformis han sido
purificadas y se ha demostrado la presencia de 14 proteínas cuyo peso molecular varia de
11.2 a 75.3 kDa. Tres proteínas de 31.5, 42 y 45 kDa pueden representar las proteínas de
membrana externa inmunodominantes.

Los lipopolisacaridos de la membrana externa también han sido purificados y producen

una banda difusa de aproximadamente 5 kDa, son pobremente inmunogénicos.

Una proteína probablemente de localización citoplasmatica de 65 kDa llamada Bb65 ha

sido identificada como una de los principales antígenos específicos de B. bacilliformis.

5.4 FACTORES DE VIRULENCIA

5.4.1 ADHERENCIA

La adhesión de la B. bacilliformis al eritrocito se produce después de un intervalo de

tiempo de 15 a 30 minutos formando complejos eritrocito-bacteria. El máximo número
de complejos ocurre a las seis horas. Al inactivar la fuerza motriz de los protones o la
respiración se reduce significativamente el enlace de B. bacilliformis al eritrocito, lo que
indica que la adhesión es dependiente de energía. Se ha observado que prefiere unirse a
eritrocitos humanos que a los de conejos o carnero. Probablemente el eritrocito humano
presenta un receptor más apropiado para la bacteria o una mayor densidad o accesibilidad
de los receptores que los eritrocitos de animales.

Se está investigando intensamente la naturaleza molecular de la adherencia de la B.

bacilliformis.
Datos recientes sugieren que B. bacilliformis posee una fimbria agregativa o pili
formante sirven como adhesinas.
5.4.2 INVASIÓN

5.4.2.1 La deformina

Es una proteína extracelular de 67 kDa, es inactivada por proteasas y calor a 70-80ºC,

antibióticos como kanamicina inhibe su síntesis, es liberada en los medios de cultivo
durante el crecimiento bacteriano. Produce profundas invaginaciones en la membrana del
eritrocito.

5.4.2.2 Flagelos

El segundo determinante involucrado en el mecanismo de invasión es la motilidad; la

deformina por sí sola, no produce mayor entrada de B. bacilliformis al citosol de la célula
hospedera a menos que la bacteria sea móvil. Bartonella bacilliformis es una bacteria que
tiene múltiples flagelos unipolares que le dan gran movilidad. Los flagelos han sido
aislados y purificados. Utilizando anticuerpos dirigidos contra el flagelo purificado se ha
determinado que el componente principal del flagelo es
una proteína de 42 kDa llamada flagelina. Estos datos
sugieren que el flagelo juega un rol importante en la
invasión del eritrocito y puede actuar sinérgicamente
con la deformina para facilitar la entrada de la bacteria
dentro de las invaginaciones producida por la
deformina. El flagelo le sirve para desplazarse, las
bacterias reciben información del exterior por medio de
quimioreceptores que se encuentran en la superficie de la pared bacteriana, si el medio es
adecuado se sus-penderá el movimiento, actúa como un coayudante en la invasividad o
penetración al eritrocito.

5.4.2.3 Las proteínas ialA e ialB

B. bacilliformis tiene un locus asociado a la invasión denominado ialAB. Este locus

contiene dos genes (ialA e ialB). Aparentemente se requieren ambos genes para producir
el fenotipo invasivo.
ANEXOS

5.5 AISLAMIENTO

El aislamiento de B. bacilliformis se puede realizar en los siguientes medios:

• En agar Columbia con sangre de carnero al 10% en placas Petri.

• En medio de cultivo bifásico distribuido en frascos, constituido por una fase sólida
de agar Columbia con sangre de carnero al 10% y extracto de levadura al 0,1% y una fase
líquida con medio RPMI suplementado con suero fetal bovino; una alternativa para la
fase líquida es el medio RPMI sin suplemento o infusión cerebro corazón.

El mayor porcentaje de aislamientos (70-80%) se logra en las dos primeras semanas de

incubación, en la tercera y cuarta semana se obtiene el resto (20-25%).

• Condición específica de la muestra

• La muestra de sangre no debe de tener más de siete días de haber sido obtenida.
• La muestra debe ser obtenida antes del tratamiento con antibióticos
• Para incrementar el aislamiento de B. bacilliformis de la sangre es conveniente
lisar los eritrocitos por medios mecánicos como el de centrifugación de la muestra.

5.5.1 Agar Columbia sangre de carnero al 10%

• Inocular de 0,5 a 1mL de sangre sobre el agar Columbia, dejando que la sangre
fluya sobre la superficie del medio, luego cerrar la placa.
• Colocar la placa con la muestra sembrada en bolsas de polietileno de baja densidad
autosellables para mantener la humedad del medio de cultivo que debido al largo período
de incubación se seca y para evitar contaminación con hongos saprofitos.
• Incubar el cultivo a 28 ºC hasta por 45 días.
Lectura de cultivos en placas:

• Examinar los cultivos visualmente con luz transmitida o con una lupa, todos los
días hasta por 45 días.
• Si se ve desarrollo de colonias entre las 24 y 72 horas, no se trata de B.
bacilliformis. Efectuar un examen microscópico de las colonias, realizar el frotis de una
colonia y teñirla con colorante Gram para determinar la forma bacteriana, y si son Gram
positivas o negativas. Identificar la bacteria mediante pruebas bioquímicas y serológicas;
podría tratarse de una bacteria que esté causando una complicación al paciente, por lo que
es necesario identificarla y realizar el antibiograma correspondiente.
• En el aislamiento primario las colonias de B. bacilliformis se desarrollan entre
cuatro días a seis semanas de incubación, crecen lentamente. Son colonias pequeñas de
apenas 1 mm de diámetro, translúcidas tipo rocío o blanquecinas. Realizar el examen del
frotis de una colonia y teñirla con colorante Gram para observar la forma bacteriana.
• B. bacilliformis colorea muy débilmente con la tinción de Gram.
• Los cultivos pueden ser crioconservados en medio de infusión cerebro corazón
(BHI) con 10% de glicerol a -70 ºC

Cultivo puro en placas con agar Columbia

con sangre de cinco a seís días de incubación

Cultivo puro en placas con agar Columbia

con sangre de siete días de incubación

Cultivo puro en placas con agar Columbia

con sangre de nueve días de incubación.
5.5.2 Medio bifásico

• Colocar en la mesa de trabajo las muestras de sangre total, contenidas en tubos al

vacío con anticoagulante.
• Dejar que los medios tomen temperatura ambiente.
• Extraer con una jeringa la sangre total del tubo que contiene la muestra de sangre.
• Inmediatamente, inocular a través del tapón de jebe 0,5 a 1mL de sangre al frasco
con medio de cultivo bañando la fase sólida.
• Si el medio de cultivo se encuentra en frascos con tapa rosca, destapar e inocular
la muestra de sangre con una pipeta de transferencia estéril.
• Se deja reposar el frasco inclinado hasta que la sangre se impregne en el agar por
30 minutos.
• Incubar el cultivo a 28-29 °C hasta 45 días.

Lectura de las placas

• En el caso del medio bifásico, bañar la fase sólida del medio con la fase líquida
inclinándola suavemente cada cuatro o cinco días.
• Si a las 24 ó 48 horas se nota desarrollo de colonias pequeñas de apenas 1 mm de
diámetro, translúcidas tipo rocío o blanquecinas. Sobre el plano inclinado de la fase
sólida o se nota turbidez o lisis de los hematíes en la fase líquida, realizar un subcultivo
en placas de agar sangre y Mac Conkey, y proceder a la identificación del
microorganismo; no se trata de B. bacilliformis, puede ser una infección sobreagregada.
• Los cultivos deben seguir incubándose hasta por 45 días.
5.6 IDENTIFICACIÓN DE B. bacilliformis

5.6.1 Examen directo

Frotis sanguíneo con colorante Giemsa

La coloración de Giemsa es una modificación de la coloración de Romanowsky, está

disponible en cualquier laboratorio y nos permite detectar los glóbulos rojos infectados
por B. bacilliformis en sus formas bacilares, cocobacilares o cocoides.

En la lectura se debe tener en cuenta:

• Índice de bacteriemia
• Forma de las bacterias

En función a estos parámetros se deben emitir los resultados para el pronóstico médico.

• Se lee de 50 a 100 campos por lámina con la muestra de frotis sanguíneo a 1000
aumentos (objetivo de 100x) con aceite de inmersión, buscando la presencia de formas
cocobacilares, bacilares o cocoides que se encuentran dentro de los hematíes.
• Las formas cocoides se encuentran en pares o cadenas. Si se observa un solo
hematíe con forma cocoide es preferible revisar toda la lámina, es posible que no sea la
forma cocoide sino algún artefacto.
• En un frotis positivo, se observan hematíes deformados y muchas veces toman la
forma ameboide.
• El resultado de la lectura del frotis sanguíneo se expresa en porcentaje de hematíes
infectados, para lo cual se cuenta 100 hematíes y se determina cuántos están infectados.
• En el reporte se debe colocar las formas bacterianas observadas, ya sea bacilar,
cocobacilar o cocoide.
 Observación de B. bacilliformis en un extendido sanguíneo

Los errores más frecuentes son confundir las formas cocoides con punteado basófilo,
precipitados del colorante, células de Heinz o con reticulocitos en los cuales se colorea el
núcleo. La lectura también puede ser obstaculizada en el caso de extendidos gruesos, que
se colorean en tono oscuro y no se observan claramente las formas cocoides.

Las condiciones requeridas para el desarrollo bacteriano, como:

• La temperatura de crecimiento, entre 28 - 29 ºC.

• El período de incubación, desarrolla desde los 4 hasta 45 días.
• Desarrolla sólo en medios enriquecidos.
• El aislamiento primario es lento.
• No produce hemólisis en agar Columbia con sangre de carnero.
• Las colonias son pequeñas, puntiformes y translúcidas, de borde entero; otras son
ligeramente más grandes blanquecinas, de borde entero y se adhieren a la superficie del
agar, esta adherencia es una característica fenotípica de algunas colonias. La morfología
de la colonia y las características de crecimiento probablemente estén relacionadas con la
patogenicidad del microorganismo.
• No crecen en medio de agar Mac Conkey o agar nutritivo.
• No fermentan los azúcares, son bioquímicamente inertes.
 • No crece a 37 ºC.
• Son oxidasa negativa, catalasa positiva, ureasa e indol negativo.
• Son móviles, lo que se observa en el medio de gel de fases, forman una banda de
desarrollo bacteriano de aproximadamente 6 mm, con migración del cultivo desde el trazo
de inoculación hacia las paredes del tubo.

CUADRO DE IDENTIFICACION DE ESPECIES DE Bartonella

B. B. B. B. B. B. grahamh
bacilliformis quintana henselae elizab claridgeiae
ethae
Temperatura 25-30°C 35-36°C 35-36°C 35- 35-36°C 35-36°C
optima 36°C
hemolisis - - - + - -
Oxidasa - V - - - -
catalasa + V - - - -
Reducción de - - - - - -
nitratos
Urea - - - - - -
O-F - - - - - -
Flagelos + - - - + -
Fuente: Manual Sistematico de Bergey, segunda edición.

5.6.2 Identificación indirecta – serológico

Debido a todo lo expuesto, este tipo de diagnóstico es el más fácil de realizar. En la

actualidad se dispone de técnicas de enzimoinmunoanálisis (ELISA) e
inmunofluorescencia indirecta (IFI) para B. bacilliformis, B. henselae y B. quintana, con
características adecuadas de especificidad y sensibilidad. El antígeno empleado para la
detección de anticuerpos tiene dos posibles orígenes: el cultivo de la bacteria.
 IFI de B. bacilliformis

5.6.3 Identificación PCR

En el estudio realizado para el diseño e implementación de una prueba de PCR para el

diagnóstico de bartonelosis, se encontró que tanto las muestras con frotis positivo para B.
bacilliformis fueron correctamente identificadas.

5.6.4 Antibióticos

Tienen un patrón homogéneo de alta sensibilidad a muchos antibióticos beta lactamicos

(excepto para oxacilina, cefalotina y cefotetan) aminoglucosidos, cloranfenicol,
macrolidos, doxiciclina, cotrimoxazol, rifampicina y vancomicina.Entre las quinolonas
ciprofloxacina y sparfloxacina son las más efectivas. Clindamicina y colistina tienen poca
efectividad en inhibir el crecimiento de B. bacilliformis. Otros estudios han demostrado
la sensibilidad de las otras Bartonellas patógenas para el humano a los macrolidos y a
otros antibióticos.
 BIBLIOGRAFÍA

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