DETERMINACION DE HDL

INTRODUCCIÓN. Las Lipoproteinas son macromoléculas que estructuralmente están formadas

por una parte lipídica y una proteica, cuya función es empaquetar los lípidos insolubles en el
plasma proveniente de los alimentos (exógeno) y los sintetizados por nuestro organismo
(endógenos), que son transportarlos desde el intestino y el hígado a los tejidos periféricos y
viceversa; devolviendo el colesterol al hígado para su eliminación del organismo en forma de
ácidos biliares.

En la actualidad, las lipoproteínas se clasifican según su densidad en :

 Quilomicrones
 VLDL, lipoproteinas de muy baja densidad
 IDL; lipoproteinas de densidad intermedia
 LDL; lipoproteinas de baja densidad
 HDL, lipoproteinas de alta densidad.

Características: Las lipoproteínas son partículas esféricas, de un tamaño menor que los hematíes y
solo son visibles al microscopio electrónico. Están formadas por una parte lipídica, y una proteica.
Dentro de la lipídica encontramos colesterol esterificado y no esterificado, triglicéridos y fosfolipidos
y en la parte proteica a las apolipoproteinas. El colesterol en su forma esterificada se va a
encontrar en el centro o core de la lipoproteina, y el colesterol no esterificado lo vamos a encontrar
en una capa mas superficial junto a los fosfolípidos.

El colesterol es una molécula derivada de los esteroides, y es esencial para nuestro organismo,
esta presente en todas las células formando parte de las membranas celulares, en pequeña
cantidad en el sistema nervioso central, recubriendo las vainas de mielina. Es precursor de
hormonas esteroides (progesterona, estrógeno, testosterona y corticoesteroides. En la piel y por
acción de los rayos solares se transforma en vitamina D. El ser humano dispone de colesterol
gracias a dos vías: la exógena directamente a través de los alimentos y la endógena que sintetiza
el hígado (la mayor parte).

La determinación de colesterol total incluye la medición de las formas libres y esterificadas del
esteroide. En el suero o en el plasma 2/3 del colesterol total se encuentran como éster y el resto en
forma libre. Esto tiene cierta importancia analítica ya que en algunas reacciones químicas, el éster
del colesterol desarrolla un color más intenso que el colesterol libre, lo cual puede provocar un
sesgo positivo. Por esta razón es de suma importancia el conocimiento de la química de los
diversos métodos para colesterol y el reconocimiento de sus limitaciones en la elección del método
que se empleara en el laboratorio.

DETERMINACION. La incidencia de las enfermedades cardiacas coronarias tiene una correlación

inversa con el nivel sérico de HDL(High Density Lipoproteín) colesterol, osea que a mayor
concentración de HDL-Colesterol, menor es la incidencia de la enfermedad y viceversa.
Aparentemente la relación esta dada por el hecho que las HDL transportan el colesterol desde los
tejidos perisfericos para ser metabolizados por el higado, evitando así la proliferación y crecimiento
de lesiones ateromatosas.

Existe HDL aumentado en mujeres , niños y negros. En la enfermedad de Tangierexiste déficit de

síntesis de HDL, acumulando colesterol en los tejidos. El colesterol ligado a HDL es en promedio el
20 % del colesterol total en hombres y 22,5% en mujeres.

MÉTODO DE RUTINA: Método Fosfotungstínico-Magnesio

Fundamento. Los quilomicrones, VLDL(Very Low Density Liporpoteín) y LDL(Low Density
Liporpoteín), son precipitados por adición de acido fosfotungstinico e iones magnesio. Luego de la
centrifugación , la fracción HDL está contenida en el sobrenadante. La cuantificación posterior se
realiza utilizando el reactivo para determinar colesterol.

Muestra: Suero, Plasma heparinizado o EDTA.

Linealidad: El test solo debe ser realizado en pacientes con niveles de trigliceridos menores a 400
mg/dl.

Consideraciones: Concentraciones elevadas de acido ascorbico (>2,5 mg/dl) puede arrojar

valores bajos. Valores de Hemoglobina sobre 100 mg/dl y de Bilirrubina sobre 10 mg/dl interfieren
en la metodología.

Valores de referencia

HDL colesterol
Hombre Mujer
Pronóstico favorable >55 mg/dl >65 mg/dl
Niveles aceptables 35-55 mg/dl 45-65 mg/dl
Indicador de riesgo <35 mg/dl <45 mg/dl
LDL colesterol
Deseable <130 mg/dl
Riego moderado Entre 130-159 mg/dl
Riesgo elevado >160 mg/dl

METODO DE REFERENCIA: POR PRECIPITACIÓN

En estos métodos, se emplean polianiones (Heparina, Dextránsulfato), Fosfotungstato,

Polietilenglicol, en presencia de actiones bivalentes para precipitar las liporpoteinas más grandes,
menos densas; las HDL se determinan en el sobrenadante como colesterol-HDL. Dentro de estos
métodos se encuentran la determinación por medio de heparina-Cloruro de manganeso que es un
reactivo de uso frecuente.

OBJETIVO: Establecer la significancia clínica de la determinación de HDL y su correlación con

las demás determinaciones del perfil de lípidos.

MUESTRA CLÍNICA:
Suero obtenido de 12 horas de ayuno. El suero puede conservarse a temperatura ambiente
hasta 5 días. La refrigeración puede alterar la estructura de las
lipoproteínas dando resultados bajos. Usar suero control comercial.

REACTIVOS:

 Solución precipitante (Reactivo

comercial): 0.5 Molar de MgCI 2
 Fosfotungstato al 4%
  Reactivo para la determinación de colesterol enzimático (reactivo comercial)

 Solución estándar de colesterol de 200 mg/dL

Nota: las soluciones se deben atemperar ante de su uso

MATERIAL POR EQUIPO:

 Tubo de ensaye de 13x1 00 mmm

Tubos de centrifuga
 Micropipeta 1 000 µL
Micropipeta 200 µL
Gradilla
 Centrifuga

POR GRUPO
Baño María a 25 °C
Espectrofotómetro

PROCEDIMIENTO

Pipetear en tubos de centrifuga

Suero 250 µL
Solución precipitante 25 µL

A Mezclar y dejar en reposo a la temperatura ambiente durante 10 min. Centrifugar el

sobrenadante a 4000 rpm.

Separar el sobrenadante claro y emplearlo para la determinación de colesterol con el método

CHOD-PAD
Probl. St Blanco
Sobrenadante 100uL 20 ul
Sol. Reactiva 2.0 2.0 2.0

Mezclar e incubar los

tubos a 37 °C durante 15 min o a 37 °C por 12 min. Leer a 505 nm

LlNEARIDAD DEL METODO: La reacción es lineal u sigue

La ley de Lambert-Beer hasta 1000 mg/dL

VALORES DE REFERENCIA:
Hombres(mg/dL) Mujeres(mq/dL)
Pronóstico favorable > 55 > 65
Riesgo Normal 35 - 55 45 - 65
Alto riesgo < 35 < 45
RESULTADOS

DISCUSION DE RESULTADOS

BIBLIOGRAFIA

1. JOAN F. ZILVA, P.R. PANNALL. 1998. BIOQUIMICA CLíNICA EN EL •

DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO. ED. SALVAT
2. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE
LABORATORIO. EDITORIAL INTERAMERICANA.

http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EpllVuAyZuoRKbAyEj.php

http://escuela.med.puc.cl/paginas/cursos/tercero/integradotercero/apfisiopsist/nutricion/NutricionPD
F/Dislipidemias.pdf