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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERIA

CAMPUS GUANAJUATO

INGENIERIA DE BIORREACTORES
DISEÑO DE UN BIORREACTOR AIRLIFT PARA LA PRODUCCION DE
ACIDO GIBERÉLICO

6FM1

BARRIENTOS GARCIA ENRIQUE

ORTIZ HERNANDEZ VICTOR HUGO

GRANADOS GONZALEZ JOSE GUADALUPE

MARTÍNEZ LIZAMA OSCAR ADRIAN

PROFESORA

DIANA RAMIREZ SAENZ

28 de noviembre de 2014
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INDICE
• Fundamento
• Antecedentes
• Objetivos
• Definición, justificación y selección del microorganismo
• Parámetros cinéticos y volumen de operación
• Simulación (modelo de Monod)
• Factores de forma
• Descripción del biorreactor tipo Arilift
• Simulación de Cultivo Continuo
• Dimensionamiento del Biorreactor
• Descripción del sistema de agitación, condiciones de operación, reología
y potencia del motor
• Descripción del mecanismo de transferencia de masa en el reactor
• Criterios de escalamiento
• Instrumentación
• Esterilización del biorreactor y del medio de cultivo.
• Conclusión

FUNDAMENTO
PRODUCCIÓN DE ÁCIDO GIBERÉLICO
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La producción de ácido giberélico tiene gran importancia en la industria

agrícola, para el análisis físico y biológico de semillas, como el estudio
de la Avena sativa, Hordeum Vulgare, Secale Cereale y Triticum
Aestivum. Este ácido es además un regulador de crecimiento que se usa
para estimular y regular el desarrollo de las plantas, en fenómenos como
reforzar la dominancia apical, estimulación de la floración, aumento del
fructificación, rompiendo la dormición de las semillas, suprimiendo el
estrés causado por algunos virus y actividad antibacteriana, (E.P. Yúfera,
1995).

El hongo Gibberella Fujikuroi, produce ácido giberélico, este hongo

generalmente tiende a infectar plantas y provoca que estas tengan un
desarrollo anormal, por ejemplo, cuando infecta a la planta de arroz
produce el desarrollo de tallos muy largos. El producto aislado se
comporta como una hormona de crecimiento vegetal, estimulando el
crecimiento de los tallos y el desarrollo de los brotes. Las plantas
también producen ácido giberélico, como una hormona natural de
crecimiento en los vegetales, (E. P. Yúfera, 1995).

El costo de la producción de ácido giberélico mediante fermentación

sumergida es muy alto, principalmente por su rendimiento
extremadamente bajo y al extenso procesamiento en el downstream, se
han llevado a cabo estudios para disminuir el costo de producción de
ácido giberélico usando varios enfoques, (S. Bandelier y col. 1997). Por
ejemplo:

a) La optimización de nutrientes y de las condiciones del cultivo.

b) Desarrollo de nuevas técnicas (células inmovilizadas, cultivos por lote

alimentado).

c) Técnicas de bajo costo para la extracción del componente.

Otra alternativa es la fermentación en estado sólido, la cual tiene

ventajas económicas en la producción de biomasa y metabolitos en la
producción agrícola industrial.

CRECIMIENTO DE GIBBERELLA FUJIKUROI EN UN REACTOR

AIRLIFT

Los parámetros más importantes para el desarrollo de Gibberella

Fujikuroi en el reactor Airlift son la retención de gas, la velocidad del
fluido en los tubos ascendente y descendente, la determinación del
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tiempo de mezclado, la velocidad determinada del gas que fluye hacia la

superficie. La transferencia de masa, es determinada con el coeficiente
volumétrico de transferencia de masa, el cual es determinado en función
de la velocidad del gas en el tubo ascendente y como una función del
tiempo de fermentación, (M. C. Chavez y Col., 2007).

BIORREACTOR AIR-LIFT

Es un reactor para fermentación, en el cual el uso de una corriente de

aire es esencial, ungiendo como la fase dispersante en la recirculación
de componentes, como las células y el medio dentro del reactor. Es
funcional en procesos de carácter aerobio. La forma típica de un Airlift
contiene un tubo inyector de aire en el fondo del reactor, por el cual el
aire entra a alta velocidad, impulsando el contenido dentro del reactor,
generando burbujas en el caldo las cuales suben a la superficie
generando una corriente de arrastre en el fluido cercano, provocando un
flujo hacia arriba, al llegar el fluido a la superficie pierde la velocidad de
arrastre por la liberación de la burbuja, aumentando su densidad, y por
gravedad fluye ahora hacia abajo con una mínima concentración de aire
disuelto, generando recirculación, (D. G. Rao, 2010).

ANTECEDENTES
La producción de ácido giberélico es un proceso que actualmente es
relevante en la industria alimentaria debido a la necesidad de generar
investigación relacionada con los sistemas de plantación como es el uso
de sustratos y/o cultivos sin suelo en contenedores, al igual que otras
prácticas hortícolas adecuadas que permitan el incremento de la
producción. Por lo tanto, determinar cuáles serían algunos sustratos que
puedan ser utilizados por los productores, constituye una nueva fuente
de investigación, cómo hechos destacados podemos mencionar a los
procesos elaborados en Venezuela que evalúan los efectos de diferentes
sustratos y ácido giberélico sobre el crecimiento, producción y calidad de
la fresa, debido a la fuente de trabajo que representa para las zonas
altas de ese país. La introducción de semillas modificadas
genéticamente para su reproducibilidad da lugar a una producción
tardía. La aplicación de ácido giberélico, puede mejorar el crecimiento
celular, dando lugar a la recolección temprana de cultivos. Un ejemplo
claro es lo que sucede en el estado de Chihuahua en México donde a se
evalúa la acción del ácido giberélico sobre la producción hidropónica del
tomate.
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En la industria agrícola se desarrollan técnicas para aumentar la

producción mediante el uso y promoción de promotores de crecimiento
para los vegetales, el uso de Gibberella Fujikuroi para producir ácido
giberélico mediante lotes de fermentación sumergida es una
herramienta de alta eficacia para promover la producción en este sector.

En esta investigación su utilizo un modelo ortogonal para investigar los

efectos de la tempera, pH, la relación entre fuente de carbono y
nitrógeno y concentraciones de harina de arroz sobre la producción de
ácido giberélico por Gibberella Fujikuroi en biorreactores fluidizados. En
biorreactores fluidizados la producción de este ácido puede ser en
promedio 3.90 g L-1, más de tres veces más grande que los reportados
por fermentaciones sólidas y sumergidas, donde los parámetros antes
mencionados son los que más impactaron en la producción de dicho
ácido, donde el pH fue el que más afecto la producción.

Para este experimento los efectos de la temperatura, pH, la

concentración de fuente de carbono y fuente de nitrógeno y los cambios
en la concentración de harina de arroz, no tuvieron gran impacto con
respecto a una pobre producción, lo contrario se mostraron rendimientos
mayores.

Para producción de ácido giberélico se ha implementado técnicas de

inmovilización celular, que permiten concentrar la biomasa en espacios
reducidos, la reutilización de biocatalizador y la separación facilitada de
la biomasa. La utilización de sistemas de producción que utilizan células
inmovilizadas representa una alternativa viable para la producción de
metabolitos secundarios de interés biotecnológico, sin embargo la
utilización de un biorreactor air-lift produce una mayor concentración de
oxígeno, proporcionando un mayor rendimiento en los procesos
metabólicos. (Molina y colaboradores)

El biorreactor air-lift proporciona aireación, siendo un factor clave para la

remoción del calor metabólico, CO2 y metabolitos volátiles ocluidos entre
las partículas, junto con su efecto regulador de la humedad del
biorreactor. Además por su configuración geométrica, induce la
recirculación del medio de cultivo, lo que hace más atractiva e indicada
su aplicación para el desarrollo eficiente de cualquier tipo de
fermentación sumergida. (Cruz, 2007)

OBJETIVOS
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OBJETIVO GENERAL

Determinar los parámetros cinéticos, dimensionales y escalares para el

diseño de un biorreactor tipo Airlift empleado para la producción de
ácido giberélico con una cepa de Gibberella Fujikuroi.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Definir las condiciones específicas de crecimiento de Gibberella

Fujikuroi en un reactor de tipo Airlift necesarias para la producción
de ácido giberélico.
 Definir una ecuación balanceada que describa a la cinética de
crecimiento por balanceo de electrones.
 Realizar una cinética de crecimiento teórica de acuerdo a las
condiciones de crecimiento adecuado para el hongo.
 Realizara una simulación de la cinética con los parámetros
obtenidos.
 Diseñar una simulación para un sistema de lote alimentado y continuo.
 Establecer las dimensiones apropiadas de un biorreactor tipo Airlift para
un volumen de siete litros.
 Determinar las variables de medición y control.
 Especificar el instrumental necesario para el funcionamiento óptimo de
un biorreactor tipo Airlift para determinar los parámetros de producción
de ácido giberélico.

DEFINICIÓN, JUSTIFICACIÓN Y SELECCIÓN DEL

MICROORGANISMO (GIBERELLA FUJIKUROI)
Las giberelinas son un grupo de hormonas encargadas de regular el
crecimiento de las plantas, en su estructura química lo constituyen de
diterpenos, los cuales están compuestos por cuatro estructuras de
isopreno que forman como ligadura tres anillos, además de formar un
puente de lactona.

Existen alrededor de 79 tipos de giberelinas que han sido documentadas

e identificadas en bacterias y plantas. A esta gran variedad de
giberelinas se les designa como GA1, GA2, GA3 hasta llegar a GA79. La
diferencia que existe entre cada una de ellas se debe a la presencia y
localización de doble ligadura y al número de grupos carboxilo, carbonilo
e hidroxilo dentro de la molécula (Grove 2001). De estos 79 tipos, 25 son
producidas por el hongo gibberella (Jones 1968).
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El ácido giberelico (GA3) es producido por microorganismos, donde el

hongo ascomiceto Giberella Fujikuroi es el más empleado para su
producción (Jefferys 1970). El GA3 es el compuesto más importante del
grupo de las giberelinas, este acido es sólido cristalino blanco soluble en
agua cuando no excede de 5 g/L. es fácilmente soluble en solventes
orgánicos tales como etanol, metanol, acetato de etilo, acetato de butilo
y acetona.

El hongo Giberella Fujikuroi es un hongo cuyo estado imperfecto es

denominado fusarium moniliforme, su aspecto de cultivo es muy
variable y es causante de la enfermedad “Bakanae” en la planta de
arroz. (Durand 2002)

Figura 1. Vista microscópica de fusarium moniliforme

Pertenece al orden Maniliales familia Tuberculariaceas. Una

característica que es muy remarcada en este hongo es la formación de
macroconidios falciformes de varias células y frecuentemente presenta
también microconidios monocelulares.Es productor de un pigmento color
violeta, perteneciente al grupo de las Bikaverinas que presenta amplias
posibilidades de aplicación en la industria farmacéutica y cosmetología
(Kumar 1970).Por lo tanto se considera que G. Fujikuroi es el
microorganismo más adecuado para la producción de GA3.

FACTORES QUE AFECTAN LA FERMENTACION GIBERELENICA (GA3)

Los rendimientos que se consideran óptimos de una fermentación

dependen de factores como: cepa utilizada, tipo y preparación del
inoculo, concentración y tipo de nutrientes, temperatura, pH y
suministro de oxígeno.

Las características del medio de fermentación son fundamentales para

la obtención de buenos rendimientos de ácido giberelico, siendo
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primordiales la fuente de carbono, fuente de nitrógeno, sales minerales

y factores de crecimiento(Brucker 2001).El oxígeno tiene un efecto y un
papel muy importante cuando las células están en crecimiento, ya que la
demanda de oxigeno aumenta, y si existen inhibiciones del gas por un
periodo largo de tiempo, decrece la producción de GA 3, CO2 y
metabolitos volátiles ocluidos entre las partículas, lo que podría generar
un aumento en la humedad. La aireación del reactor permite que el
crecimiento del microorganismo se realice en condiciones aeróbicas y
ricas en nutrientes.

Para el caso de hongos existen diversos tipos de inóculos (micelio,

esporas) sin embargo, las esporas fúngicas del hongo Gibberella
Fujikuroi presentan características de tamaño, forma y estado fisiológico
más uniforme y se manejan más fácilmente que la masa micelial
(Mandels 1996).

La velocidad de crecimiento y la acumulación de producto también son

afectadas por variaciones de temperatura y pH. La temperatura optima
de crecimiento de G. Fujikuroi se encuentra entre 31 y 32°C, mientras
que la mayor producción de ácido giberelico se logra obtener a 29°C, a
temperaturas superiores se acumulan otras giberelinas como A 4 y A7.
(Borrow 2001)

BIOSINTESIS DE GA3

La ruta metabólica para la síntesis de GA 3 ocurre en cuatro etapas:

(Jones 1968)

1. Formación de la unidad isopreno o su equivalente biológico a

partir de acetil CoA o leucina.
2. Deshidratación y descarboxilacion de mevalonil 5 fosfato para
dar un isopreno activo seguida de la condensación de unidades
de isopreno para formar terpenos alicíclicos.
3. Ciclación de las estructuras aliciclicas.
4. Posteriores modificaciones de la estructura ciclizada que
conducen a la formación de las distintas giberelinas.

El análisis de la biosíntesis de GA 3 revela que existe una gran similitud

con el anabolismo de grasas, lo que hace suponer que la presencia de
estas moléculas en el medio puede provocar una alteración de la
producción de GA3.
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FERMENTACION ADECUADA PARA EL CRFECIMIENTO DE

GIBBERELLA FUJIKUROI

En los últimos años se ha ido generado un gran interés por las

fermentaciones en estado sólido con aireación directa, esto se debe a
los altos rendimientos que genera. Además de la excelente
productividad, este tipo de fermentación ofrece otras ventajas prácticas
y económicas (Grove 2001).

Las fermentaciones en estado sólido son aquellas en las cuales el

crecimiento microbiano y la formación del producto se llevan a cabo en
la superficie de sustratos sólidos. La fase solida puede brindar una
superficie rica y compleja de nutrientes y además un soporte para el
crecimiento microbiano.

Se pueden obtener condiciones selectivas para el crecimiento fúngico

humedeciendo los sólidos con medio a bajo pH y con alta densidad de
inoculo de esporas (Durand 2002). Unas de las ventajas que ofrece la
aireación en reactor tipo Airlift, es que la aireación se facilita por
espacios entre las partículas de sustratos y partículas de la mezcla, por
lo que el rendimiento del producto puede ser mucho más alto que en un
tratamiento con medio líquido.

INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES DE FERMENTACION EN LA

PRODUCCION DE GIBERELINAS

Cada hongo tiene un desarrollo en sus propiedades anatómicas,

morfológicas y sobretodo fisiológicas. Se ha demostrado que las
condiciones óptimas para la producción del ácidoliberalice se dá en
cultivos en donde la fuente de nitrógeno se restringe parcialmente a la
par que se desarrolla el micelio al metabolizar la fuente de carbono
(Kumar 1970)

Como fuente de nitrógeno se ha utilizado preferentemente nitrógeno

amoniacal y también como fuentes alternativas se pueden emplear
semillas de cereales o plantas.

En lo referente a la fuente de carbono es ideal un proceso de liberación

gradual o lenta para evitar un fenómeno de represión catabólica. Se ha
demostrado que la sacarosa es mejor que la glucosa como fuente de
carbono pero también se pueden utilizar aceites de semillas de cereales,
maíz o ajonjolí.
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La producción de ácido giberélico depende mucho del pH, este intervalo

ahonda entre los 3 y 5.5, si no se respeta este parámetro la velocidad de
producción y de velocidad tienden a decrecer (Brucker 2001)

El medio ambiente gaseoso o de aireación contribuye de manera

considerable en la velocidad de formación de biomasa y de biosíntesis
del ácidoliberalice en el estado sólido. Tiene la propiedad de establecer
un monitoreo de la actividad biológica por determinaciones de
parámetros como humedad, temperatura, cantidad de oxígeno y de CO2.

PARÁMETROS CINÉTICOS Y VOLUMEN DE

OPERACIÓN
Para producción de ácido giberélico, se parte de la siguiente ecuación:

C6 H 12 O6 +0.026 NH 4 Cl+O2 →C H 1.79 O0.50 N 0.20+C 19 H 22 O6+ CO2 + H 2 O

Dónde:

C6 H 12 O6 → Dextrosa=Fuente de Carbono

NH 4 Cl →Cloruro de Amonio=Fuente de Nitrogeno

O2 → Oxigeno=Fuente de Oxigeno

C H 1.79 O0.50 N 0.20 →Gibberella fujikuroi=Biomasa

C19 H 22 O6 → Acido giberelico= producto

Se determinan los coeficientes estequiométricos para determinar el

balance general de la ecuación anterior (ver Anexo 1), quedando de la
siguiente manera:

C6 H 12 O6 +0.026 NH 4 Cl+1.741 O2 → 2.99C H 1.79 O0.50 N 0.20 +0.001118C 19 H 22 O6 +CO 2 + H 2 O

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DETERMINACION DE LOS PARAMETROS CINETICOS

Se utilizó la cepa H-984 del hongo Gibberella Fujikuroi utilizando como

fuente de nitrógeno NH4Cl y como fuente de carbono Dextrosa. Las
variables independientes involucradas en este proceso fueron el pH,
cantidad de carbono y cantidad de nitrógeno y la variable dependiente
fue la producción de Ácido Giberélico (GA 3).El proceso se llevó a cabo en
un reactor tipo Airlift con un volumen de capacidad de 4 litros. Se
monitoreo la evolución de biomasa, glucosa, consumo de nitrógeno y
producción de ácido giberélico en un periodo de 50 Horas.

Se registraron los siguientes datos a partir de la cinética de crecimiento

Tabla 1. Datos obtenidos para la producción de ácido giberélico, así

como los respectivos rendimientos de sustrato, biomasa y producto.

Tiemp Produc Sustrato Sustrato Biomasa LAN(X/x0 Ypx Yxs 1/Yxs Yps
o to g/L (residual (consumi g/L )
h ) g/L do)
g/L
0 0 50 0 2.15 0 0 0 0 0
25 0 45.78 4.22 8.67 1.3944 0 2.0545 0.48673 0
50 0.03 43.45 6.55 10.31 1.5676 0.00368 1.574 0.63530 0.004
58
75 0.045 34.33 15.67 10.52 1.5878 0.00538 0.6713 1.48954 0.002
87
100 0.055 32.56 17.44 12.33 1.7465 0.0054 0.7069 1.41443 0.003
15
125 0.0886 30.01 19.99 10.89 1.6223 0.01014 0.5448 1.83562 0.004
5 43
145 0.102 25.89 24.11 8.5 1.3745 0.01606 0.35255 2.83647 0.004
23
Los datos proporcionados en la Tabla No. 1 fueron colocados en una hoja
Excel para aplicar su regresión y obtener así los parámetros como la
velocidad de crecimiento (µ), generación de producto en la fase
estacionaria (mp), coeficiente de mantenimiento celular (ms),
generación del producto en etapa estacionaria (qp) y (qs).

Gráfico 1. Variación en la concentración de sustrato consumido,

sustrato residual y biomasa.
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Sustrato (residual) g/L

Linear (Sustrato (residual) g/L)
Sustrato (Consumo)
Linear (Sustrato (Consumo))
Biomasa g/L
Linear (Biomasa g/L)

60
40
Concentración, g/L 20

0
0 20 40 60 80 100 120 140 160

Tiempo, h

En el gráfico No. 1 podemos notar las variaciones de consumo de

sustrato por el hongo, observamos que a un tiempo de 148 horas el
sustrato se ha consumido totalmente, pero a un tiempo de 100 horas la
biomasa comienza sus mecanismos de defensa (fase de senescencia)
reduciéndose la concentración de biomasa.

Gráfico 2. Velocidad de producción de ácido giberélico.

0.12
0.1
0.08

Ácido giberélico, g/L 0.06

0.04
0.02
0
0 50 100 150 200
Tiempo, h

La cantidad de ácido giberélico producido es menor debido a que el

hongo emplea la mayor parte del sustrato para su mantenimiento
celular, así como para su reproducción, esto se ve atenuado debido a la
presencia de nitrógeno en forma de NH4Cl en el medio.

En la sección de anexos se incluyen los gráficos para la determinación

del coeficiente específico de crecimiento global del rendimiento Ypx con
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respecto al tiempo para obtener coeficiente de mantenimiento celular en

fase estacionaria (mp) y el coeficiente de mantenimiento celular (ms).

SIMULACIÓN (MODELO DE MONOD)

Tabla 2. Datos obtenidos de la simulación al utilizar MathCad.

Se observa en la tabla 2 los datos arrojados en la simulación realizada a

través de MathCad utilizando el modelo de Monod debido a que el
proceso de producción de ácido giberélico se ajusta a las variables y
condiciones del Modelo de Monod, así teniendo en cuenta los
parámetros cinéticos que dependen de la concentración de sustrato
consumido y producto producido, ya que la proporción de producción es
pequeña a comparación de la proporción de consumo. Al analizar los
datos se obtiene que la concentración de sustrato es consumida casi en
su totalidad a un tiempo de 141.176 horas, tiempo en la cual existe una
concentración de ácido giberélico de 0.535g/L, con una concentración
final de biomasa de 5.816g/L, esto infiere que la célula utiliza la mayor
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parte del sustrato (mayor porcentaje) a su mantenimiento celular que a

la producción de ácido giberélico.

Gráfica 3. Cinética de producción del ácido giberélico dependiente de la

dextrosa y la biomasa.

Se observa en la gráfica No. 6 que la concentración de productos es

proporcional a la biomasa generada, sin embargo los requerimientos de
sustrato son muchos, infiriendo que un mayor porcentaje de sustrato
consumido es utilizado para el mantenimiento celular y no a la
producción de ácido giberélico.

FACTORES DE FORMA
Existen diferentes características físicas e importantes, en cuanto a la selección
y diseño del reactor adecuado se refiere, las cuales son conocidas como
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factores de forma. Estos factores se desarrollan de acuerdo al método de

fermentación o tipo de producción que se desea realizar, pues describen las
dimensiones del reactor basado en las características que el proceso requiere
cumplir para proveer las condiciones óptimas para el cultivo. Para el caso de la

producción del ácido giberélico (

GA 3 ), a través del hongo Gibberella

Fujikuroi se requiere utilizar un reactor cuyos factores de forma faciliten la

generación del producto, mediante la fermentación sumergida, como es el caso
del reactor Airlift.

Los factores de forma del biorreactor son diseñados en base a una relación
patrón del tipo de reactor que se desea diseñar (Airlift 1:3 o 1:6) entre el
diámetro y la altura de este, partiendo de un volumen de operación establecido
para el tanque modelado, que permita determinar el diámetro adecuado. Con
lo cual a partir del diámetro y del esquema del reactor se calcularan los demás
factores que darán estructura al tanque piloto (L. T. Harry, 2006).

SISTEMA DE AIREACIÓN

El sistema de aireación en este tipo de reactor es una de sus principales

características, debido a que tanto su sistema de aireación como el de
agitación son generados mediante el suministro de gas en un difusor o
distribuidor el cual ocasiona la formación de burbujas en el fluido o medio de
cultivo generando un esfuerzo cortante mucho menor al de un impulsor, lo que
lo convierte en un proceso que requiere menos energía que la agitación
mecánica. Además de que al reducir el esfuerzo cortante se evita el daño
celular por cizallamiento, sin embargo se deberá tener en cuenta que, la
agitación deberá ser tan eficiente como para no dañar la célula y al mismo
tiempo para proveer un mezclado y transferencia de masa adecuados
(Martínez, 2007).

La inyección de gas en este tanque, permite se realice la aireación del medio y

facilita la fluidización de los sólidos presentes en el mismo, debido al constante
movimiento del fluido inducido por la burbujas, por lo tanto cuando se
presentan valores altos para el coeficiente de transferencia de oxigenación, la
demanda alta de oxigeno se satisface eficientemente en este reactor, por el
sistema de aireación. Otro factor a considerar es que, el diseño del equipo y el
flujo del líquido, ocasionan que el calor sea distribuido rápida y uniformemente
ya que como se mencionó anteriormente la relación altura diámetro es de 1:3
lo que lo convierte en un reactor angosto en donde, la turbulencia del líquido
será mayor y como consecuencia la transferencia de calor y de masa serán por
ende mayores (Martínez, 2007)

Al igual que el proceso de aireación y agitación el mezclado forma parte

importante de este sistema, para el caso del reactor Airlift esta operación se
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lleva de manera adecuada debido a que los nutrientes, células y productos se

distribuyen uniformemente en el fluido. Ocasiona también efectos sobre la
forma y funcionalidad de las células provocando cambios en la transferencia de
masa (nutrientes, metabolitos), tomando en cuenta nuevamente que la fuerza
de mezclado deberá ser óptima para evitar el daños en las células involucradas
y que el metabolito de interés se produzca (Gurrola, 2007)

TRANSFERENCIA DE MASA

La transferencia de masa en el reactor es de vital importancia debido a que de

esta depende la alimentación de oxígeno, CO2 y partículas sólidas del medio
hacia el interior de la célula a través de una ruta o etapas de transferencia
masa. Para esto cabe resaltar que durante a nivel industria los reactores
trabajan a niveles altos de turbulencia en el fluido por lo que el transporte
conectivo es predominante en el seno del líquido ignorando así la resistencia
asociada. Aunado a esto se debe tener en cuenta que para que las burbujas
suministradas permanezcan siempre retenidas en el seno del líquido y se
efectué la transferencia de masa adecuada, el oxígeno que se bombea al
interior del tanque deberá ser suministrado de manera continua debido a que
mientras mayor sea el tiempo de retención de las burbujas en el seno del
líquido mayor será la transferencia de masa (Chisti, 2005)

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE MASA

1.- Transferencia del sustrato de acuerdo a la fase gaseosa, liquida, o solida a la

interface liquida acuosa (por difusión).

2.- Transporte mediante una capa delgada de la fase acuosa, la cual rodea a la
burbuja de gas, líquido o partícula solida (difusión y convección).

3.- Transporte a través del seno del líquido por convección (turbulencia) hacia
una capa delgada que cubre al microorganismo a alguna partícula donde se
encuentre el microorganismo (pueden ser pellets, aglomerados o soportes
inmovilización).

4.- Transporte por difusión a través de la capa de fase acuosa hacia la

superficie celular

5.- Transporte del exterior de la membrana celular hacia el interior de la célula

donde se efectúa la reacción (Nielsen, 2003)
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Figura 2. Etapas de transporte de masa hacia el interior de la célula

Los fenómenos de transferencia de masa que ocurren durante el

crecimiento de microorganismos en medio líquido, implican disolución
de nutrientes, transferencia de productos y uno de los más importantes
corresponde a la transferencia de oxígeno. La transferencia de masa en
los reactores Airlift con amplia variación y contradicción debido a que los
reactores y los procedimientos experimentales son diferentes.
Tradicionalmente el método para mejorar la transferencia de oxígeno se
basa en el incremento de la velocidad de aireación, con el fin de producir
un régimen de turbulencia que además de mejorar el mezclado,
incremente la velocidad de transferencia de masa gas-líquido,
disminuyendo la viscosidad que afecta los efectos de coalescencia en la
fase gaseosa que reducen el área de contacto.
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Figura 3. Representativa de un Biorreactor Airlift

DESCRIPCION DEL BIORREACTOR AIRLIFT

Este tipo de reactor es también identificado como biorreactor de elevación con
aire o en rizo (Scriban, 1985). Están comprendidas en 4 zonas distintas, cada
una de ellas tiene su propio patrón de flujo, este a su vez consiste en dos
secciones interconectadas principalmente por bafle o tubo de draft. Una región
es asperjada con gas y es llamada ascendente o riser, donde la dispersión del
gas en el líquido se da generalmente en dos fases en dirección paralela. Esta
sección retiene la concentración de gas más alta en el reactor y es en esta
sección donde ocurre la mayor parte del fenómeno de transferencia de
oxígeno.
19

Figura 4. Estructura interna de un biorreactor tipo Airlift.

El líquido que ingresa al domo de la columna entra en una zona de liberación

de oxigeno (zona II), que es un separador gas-liquido donde la gran mayoría
del oxígeno dispersado es eliminado. El líquido libre de gas fluye hacia la
segunda sección que se le conoce como descendente o downcomer y viaja
hacia el fondo de la columna (zona IV) completando así el ciclo y reingresando
a la zona de ascenso (Scragg, 2001).

Figura 5. Zonas de un biorreactor airlift.

La cantidad de aire necesaria para la reacción biológica es suficiente para

actuar como la única fuente de movimiento del líquido (Scragg, 2001). Las
características del funcionamiento de los biorreactores Airlift dependen
principalmente de la velocidad de inyección del gas y la velocidad de
recirculación del líquido (Chisti y Moo, 2002).

En este tipo de reactores, se recomienda el uso de bafles para conseguir la

separación de las dos zonas. Debe quedar completamente sellado a las
paredes del reactor de manera que no haya forma de paso del líquido o del
medio de la sección riser a la downcomer a excepción de la recirculación.

En la siguiente tabla, se mencionan algunas características generales del

biorreactor tipo Airlift (Gutiérrez, 2011).

Tabla 3. Características del biorreactor Airlift

CARACTERISTICA B. AIRLIFT

RELACION ALTURA/DIAMETRO Entre 3 y 7

AGITACION Neumática
20

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL Velocidades de inyección del gas y de

FUNCIONAMIENTO circulación del líquido.

VENTAJA Altamente eficiente en energía

DESVENTAJAS KLa relativamente bajos aunque

superiores a la columna de burbujeo

Cultivo de células bacterianas y

USOS levaduras, fermentaciones con hongos,
cultivo de células animales y vegetales,
tratamiento de aguas residuales.

Entre otras propiedades, las ventajas principales de los biorreactores airlift con
respecto a las columnas de burbujas son:

 Mayor capacidad de transferencia de masa.

 Mayor velocidad superficial de líquido y gas.
 Riesgo de contaminación bajo debido a su sellado hermético, su
orientación vertical facilita su limpieza y esterilización.
 Control en las condiciones de cultivo.

SIMULACIÓN DE CULTIVO CONTINUO

El cultivo continuo es un sistema abierto con volumen constante, al que
continuamente se añade medio fresco de un reservorio y del que se retira
medio usado que contiene microorganismos y sustancias de desecho a una
velocidad constante, siendo estas el ácido giberélico.
Por lo tanto, el medio se renueva y su composición no cambia a lo largo del
tiempo, lo que permite mantener el crecimiento de la población de forma
indefinida, una vez alcanzado el estado de equilibrio.

Tabla 4 Se observan los datos a

partir de una simulación de cultivo
continuo.
21

Gráfica 4. Cinética de producción

Donde la columna cero es la de ácido giberélico a partir de
variación de volumen, 1 es la dextrosa y biomasa producida para
biomasa, 2 es el producto y 3 es un cultivo continúo.
sustrato.

Podemos observar en el gráfico No. 7 como al mantener constante el flujo de

sustrato, compuesto por la fuente de nitrógeno NH 4C y la fuente de carbono
dextrosa, existe una dilución del producto, es decir una dilución de ácido
giberélico producido por el hongo Gibberella Fujikuroi, el cual se ve
representado en la tabla 4 con valores negativos, estos valores
negativos se producen debido a las cantidades mínimas producidas de
ácido giberélico y las grandes cantidades de sustrato suministradas al
cultivo continuo del biorreactor Airlift, así como la dilución hecha a la
biomasa antes de llegar al equilibrio.

Tabla 5. Datos obtenidos de la simulación de

cultivo continuo para la producción de ácido
giberélico.
22

Gráfico 5. Representación de las cantidades de

biomasa, producto y sustrato para un cultivo
El gráfico No. 8 muestra el volumen de operación que permanece constante,
continuo en un bioreactor Airlift
sin embargo se observa que existe una disminución de biomasa producida por
la dilución de la misma hasta un tiempo aproximado de 25 horas, tiempo en el
cual se llega a un equilibrio entre la biomasa contenida en el biorreactor, la
23

dilución provocada por el flujo continuo del medio de cultivo, así como la
producción del ácido giberélico.
El cultivo entra en fase de mantención, período en que ocurre gran parte de la
síntesis de ácido giberélico. Como factores dependientes de la producción se
encuentran la humedad, tiempo de auto clavado, pH, perfiles de alimentación
fed-batch, además de los sustratos. La biomasa total aumentará aun cuando
no existe urea disponible en el medio. Esto indicará que el hongo Gibberella
Fujikuroi acumularía parte del nitrógeno proveniente de la urea, para
luego, bajo condiciones de limitación externa, proceder a su consumo.
Esto indicaría que producciones más importantes de ácido giberélico se
obtienen con tiempos de cultivo más largos.

DIMENSIONAMIENTO DEL BIORREACTOR

Gran parte de la información que se relaciona con la construcción de
biorreactores tipo Airlift tienen origen empírico de tal manera que se han
recomendado varias relaciones geométricas que pueden optimizar el tiempo de
mezclado y la transferencia de masa en el fermentador (Gutiérrez, 2011).

Especificaciones del equipo.

Para el diseño del biorreactor Airlift se tomaron las siguientes consideraciones:

 Para facilitar el armado del equipo se propuso diseñarlo en tres partes:

tapa, cuerpo y base, siendo un biorreactor tipo Airlift de circuito interno.
 El equipo será construido de vidrio, ya que brinda superficies lisas, no es
tóxico, su coeficiente de transferencia de calor es poco (1.6 W/°C),
además de su fácil limpieza.
 Las dimensiones se determinaron tomando en cuenta que la relación
altura/diámetro debía ser 1:3, considerando un volumen total del tanque
de 7 litros.
 El diseño de la tapa consta de cuatro entradas, dos con tapones de rosca
que puedan servir para colocar electrodos medidores de oxígeno disuelto
y pH, otros dos sin tapa en los que puedan introducirse termómetros o
sirvan como entrada de líquidos.
 Se colocarán cuatro llaves de entrada o salida en el cuerpo, para que se
pueda trabajar con volúmenes distintos o con cultivos semicontinuos.
 La unión entre las partes del biorreactores se llevará acabo empleando
cuatro bridas de acrílico, empaques de neopreno, tornillos y tuercas para
ajustarlas.

Diseño preliminar del equipo. En las siguientes figuras 6, 7 y 8 se muestran los

esquemas de diseño del biorreactor con las dimensiones principales de las
distintas partes y accesorios. El diseño final consta de un diámetro externo de
24

13 cm, diámetro del tubo interno de 7.54 cm, así como una longitud del
biorreactor de 40 cm, con longitud del tubo interno de 30.8 cm.

En la configuración diámetro (D2/D1) y longitud (L2/L1) se aprecían mayores

ReL en la zona de descenso del biorreactor lo cual es relevante pues esta zona
opera con Re no turbulentos. En el ascenso Re L son mayores. Se seleccionó
esta configuración debido a la presencia de un Re que se mantiene alrededor
de 1000 y es turbulento por definición para estos sistemas.

Tabla 6. Se observan los valores de los diámetros de ambos cilindros (interno y

externo) para un biorreactor tipo Airlift de circuito interno.

Factores de forma Dimensión(m)

D1 13
D2 7.54
L1 40
L2 30.8
25

Figura 6. Biorreactor Airlift de circuito interno. Se observan las tres partes

que conforman el biorreactor: tapa, cuerpo y base, así como sus respectivas
dimensiones.
26

Figura 7. Vista frontal y superior de la tapa del biorreactor.

27

Figura 8. Base del biorreactor con el difusor de placa filtrante

TRANSFERENCIA DE OXIGENO

La transferencia de oxigeno es el fenómeno en el cual este es transportado de

una fase a otra, principalmente de una fase gaseosa a una liquida. (Scriban,
1985). Esta molécula es poco soluble en medio acuoso. El transporte del mismo
de la fase gaseosa hacia las células debe permitir el mantenimiento de una
concentración adecuada de oxígeno disuelto de manera que el crecimiento
microbiano no se vea limitado (Nielsen, 2003). La demanda de oxígeno en un
proceso fermentativo depende en gran parte de la concentración de biomasa y
la actividad respiratoria que se relaciona con la velocidad de crecimiento. La
transferencia se puede ver afectada por la temperatura, ya que cuando se
tiene una temperatura baja, la solubilidad del oxígeno disminuye, intensidad de
mezclado que puede afectar la viscosidad del medio. La transferencia de
oxigeno de la fase gaseosa hacia el microorganismo a través de las burbujas
como punto de partida de aire suministrado.

El proceso ocurre en 8 pasos (Bailey, 1986):

1. Difusión desde el seno o núcleo del gas a la interfase gas-liquido.

2. Movimiento a través de la interfase gas-liquido.
28

3. Difusión del soluto a través de la región estancada adyacente a la

burbuja.
4. Transporte del soluto a través del seno del fluido líquido.
5. Movimiento a través de la segunda región estancada asociada con la
célula.
6. Transporte difusivo hacia el interior de la célula.
7. Si las células están en un floculo, agregado o partícula sólida, difusión a
través del solido hasta la célula individual.
8. Transporte a través del citoplasma hasta el lugar de reacción.

Figura 9. Esquema del transporte de oxigeno de la fase gaseosa al interior del

microorganismo (Bailey, 1986)

DESCRIPCIÓN DEL SISTEMA DE

AGITACIÓN, CONDICIONES DE
OPERACIÓN, REOLOGÍA Y POTENCIA DEL
MOTOR.
El Airlift tiene un tubo de aspersión dentro del tubo, lo cual mejora la
circulación de transferencia del oxígeno e iguala la fuerza de corte en el
reactor. Este tipo de biorreactor no tienen ninguna agitación mecánica, es un
biorreactor neumático, la turbulencia producida por el flujo del fluido asegura
un mezclado adecuado en el líquido, es ideal para cultivos aerobios ya que el
coeficiente de transferencia de masa de oxigeno es alto en comparación con
los reactores de tanque agitado (Chisti, 1989).
29

El Airlift se construye usando compartimientos ascendentes y descendentes

separados, esta conectados por conductos horizontales en la parte superior e
inferior el tubo ascendente y descendente se localizan en el mismo recipiente,
estos son separados por un bafle de división o un tubo de aspersión
concéntricos (Chisti, 1989). Los sistemas externos soportan velocidades
mayores de circulación de líquido.

La entrada de energía especifica está entre 2 a 3 kW/m3 y los esfuerzos de

corte son bajos de 0.11 kW/m3. Los Airlift no tienen puntos de disparo de
energía, los esfuerzos de corte son homogéneos y no provocan estrés en las
células (Chisti, 1989).

Los Airlift son ideales para cultivos aerobios refiriéndose al coeficiente de

transferencia de masa del oxígeno.La ventaja de usar Airlift es tener un menor
riesgo de que exista contaminación y que hay un control más cercano en la
estabilidad genética de los organismos.

La reología del caldo utilizado cambia usualmente. Gran cantidad de cultivos

empiezan siendo newtoniano pero se transforman en ocasiones en no
newtonianos. Las causas que provocan estos cambios de reología en los caldos
de fermentación son debido a variaciones de algunas propiedades como
(Chisti, 1989):

 Concentración celular.
 Concentración del producto.
 Concentración del sustrato.
 Flexibilidad y deformabilidad de las células.
 Morfología celular.
 Velocidad de ciza.

Sin embargo para simplificación de cálculos, se considera la mayoría de los

caldos que permanecen constantemente con una viscosidad de tipo
newtoniano.

En los reactores con agitación neumáticos, se puede determinar la potencia ya

sea por expansión isotérmica del gas o por la energía cinética del gas insertado
(Chisti, 1989).

En este caso se determinara la potencia mediante el uso de expansión

isotérmica del gas que se mueve a través del reactor mediante la fórmula:

PG
=ρL g uG
LV
30

De acuerdo don Chisti, 1989, lo valores que ajustan al modelo pueden ser los
siguientes:

Sabiendo:

Potencia
PG
tiempo

VL=0.054 m3 (Chisti, 1989)

ρL=887 kg/m3

uG=0.3 m/s

Por lo cual la potencia necesaria para el difusor se determina de la siguiente

manera:

PG=VLρLguG

PG=(0.054m3)(887kg/m3)(9.81m/s2)(0.3m/s)

PG=140.9638 Watt = 0.189035 HP

Para determinar el flujo se obtuvo el vvm al que crece de mejor manera para la
producción de penicilina el cual oscila entre 0.5 y 1 vvm, dependiendo de la
cepa (Chisti, 1989). Para términos prácticos se utilizó el promedio de 0.75 vvm.
Por lo cual el flujo es de:

F
vvm= V L

3 3 3 60 min 3
F=(0.75 maire /mmedio∗min ¿( 0.0056 mmedio )( 1h )=0.252 m /h

Se calcula el area de la seccion transversal del riser

2
A i=π r i

2
0.0754 m
A i=π ( 2 )
=4.4651∗10−3 m 2

Conociendo el area y el flujo del gas se sustituye en la ecuacion:

31

flujo gas
U GR=
Areatransversal

3
m
0.252
h m m
U GR= −3 2
=56.437 =0.01567
4.4651∗10 m h s

Ese valor de flujo se utilizó para determinar la simulación del proyecto, el cual
se realizó de forma de operación tipo lote alimentado (fed-batch). (revisar
archivo adjunto de Mathcad apéndice C).

DESCRIPCIÓN DEL MECANISMO DE

TRANSFERENCIA DE MASA EN EL REACTOR
El proceso de transferencia de masa en un biorreactor del tipo airlift es de
suma importancia, pues además de estar introduciendo la cantidad suficiente
de oxigeno para que se lleve a cabo el bioproceso también participa en el
mecanismo de mezclado del biorreactor. Debido a esto el tamaño de burbuja
introducido por el difusor debe ser el adecuado, pues e debe considerar el
esfuerzo de corte que se genera en la célula debido al aire introducido.

En un airlift la transferencia de masa se genera por una circulación fluida

de líquido con aire (burbujas) que asciende el compartimiento interno y luego
desciende por el compartimiento externo, favoreciendo también el mezclado
perfecto.

Un valor que permite conocer la cantidad de oxigeno disuelta en el medio de

cultivo en el reactor es el K La que es el coeficiente de transferencia de masa
de oxigeno. Los valores de este coeficiente depende principalmente de la
velocidad con la que se esté agitando el medio y el tiempo, la velocidad está
siendo introducido el oxigeno, el diseño del biorreactor, así como la reología
del medio de cultivo. En general, disminuyen el K La: la viscosidad y el volumen
del líquido y aumentan el K La: el área de transferencia, la agitación y la
presencia de dispositivos que aumenten una, la otra, o ambas. (Eibl & Eibl,
2009)

Existen diferentes métodos para estimar el KLa de manera experimental como

los son (García, Ochoa, 2009) :
32

 Métodos químicos.
 Método de la oxidación de sulfito de sodio.
 Absorción de CO2.
 Método dinámico.

El uso de correlaciones es un método que estima este valor de manera

empírica, permitiendo así calcular los posibles valores de K La para el reactor a
utilizar y asi realizar los ajustes necesarios en el diseño del proceso.

Para un biorreactor airlift external-loop la correlación se basa en la velocidad

que tarda en subir y bajar por el brazo externo del biorreactor, asícomo en la
AD
relación que existe entre los diámetros de ambas secciones ( A G ¿ . Utilizada

es la siguiente (García, Ochoa, 2009):

AD c d e
1+ ¿ V IR φ
Ag
k L a=C V as µba ¿

Donde:

C[=] Constante empírica.

Vs[=] Velocidad superficial del gas (m s-1).

VIR[=] Velocidad promedio del liquido en circulación (m s -1).

µa[=] Viscosidad aparente.

AD[=] Área transversal de la sección down-comer del reactor (m 2).

Ag[=] Área transversal de la columna (m2).

ɸ[=] Retención del gas en el reactor.

Para las clásicas columnas de burbujas y usando agua pura se

determinaron los valores de la contante C y el exponente a de 0.47 y 0.82
respectivamente. En una solución salina se propusieron los valores para C
entre 0.12 y 9.5 y el exponente a con valores de 0.72-1.28. Para fluidos
no newtonianos se introduce el término de la viscosidad aparente en la
ecuación con el exponente b que puede tomar un valor de -0.8 a -1.

Existen otros parametros establecidos de acuerdo a ciertas literaturas, de

acuerdo con la siguiente figura.
33

Figura 10. Valor de los exponentes de la correlación para K La en un biorreactor

airlift external-loop.

Para introducir el aire al rector se utilizará un difusor de membrana de burbuja

fina, ya que la burbuja generada por estos equipos tiene un diámetro de
aproximadamente 10 mm. Ya que se ha demostrado que las burbujas
pequeñas ( <2 mm de diámetro ) generan un mayor daño celular que las
burbujas de mayor tamaño ( 10mm de diámetro)(Chisti, 2000).

Escalamiento del reactor a volumen industrial

El proceso de escalamiento involucra el estudio de los problemas relacionados

a transferir la información obtenida en un experimento a nivel laboratorio (ml)
a escala de planta piloto (it) y desde escala de planta piloto (it) a escala
industrial (m3). La selección para el criterio de escalamiento dependerá de cuál
es la variable más importante para el crecimiento del microorganismo y para la
producción del producto deseado.

Sistema de instrumentación y control. Justificación de la elección de sensores y

sistemas de control. El escalamiento se hace en base de principios de
semejanza entre dos sistemas, o traducido en otras palabras, dos escalas;
dichas similitudes pueden ser:

 Similitudes geométricas: las razones entre las longitudes

correspondientes deben ser iguales en ambos sistemas.
 Similitudes dinámicas: las razones entre las fuerzas en puntos
equivalentes deben ser iguales en ambos sistemas. (Rodríguez, 2003)

CRITERIOS DE ESCALAMIENTO
Coeficiente de transferencia de Oxigeno
34

Lo más importante en este tipo de procesos es mantener el nivel de

transferencia de oxígeno en el cultivo, entonces se debe considerar este
criterio, los pasos para el escalamiento son:

1. Determinar el KLa desde experimentos a nivel piloto.

2. Relacionar (KLa) con las variables de diseño de la escala a la cual se
desea escalar.

( K L a )escala 1=( K L a )escala2

Potencia por unidad de volumen

Resulta un criterio clásico de escalamiento, ya que gracias a él se permite

mantener el nivel establecido de agitación. Al momento de aplicarlo se debe
considerar no sobrepasar los límites tanto de esfuerzo de corte máximo y nivel
de transferencia de oxigeno mínima

( PV )
g

escala 1
= ( PV )
g

escala 2

Se consideró un volumen de 500 L; en la bibliografía se reporta que este

volumen se puede tomar como mínimo para realizar un escalamiento.
(Rodríguez, 2003).

En la tabla 7 se muestran los resultados obtenidos del cálculo de escalamiento.

Tabla 7. Escalamiento de parámetros de potencia y coeficiente de transferencia

de oxígeno (Vea procedimiento en la sección de anexos).

Característica Volumen 7L Volumen 500L

Coef. Transferencia 0.01567 (m/s) 0.0727 (m/s)
oxigeno
Potencia 140.9638 w 10068.842 w

INSTRUMENTACIÓN
PH
35

Para el monitoreo del pH se utiliza un electrodo 405DPAS-SC-K8S/325 marca

Mettler Toledo. El rango de medición de este electrodo es de 0 a 12 unidades
de pH. La manera más adecuada para la medición del pH dentro del reactor es
utilizando un medidor de pH con electrodo combinado de vidrio. (MT)

Figura 11. Sensor de pH (MT)

Para obtener con exactitud el pH dentro del reactor, previamente se debe

calibrar pHmetro con soluciones buffer que mantienen casi invariable el pH de
una solución cuando a esta se le agrega un ácido o una base.

TEMPERATURA

Para medir esta magnitud se utiliza un termopar industrial con vaina con
recubrimiento de acero inoxidable modelo RTD Pitters, con longitud de 10cm.
Tiene un intervalo de medición de -10 a 120°C. Su delgadez proporciona mayor
sensibilidad al contacto con la solución dentro del reactor.

Figura 12. Termopar industrial de vaina corta. (thermonew)

36

Para el registro de la temperatura, se utilizara un equipo de control de

temperatura, de alta precisión, y que aunque las condiciones de temperatura
son de 25°C, se necesita de un control de esta variable. Se empleara un equipo
de control de temperatura modelo “Peltier-type Air-Thermo” HEA marca SMC.
(Recuperado de SMC).

Figura 13. Equipo de control de temperatura “Peltier-type Air Thermo” HEA

SMC. (SMC)

Tabla 8. Especificaciones del equipo “Peltier-tyoe Air Thrermo”

Intervalo Capacida Estabilida Método

Circulació
Caracterís de d de d de de
n del
ticas temperat enfriamie temperat enfriamie
liquido
uras nto ura nto
Gran
precisión
Equipo de
control de
temperatur
Aire de
a con Vapor
0-90°C 19 W +/- 1°C enfriamien
termopares saturado
y to
elementos
compactos.
Acción
inmediata.

CONTROL DEL FLUJO DE AIRE

Para el control de flujo de aire del biorreactor airlift, donde se tomaron en

cuenta las condiciones de operación para el sistema de aireación, donde el
flujo es de 0.75 VVM, se eligió el sensor de flujo con display que se aprecia en
la figura 14.
37

Figura 14. Sensor de flujo con display SFE3-500 marca FESTO.

Las especificaciones de este equipo se muestran en la siguiente tabla.

Tabla 9. Especificaciones del sensor del caudal SFE3. (Festo, 2011).

Descripción Margen Fluido Presión de Conexión Conexión

de funcionami neumátic eléctrica
medición ento a
de caudal
Display Permite
integrado. mezcla
Conexión s de
eléctrica aire
Rosca
utilizando 0.01-50 con
0-7 bar interior cable
un cable con L/min otros
G1/8
extremo gases
abierto. como
nitróge
no

En el diagrama se emplea una notación técnica para cada dispositico

conformada por un grupo de letras y números que identifican a los
instrumentos, por lo cual la notación del diagrama a utilizar es la siguiente:
(Juan, 2005)

 FR: registrador de flujo.

 FT: transmisor de flujo.
 FE: placa orificio de flujo.
 PR: registrador de presión.
 TR: registrador de temperatura.
 TS: interruptor para activar alarma por baja temperatura.
 TAL: alarma por baja temperatura.
 FO: falla de abre.
 FC: falla de abre cierra.
38

 SPH: sensor de PH

Figura 15. Diagrama del proceso de instrumentación, control de flujo,

temperatura y medición de pH del biorreactor tipo arilift.

Simbología

En el proceso, un transmisor de flujo FT, envía una señal eléctrica al registrador

de flujo FR en el (display), para el caso de temperatura (TR), el elemento de
control es una válvula (TV), en caso de que la señal de aire falle o el tubo se
llega a romper, (TS) es el interruptor para activar o desactivar la alarma por
baja temperatura (TAL), donde la válvula FO abre y la FC cierra la salida de aire
el primer elemento para medir el flujo de aire es la placa orificio del sensor FE,
donde los transmisores de flujo y presión (FT y PT) respectivamente,
39

conectados a la salida de la placa orificio, envían las señales neumáticas a sus

respectivos registradores (FR y PR), en este caso como se trabajará con fluidos
compresibles como aire, la presión de entrada afectará en gran medida el
volumen calculado y registrado en los respectivos dispositivos. (Juan, 2005).

ESTERILIZACIÓN DEL BIORREACTOR Y DEL

MEDIO DE CULTIVO
ASPECTOS DE ESTERILIDAD

De acuerdo con Pometto (2008), durante el diseño de un biorreactor se deben

de considerar la condiciones de asepsia para que el reactor pueda ser
funcional, ya que un mal diseño del mismo puede generar problemas durante
la esterilización del reactor y de los medios de cultivo que se deseen utilizar;
estas anomalías pueden generar lotes no axénicos, así como, una esterilización
no efectiva del volumen muerto en el reactor.

Los residuos orgánicos y microorganismo que se depositan en espacios

muertos del reactor pueden generar contaminación del sistema, en espacios
muertos llenos de aire la temperatura de esterilización puedo no ser alcanzada,
todos estos espacios constituyen el denominado volumen muerto del reactor,
para garantizar una esterilización efectiva se opta por la instalación de
indicadores en lugares muy próximos a estos espacios.

Así mismo, Pomito (2008), menciona que una causa de una esterilización no
efectiva además del volumen muerto son las fugas de aire en el reactor, en los
sistemas de entrada y de salida, para lo cual recomienda la aplicación de la
prueba de presión y la prueba de sellado, en la primera el reactor se debe
mantener a una presión aproximada de 1.5 bar, durante sus operación la
detección de una caída de presión indica la existencia de una fuga, en el
segundo caso el reactor se llena con agua y a 1.5 bar de presión, se lee la
temperatura y presión iniciales, después de 10 minutos se vuelve hacer lectura
de los parámetros y posterior a una 15 horas. Si la velocidad de fuga es menor
a 0.05gm/h m, el reactor se considera hermético, en caso de ser menor, el
reactor no es efectivo por lo cual se deben corregir las fugas.

ESTERILIZACIÓN DEL MEDIO

El medio de cultivo debe de tener las características nutricias que demanda el

microorganismo; para que el medio pueda ser aprovechado adecuadamente
por el microorganismo debe ser suministrado estéril o ser esterilizado en el
biorreactor, de acuerdo con Stanbury (1995), la esterilización del medio de
cultivo puede por calor, filtración, tratamientos químicos entre otros, pero el
más utilizado es el calor (vapor de agua saturado), por ser bastante practico.
40

Para el reactor en cuestión se utilizará vapor de agua saturado (steaming in

place), la destrucción de microorganismo mediante esta técnica puede ser
descrita por la siguiente ecuación:

−dN
=kN
dt

Donde N es el número de organismos presentes viables, t es el tiempo de

esterilización, k es la velocidad específica de muerte. Sabemos que el mínimo
número de microorganismos para contaminar el medio es uno y este número
es independiente del volumen del lote.

De la integración de la ecuación anterior y aplicando propiedades logarítmicas

tenemos que:

ln ( NoNt )=−kt
Ec. B

Donde No es el número de m.o antes del tratamiento y Nt es el número de m.o

después del tratamiento en el tiempo t.

A partir de la relación de la temperatura y la constate de reacción se

demuestra con la siguiente ecuación de Arrhenius, Stanbury (1995).

d ln k E
=
dt RT2

Ec. C

Donde E es la energía de activación, R la constante de los gases y T es la

temperatura absoluta. Si, k=Ae-E/RT. Donde A es la constante de Arrhenius.

Integrando y aplicándole propiedad de logaritmo tenemos la ecuación:

E
ln k =ln A−
RT

Ec. D

Relacionando las ecuaciones B y C, obtenemos la siguiente ecuación:

41

No −E / RT
ln
=At e
Nt

Ec. E

No −(
E
)
Si
=∇ la ecuación se ajusta a la siguiente expresión: ∇=A t e RT
,
Nt

ajustando la ecuación tenemos:

ln t = E/RT +ln(∇/A). Ec. F.

DISEÑO DE ESTERILIZACIÓN POR LOTE

La esterilización por lote o discontinuo toma en cuenta las siguientes etapas.

1. Etapa de calentamiento: tiempo que tarda el medio en alcanzar la

temperatura necesaria para la esterilización.
2. Etapa de enfriamiento: Tiempo que tarda el medio en descender su
temperatura de esterilización hasta la de fermentación.
3. Etapa de mantenimiento: tiempo en el que la temperatura del medio
debe mantenerse parara la esterilización.

A partir de las etapas anteriores se deduce la siguiente expresión:

MECANISMOS DE TRANSFERENCIA DE CALOR EN EL BIORREACTOR

Es importante recalcar que la finalidad de este proyecto es diseñar un reactor

que se adapte a las condiciones del microorganismo a utilizar para poder así
generar el producto deseado. Por lo tanto es necesario tomar en cuenta las
necesidades y propiedades del microorganismo para diseñar un sistema
adecuado que permita explotar de cierta manera, todas las habilidades del
microorganismo involucrado.

De acuerdo con lo anteriormente mencionado y con la finalidad de obtener la

producción máxima de la biomasa presente en el medio, es necesario conocer
las condiciones óptimas del cultivo en cuanto a la transferencia de calor que
este necesite para mantenerse a un nivel óptimo de producción adecuado. Para
el caso del hogo G. Fujikuroi, la temperatura optima de crecimiento se
establece de 31 a 32°C sin embargo la mayor tasa de producción de ácido
giberélico se logra a una temperatura de 29 °C según Borrow en 2001.Dichos
valores se encuentran por encima de la temperatura ambiente, lo cual indica
que no es necesario generar una gran cantidad de calor para alcanzar este
42

valor, por lo tanto es necesario proponer un dispositivo externo que permita

alcanzar esta temperatura, como la chaqueta de calentamiento . Pues como se
menciono anteriormente la temperatura máxima tolerada para el crecimiento
del hongo G. Fujikuroi es de 32°C y la aplicación de un dispositivo más
sofisticado que genere más calor, podría ocasionar, que el crecimiento se
vuelva lento y como consecuencia que la producción de ácido giberélico
decaiga, será importante tomar en cuenta la temperatura de operación optima
de la célula pues un incremento en la temperatura que rebase el rango
máximo tolerado por la célula, podría generar, que el cultivo se mantenga en la
fase estacionaria de crecimiento(Qin 2005)

La chaqueta es un intercambiador de calor externo muy utilizado para el

recubrimiento de un biorreactor, el cual genera la cantidad de calor necesaria
para el sistema manteniendo la temperatura estable en el interior del reactor
(29°C para este caso). La elección de este intercambiador de calor se
fundamenta en que además de brindar la temperatura requerida al reactor,
podrá ser utilizado para el proceso de esterilización del tanque, ya que este
puede proporcionar un coeficiente global de transferencia de calor mejor al de
un serpentín, y puede producir una temperatura mayor a los 121 °C necesarios
para alcanzar la esterilización del equipo (Cengel, 2007).

Para la esterilización se utilizara una chaqueta de calentamiento.

Etapa de calentamiento:

T =¿(1+αt )

Q
α= MCpTo donde:

T (temperatura absoluta en K) = 121 ºC = 394.15 K

T0(temperatura inicial del medio)= 100 ºC =373.15 K

t(calentamiento)= ?

Q( velocidad de transferencia de calor)= 0.182 kcal/kg K

Cp(calor específico del medio)= 1.002 kcal/kg K

M(Masa del medio)=10 kg

Por lo tanto el valor para α es:

43

α=4.868*10-5

1
t=1158 s( 60
¿ = 19 minutos.

Etapa de enfriamiento:

Para llevar a cabo el cálculo del tiempo necesario de enfriamiento se tomo

encuentra que el biorreactor se enfriara a temperatura ambiente si necesidad
de implementar algún dispositivo que disminuya la temperatura.

De esta manera el enfriamiento se dará mediante la convección natural. Dicho

cálculo se realizara usando el número de Nusselt (Nu), considerando la camisa
de calentamiento como un sistema de placas verticales se procede a realizar
los cálculos con la siguiente correlación de Nu para placas:

Correlación para placas verticales (Cengel, 2006):

Para lo cual Ra=GrPr, donde C=0.59 y M=0.25. Y considerando un Grashof

β (coeficiente de expansión térmica) =2.38*10-3 K-1

Ts= 121º C.

T∞= 25º C.

Lo=0.16 m

µ=20.92*10-6

Partiendo de estos valores obtenemos un valor de Gr= 20977502.67. El valor

de Prantl para este sistema es de 0.7.

Así obtenemos el Ra=(0.7)(20977502.67)= 14684251.87, ahora sacamos el

valor de Nu.

Nu= (0.59)( 596456*10^3)0.25=36.5228

44

Para posterior con el Nu obtenemos el coeficiente de transferencia de calor h.

h Lo
Nu= k donde k= 33.8W/mK, de acuerdo con esto se tiene un valor de h

de:

( 33 . 8 ) (92. 2)
h= 0. 16 =7715.4415 W/m2K

Aplicando la ley de enfriamiento de Newton:

Q= (19477.25W/m2K)(0.19m2)(121 ºC -25 ºC)=139988.9706 W

Para alcanzar la temperatura inicial de la chaqueta de calentamiento se aplica

el principio de Richards, desde la temperatura de esterilización hasta 100 º C.

El Cp = 4.239 kJ/kgK; ∆T= 21º C.

Para calcular el flujo másico “m”, se obtiene a partir del flujo de aire
considerando una temperatura de 25 °C y a 1 atm de presión.
Para calcular la densidad del aire a estas condiciones se utiliza la ley de los
gases ideales donde:

g 1 kg
ρ=
(
( 101.325 Pa ) 28.84 )(
mol 1000 g
)
=1.178 kg /m 3
3
( 298.15 K ) (8.314 Pa m )
mol K

m=(0.2L/s)(1/100L)(1.78kg/m3)= 1.401*10-4 kg/s

Si,

Q= (1.0401*10-4kg/s) (4.239kJ/kgK) (21) = 175 J/s (W)

45

El tiempo que le toma al reactor para ir de 121 a 100 ºC, se calcula de la

siguiente manera:

139988 . 9706 W
Tiempo de enfriamiento= 175 W = 799.937 segundos.

Enfriamiento= 13.5 minutos.

Etapa de calentamiento

Esta etapa de mantenimiento o mejor conocido como tiempo de

mantenimiento se obtiene a partir de las etapas de calentamiento y
enfriamiento esto se debe al proceso de transferecia de calor que se lleva en
ests etapas.

Para lo cual se necesita calcular el tiempo total del ciclo de esterilización de la

siguiente manera:

∇ total=∇ calentamiento +∇ mantenimiento+∇ enfriamiento

N0
∇ total=ln ⁡( )N

∇ mantenimiento=∇ total−∇ calentamiento−∇ enfriamiento

∇ mantenimiento
mantenimiento=¿
K mantenimiento
t¿

Considerando:

N 0=1010 Ya que no se conoce la cantidad inicial de microorganismos

contaminantes iníciales presentes en el medio

N 0=107 esporas en 7 L

N=10−3 esporas . Esporas. Ya que se supone no existe una esterilidad

absoluta, puesto que 1 de cada 1000 lotes de fermentación se contamina.

Por lo tanto:
46

N0 7
∇ total=ln ( ) ( )
N
=ln
10
10
−3
=23.025

Utilizando método de Richards:

Factor de corrección

t calentamiento /enfriamiento
∇ calentamiento/∇ enfriamiento=∇ ( t Ric hards )
Para calentamiento:

∇ 121=¿ 12.549

t Ric h ards=21 min

t calentamiento=19 min

∇ calentamiento=12.549 ( 1921min
min
)=11.3538
Para enfriamiento:

t enfriamiento=13.5 min

∇ 121=12.549

t ric h ards=21 min

∇ enfriamiento=12.549 ( 13.5 min

21 min )
=8.067

Para mantenimiento:

( ∇ total −∇ calentamiento−∇ enfriamiento )

t manteni miento=
K mantenimiento

*Considerando el parámetro para esporas de B. Stearothermophilus FS1518

47

−1
k =1.831min

∇ mantenimiento=kΔt

−1 °C
∇ mantenimiento=1.831 min ( 121 ° C−100 ° C )=38.45
min

( ∇ total−∇ calentamiento−∇ enfriamiento )

t mantenimiento=
K mantenimiento

EA
( )
RT
k =A e

29 . 933−11 . 5271−9 . 6447

¿
tmantenimiento= ¿
¿

CONCLUSIÓN

El diseño de un biorreactor involucra una serie de conceptos que son

indispensables para que el del mismo cumpla con los requerimientos
necesarios para lograr obtener algún producto a partir de materia prima
y microorganismo, mismos que deben responder positivamente a los
sistemas implicados en el biorreactor que generan las condiciones para
que el microorganismo crezca, madure y sea capaz de desarrollar la
función para la cual fue implantado en el reactor. Pero para que el
resultado de este proceso sea positivo es necesario integrar cada parte
del reactor con un motivo específico, que implique una pieza clave para
el buen funcionamiento del mismo. La reología y la definición de
parámetros de ingeniería son la base sólida de este diseño, lo cual nos
permite especular que el mismo sea funcional a nivel laboratorio y a
nivel piloto, de acuerdo con el escalamiento y la congruencia de
nuestros cálculos.
48

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ANEXOS
Memoria de cálculo.
51

1. BALANCES ESTEQUIMETRICOS

ECUACIONES PARA BALANCE DE ELECTRONES

De acuerdo a la siguiente ecuación general, se determinan los grados de

reducción molecular de cada componente de la ecuación:

C a H b Od N e + α C f H g On H i + β O 2 → δ CO 2+ϑ H 2 0+ K C j H k Oi N m +φC H n O p N q

FUENTE DE CARBONO

4 a+b−2 d−3 e
γ FC =
a

FUENTE DE NITROGENO

4 f +g−2 h−3i
γ FN =
a

FUENTE DE OXIGENO

γ O=0

DIOXIDO DE CARBONO

γ CO =0
2

BIOMASA

4+n−2 p−3 q
γ B=
1

PRODUCTO

4 j+ k−2 i−3 m
γ B=
j

VALENCIAS PARA ELEMENTOS UTILIZADOS

C=4
52

H=1

O=-2

N=-3

Cl =-1

Se determinaron los balances eléctricos de la ecuación de producción de

ácido giberelico

C6 H 12 O6 + NH 4 Cl+O2 →C H 1.79 O0.50 N 0.20+C 19 H 22 O6+CO 2 + H 2 O

FUENTE DE CARBONO

4(6)+1(2)−2(6)
γ FC = =4
6

FUENTE DE NITROGENO

1(−3)+1(4 )−1(1)
γ FN = =0
1

FUENTE DE OXIGENO

γ O=0

DIOXIDO DE CARBONO

γ CO =0
2

BIOMASA

4 (1 )+1 ( 1.79 )−2( 0.50)−3(0.20)

γ BM = =4.19
1

PRODUCTO
53

4(19)+1(22)−2(6)
γ B= =4.52
19

Se determinan los siguientes rendimientos:

Rendimiento de biomasa

g
0.05 −0
P −P0 L Pm P
Y PS = f = =0.00227=k
S f −S 0 g Pm s
22 −0
L

Pm., producto (Ácido giberelico): 346 g/gmol

Pm., sustrato (Dextrosa):180 g/gmol

Pm, Biomasa (gibberella fujikuroi)= 24.59g/gmol

Entonces:

g
0.00227(180 )
Y PS ( Pm s) gmol
k= = =0.00118
Pm p g
346
gmol

Rendimiento de biomasa

g
(11−2)
X −X 0 L Pm X
Y XS= f = =0.409=BM
Sf −S0 g Pm S
( 22−0)
L

Entonces:

g
0.409(180 )
Y (Pm s) gmol
BM = XS = =2.9938
Pm X g
24.59
gmol

CANTIDAD DE OXIGENO REQUERIDA

54

K γ P BM γ BM 4 DO
1= + +
a γ fc a γ fc a γ fc

Donde DO= Demanda de oxigeno

Despejando demanda de oxigeno queda:

K γ P BM γ BM
( 1−
a γ fc
−
a γ fc )
( a γ fc )
=D O
4

0.00118 ( 4.5263 ) 2.9938

(1− − )( 6 ( 4 ))
6 (4 ) 6 (4 )
DO= =1.74
4

RENDIMIENTOS

Los cálculos realizados para la obtención de los parámetros se muestras

a continuación tomando como ejemplo los datos en el tiempo de 50
horas.

Pfinal−Pinicial 0.03−0
Ypx= = =0.003676
Xfinal−Xinicial 10.31−2.15

Xfinal− Xinicial 10.31−2.15

Yxs= = =1.574
Sfinal−Sinicial 6.55−0

Pfinal−Pinicial 0.03−0
Ypx= = =0.00458
Sfinal−Sinicial 6.55−0

Gráfico 6. Valores del Ln(X/X0) con respecto al tiempo para la obtención

del coeficiente específico de crecimiento global del rendimiento Ypx con
respecto al tiempo para obtener coeficiente de mantenimiento celular en
fase estacionaria (mp) y el coeficiente de mantenimiento celular
55

2
1.8
f(x) = 0.01x + 0.8
1.6 R² = 0.39
1.4
1.2

Logaritmo natural de biomasa, Ln(X/X0) 1

0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 50 100 150 200

Tiempo, h

A través del gráfico 6 encontramos el valor del coeficiente específico de

crecimiento (µ) realizando una regresión a los valores. Se obtuvo una
ecuación lineal que puede ser observada en el gráfico.

Gráfico 7. Valores del rendimiento Ypx con respecto al tiempo.

12

10

Ypx 6

0
0 f(x) =20 40 60 80 100 120 140 160
R² = 0
Tiempo, h

Con la regresión de la gráfica 7 se determinó el valor de mp, coeficiente

de mantenimiento celular en fase estacionaria.
56

Gráfico 8. Se observa la varianza de los datos de 1/Yxs respecto al

tiempo para encontrar el valor de qs.

12

10

1/Yxs 6

0
0 f(x) =
20 40 60 80 100 120 140 160
R² = 0
Tiempo, h

A través de la regresión (cómo puede observarse en la gráfica 8) se

pudo determinar el valor de ms, que es el coeficiente de mantenimiento
celular, es decir, una estimación aproximada del uso que la célula le da
al sustrato.

2. ESCALAMIENTO

Para un volumen de 500 L

1 m3
500 L ( 1000 L)=0.5 m3

V op=0.5 m3

V op=0.7 V T

V op 0.5 m3
VT= = =0.71428 m3
0.7 0.7
57

A partir de la siguiente ecuación:

π D2
VT= L
4

Y considerando el factor de forma:

3 D=L

Se sustituye en el valor de L en la ecuación que define el volumen total para

calcular el diámetro total:
3
3π D
VT=
4

DT =
√ √
3 4 V T 3 4 ( 0.71428 m3 )
3π
=
3π
=0.6717 m

Se determina la longitud del tanque

LT =3 DT

LT =3 ( 0.6717 m) =2.015 m

Para obtener el diámetro interno:

Di=0.6 DT

Di=0.6 ( 0.6717 m )=0.4030 m

Para obtener la longitud del cilindro interno:

Li=0.6 ( 2.015 m )=1.209 m

Determinación del coeficiente de transferencia de oxigeno:

Para un volumen de 500L

Área seccional del Riser:

58

2
A i=π r

0.4030 m 2
A i=π ( 2 )=0.1275 m2

Considerando las mismas VVM (0.75VVM) se calcula el flujo de aire:

flujo de gas
VVM=
volumen de liquido

flujo de gas=VVM ( volumen de liquido )

min m3
flujo de gas=0.75 VVM ( 0.7418 m3) 60( h )=33.38
h

flujo de gas
U GR=
area seccional

m3
33.38
h m
U GR= 2
=261.811
0.1275 m h

m 1h m
261.811 (
h 3600 s )
=0.0727
s

Escalamiento de potencia del difusor

Para un volumen de 500L

P1 P2
=
V1 V2

Despejando la potencia 2

P1V 2
P2=
V1
59

( 140.9638W )( 500 L )
P2= =10,068.842W
7L

DIMENSIONAMIENTO

DIMENSIONAMIENTO

Se empleo un volumen total de 7 litros, con un volumen de operación de 5.6

litros (al 80%). Los cálculos para determinar los factores de forma fueron los
siguientes.

V op=0.7 V T

V op=0.8 ( 7∗10−3 ) m3=5.6∗10−3 m3

Se procedió a calcular la longitud del biorreactor (L1) empleando la siguiente

fórmula:

π D12 L1
VT=
4

Y sabemos que la relación altura/diámetro a emplear para el diseño del

biorreactor es 1:3, obtendremos:

3 D1=L1

2
π (L 1/ 3) L1
VT=
4

Despejando L1 tenemos:

L1=
√
3

π
=
√
V T (36) 3 5.6∗10−3 (36)m3
π
=0.40 m

Por lo tanto el D1 es:

3 D1=L1
60

L 1 0.40 m
D1= = =0.13 m
3 3

Para determinar el diámetro interno (D2) y la longitud del tubo interno (L2):

D2/D1=0.58 y L2/L1=0.77

D 2=0.58∗D2=0.58 ( 0.13 m )=0.0754 m

L2=0.77∗L1=0.77 ( 0.4 ) =0.308 m

Para la determinación de los factores de forma anteriores se empleo un estudio

realizado por Lizardi, Saucedo y Gutiérrez, donde concluyen que las relaciones
de diámetro y longitud son adecuadas a 0.58 y 0.77 respectivamente.