ESPECTRO DE ABSORCIÓN DE LA HEMOGLOBINA

Componentes básicos

Panel de control
Botones y funcionamiento
%T
Tanto porciento de transmitancia
Este modo se selecciona moviendo el cursor al menú %T utilizando las teclas cursoras izda/dcha.
La pantalla principal mostrará la transmitancia, con las unidades %T, que se lee en números
enteros. El haz de luz se detiene mientras mayor concentración haya. Por ejemplo: si es agua
destilada tendrá una transmitancia del 100%.

D. opt.
Densidad óptica
Este modo se selecciona moviendo el cursor al modo D. opt. Utilizando las teclas cursoras
izda/dcha. Sirve para medir la concentración de la sustancia. Es diversamente proporcional a la
transmitancia. La pantalla principal mostrará la densidad óptica con unidades absorbancia que se
leen en decimales. La longitud de onda puede ajustarse utilizando las teclas cursoras arriba/abajo.

Calibración
Calibración automática: El aparato se calibra automáticamente al prenderse, esto se realiza sin
cubeta.
Calibración manual: Se realiza poniendo en una cubeta con una disolución blanca (agua destilada
o el reactivo). Luego se presiona la tecla CAL.
 Curva de Hemoglobina

Procedimiento

1. Se coloca 5 ml de reactivo cianohemoglobina y 40 ul de sangre en un recipiente.

2. Se mezcla y se deja reposar por 5 minutos.
3. En distintas cubetas se colocan 0,5cm3; 1cm3; 1,5cm3; 2cm3; 2,5cm3; 3cm3.
4. Se mide la densidad óptica de cada cubeta en el espectrofotómetro.
5. Se anotan los resultados y se realiza la gráfica

Resultados

0,5cm3 --- 0,097

1cm3 --- 0,054
1,5cm3 --- 0,28
2cm3 --- 0,15
2,5cm3 --- 0,178
CUANTIFICAR LA CONCENTRACIÓN DE LA HEMOGLOBINA
El color rojo de la hemoglobina se debe a que absorbe radiación visible, aunque también
presenta picos de absorción en y cerca de la región ultravioleta.
Diseño del experimento: Utilizando agua y la disolución de hemoglobina, prepara distintas
diluciones y analiza su espectro UV-VIS completo. Para ello, llena una cubeta con hemoglobina
y en las otras dos cubetas prepara sendas mezclas diferentes de hemoglobina con agua. Todas
las cubetas deben tener un volumen total de 3 mℓ.
Para ayudarte a hacerlo, rellena previamente esta tabla (o mejor, una que hagas en tu cuaderno
de laboratorio) con los volúmenes que piensas poner en cada cubeta:

Medida: A continuación, introduce al espectrofotómetro las cubetas, de una en una, y pulsa el

botón para registrar el espectro entre 200 y 800 nm. Pulsa en el icono de cámara de fotos y copia
la imagen resultante para poderlas comparar todas al terminar el experimento.
Análisis cualitativo de resultados: Compara los 3 espectros. ¿Qué efecto se observa al diluir la
hemoglobina de partida? ¿Cambia la posición (λ) de los picos de absorción máxima? Describe
lo que observas.
2ª medida: Observando el espectro, anota dos longitudes de onda (de la región visible, no
ultravioleta) en las que haya un pico (un máximo local de absorción). A continuación mide y
anota la absorbancia de las 3 cubetas a cada una de esas dos longitudes de onda. Representa tus
resultados en una gráfica, considerando que la concentración de partida de hemoglobina (en la
botella) es de 200 mg/ℓ.