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LABORATORIO DE BIORREACTORES ELABORÓ: SALGADO ROMÁN J.M., RODRÍGUEZ-SIERRA J. C. JIMÉNEZ CASTILLO R. I.

PRÁCTICA 9. CULTIVO POR LOTE


INTRODUCCIÓN.

Una fermentación discontinua (en batch) puede ser considerada como un "sistema cerrado". Al inicio de la
operación se añade el medio de cultivo y se inocula, incubando bajo las óptimas condiciones. A lo largo de toda
la fermentación no se añade nada, excepto oxígeno (en forma de aire), un agente antiespumante y ácidos o
bases para controlar el pH. La composición del medio de cultivo, la concentración de la biomasa y la
concentración de metabolitos cambia generalmente como resultado del metabolismo de las células
observándose las cuatro fases típicas de crecimiento: fase de latencia, fase logarítmica, fase estacionaria y fase
de muerte.

OBJETIVOS.
Establecer un cultivo por lote (CL) para la producción de biomasa y de un metabolito previamente seleccionado
a nivel laboratorio.
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MATERIALES Y MÉTODOS
n. 1 Manguera de silicón.
MATERIALES Y EQUIPO: o. 1 Cronómetro.
a. Autoclave (15 L de capacidad).
b. Incubadora rotatoria de temperatura controlada. MICROORGANISMO:
c. Biorreactor. Según producto que se desea obtener.
d. Placa de calentamiento y agitación.
e. Espectrofotómetro.
f. Centrífuga. MEDIOS DE CULTIVO:
g. Balanza analítica. Se tendrán el medio de cultivo acorde al
h. Equipo de filtración (matraz Kitasato, embudo y microorganismo, y se dividirá en tres: para inóculo,
bomba de vacío). para la fermentación y para la alimentación.
i. Torundas de algodón-alcohol
MÉTODOS ANALÍTICOS:
j. Interfase colectora de datos
Tendrá que proponer un método para:
k. Electrodos de pH, temperatura y oxígeno
a. Determinación de la concentración celular
disuelto.
b. Determinación de sustrato
l. 1 Probeta de 1000 mL.
c. Determinación de producto
m. 1 Pipeta de 10 mL.

REACTIVOS:
1. 50 mL solución de NaOH 0.5N.
2. 50 mL solución de HCl 0.5N.
3. 50 ml solución de Tween 80.
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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

a. Preparación del inóculo:


1. Preparar de 10 a 20 % del volumen de operación del medio seleccionado para hacer el inoculo en un
recipiente (matraz o frasco). Recuerde no exceder el 50% del volumen total de este, con el medio a
preparar.
2. Esterilizar los recipientes a 15 lb/in2 durante 15 min y dejar enfriar.
3. Inocular con la cepa a utilizar, previamente cultivada en cajas Petri, bajo condiciones asépticas.
4. Incubar a temperatura y agitación adecuadas para la cepa durante 12 h.
b. Cultivo por lote:
1. Se prepara un volumen igual al 60 a 70% del volumen total del reactor menos el volumen del inóculo de
medio para el cultivo por lote y se ajusta el pH al deseado.
2. El medio se carga en el fermentador, previamente preparado, y se esteriliza en el autoclave a 15 lb/in2,
15 min. También se esterilizan, conjuntamente, los recipientes que contienen el antiespumante, el ácido
y el álcali.
3. El fermentador con el medio de cultivo se coloca en el sistema de agitación, venteo, agua de
enfriamiento, etc. y después se inocula, en condiciones asépticas: el cultivo por lote operará bajo las
condiciones específicas para el microorganismo de velocidad de agitación, aireación, temperatura, pH y
antiespumante (Tween 80, 10%), este ultimo de acuerdo a la formación de espuma.
4. Se tomarán muestras (estableciendo los tiempos por los estudiantes) del cultivo por lote el cual durará
12 horas o el tiempo necesario para estar en fase exponencial para continuar con cultivo continuo. A las
muestras se les determinará concentración celular, sustrato residual y producto.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN.

El alumno elaborara un informe, el cual contendrá los siguientes puntos:

1. Registro de los resultados en la tabla 1.


2. Determinación μmax, Yxs (global) y Yps (global) de la cepa utilizada en el cultivo por lote.
3. Para el cultivo continuo, elaborar lo siguiente:
a. Tabla de valores de concentración celular (x), sustrato residual (s), rendimiento celular en base al
consumo de sustrato (Yxs) y la velocidad específica de consumo de sustrato (qs).
b. Gráfica de la concentración celular (x) vs. velocidad de dilución (D).
c. Gráfica de la concentración de sustrato residual (s) vs. velocidad de dilución (D).
d. Gráfica de la productividad celular (rx ) vs. velocidad de dilución (D).
e. Gráfica de la velocidad específica de consumo de sustrato (qs ) vs. velocidad de dilución (D).
4. Resumen de la práctica y discusión de los resultados obtenidos.

Tabla 1. Resultados obtenidos.


Concentración celular Sustrato residual Metabolito de interés
TIEMPO DE
HORA g/
CULTIVO Tubo Dilución Lectura g/L Tubo Dilución Lectura g/L Tubo Lectura Dilución
L
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OBSERVACIONES Y MEMORIA DE CÁLCULO. DEBE ANEXAR GRÁFICAS, CÁLCULOS, ETC.

OBSERVACIONES
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REFERENCIAS.
1. Aiba, S. y Humprey A.E. Biochemical Engineering. Academic Press. EUA. 1973, 434 págs.
2. Atkinson, B. Reactores Bioquímicos. Reverté. Barcelona. 1986, 296 págs.
3. Atkinson, B. y Mavituha, F. Biochemical Engineering and Biotechnology Handbook. M. Stockton Press. Nueva
York, EUA. 1991, 1271 págs.
4. Bailey, J.E. y Ollis, D. F. Biochemical Engineering Fundamentals. McGraw-Hill. Singapur.1990, 962 págs.
5. Blanch, H. W. Biochemical Engineering. Marcel Dekker. Nueva York, EUA. 1997, 691 págs.
6. Demain, A. L. Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology. ASM Press. EUA. 1999, 830 págs.
7. Doran, P. M. Bioprocess Engineering Principles. Academic Press. EUA. 1995, 439 págs.
8. Scriban, R. Biotecnología. El manual moderno. México, 1982, 669 págs.
9. Stanbury, P.F. et. al. Principles of Fermentation Technology. Butterworth-Heinemann. EUA. 1999, 376 págs.
10.Vogel, H.C. y Todaro, C. Fermentation and Biochemical Engineering Handbook: Principles, Process Design,
and Equipment. Noyes Publications. 1996, 799 págs.