Descripción:

GoTaq Green Master Mix es una solución premezclada, lista para usar, que contiene ADN
polimerasa Taq, dNTP. El MgCl2 y los tampones de reacción en concentraciones óptimas para
la amplificación eficiente de las plantillas de ADN por PCR GoTaq Green Master Mix contienen
dos colorantes que permiten controlar el progreso durante la electroforesis. Las reacciones
ensambladas con GoTaq Green Master Mix tienen una densidad suficiente para la carga
directa en geles de agarosa.

Go Taq Green Master Mix se recomienda para cualquier acción de amplificación que se
visualizará mediante electroforesis en gel de agarosa y tinción con bromuro de etidio. No se
recomienda la mezcla maestra, ya que cualquier aplicación de dowstream utiliza la
exoneración o la fluorescencia, ya que los colorantes amarillo y azul en la mantequilla de
reacción pueden interferir con estas aplicaciones. Los tintes abeob entre 225. 300 nm, lo que
hace que las lecturas estándar de A260 para determinar la concentración de ADN sean
imposibles de mantener. Los tintes tienen un grado de excitación mínimo, ya que es el tinte
amarillo el que absorbe esta longitud. los geles escaneados por este método tendrán un frente
de tinte gris claro (correspondiente al frente de tinte amarillo) debajo de los cebadores.

Go Taq Green Master Mix Compatibilidad

Go Taq Green Master Mix es compatible con los aditivos de PCR comunes, como el
DMSO y la betaína. Estos aditivos no cambian el color de GoTaq Green Mater Mix ni la
migración del tinte.

Se utilizarán tanto los análisis de gel de agarosa como las aplicaciones posteriores que
impliquen absorbancia o fluorescencia, los dos colorantes pueden eliminarse de las
reacciones utilizando los sistemas estándar de limpieza de PCR uo como el Gel Wizard
SV y los sistemas de limpieza de PCR.

Diseño de imprimación

Los cebadores de PCR generalmente tienen una longitud de 15 '30 bases y están
diseñados para flanquear la región de interés. los cebadores deben contener 40 '60%
G.C, y el cuidado debe ser falso para evitar secuencias que puedan producir una
estructura secundaria interna. Los extremos 3 'de los cebadores no deben ser
complementarios para evitar la producción de cebadores cebadores. Los dímeros de
cebadores son innecesarios para eliminar los primars de la reacción y dar como
resultado una reacción de polimerasa no deseada que compite con la reacción
deseada. Evite tres nucleótidos G o C en una fila cerca del extremo 3 'del cebador, ya
que esto puede resultar en un recocido del cebador no específico, lo que aumenta la
sensación de producción de reacciones indeseables. Idealmente, ambos cebadores
deberían tener temperaturas de fusión casi idénticas; En este manual, los dos primers
deben ser recocidos a la misma temperatura. La temperatura de recocido de la
reacción depende del cebador con la tm más baja. Para obtener ayuda con el cálculo
de la tm de cualquier indicador, se proporciona una calculadora de Tm en la página
BioMath de Promega.

Solución de problemas de amplificación

Para superar el bajo rendimiento o el rendimiento en amplificaciones, recomendamos

las siguientes sugerencias:

 Ajustar la temperatura de recocido. La composición del tampón de reacción

determina las propiedades de fusión del ADN; consulte la Calculadora BioMalh
para calcular la temperatura de fusión de los cebadores en la reacción de
GoTaq.
 Minimiza el efecto de los inhibidores de la amplificación. Algunos
procedimientos de aislamiento de ADN, especialmente el aislamiento de ADN
genómico, pueden resultar en la copurificación de los inhibidores de la
amplificación. Reduzca el volumen de ADN de plantilla en la reacción o diluya el
ADN de plantilla antes de agregar a la reacción. Se ha demostrado que la
dilución de muestras, incluso 1: 10,000, es eficaz para mejorar los resultados,
según la concentración inicial de ADN.
 Aumente la pureza del ADN de la plantilla, incluya una precipitación con etanol
y la etapa de lavado a amplificación para eliminar los inhibidores que coinciden
con el ADN.
 Añadir los aditivos de PCR. Agregar agentes potenciadores de la PCR puede
mejorar los rendimientos. Los agentes estabilizadores generales, como BSA,
también pueden ayudar a superar la amplitud de la amplificación.