Bioseparaciones

UPZMG Precipitación
Martha Cecilia Mosqueda López
17311054
RESUMEN
Precipitación
En la precipitación se concentra el soluto de una solución convirtiéndolo en sólido
mediante la acción de un agente precipitante.
Teóricamente la precipitación debe producir un soluto concentrado y puro, por lo
que es una operación que se utiliza al inicio de un proceso de bioseparación.

Ventajas
1. Operación que se adapta fácilmente a gran escala
1. Puede realizase en forma continua
2. El equipo que se utiliza es sencillo
3. Se dispone de diversos agentes precipitantes y en muchos casos éstos son
baratos

Fundamentos
Principio Agente precipitante
Disminución de la solubilidad Sales (Sulfato de amonio)
pH (precipitación isoeléctrica)
Solventes (etanol)
Polímeros no iónicos
Desnaturalización selectiva Temperatura
pH
Solventes

Precipitación por disminución de la solubilidad

Precipitación con sales

Precipitación por incremento de la fuerza iónica

Ecuacion de la precipitacion con sales

log S = A-m[Sal]
Donde:
S = Solubilidad de la proteína a un valor dado de concentración salina.
A = Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura. Esta constante
usualmente toma un valor mínimo en el punto isoeléctrico, es característica de
cada proteína e independiente del tipo de sal.
m = Pendiente de la curva de solubilización por salado. Ésta es independiente del
pH y la temperatura, pero varía con el tipo de sal y de proteína.
Naturaleza de la sal
1. Los aniones son más efectivos en el siguiente orden (Series de Hofmeister):

2. Los cationes son efectivos en el siguiente orden:

3. Seleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentraciones que
requiere el método.

Precipitación isoeléctrica

Precipitación con solventes

Esta técnica se basa en la disminución de la solubilidad mediante la adición de un
solvente orgánico ligeramente polar

Ecuación de la precipitación con solventes

Donde:
S = Solubilidad de la proteína
DS = Es la constante dieléctrica de la mezcla solvente-agua, misma que varía
dependiendo de la cantidad de solvente agregada.
K = Es una constante que toma en cuenta la constante dieléctrica original del
medio acuoso.
S0 = Es la solubilidad extrapolada

Precipitación con polímeros no iónicos

La precipitación de proteínas también puede realizarse utilizando polímeros neutros
como el poli etilenglicol (PEG) en lugar de sales o solventes.
El mecanismo no está claramente establecido

Ecuaciones de la precipitación con solventes

Precipitación de proteínas por desnaturalización selectiva

El objetivo de la desnaturalización selectiva es crear las condiciones en las cuales
la proteína de interés no se desnaturaliza o su desnaturalización es mínima
Si la proteína que se desea purificar presenta estabilidad en condiciones extremas
de temperatura, pH, o en solventes orgánicos, puede utilizarse esta propiedad en
las primeras etapas del proceso de purificación

Desnaturalización por pH
Debido a que ciertas proteínas son estables a pH’s extremos, se ha utilizado esta
propiedad para purificarlas mediante su precipitación por desnaturalización
selectiva de las proteínas contaminantes.
Desnaturalización por solventes orgánicos
La estabilidad que presentan algunas proteínas en una solución con solventes
orgánicos es una propiedad que ha sido utilizada en procesos de purificación,
mediante la precipitación de proteínas contaminantes

Precipitación por afinidad

La precipitación de proteínas por afinidad es un método de precipitación selectivo
que se basa en la capacidad que tienen las proteínas para unirse con ligandos por
medio de sus sitios activos.
En el caso de la afinidad bioespecífica el ligando puede ser un sustrato, un inhibidor,
o un anticuerpo.

Equipos de precipitación
La operación de precipitación puede llevarse en diferentes tipos de reactores entre
los que se encuentran los:

Diseño de Precipitadores
En el diseño de un proceso de precipitación debe tomarse como base el
comportamiento cinético de las partículas en solución. El conocimiento de este
comportamiento permite hacer la selección adecuada de la geometría en la que
se realizará el proceso.
Se puede idealizar la precipitación como un mecanismo de 6 etapas:
1. Mezclado inicial: La alimentación conteniendo el soluto es mezclada con el no-
solvente o la sal
2. Nucleación: Aparecen pequeñas semillas e inicia la precipitación
3. Crecimiento limitado por difusión: El precipitado crece por difusión
4. Crecimiento influenciado por flujo: Nuevo crecimiento es ayudado por mezclado
5. Floculación: Partículas coloides se agregan en flóculos grandes
6. Centrifugación: Los flóculos son separados por los métodos ya descritos

Mezclado Inicial:
El tiempo requerido para producir homogeneidad puede ser estimado de la
ecuación:
 Nucleación:
La nucleación es la parte del proceso donde pequeñas partículas aparecen y
empiezan a crecer:
 En sistemas inorgánicos, la nucleación puede ser lenta y la sobresaturación puede
persistir por largos periodos
 Para sistemas coloides, este proceso es efectivamente instantáneo

Crecimiento limitado por difusión (Crecimiento Pericinetico):

Después de la nucleación, las partículas del precipitado crecen cuando el soluto
disuelto difunde hacia ellos de la solución circundante.

Crecimiento influenciado por flujo (Crecimiento o agregación ortocinetica):

La difusión limita el crecimiento de pequeñas partículas pero es menos importante
que el crecimiento de partículas grandes.
Para estas partículas grandes, el crecimiento usualmente involucra coalición entre
especies las cuales son barridas junto con el mezclado.

Floculación:
Los flujos altos para el crecimiento de partículas pequeñas pueden destruir los
flóculos más grandes, así esta etapa es algunas veces llevada a cabo en tanques
no agitados.
Los polielectrolitos sintéticos pueden algunas veces ayudar a la floculación, tal
como ocurre en la filtración.