discos compactos

¿Cómo las células crecen

LI INTRODUCCIÓN

Para los microbios, el crecimiento es su respuesta más esencial para su ment Environ físico-químico. El crecimiento es un resultado
tanto de la replicación y el cambio en el tamaño celular. Los microorganismos pueden crecer bajo una variedad de propiedades
físicas, químicas y las condiciones nutricionales. En un medio ent Nutri adecuado, organismos extraen nutrientes del medio y las
convierten en compuestos biologi Cal. Parte de estos nutrientes se utilizan para la producción de energía y parte se utiliza para la
biosíntesis y la formación del producto. Como resultado de la utilización de nutrientes, la masa microbiana aumenta con el tiempo y
puede ser descrita simplemente por

sustratos + células --------> productos extracelulares + más células (, ..

(}
ZS + X --------> ZP + nX

El crecimiento microbiano es un buen ejemplo de una reacción autocatalítica. La tasa de crecimiento es di rectamente relacionada con
la concentración celular y la reproducción celular es el resultado normal de esta reacción.

La tasa de crecimiento microbiano se caracteriza por la red tasa de crecimiento específico, definido como

(6.2a)
t:

155
 M'net (6.2b)

dónde X es la concentración de la masa de células (g / 1), t es el tiempo (h), y | l red es la tasa de crecimiento específica neta (h- 1). El crecimiento

específico neto es la diferencia entre una tasa de crecimiento específico bruto, | i sol
(h- 1), y la tasa de pérdida de masa celular debido a la muerte celular o el metabolismo endógeno, Z ^ (h_ 1).
El crecimiento microbiano también puede ser descrito en términos de concentración del número de células, NORTE, tanto como X. En ese

caso

1 dN
(6,3)
N dt

¿dónde está la tasa de replicación específica neta (h_ 1). Si ignoramos la muerte celular, k re, a continuación, se utiliza el símbolo (l' R; y en los casos

en que la muerte celular no es importante, | i ^ será igual

En este capítulo vamos a discutir cómo los cambios en la tasa de crecimiento específico con su medio am biente. En primer lugar, vamos a

considerar el crecimiento en cultivo por lotes, donde las condiciones de crecimiento están cambiando constantemente.

6.2. CRECIMIENTO DE LOTE

crecimiento por lotes se refiere a el cultivo de células en un recipiente con una carga inicial de medio que no se altera por la adición
adicional de nutrientes o la eliminación. Esta forma de cultivo es simple y ampliamente utilizado tanto en el laboratorio e
industrialmente.

6.2.1. La cuantificación de la concentración de células

La cuantificación de la concentración de células en un medio de cultivo es esencial para la Determina ción de la cinética y la
estequiometría del crecimiento microbiano. Los métodos utilizados en el tificación Quan de la concentración celular se pueden
clasificar en dos categorías: directos e indirectos. En muchos casos, los métodos directos no son factibles debido a la presencia
de sólidos en suspensión u otros compuestos que interfieren en el medio. De cualquier número de células o masa de células
pueden ser tificado Quan dependiendo del tipo de información necesaria y las propiedades del sistema. Cell concentración en
masa se prefiere a menudo a la medición de la densidad de número de células cuando sólo uno se mide, pero la combinación
de las dos mediciones es a menudo deseable.

6.2.1.1. La determinación de la densidad de número de células. Una diapositiva Petroff-Hausser o una

hemocitómetro a menudo se utiliza para el recuento directo de células. En este método, una rejilla calibrada se coloca sobre la cámara
de cultivo, y el número de células por cuadrado de la cuadrícula se contaron usando un microscopio. Para ser estadísticamente
confiable, al menos 20 cuadrados de rejilla deben ser contados y av media fluctuaba entre. El medio de cultivo debe ser clara y libre
de partículas que podrían ocultar las células o ser confundido con las células. Las manchas se pueden utilizar para distinguir entre
células vivas y muertas. Este método es adecuado para cultivos no agregadas. Es difícil contar moldes bajo el mi croscope debido a
su naturaleza de micelio.

Las placas que contenían medio de crecimiento apropiado gelificado con agar (placas de Petri) se utilizan para el recuento de células

viables. (La palabra viable utilizado en este contexto significa capaz de ción reproduc.) Las muestras de cultivo se diluyeron y se extendieron

sobre la superficie del agar y las placas se Incu contenida. Las colonias se contaron en la superficie del agar después del período de

incubación. Los resultados se expresan en términos de unidades formadoras de colonias (CFU). Si las células forman agregados, entonces

una sola

156 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

colonia no puede formarse a partir de una sola célula. Este método ( placa recuentos) es más adecuado para las bacterias y levaduras y
mucho menos adecuados para moldes. Un gran número de colonias debe ser contado para producir un número estadísticamente fiable. El
medio de crecimiento tiene que ser cuidadosamente seleccionados, ya que algunos de crecimiento apoyo de los medios mejores que otros.
los recuento viable puede variar, dependiendo de la composición del medio de crecimiento. A partir de una sola célula, puede requerir 25
generaciones para formar una colonia fácilmente observables. A menos que se eligen las condiciones de medio de cultivo y correctas,
algunas células que son metabólicamente activa no pueden formar colonias.

En un método alternativo, un medio de agar-gel se coloca en un pequeño anillo montado sobre un portaobjetos de microscopio, y
las células se extienden sobre esta placa de cultivo en miniatura. Después de un período de incubación de unos tiempos de duplicación, el
portaobjetos se examina con un microscopio para contar las células. Este método tiene muchas de las mismas limitaciones que los recuentos
de placas, pero es más rápido, y se contaron las células capaces de solamente reproducción limitada.

Otro método se basa en la resistencia eléctrica relativamente elevada de las células (Fig. 6.1). Comercial los
contadores de partículas emplear dos electrodos y un electrolito ción Solu. Un electrodo se coloca en un tubo que contiene un
orificio. Se aplica un vacío al tubo interior, lo que provoca una solución de electrolito que contiene las células a ser aspirado a
través del orificio. Un potencial eléctrico se aplica a través de los electrodos. Como las células pasan a través del orificio, la
resistencia eléctrica aumenta y hace que los pulsos de la tensión eléctrica. El número de impulsos es una medida del número
de partículas; concentración de partículas se conoce, ya que el contador se activa para un volumen de muestra
predeterminada. La altura del impulso es una medida del tamaño celular. Las sondas con distintos tamaños de orificios se
utilizan para diferentes tamaños de célula. Este método es adecuado para las células discretas en un medio libre de particulatc
y no se puede utilizar para los organismos de micelio.

El número de partículas en solución se puede determinar a partir de la medición de la intensidad de luz dispersada
con la ayuda de un fototubo (nefelometría). La luz pasa a través de
vacío

Figura 6.1. Diagrama de un contador de partículas utilizando

el método de resistencia eléctrica para medir el número de
Abertura
células y ción distribu tamaño de la celda. La relación de
Agujero-
volúmenes de una partícula ing nonconduct al volumen
orificio (alterado cambiando el diámetro del orificio) determina
el tamaño del impulso de tensión. (Adaptado con por misión.
DIC de Wang y otros, Fer mentación y la tecnología de
enzimas, John Wiley & Sons, Nueva York, 1979, p. 64.)

^ electrolitos Los electrodos

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 157

la muestra de la cultura, y una célula fotoeléctrica mide la luz dispersada por las células de la muestra. La intensidad de la luz
dispersada es proporcional a la concentración de células. Este método da mejores resultados para las suspensiones de células y
partículas diluidas.

6.2.1.2. La determinación de la concentración de la masa de células. Los métodos directos. Determi nación de celular peso
en seco es el método directo utilizado más comúnmente para determinar la concentración de la masa de células y es aplicable solamente
para las células cultivadas en medio libre de sólidos. Si los sólidos no celulares, tales como melaza de sólidos, celulosa, o com licor de
maceración, están presentes, la medición de peso en seco será imprecisa. Típicamente, las muestras de caldo de cultivo se CEN
trifuged o filtración y se lavaron con una solución tampón o agua. Se secó entonces la masa celular húmeda se lavó a 80 ° C durante 24
horas; a continuación, peso celular seco se mide.

El volumen del celular esta alto se utiliza para estimar rápidamente, pero más o menos la concentración de células en un caldo
de fermentación (por ejemplo, las fermentaciones de antibióticos industriales). caldo de fermentación se CEN trifuged en una cónica tubo
bajo condiciones estándar (rpm y tiempo) graduada, y se mide el volumen de las células.

Otro método rápido se basa en la absorción de luz por las células en suspensión en medios de cultivo sam ple. La
intensidad de la luz transmitida se mide utilizando un espectrómetro. o turbidez densidad óptica medición del medio de cultivo
proporciona una, sive inexpen rápido y simple método de estimación de la densidad celular en ausencia de otros sólidos o
compuestos absorbentes de luz. El grado de transmisión de luz en una cámara de muestra es una función de la densidad
celular y el espesor de la cámara. Transmisión de la luz es modulada por tanto la absorción y la dispersión. células
pigmentadas dan diferentes resultados que los no pigmentados. absorción de fondo por los componentes en el medio debe
ser considerado, en particular si la absorción de especies disueltas se toman en las células. El medio debe ser
esencialmente parti CLE libre. El procedimiento adecuado implica el uso de una longitud de onda que minimiza la absorción
por los componentes del medio (600 a 700 nm se utilizan a menudo longitudes de onda), “supresión” contra medio, y el uso
de una curva de calibración. La curva de calibración se relaciona la densidad óptica (OD) a mediciones de peso en seco.
Tales curvas de calibración pueden llegar a ser no lineal a altas valores de DO (> 0,3) y dependerá en cierta medida sobre
el estado fisiológico de las células.

Los métodos indirectos. En muchos procesos de fermentación, tales como fermentaciones de moho, métodos di rect no
se pueden utilizar. En tales casos se utilizan métodos indirectos, que se basan principalmente en la medición del consumo de
sustrato y / o la formación de producto durante el curso de crecimiento.

componentes intracelulares de las células, tales como ARN, ADN y proteínas se pueden medir como medidas
indirectas de crecimiento celular. Durante un ciclo de crecimiento por lotes, las concentraciones de estos
componentes intracelulares cambian con el tiempo. Figura 6.2 representa la variación del CER tain componentes
intracelulares con el tiempo durante un ciclo de crecimiento por lotes. La concentración de RNA (RNA peso / célula)
varía significativamente durante un ciclo de crecimiento por lotes; sin embargo, las concentraciones de ADN y
proteínas se mantienen bastante constantes. Por lo tanto, en un medio complejo, la concentración de ADN puede ser
utilizado como una medida del crecimiento microbiano. mentos celular medida proteína se puede lograr utilizando
diferentes métodos. aminoácidos totales. Biuret, Lowry (reactivo de Folin), y Kjeldahl mediciones de nitrógeno se
pueden utilizar para este propósito. total de aminoácidos y el método de Lowry son los más fiables. Recientemente,

158 ¿Cómo las células crecen Cap. 6 Segundo. 6.

 2.0 T T T 3.0

CeN
Volumen
T 2.0

mi
iuW
x lo 12 gm / cel

segundo

1,0 g U5

Célula
0.8

o
Componente Peso,

0.4

0 10 20 30 40 50
Horas de tiempo,

I'i
. z El volumen celular
2.0

2.0
Tamaño de celda, ^ m 3

1.6
segundo
Componente Peso, XKT, 2 gm / célula

Cel
1.2

alevines Peso por

o

Nucleic Acid
norte ácido ucleic

rroT®fln

segundo 0
10 20 30 40 50

Horas de tiempo,

Figura 6.2. Los cambios de cal-dependiente en la composición celular y tamaño de celda para Azotobacter vinelandii en
cultivo discontinuo se muestran. (Con permiso, de ML y HM Shuler Tsuchiya, “Tamaño de la célula como un indicador de
cambios en la composición intracelular de Azotobacter vinelandii,”Can. J. Microbiol. 31: 921, 1975 y el Consejo Nacional de
Investigación de Canadá. Ottawa.)

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 159

Sin embargo, muchos medios de comunicación contienen proteínas como sustratos, lo que limita la utilidad de este enfoque.

La concentración de ATP intracelular (mg células de ATP / Mg) es aproximadamente constante para un organismo dado.
Por lo tanto, la concentración de ATP en un caldo de fermentación se puede utilizar como un mea seguro de concentración de
biomasa. El método se basa en la actividad de luciferasa, que cataliza la oxidación de luciferina a expensas de oxígeno y ATP con
la emisión de luz.

luciferina + O 2 + ATP luciferasa> ligero (6,4)

Cuando el oxígeno y luciferina están en exceso, la emisión de luz total es proporcional al total de ATP presente en la muestra.
Fotómetros se pueden utilizar para detectar la luz emitida. ciones Concentra pequeñas de biomasa se pueden medir por este
método, ya que concentraciones muy bajas de ATP (IO- 12 g ATP / 1) se puede medir por fotómetros o contadores de centelleo. El
ATP con tienda de campaña de una célula bacteriana típica es de 1 mg ATP / g de células en peso seco, aproximadamente.

A veces, los nutrientes utilizados para la producción de masa celular se pueden medir para seguir el crecimiento microbiano. Los
nutrientes utilizados para la formación de producto no son adecuados para este propósito. Nitrato, fosfato, o sulfato de mediciones se
pueden utilizar. La utilización de una velocidad de captación de fuente de carbono o de oxígeno se puede medir para controlar el
crecimiento celular cuando la masa celular es el producto principal.

Los productos de metabolismo celular se pueden utilizar para supervisar y cuantificar el crecimiento celular. Ciertos productos
producidos bajo condiciones anaeróbicas, tales como el etanol y el ácido láctico, se pueden relacionar aliado casi estequiométrica al
crecimiento microbiano. Los productos deben ser o bien del crecimiento asociado (etanol) o el crecimiento mixto asociado (ácido láctico)
que se correlaciona con el crecimiento microbiano. Para las fermentaciones aeróbicas, CO 2 es un producto común y puede estar
relacionado con el crecimiento microbiano. En algunos casos, los cambios en el pH o ácido-base, además de controlar el pH se pueden
utilizar para controlar la absorción de nutrientes y el crecimiento microbiano. Por ejemplo, la utilización de los resultados de amonio en la
liberación de iones de hidrógeno (H +) y, por tanto, una caída en el pH. La cantidad de base añadida para neutralizar el H + liberado es
proporcional a la absorción de amonio y el crecimiento. Del mismo modo, cuando el nitrato se utiliza como la fuente de nitrógeno, iones
de hidrógeno son re mueven desde el medio, lo que resulta en un aumento en el pH. En este caso, la cantidad de ácido añadido es
proporcional a la absorción de nitrato y por lo tanto al crecimiento microbiano.

En algunos procesos de fermentación, como resultado del crecimiento del micelio o la formación de poli sacárido
extracelular, la viscosidad de los aumentos de caldo de fermentación durante el curso de la fermentación. Si el sustrato es un
polímero biodegradable, tal como almidón o celulosa, entonces la viscosidad del caldo disminuye con el tiempo como
biohidrólisis continúa. Los cambios en la viscosidad del caldo de fermentación se puede correlacionar con el grado de
crecimiento microbiano. Aunque caldos poliméricos son por lo general no newtoniano, la viscosidad aparente medida a una
velocidad fija puede ser utilizado para estimar la concentración de células o producto.

6.2.2. Los patrones de crecimiento y cinética en cultivo discontinuo

Cuando un medio nutriente líquido se inocula con un cultivo de siembra, los organismos Selec tivamente toman los nutrientes
disueltos a partir del medio y los convierten en biomasa. Una curva de crecimiento por lotes cal typi incluye las siguientes
fases: (1) retraso de fase, (2) fase de crecimiento logarítmica o exponencial, (3) fase de desaceleración, (4) la fase
estacionaria, y (5) fase de muerte. Figura 6.3 describe un ciclo de crecimiento por lotes.

160 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

 Fase de crecimiento

io
Número de registro

ingrese OD
de la célula / mL

10 15
Tiempo (h)

La Figura 63. curva de crecimiento típica para una población bacteriana. Tenga en cuenta que la fase de crecimiento ot (que se muestra aquí para el

número de células) depende del parámetro utilizado para controlar el crecimiento.

los fase de latencia se produce inmediatamente después de la inoculación y es un periodo de adaptación de las
células a un nuevo entorno. Microorganismos reorganizan sus constituyentes moleculares cuando se transfieren a un nuevo
medio. Dependiendo de la composición de los nutrientes, las nuevas enzimas son sintetizados, la síntesis de algunos otros
enzimas es reprimida, y la maquinaria nal inter de las células se adaptan a las nuevas condiciones ambientales. Estos
cambios re flejan los mecanismos intracelulares para la regulación de los procesos metabólicos analizados en el capítulo 4.
Durante esta fase, la masa de células puede aumentar un poco, sin un aumento en la densidad de número de células.
Cuando el inóculo es pequeño y tiene una baja fracción de células que ARC vi capaz, puede haber una fase pseudolag, que
es un resultado, no de adaptación, pero de tamaño pequeño Oculum o mal estado del inóculo.

Baja concentración de algunos nutrientes y factores de crecimiento también puede causar una fase de latencia larga. Por
ejemplo, la fase de retardo de Enterobacter aerogenes ( antes Aerobacter genes Aero) crecido en glucosa y tampón de fosfato
medianas aumenta a medida que la concentración de Mg 2+, que es un activador de la fosfatasa de la enzima, se disminuye. Como
otro ejemplo, incluso las células heterótrofas requieren CO 2 de fijación (para complementar intermedios retirados de ciclos clave
metabólicas de producción de energía durante la biosíntesis rápida), y burbujeo excesivo puede eliminar generada
metabólicamente CO 2 demasiado rápido para la reestructuración celular para ser ac complished de manera eficiente, en particular
con un pequeño inóculo.

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 161

 La edad del cultivo del inóculo tiene un fuerte efecto sobre la longitud de la fase de latencia. La edad se refiere a cuánto
tiempo una cultura se ha mantenido en un cultivo discontinuo. Normalmente, el período de retraso aumenta con la edad del inóculo.
En algunos casos, no existe una edad óptima inóculo que resulta en período de latencia mínima. Para reducir al mínimo la duración
de la fase de retraso, las células deben adaptarse al medio de crecimiento y las condiciones antes de la inoculación, y las células
deben ser pequeños (o exponencial células en fase) y activa, y el tamaño del inóculo deben ser grandes (5% a 10% en volumen).
puede necesitar ser optimizado y ciertos factores de crecimiento incluido para reducir al mínimo la fase de retardo El medio
nutriente. Figura 6.4 muestra un ejemplo de ción varia de la fase de retardo con MgSO 4 concentración. Muchas plantas de
fermentación comercial confían en cultivo discontinuo; para obtener una alta productividad a partir de un tamaño de la planta fijo, la
fase de retardo debe ser tan corto como sea posible.

fases de retraso múltiples pueden ser observados cuando el medio contiene más de una fuente Bon coche. Este
fenómeno, conocido como crecimiento diauxic, es causada por un cambio en las vías metabólicas en el medio de un ciclo de
crecimiento (véase el Ejemplo 4.1). Después de que se agote una fuente de carbono, las células se adaptan sus actividades
metabólicas de utilizar la segunda fuente de carbono. La primera fuente de carbono es más fácilmente utilizable que la
segunda, y la presencia de fuente de carbono disponible más fácilmente reprime la síntesis de las enzimas requeridas para el
metabolismo de la segunda sustrato.

los fase de crecimiento exponencial también se conoce como el fase de crecimiento logarítmico. En esta fase, las células se han
adaptado a su nuevo entorno. Después de este periodo de adaptación, las células se pueden multiplicar rápidamente, y la masa celular y
aumento de la densidad del número de células exponencialmente con el tiempo. Este es un período de crecimiento equilibrado, en la que todos
los componentes de una célula crecen a la misma tasa. Es decir. la composición media de una sola célula permanece aproximadamente
constante durante esta fase de crecimiento. Durante el crecimiento equilibrado, la tasa de crecimiento específico neta

Figura 6.4. Influencia de Mg 2+ operación de concentración

en la fase de retardo en E. aerogenes cultura. (Con permiso,
de Dean y ACR
C. Hinshelwood, Crecimiento. Función y regulación en las
células bacterianas. Oxford Press. Londres, 1966, p. 55.)

162 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

determinada a partir de cualquiera de los números de células o masa celular sería el mismo. Dado que las concentraciones de nutrientes son

grandes en esta fase, la tasa de crecimiento es independiente de nutrientes concen tración. La tasa de crecimiento exponencial es de primer

orden:

^ = gnet X, X = X 0 en r = 0 (6,5)
a

Integración de eq. 6.5 rendimientos

X
En = HNET '> o X = (6,6)

dónde X y X Q son las concentraciones de células en el momento t y t = 0.

El tiempo requerido para doblar la masa microbiana está dada por eq. 6.6. El crecimiento exponencial se caracteriza por
una línea recta en una parcela semilogarithm de En X en función del tiempo:

0,693
(6,7)
II
yo
■ tJ

do

dónde T re es el tiempo de duplicación de la masa de células.

Del mismo modo, podemos calcular un tiempo de duplicación basada en el número de células y la tasa de spe CIFIC neto de

replicación. Así

(6,8)

dónde t re es el tiempo de duplicación basado en la tasa de replicación. Durante el crecimiento equilibrado T re

será igual ya que la composición de celda promedio y tamaño no cambiarán con el tiempo.
los fase de crecimiento de deceleración sigue a la fase exponencial. En esta fase, el crecimiento se desacelera debido a ya
sea el agotamiento de uno o más nutrientes esenciales o la acumulación de subproductos tóxicos de crecimiento. Para un cultivo
bacteriano típica, estos cambios ocurren durante un período muy corto de tiempo. Los rápidamente cambiantes resultados de
entorno en crecimiento desequilibrado. Durante el crecimiento desequilibrado, composición y tamaño de celda cambiarán y T re y V re

será no igualarse. En la fase exponencial, el sistema de control metabólico celular se ajusta para lograr tasas máximas de
reproducción. En la fase de desaceleración, las tensiones inducidas por agotamiento de los nutrientes o la acumulación de
residuos causan una reestructuración de la célula para aumentar las perspectivas de supervivencia celular en un ambiente
hostil. Estos cambios observables son el resultado de los mecanismos moleculares de la represión y la inducción que hemos
discutido en el capítulo 4. Debido a la rapidez de estos cambios, la fisiología celular bajo condiciones de limitación de nutrientes
se estudia más fácilmente en cultivo continuo, como se discute más adelante en este capítulo .

los fase estacionaria se inicia al final de la fase de desaceleración, cuando la tasa de crecimiento neto es cero (sin
división celular) o cuando la tasa de crecimiento es igual a la tasa de mortalidad. A pesar de que la tasa de crecimiento neto es
cero durante la fase estacionaria, las células son todavía metabol- camente activo y producen metabolitos secundarios. metabolitos
primarios son productos relacionados con el crecimiento y la metabolitos secundarios son no crecimiento relacionada. De hecho,
la producción de ciertos metabolitos se mejora durante la fase estacionaria (por ejemplo, antibióticos, algunos hor mones) debido
al desregulación metabolito. Durante el curso de la fase estacionaria, uno o más de los siguientes fenómenos pueden tener lugar:

Segundo. Crecimiento 6,2 por lotes 163

 La concentración total de la masa de células puede permanecer constante, pero el número de células viables puede disminuir.

La lisis celular puede ocurrir y la masa de células viables puede caer. Una segunda fase de crecimiento se puede producir y las células

pueden crecer en los productos de lisis de las células lisadas (crecimiento críptico). Las células pueden no estar creciendo, pero pueden

tener metabolismo activo para producir metabolitos secundarios. la regulación celular cambia cuando las concentraciones de ciertos

metabolitos (carbono, nitrógeno, fosfato) son bajos. Metabolitos secundarios se producen como re sultado de la desregulación

metabolito.

^ - = -k re X o X = X asi que mi- k “' (6,9)

dt

dónde k re es una constante de velocidad de primer orden para el metabolismo endógeno, y X 5O es la concentración de masa
debido a la lisis celular durante la fase estacionaria es
celular al comienzo de la fase estacionaria. Debido a que S es cero, p sol es cero en la fase estacionaria.

ecuaciónLa
apropiada
razón depara describir la del
la terminación conversión de masa
crecimiento celular
puede ser oen energía
bien de mantenimiento
el agotamiento o laNutri
de una ent pérdida de masa
esencial celular
o acumulación
de productos tóxicos. Si un producto inhibidor se produce y lates acumu en el medio, la tasa de crecimiento se ralentizará,
dependiendo de lay producción
como la motilidad la reparacióndedeinhibidor,
daños a ylas
enestructuras
un cierto nivel de concentración
celulares. Este gasto dedeenergía
inhibidor, el crecimiento
se llama se detendrá.
mantenimiento en ergy.La
La
producción de etanol por la levadura es un ejemplo de una fermentación en la que el producto es inhibitorio para el
crecimiento. ción Dilu de medio toxified, adición de un complejante compuesto químico unmetabolizable con la toxina, o la
con corriente (es decir, fuerza protón-motriz) y el transporte de nutrientes y para las funciones metabólicas esenciales, tales
eliminación simultánea de la toxina podría aliviar los efectos adversos de la toxina y producir un mayor crecimiento.

producción de energía. Se llama metabolismo endógeno. La célula siempre debe gastar energía para mantener una membrana

los fase de muerte ( o fase de declive) sigue a la fase estacionaria. Sin embargo, algunos la muerte celular puede
comenzar durante lalafase
la fase estacionaria, estacionaria,
célula y una
cataboliza las clara demarcación
reservas celulares paraentre estas
nuevos dos fases
bloques no siempre yespara
de construcción posible. A menudo,
monómeros de las
células muertas se lisan, y los nutrientes intracelulares re alquilados en el medio son utilizadas por los organismos vivos
durante la fase estacionaria. Al final de la fase estacionaria, ya sea por agotamiento de los nutrientes o mento acu producto
medio rico en nutrientes. En tanto la muerte y fases estacionarias, es importante reconocer que hay una distribución de Durante
tóxico, comienza la fase de muerte.

o no lisan, y el restablecimiento de la cultura pueden ser sible pos en la fase temprana muerte si las células se transfieren a un
La tasa de muerte por lo general sigue una cinética de primer orden:

(6,10)pueden
primer orden. Una parcela de En norte versus t produce una línea de pendiente - k' re. Durante la fase de muerte, las células

dónde norte s es la concentración de las células al final de la fase estacionaria y k re es la constante de la tasa de mortalidad de

164 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

 Para describir mejor la cinética de crecimiento, definimos algunos paráme- pa estequiométricamente relacionados. coeficientes
de rendimiento se definen basándose en la cantidad de consumo de otro material. Por ejemplo, el rendimiento de crecimiento en una
fermentación es

(6,11)

III
Yxis

feife
Al final del periodo de crecimiento por lotes, tenemos una rendimiento crecimiento aparente ( o ob sirve rendimiento de crecimiento).

Debido a las condiciones de cultivo pueden alterar los patrones de utilización de sustrato, el rendimiento de crecimiento aparente no es una

constante real. Por ejemplo, con un compuesto (tal como glucosa) que es a la vez una fuente de carbono y energía, el sustrato puede ser

consumido como:
puede seleccionar variantes de la cepa original que tiene capacidades metabólicas alteradas.
^^ ^^ asimilación + asimilados + ^ * $ crecimiento de la energía de mantenimiento ^^
en biomasa en una energía (6,12)
producto
extracelular

En el apartado de cultivo continuo, vamos a diferenciar entre el verdadero rendimiento del crecimiento (que es constante) y
el rendimiento
reestab de un aparente.
cultivo decoeficientes de rendimiento
inóculo derivado en base
de cultivos a otros STRATES
estacionarios o de fasesub
de omuerte.
formación
Así,deutilizando
producto un
pueden
viejo ser definidos;
inóculo
por ejemplo,

HACHA
(6,13)
AO 2

subfracción de la población puede sobrevivir durante un período prolongado. Es esta subfracción que dominaría el estableci-
SLA

(6,14)
yo

Yp / s

Para los organismos que crecen aeróbicamente en glucosa, es típicamente 0,4 a 0,6 g / g para la mayoría levaduras y bacterias,
mientras que F w? es 0,9 a 1,4 g / g. crecimiento anaeróbico es menos eficiente, y el coeficiente de rendimiento se reduce
sustancialmente
Con (ver Fig.
una distribución 6.5). Con
estrecha, sustratos
la muerte que son
celular más o menos
se produce reducido que la glucosa,
casi simultáneamente; el valor
con una del coeficiente
distribución amplia,deuna
elasticidad
aparente cambiará. Para el metano, asumiría valores de 0,6 a 1,0 g / g, con la Y correspondiente w? decreas ing a aproximadamente
0,2 g / g. En la mayoría de los casos, el rendimiento de biomasa en una fuente de energía de carbono es de 1,0 ±

0,4 g de biomasa por g de carbono consumido. Tabla 6.1 se enumeran algunos ejemplos de Fx / s y F ^ para una variedad de
sustratos y organismos.
componentes de la biomasa
UNA se de
coeficiente utiliza para la energía
mantenimiento de mantenimiento.
se usa para propiedades
describir la tasa específica entre los
de absorción de individuos
sustrato de una población.

para el mantenimiento celular, o

[DS / dt] metro

m= (6,15)
X

Sin embargo, durante la fase estacionaria donde poco sustrato externa está disponible, endoge- metabolismo lánea de

Segundo. Crecimiento 6,2 por lotes 165

 Y glucosa - 58 2 g rwoi- 1

peso seco bacteriana (pg / mi *) 400-

_________ __________ YO -------------- - 1 ---------

5 10
La concentración de sustrato (mM)

Figura 6.5. los rendimientos de crecimiento aeróbico y anaeróbico de Streptococcus faecalis con glucosa como sustrato.
(Con autorización, de B. Atkinson y F. Mavituna. ING ingeniero bioquímico y Manual de Biotecnología, Macmillan, Inc.,
Nueva York, 1983.)

mantenimiento celular representa los gastos de energía para reparar componentes celulares dañados, para transferir
algunos nutrientes y productos dentro y fuera de las células, para la motilidad, y para ajustar la osmolaridad del volumen interior de
las células. el crecimiento microbiano, ción forma del producto, y las tasas de utilización de sustrato se expresan normalmente en
forma de tasas específicas (por ejemplo, normalizados con respecto a X), ya que biorreacciones son autocatalítico. Las tasas
específicas se utilizan para comparar la eficacia de diferentes esquemas de fermentación y biocatalizadores.

Los productos microbianos pueden clasificarse en tres categorías principales (véase la figura 6.6.):

1. productos de crecimiento asociada se producen simultáneamente con el crecimiento microbiano.

La tasa específica de la formación de producto es proporcional a la tasa específica de crecimiento, p sol. Tenga en cuenta que | i sol difiere
de p red, la tasa de crecimiento específico neto, cuando el metabolismo endógeno es distinto de cero.

1 dP 1Z
q p ~% dt ~ (6,16)

La producción de una enzima constitutiva es un ejemplo de un producto asociada al crecimiento.

2. la formación de producto no crecimiento asociada tiene lugar durante la fase estacionaria, cuando la tasa de crecimiento
es cero. La tasa específica de la formación de producto es constante.

166 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

 Xo
P
X

X
Hora
(una)

Figura 6.6. patrones cinéticos de crecimiento y formación de producto en las fermentaciones por lotes: (a) la formación asociada al crecimiento

del producto, la formación del producto (b) asociada a crecimiento mixta, y (c) la formación de producto no crecimiento asociada.

Luedeking-Piret ecuación. Si a = 0, el producto sólo es asociado no crecimiento, y si P = 0, sería el

producto sólo el crecimiento asociado, y en consecuencia una sería entonces igual a Y P / X.

Algunos de los conceptos relativos a la tasa de crecimiento y el rendimiento se ilustran en Ex amplio 6.1.

Ejemplo 6.1.

Una cepa de moho se hizo crecer en un cultivo por lotes en la glucosa y los siguientes datos fueron ob CONTENIDA.

Célula La concentración

Tiempo concentración de glucosa

(h) (G / 1) (G / 1)

0 1.25 100
9 2.45 97
dieciséis 5.1 90.4
23 10.5 76.9
30 22 48.1
34 33 20.6
36 37.5 9.38
40 41 0.63

a. Calcular la tasa de crecimiento específico máxima neta.

segundo. Calcular el rendimiento de crecimiento evidente.

do. ¿Qué concentración máxima de células se puede esperar si se utilizara 150 g de glucosa con el mismo inóculo
tamaño?
Solución Una parcela de En X versus t produce una pendiente de 0,1 h.

. lnX 2- lnX. In37.5-ln5.1 norte

3) DRNA = ------- "-------- L = --------------------- = 0.1 h
Fneta
36-16

.. v AX 41 a 1,25 . u
segundo) Y = -------- = -------------------- = 0,4 e CEL es / sustrato g
COMO 0,625-100

c) X max = X o + YS () = 1,25 + 0,4 células (150) = 60,25 g / 1

Chan fi
6.2.3. Como las condiciones ambientales afectan la
cinética de crecimiento

La temperatura es un factor importante que afecta el rendimiento de las células. De acuerdo con su
temperatura óptima, los organismos se pueden clasificar en tres grupos: (1) psicrófilos (T ^ <20 ° C), (2) mesófilos
(7 ^ = de 20 ° a 50 ° C), y (3) termófilos ( T OPL > 50 °
DO). A medida que aumenta la temperatura hacia la temperatura de crecimiento óptima, la tasa de crecimiento aproximadamente duplica
por cada aumento de 10 ° C en la temperatura. Por encima de la gama temperamento Ature óptima, pueden producirse los disminuye la
velocidad de crecimiento y la muerte térmica. La tasa de cationes repli específica neta se puede expresar por la siguiente ecuación para la
temperatura sobre el nivel óptimo:

ambientales tales como la temperatura, pH, y la concentración de oxígeno disuelto.

= (6-19)

A altas temperaturas, la tasa de muerte térmica supera la tasa de crecimiento, lo que provoca una disminución neta de la
crecimiento microbiano
concentración de células yviables.
la formación de producto que acabamos de discutir se encuentran en fluenced por las condiciones
Ambos | T pag y k' re variar con la temperatura de acuerdo con la ecuación de Arrhenius:

= A'e ~ EJRT (6,20)

plantas, pH = 5 a 6; y para células animales, pH = 6,5 a 7,5. Muchos organismos tienen mecanismos a los patrones de
dónde mi una y mi re son energías de activación para el crecimiento y la muerte térmica. La activación en ergy para el crecimiento es
típicamente de 10 a 20 kcal / mol, y para la muerte térmica de 60 a 80 kcal / mol. Es decir, la muerte térmica es más sensible a cambios
de temperatura que el crecimiento microbiano.
La temperatura también afecta a la formación de producto. Sin embargo, la temperatura óptima para el crecimiento y
óptimo para
formación muchas bacterias
de producto puede servaría de pH
diferente. El=coeficiente
3 a 8; paradelarendimiento
levadura, pH = 3 a 6;
también se para moldes,por
ve afectada pHla=temperatura.
3 a 7; para células de
En algunos
casos, como la producción de proteína unicelular, ción Optimiza temperatura para maximizar el coeficiente de rendimiento (T ATS) * s crítico.
Cuando la temperatura se incrementa por encima de la temperatura óptima, los requisitos de mantenimiento de células aumentan. Es
decir, el coeficiente de mantenimiento (ver eq. 6,15) aumenta al aumentar la temperatura con una energía de activación de 15 a 20
kcal / mol. resultando en una disminución en el coeficiente de rendimiento.
de pH aceptable varía sobre el óptimo en ± 1 a 2 unidades de pH. Diferentes organismos tienen diferentes pH óptimos: el pH

La temperatura también puede afectar a la etapa limitante de la velocidad en un proceso de fermentación. A altas temperaturas, la
tasa de biorreacción podría llegar a ser más alta que la velocidad de difusión, y la difusión se convertiría entonces en la etapa limitante de
la velocidad (por ejemplo, en un sistema de células inmovilizada). La energía de activación de la difusión molecular es de aproximadamente
microbiano. El pH óptimo para el crecimiento puede ser diferente de la de la formación de producto. Generalmente, el intervalo
6 kcal / mol. La energía ción activa para la mayoría de biorreacciones es de más de 10 kcal / mol, por lo que las limitaciones difusionales
deben considerarse cuidadosamente a altas temperaturas. Figura 6.7 representa una variación típica de la tasa de crecimiento con la
temperatura.

concentración de iones de hidrógeno (pH) afecta a la actividad de las enzimas y por lo tanto la tasa de crecimiento

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 169

 xo Q_

X
Hora Hora Hora
(una) (segundo) (do)

Figura 6.6. patrones cinéticos de crecimiento y formación de producto en las fermentaciones por lotes: (a) la formación asociada al

crecimiento del producto, la formación del producto (b) asociada a crecimiento mixto, y la formación de producto (c) no

crecimiento-associatcd.

Luedeking-Piret ecuación. Si a = 0, el producto sólo es asociado no crecimiento, y si P = 0, sería el producto

de crecimiento asociados, y en consecuencia una sería entonces igual a Yp / x-

Algunos de los conceptos relativos a la tasa de crecimiento y el rendimiento se ilustran en Ex amplio 6.1.

Ejemplo 6.1.

Una cepa de moho se hizo crecer en un cultivo por lotes en la glucosa y los siguientes datos fueron ob CONTENIDA.

Célula La concentración

Tiempo concentración de glucosa

(h) (G / 1) (G / 1)

0 1.25 100
9 2.45 97
dieciséis 5.1 90.4
23 10.5 76.9
30 22 48.1
34 33 20.6
36 37.5 9.38
40 41 0.63

a. Calcular la tasa de crecimiento específico máxima neta.

segundo. Calcular el rendimiento de crecimiento evidente.

do. ¿Qué concentración de células máxima podría esperarse si se utilizara 150 g de glucosa
con el mismo inóculo tamaño?
Solución Una parcela de En X versus t produce una pendiente de 0,1 h.

. lnX.-lnX, In37.5-ln5.1 norte

a) Li. = ------- --------- L = -------------------- = 0 1 h 1

41 a 1,25
una;

yo

= Células 0,4 g de sustrato / g

II

II

0,625-100

c) X max = X o + Kansas 0 = 1,25 + 0,4 células (150) = 60,25 g / 1

168 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

6.2.3. Como las condiciones ambientales afectan la
cinética de crecimiento

Los patrones de crecimiento microbiano y la formación de producto que acabamos de discutir están en fluenced por las
condiciones ambientales tales como la temperatura, pH, y la concentración de oxígeno disuelto.

La temperatura es un factor importante que afecta el rendimiento de las células. De acuerdo con su
temperatura óptima, los organismos se pueden clasificar en tres grupos: (1) (T psicrófilos opt < 20 ° C), (2) mesófilos (T O
pag t = de 20 ° a 50 ° C), y (3) termófilos (T OPL > 50 °
DO). A medida que aumenta la temperatura hacia la temperatura de crecimiento óptima, la tasa de crecimiento aproximadamente duplica
por cada aumento de 10 ° C en la temperatura. Por encima de la gama temperamento Ature óptima, pueden producirse los disminuye la
velocidad de crecimiento y la muerte térmica. La tasa de cationes repli específica neta se puede expresar por la siguiente ecuación para la
temperatura sobre el nivel óptimo:

^ L = ^' R- k' re) norte (6,19)

a

A altas temperaturas, la tasa de muerte térmica supera la tasa de crecimiento, lo que provoca una disminución neta de la
concentración de células viables.
Tanto p'fl y V re variar con la temperatura de acuerdo con la ecuación de Arrhenius:

= Ae mi ' IRT, k' d = a'e ~ mi ' IRT (6,20)

dónde mi una y mi re son energías de activación para el crecimiento y la muerte térmica. La activación en ergy para el crecimiento es
típicamente de 10 a 20 kcal / mol, y para la muerte térmica de 60 a 80 kcal / mol. Es decir, la muerte térmica es más sensible a cambios
de temperatura que el crecimiento microbiano.
La temperatura también afecta a la formación de producto. Sin embargo, la temperatura óptima para el crecimiento y
formación de producto puede ser diferente. El coeficiente de rendimiento también se ve afectada por la temperatura. En algunos
casos, como la producción de proteína unicelular, ción Optimiza temperatura para maximizar el coeficiente de rendimiento (T ATS) es
critico. Cuando la temperatura se incrementa por encima de la temperatura óptima, los requisitos de mantenimiento de células
aumentan. Es decir, el coeficiente de mantenimiento (ver eq. 6,15) aumenta al aumentar la temperatura con una energía de activación
de 15 a 20 kcal / mol, lo que resulta en una disminución en el coeficiente de rendimiento.

La temperatura también puede afectar a la etapa limitante de la velocidad en un proceso de fermentación. A altas temperaturas, la
tasa de biorreacción podría llegar a ser más alta que la velocidad de difusión, y la difusión se convertiría entonces en la etapa limitante de
la velocidad (por ejemplo, en un sistema de células inmovilizada). La energía de activación de la difusión molecular es de aproximadamente
6 kcal / mol. La energía ción activa para la mayoría de biorreacciones es de más de 10 kcal / mol, por lo que las limitaciones difusionales
deben considerarse cuidadosamente a altas temperaturas. Figura 6.7 representa una variación típica de la tasa de crecimiento con la
temperatura.

concentración de iones de hidrógeno (pH) afecta a la actividad de las enzimas y por lo tanto la tasa de crecimiento
microbiano. El pH óptimo para el crecimiento puede ser diferente de la de la formación de producto. Generalmente, el intervalo
de pH aceptable varía sobre el óptimo en ± 1 a 2 unidades de pH. Diferentes organismos tienen diferentes pH óptimos: el pH
óptimo para muchas bacterias varía de pH = 3 a 8; para la levadura. pH = 3 a 6; para moldes, pH = 3 a 7; para células de
plantas, pH = 5 a 6; y para células animales, pH = 6,5 a 7,5. Muchos organismos tienen mecanismos para

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 169

 1.0 37 do

pag
constante crecimiento, k (hr _ 1)

Figura 6.7. gráfico de Arrhenius de la velocidad de crecimiento de E.

coli B / r. puntos de datos individuales arco marcado con

correspondientes grados Celsius.

E. coli B / r se cultivó en un medio rico complejo (•) y unas

sales de glucosa-minerales medio (O). (Con permiso,
después de SL Herendeen. VanBogelen la AR, y el FC
Neidhardt. “Los niveles de proteína principal de Escherichia
coli Durante el crecimiento a diferentes temperaturas,”J. Bacteriol.
48 ° \ ° l5
739: 195. 1979, como se dibuja en RY Stainer y otros. El

13,5 ° * i
Mundial microbianas mi. 5ª ed .. Pearson Education, Upper
0,1 I- yo yo ii yo ii yo yo Saddle River. NJ, 1986. 207.)
3.1 3.2 3.3 3.4 3.5

1000/7 (° K)

mantener el pH intracelular a un nivel relativamente constante en presencia de fluctuaciones en el pH del medio

ambiente. Cuando el pH se diferencia del valor óptimo, los quirements mantenimiento de energía re aumentan. Una
consecuencia de diferente pH óptimo es que el pH del medio se puede utilizar para seleccionar un organismo sobre otro.

En la mayoría de las fermentaciones. pH puede variar sustancialmente. A menudo la naturaleza de la fuente de nitrógeno
puede ser importante. Si amonio es la única fuente de nitrógeno, iones de hidrógeno arco re alquilados en el medio como
consecuencia de la utilización microbiana de amoníaco, lo que resulta en una disminución en el pH. Si nitrato es la única fuente de
nitrógeno, iones de hidrógeno se eliminan del medio de reducir el nitrato a amonio, resultando en un aumento en el pH. Asimismo, el
pH puede cambiar debido a la producción de ácidos orgánicos, la utilización de ácidos (ácidos particularmente aminoácidos), o la
producción de bases. La evolución o el suministro de CO 2 puede alterar pH mucho en algunos sistemas (por ejemplo, agua de mar o
cultivo de células animales). Por lo tanto, el control de pH por medio de un tampón o un sistema de control de pH activo es importante.
Variación de la tasa de crecimiento específico con pH se representa en la Fig. 6.8, lo que indica un pH óptimo.

Oxígeno disuelto ( DO) es un importante sustrato en las fermentaciones aeróbicas y puede ser un sustrato limitante, ya que el
gas de oxígeno es poco soluble en agua. A altas centraciones estafadores celular, la tasa de consumo de oxígeno puede superar la tasa
de suministro de oxígeno, ing plomo a las limitaciones de oxígeno. Cuando el oxígeno es el factor limitante de la velocidad, tasa de
crecimiento específico varía con la concentración de oxígeno disuelto de acuerdo con la cinética de saturación; por debajo de un criti
concentración cal, el crecimiento o la respiración se aproxima a una dependencia de velocidad de primer orden de la concentración de
oxígeno disuelto.

Por encima de una concentración de oxígeno crítico, la tasa de crecimiento se vuelve independiente de la concentración de oxígeno

disuelto. Figura 6.9 representa la variación de la tasa de crecimiento específico con la concentración en oxígeno disuelto. El oxígeno es un factor

de crecimiento-limitante de la velocidad cuando el

170 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

 O - io
XX

O
/
sin dimensiones
Tasa de

crecimiento
/
específico, ///

05

Illinois Con /
0.4
Adaptación - - Sin
Adaptación
0.3

0.2
II
0.1
YO.
1
O

1
CARNÉ DE IDENTIDAD

(XQ D.

00
■N

a
Figura 6.8. La variación típica de la tasa de crecimiento específico con el pH. Las unidades son arbitrarias. Con algunos cultivos microbianos,

es posible adaptar los cultivos a una gama más amplia de UEs val pH si los cambios de pH de arco hecho en pequeños incrementos de la

transferencia de la cultura para transferir.

DO nivel es inferior al crítico Concentración de oxígeno. En este caso, otro componente del medio (por ejemplo, glucosa, amonio) se
convierte en un crecimiento de medida limitante. Por ejemplo, con vinelandii ter Azotobac- a una DO = 0,05 mg / 1, la tasa de
crecimiento es de aproximadamente 50% del máximo, incluso si una gran cantidad de glucosa está presente. Sin embargo, la cantidad
máxima de células formadas no está determinado por la DO, como el oxígeno se reabastecido continuamente. Si la glucosa fueron
totalmente con Sumed, el crecimiento dejaría incluso si DO = 0,05 mg / 1. Por lo tanto, el grado de crecimiento (masa de células
formadas) dependería de la glucosa, mientras que la tasa de crecimiento de la mayoría de la RIOD cultura pe dependería del valor de
DO.

La concentración crítica de oxígeno es aproximadamente 5% a 10% de la concen tración DO saturado para las bacterias y la
levadura y aproximadamente 10% a 50% de la concentración saturada DO para cultivos de moho, dependiendo del tamaño de los gránulos
de moldes. Saturada Concentración de oxígeno en agua a 25 ° C y la presión de 1 atm es de aproximadamente 7 ppm. La presencia de
sales y compuestos orgánicos disueltos puede alterar el valor de saturación, mientras que cada vez más altas temperaturas disminuyen la
saturación

value.Oxygen generalmente se introdujo en caldo de fermentación por aspersión de aire a través del caldo. la transferencia de oxígeno

desde las burbujas de gas a células es generalmente limitada por la transferencia de oxígeno a través de la película de líquido que rodea las

burbujas de gas. La tasa de transferencia de oxígeno desde el gas a la fase líquida está dada por

W 02 = ^ un (C * -C L) = 0TR (62])

dónde k L es el coeficiente de transferencia de oxígeno (cm / h), una es el gas-líquido área interfacial (cm 2 / cm 3), k L una es el coeficiente de
transferencia de oxígeno volumétrico (h_ 1), C * está saturado DO

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 171

 1.0
XX
0.9
sin dimensiones
Tasa de

crecimiento

específico, /
//
0.5
Illinois Con /
0.4
Adaptación / - "Sin
Adaptación
0.3

0.2
l
0.1 I
l.
o

<£>
IO

<0 Zeq.

00
Figura 6.8. La variación típica de la tasa de crecimiento específico con pH. Las unidades ARC arbitrario. Con algunos cultivos microbianos,

es posible adaptar los cultivos a una gama más amplia de UEs val pH si los cambios de pH se realizan en pequeños incrementos de la

transferencia de la cultura transferir.

DO nivel es inferior al crítico Concentración de oxígeno. En este caso, otro componente del medio (cg, glucosa, amonio) se convierte
en un crecimiento de medida limitante. Por ejemplo, con vinelandii ter Azotobac- a una DO = 0,05 mg / 1, la tasa de crecimiento es de
aproximadamente 50% del máximo, incluso si una gran cantidad de glucosa está presente. Sin embargo, la cantidad máxima de
células formadas no está determinado por la DO, como el oxígeno se reabastecido continuamente. Si la glucosa fueron totalmente
con Sumed, el crecimiento dejaría incluso si DO = 0,05 mg / 1. Por lo tanto, el grado de crecimiento (masa de células formadas)
dependería de la glucosa, mientras que la tasa de crecimiento de la mayoría de la RIOD cultura pe dependería del valor de DO.

La concentración crítica de oxígeno es aproximadamente 5% a 10% de la concen tración DO saturado para las bacterias y la

levadura y aproximadamente 10% a 50% de la concentración saturada DO para cultivos de moho, dependiendo del tamaño de los

gránulos de moldes. concentración saturada DO en agua a presión Ana \ atm es de aproximadamente 1 ppm. presencia Trie oi dissoVreA

sa \ ts ANB buey ^ AMC pueden alterar el valor de saturación, mientras que cada vez más altas temperaturas disminuyen la saturación

value.Oxygen generalmente se introdujo en caldo de fermentación por aspersión de aire a través del caldo. la transferencia de oxígeno desde

las burbujas de gas a células es generalmente limitada por la transferencia de oxígeno a través de la película de líquido que rodea las burbujas

de gas. La tasa de transferencia de oxígeno desde el gas a la fase líquida está dada por

^ V Oz = ^ L C.A' 1'- do L) = OTR (6,21)

dónde k L es el coeficiente de transferencia de oxígeno (cm / h), una es el gas-líquido área interfacial (cm 2 / cm 3), k L una es el coeficiente de
transferencia de oxígeno volumétrico (h- 1), C * está saturado DO

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 171

 (A) 4. vinelandii

0.30

o°O
1_

o
/ I (l / h)

0.20

0.10

0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2

o

DO (mg / l)

(segundo) t. coli
1.00

0.95 Figura 6.9. dependencia-Tasa de crecimiento en DO para (a) Azotobacter

vinelandii, un organismo estrictamente aeróbico, y (b) E. coli, que

0.90 es faculative. E. coli crece anaeróbicamente a una velocidad de

aproximadamente 70% de su crecimiento aeróbico en medio

mínimo.
0.85

• . . . anaeróbica
0.80
aerobio
metro R-

0.75
(Con permiso, de J. Chen. Tan- AL Nahill. Shuler y ML,
Biotechnol. Bioeng. 27: 151, 1985, y John Wiley &
0,1 0,2 0,3 0.4 Sons, Inc., Nueva York).
DO (mg / l)

concentración (mg / l), do L es la concentración real DO en el caldo (mg / l), y la noz es la tasa de transferencia de oxígeno (mg O 2 / LH).
También, el término velocidad de transferencia de oxígeno ( OTR) se utiliza.

La tasa de captación de oxígeno se denota como OUR (tasa de captación de oxígeno) y

NUESTROS = q 02 X = metro UNA

(6,22)
^ X / Oo

dónde q 0 ^ es la tasa específica de consumo de oxígeno (mg O 2 / g cellsh dw), Y x / (yi es el coeficiente de rendimiento de oxígeno (g de
células dw / g O 2), y X es la concentración de células (células g dw / 1).
Cuando la transferencia de oxígeno es el paso limitante de la velocidad, la tasa de consumo de oxígeno es igual a la tasa de

transferencia de oxígeno. Si el requisito de mantenimiento de O 2 es insignificante en comparación con el crecimiento, entonces

(6,23)

o
dX
Y XIO2 k L un (C ^ -C L)
(6,24)
dt

172 ¿Cómo las células crecen Cap. 6

Tasa de crecimiento varía casi linealmente con la velocidad de transferencia de oxígeno bajo limitaciones de transferencia de oxígeno.
Entre los diversos métodos utilizados para superar DO limitaciones son el uso de aire enriquecido con oxígeno u oxígeno puro y el
funcionamiento bajo presión atmosférica alta (2 a 3 atm). la transferencia de oxígeno tiene un gran impacto en el diseño del reactor (véase
el Capítulo 10).
El potencial redox es un parámetro importante que afecta a la velocidad y extensión de muchas reacciones de
oxidación-reducción. En un medio de fermentación, el potencial redox es una función compleja de DO. pH, y otras
concentraciones de iones, tales como agentes reductores y ing oxidiz. El potencial electroquímico de un medio de
fermentación se puede expresar por la siguiente ecuación:

9 ^ RT RT
mi h = E '+ - ^ - logP O, + 2.3-- log (H +) (6.25)
4r F
donde el potencial electroquímico se mide en milivoltios por un pH / voltímetro y PAG Qy es en atmósferas.

El potencial redox de un medio de fermentación puede reducirse haciendo pasar gas nitrógeno o mediante la adición de
agentes reductores tales como HC1 cisteína o Na 2 gas S. El oxígeno se puede pasar o algunos agentes oxidantes se puede añadir a
los medios de fermentación para aumentar el potencial redox.
Disuelto dióxido de carbono (DCO 2) concentración puede tener un profundo efecto en por Formance de organismos.
Muy alta DCO 2 concentraciones pueden ser tóxicos para algunas células. Por otra parte, las células requieren un cierto DCO 2 nivel
para las funciones metabólicas adecuadas. La concentración de dióxido de carbono dis resuelto puede ser controlado
cambiando el CO 2 contenido de la suppiy aire y ite
5peed.
La fuerza iónica de los medios de fermentación afecta el transporte de entos outo- certata dentro y fuera de las
células, las funciones metabólicas de las células, y la solubilidad de ciertos entos Nutri, tales como oxígeno disuelto. La
fuerza iónica está dada por la siguiente ecuación:

(6,26)

dónde do es la concentración de un ion, Z z es su carga, y / es la fuerza iónica del medio.

Las altas concentraciones de sustrato que están significativamente por encima estequiométrica requieren mentos
son inhibitorios para las funciones celulares. los niveles de inhibidores de los sustratos varían dependiendo del tipo de
células y sustrato. La glucosa puede ser inhibidora a concentraciones por encima de 200 g / 1 (por ejemplo, etanol
fermentación por la levadura), probablemente debido a una reducción en la actividad de agua. Ciertas sales tales como
NaCl pueden ser inhibitorio a concentraciones superiores a 40 g / 1 debido a la alta presión osmótica. Algunos compuestos
refractarios, tales como fenol, tolueno y metanol, son las concentraciones de inhibidor mucho más bajas (por ejemplo, 1 g /
1). centraciones estafadores no inhibidor máximo típico de algunos nutrientes son glucosa, 100 g / 1; etanol, 50 g / 1 para
la levadura, y mucho menos para la mayoría de los organismos; de amonio, 5 g / 1; fosfato, 10 g / 1; y nitrato, 5 g / 1.

6.2.4. Generación de calor por el crecimiento microbiano

Alrededor del 40% al 50% de la energía almacenada en una fuente de carbono y energía se convierte en energía lógica bio (ATP) durante el
metabolismo aeróbico, y el resto de la energía se libera en forma de calor. Para las células en crecimiento activo, los requisitos de
mantenimiento es bajo, y la evolución de calor está directamente relacionado con el crecimiento.

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 173

 El calor generado durante el crecimiento microbiano se puede calcular utilizando el calor de combustión del
sustrato y de material celular. Un diagrama esquemático de un balance de entalpía para la utilización microbiana de
sustrato se presenta en la Fig. 6.10. El calor de combustión del sustrato es igual a la suma del calor metabólico y el
calor de combustión del material celular.

(6.27a)

+
donde Arz v es el calor de combustión del sustrato (kJ sustrato / g), Y X/ s es el coeficiente de rendimiento de sustrato (g sustrato de
células / g), y H do es el calor de combustión de células (kJ / g de células), y \ / Y u se desprende el calor metabólico por gramo de
masa celular producido (células kJ / g).
6.27a ecuación puede reordenarse para dar

K. = --------- ------------ (6.27b) AW s- y x /

s AW F

XH S y XH do puede ser determinado a partir de la combustión de sustrato y células. Los valores típicos para las células
bacterianas son de 20 a 25 células kJ / g. Los valores típicos de Y H son glucosa, 0,42 g / kcal; malato, 0,30 g / kcal; de etilo,
0,21 g / kcal; etanol, 0,18 g / kcal; metanol, 0,12 g / kcal; y metano, 0,061 g / kcal. Claramente, el grado de oxidación del
sustrato tiene un fuerte efecto sobre la cantidad de calor liberado.

La tasa total de evolución del calor en una fermentación por lotes es

= (6,28)
r H

dónde V L es el volumen de líquido (1) y X es la concentración de células (g / 1).

En fermentaciones aeróbicas, la tasa de evolución de calor metabólico más o menos se puede Corre lated a la tasa de
consumo de oxígeno, ya que el oxígeno es el aceptor final de electrones.

Q gramo- ®-HQ O2 (6,29)

CO + H2O Las células microbianas

CM

El crecimiento La combustión de

microbiano y la células microbianas

respiración
AH do( kJ / g de células)

I / Y h ( kJ / g de células)

T c otal om bustión
♦ sustrato norte

2
AHe (kJ / un sustrato) 2

Figura 6.10. balance de calor en la utilización microbiana de sustrato.

174 ¿Cómo las células crecen Cap. 6