Cultivos Celulares

[AFO009750] Especialista en Biología Molecular y Citogenética
[MOD009024] Biología Molecular y Citogenética

[UDI048950] Cultivos celulares
INTRODUCCIÓN
Los cultivos celulares se remontan al siglo XIX, cuando se empleaban como un método para el
estudio del comportamiento de las células animales bajo determinadas condiciones de estrés. En la
actualidad, el cultivo celular es una herramienta básica que sirve como punto de partida para la
realización de diferentes procedimientos o ensayos biológicos, pues pueden cultivarse en el
laboratorio gran variedad de células procedentes de tejidos y organismos diferentes.
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Cuando los cultivos provienen de células que han sido disgregadas a partir de un tejido original
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tomado de un órgano recién sacrificado, se habla de cultivos primarios. Si a partir de este último se
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genera otro grupo celular que se puede separar se forma un cultivo secundario, mientras que, los
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cocultivos son aquellos cultivos celulares en los que coexisten dos tipos de células de linajes
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diferentes.
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En la presente Unidad Didáctica se llevará a cabo el estudio de los cultivos celulares, atendiendo a
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las condiciones y principales aplicaciones asociadas a los mismos.
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campusvirtual.grupoesneca.com
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OBJETIVOS
Conocer las condiciones, componentes y métodos de preparación de los medios de cultivo.
Describir la metodología de producción de los anticuerpos monoclonales así como sus
aplicaciones.
Describir el proceso de producción de proteínas terapéuticas en cultivos de células animales.
Identificar las aplicaciones de los cultivos celulares en el ámbito de la salud.
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MAPA CONCEPTUAL
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1. Métodos de fusión celular, hibridomas, obtención, selección
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos, es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el cultivo.
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Por tanto, para estudiar las reacciones metabólicas de las bacterias es necesario cultivarlas en
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medios de cultivo, esto es, mezclas de sustancias que proporcionan en forma asimilable todos los
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elementos necesarios para su crecimiento y multiplicación. De la misma manera, para que los
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microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial, éste debe reunir una
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serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas,
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además de un grado apropiado de acidez o alcalinidad.

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Los medios de cultivo deben incluir los elementos indispensables para la vida bacteriana: carbono,
nitrógeno, hidrógeno, oxígeno, elementos minerales (fósforo, azufre, calcio, magnesio y hierro),
micronutrientes o elementos de traza (Zn, Co, Cu, Mn, etc.) y factores de crecimiento (vitaminas,
bases púricas y pirimidínicas, aminoácidos, etc.).
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los
líquidos orgánicos del cuerpo humano; por eso, la base de muchos medios de cultivo es una mezcla
de estratos corporales y peptona a la que se irán añadiendo los demás componentes.
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1.1. Condiciones necesarias para el desarrollo de los patógenos
Para que las bacterias y los hongos puedan desarrollarse en un medio artificial, además de tener los
nutrientes necesarios, se deben cumplir una serie de condiciones: atmosféricas, de temperatura,
tiempo de incubación, pH del medio y presión osmótica. El hecho de que cada bacteria tenga unas
necesidades diferentes puede aprovecharse para fabricar medios de cultivo con diferentes
composiciones y así poder aislar determinados patógenos.
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Condiciones atmosféricas
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Los microorganismos patógenos pueden clasificarse según su relación con la atmósfera:
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Aerobios: utilizan el oxígeno como aceptor terminal de electrones y presentan un desarrollo
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abundante en una atmósfera con la concentración normal del aire.
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Anaerobios: son relativamente intolerantes a la presencia de oxígeno.
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Microaerófilos: crecen bien en atmósferas con menor presión de oxígeno.
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Anaerobios facultativos: pueden crecer en condiciones aerobias o anaerobias.
Capnófilos: crecen mejor en una atmósfera con mayor concentración de CO2 que la ambiental.
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Los microorganismos aerobios y anaerobios facultativos pueden ser incubados en una concentración
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de aire ambiental sin mayor dificultad. Por su parte, los microorganismos capnófilos pueden ser
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cultivados en una estufa de incubación con puertas selladas, en una atmósfera de 5-10% de CO2.
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Generalmente, el sistema más utilizado para crear una atmósfera específica anaeróbica o capnófila
es la jarra anaerobia.
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Existen modelos que presentan en la tapadera un manómetro y válvulas para hacer el vacío e
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introducir la mezcla gaseosa que proporciona la anaerobiosis. En la cara interior de la tapadera hay
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una especie de “clip” para sujetar la bolsa que lleva el Catalizador. Las jarras para anaerobiosis se
emplean principalmente para cultivos en placas.

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La atmósfera para anaeróbica en el interior de estas jarras se puede conseguir según varios
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procedimientos:
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Técnica de evacuación/reemplazo: en este procedimiento se precisa primero crear el vacío

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mediante una bomba de vacío y una vez conseguido, se introduce la mezcla gaseosa (que suele
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estar constituida por un 10% de H2, 5% de CO2 y 85% de N2). Se utiliza un indicador redox
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que permite controlar si se ha producido o no la atmósfera anaeróbica.

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Técnica que emplea un sistema generador de H 2 y CO 2: para este sistema se emplean

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tres elementos.
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Generador descartable de H2-CO2: que consiste en una envoltura sellada de papel de
aluminio que contiene dos tabletas, una de las cuales contiene a su vez ácido cítrico y
bicarbonato sódico, mientras que la otra contiene borohidruro de sodio. Cuando se
introduce agua en este sobre, la primera tableta libera CO2 y la segunda libera H2. El H2
producido, en presencia del catalizador, reacciona con el oxígeno presente y produce
agua.
Indicador de anaerobiosis: los hay de tipo bacteriológico y químico. Los bacteriológicos
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consisten en introducir en la jarra de cultivo de un aerobio estricto; si éste crece, indica un
fallo en el establecimiento de la atmósfera de anaerobiosis. Los químicos son los más
utilizados, ya que se decoloran cuando están reducidos y no hay que esperar hasta el final
del periodo de incubación (como ocurre con los anteriores).
Catalizador en frío: consta de unas bolitas de alúmina recubiertas de paladio. Este
catalizador se inactiva por el SH2 y otros productos metabólicos producidos por las
bacterias, así como por el exceso de humedad.
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Técnica que emplea un sistema generador de Co 2: en este sistema se utiliza el generador
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descartable de CO2 y un indicador de anaerobiosis. El generador descartable de CO2 consiste
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en un sobre que contiene como principio activo el ácido ascórbico. Cuando este sobre se coloca
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en una jarra cerrada, el oxígeno atmosférico de la jarra es rápidamente absorbido con la
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generación simultánea de dióxido de carbono. Este método difiere del anterior en que la
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reacción continúa sin producción de hidrógeno, y por tanto, no requiere un catalizador. La
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reacción se inicia tan pronto como la bolsita es expuesta al aire, por tanto, es esencial colocar
ésta en la jarra y cerrarla en menos de un minuto.

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Temperatura
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La temperatura óptima de incubación para la mayoría de los patógenos humanos está próxima a la
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corporal (35-37º C), pero existen variaciones. Algunos no pueden soportar esta temperatura y otros
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tienen un margen más amplio, por ejemplo, determinados hongos y levaduras dermatofitos crecen
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mejor a temperatura ambiente, próxima a los 30º C.

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Es muy importante que la temperatura de incubación se mantenga en los límites establecidos
durante todo el proceso. La humedad puede ser controlada de forma automática si se hace llegar
agua desde una fuente externa a medida que el sistema lo necesita o de forma manual, si se coloca
un recipiente con agua en el estante inferior de la estufa.
Tiempo de incubación
El tiempo medio de incubación es de 18-24 horas, aunque algunas bacterias necesitan una
incubación adicional para desarrollarse bien y han de mantenerse hasta 48-72 horas.
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A veces es necesario incluso más tiempo, como por ejemplo las psicrófilas, que crecen a una
temperatura inferior a los 17º C y hay que mantenerlas durante 5 días a dicha temperatura. Otro
ejemplo son los hongos dermatofitos, que se mantienen en incubación durante 15 días.
pH del medio
Las bacterias se desarrollan generalmente en un pH próximo a la neutralidad, aunque algunas
exigen un pH específico distinto.
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Presión osmótica
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Debido a la composición de la pared celular bacteriana, las bacterias se adaptan bien a las
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variaciones de la presión osmótica; sin embargo, los medios de cultivo (in vitro) se preparan en
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condiciones de isotonía.
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1.2. Componentes de los medios de cultivo
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Los componentes básicos de los medios de cultivo son: agua, peptonas, extracto de carne, cloruro
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sódico y agentes solidificantes. Además, existen otros componentes adicionales que son necesarios
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para la preparación: sustancias inhibidoras de crecimiento, indicadores, sustancias enriquecedoras

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agentes reductores, hidratos de carbono, sales minerales y tampones estabilizadores del pH.
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Componentes básicos
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Los componentes básicos de los medios de cultivo son:

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Agua: para asimilar los alimentos, las bacterias necesitan agua; además, las condiciones de
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humedad son necesarias para la vida. El agua que se utiliza en los medios de cultivo es
destilada, ya que el agua del grifo contiene sustancias como el calcio o el magnesio, que
pueden formar precipitados con otros compuestos del medio de cultivo.
Peptonas: las peptonas son proteínas parcialmente hidrolizadas. Principalmente son fuente de
nitrógeno, aunque también lo son de carbono, azufre, etc.
Extracto de carne: constituye una fuente de carbono, nitrógeno, sales inorgánicas y factores
de crecimiento.
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Cloruro sódico: tiene como fin proporcionar un adecuado equilibrio osmótico, además de
incrementar la presión osmótica del medio para evitar la lisis de las bacterias.
Agentes solidificantes: están contenidos en los medios sólidos y semisólidos. El agar es el
más utilizado, siendo la gelatina y la albúmina las que menos se utilizan hoy en día.
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Componentes adicionales
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Sustancias inhibidoras de crecimiento: son sustancias que impiden el crecimiento de los

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microorganismos que no interesan que se desarrollen. Entre éstas podemos citar colorantes
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como el cristal violeta, el verde brillante (que inhibe a gram positivos), sales biliares o
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antibióticos.
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Indicadores: se utilizan para detectar variaciones en la acidez o alcalinidad del medio

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causadas por el metabolismo bacteriano. Estas variaciones se aprecian por el cambio de color
del indicador.
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Sustancias enriquecedoras: son sustancias que se añaden para favorecer el crecimiento de

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ciertos microorganismos que son más exigentes, por ejemplo, el suero, la leche, la sangre o el
huevo.
Agentes reductores: se añaden a los medios para promover la anaerobiosis. Entre los más
empleados están el tioglicolato sódico, la cisteína, o el ácido ascórbico.
Hidratos de carbono: los que se utilizan en las técnicas de cultivo hacen referencia sobre
todo a monosacáridos y disacáridos. Se pueden adicionar con fines de nutrición o para realizar
pruebas de identificación bioquímica.
Sales minerales: sulfatos y fosfatos de calcio, potasio, magnesio, hierro, etc.
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Tampones estabilizadores del pH: ya que el pH puede variar durante el proceso de
preparación del medio, es necesario estabilizarlo. La desestabilización también puede ser
consecuencia de la acumulación de los productos del metabolismo bacteriano.
1.3. Preparación de los medios de cultivo
La manipulación adecuada de determinados ingredientes nutritivos permite obtener una fuente de
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alimentación y un ambiente adecuado, para que puedan crecer y desarrollarse los microorganismos,
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en las condiciones más idóneas.
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Los medios de cultivo se comercializan desecados o en forma de polvo para su disolución y
esterilización. Actualmente se pueden adquirir también medios sólidos ya preparados y dispuestos
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en frascos, que se licuan mediante ebullición y se dispensan en placas. Otra forma de
comercialización es colocar los medios en tubos y en placa, listos para su inoculación.

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Aunque la práctica de adquirir los medios de cultivo se ha extendido enormemente, facilitando el
trabajo rutinario de los técnicos de laboratorio, conviene conocer las operaciones necesarias para
preparar un medio de cultivo en buenas condiciones. Para ello se siguen los siguientes pasos:
Pesar los componentes del cultivo.
Disolución de los componentes del cultivo.
Ajustar el pH de la disolución.
Repartir en recipientes.
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Esterilizar el medio.
Conservación de los medios de cultivo.
Antes de entrar a explicar con detalle los pasos a seguir, nombraremos el material que se suelen
utilizar en la preparación de los medios de cultivo:
Vasos de precipitados de 250 a 500ml.
Matraces Erlenmeyer de 250 a 500 ml.
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Placas de Petri.
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Pipetas de 10 a 25ml de boca ancha o dosificador.
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Papel indicador de pH o peachímetro.
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Tubos de cultivo.
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Autoclave.
Balanza.
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Algodón graso.
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Papel de aluminio.
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Asimismo, existen unos reactivos standard que suelen utilizarse en la mayoría de los casos:
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ingredientes para medios de cultivo o medios de cultivos deshidratados, hidróxido sódico al 1% y
ácido clorhídrico al 1%.

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Pesada de los componentes

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A pesar de que actualmente los medios vienen deshidratados y por tanto, no habría que pesar cada
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componente uno a uno, la pesada debe ser lo más precisa posible.

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Disolución de los componentes
La disolución debe realizarse siempre en agua destilada, salvo indicación contraria, en un recipiente
de vidrio limpio. El calor favorece la disolución, llegando a ser imprescindible en algunos productos,
aunque debe limitarse al estrictamente necesario evitando en cualquier caso llegar a la ebullición
prolongada. Para evitar el desborde por ebullición, los envases con soluciones que deben ser
esterilizados en el autoclave, sólo deben contener dos tercios de su volumen total de líquido.
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Ajuste del pH
Es muy importante ajustar el pH para obtener un medio de buena calidad. El ajuste se realiza con
tiras indicadores y soluciones de ácidos y bases. Normalmente se ajustan a pH neutro.
Reparto en recipientes
Si el medio preparado se va a utilizar en tubos o frascos, se repartirá en éstos con la ayuda de un
dosificador, a continuación se les asignará un tapón y una vez rotulados, se dispondrán en gradillas
o cestillos de autoclave para su esterilización. Si el medio se fuera a repartir en placas de Petri, se
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esterilizará en el matraz donde se hubiese preparado y posteriormente se repartirá ante mechero en
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placas estériles.
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Esterilización
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Se suele realizar en el autoclave a 1 atm de sobrepresión (121º C), durante 15-20 minutos. En caso
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de medios de cultivo que no se puedan esterilizar a estas temperaturas, se recurrirá a la filtración
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esterilizante o bien a la tindalización.
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Una vez que el ciclo de esterilización ha finalizado, debe reducirse lentamente la presión dentro del
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autoclave. El medio no debe permanecer dentro de éste una vez que se ha equilibrado la presión, ya
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que el calentamiento prolongado puede alterar alguno de los componentes.

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Conservación de los medios
Los ingredientes o medios deshidratados se conservarán protegidos de la luz, la humedad y el calor
en armarios o estanterías adecuadas. Los recipientes deben ser de plástico o de vidrio opaco y con
cierre hermético. Los medios deben conservarse en el refrigerador: las placas deberán ser invertidas
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e introducidas en bolsas de plástico y los tubos convenientemente tapados. Transcurrido un mes, no
debe usarse ningún medio.
Si se quiere comprobar la esterilidad del medio, se incuban las placas o los tubos a 37º C durante 48
horas y se comprueba si hay crecimiento. La calidad final del medio de cultivo preparado depende
de la forma en que se prepara, por lo que es de vital importancia que se sigan las normas expuestas
anteriormente. A modo de resumen, existen algunas indicaciones y recomendaciones generales:
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Generalmente, se almacenarán en una nevera a 4º C, aunque también se pueden conservar a
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temperatura ambiente, aunque su duración es más limitada (una o dos semanas).
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No deben guardarse a temperaturas por debajo de 0ºC, ya que se pueden alterar las
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estructuras.
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Es imprescindible protegerlos de la luz, para lo cual basta con envolver los medios en papel de
aluminio. es
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Los medios para verter en placa se conservan mejor en el frasco original, aunque pueden
guardarse en ellas teniendo en cuenta que:

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Se deben refrigerar inmediatamente después de su solidificación.

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Se protegerán contra la desecación precintando con cinta adhesiva su borde lateral o

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envolviendo la placa en varias bolsas de plástico.

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Se recomienda mantenerlas en posición invertida, tal y como se comentó anteriormente.
Los medios conservados en refrigerador deben ser atemperados antes de su empleo, a

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temperatura ambiente o en estufa de cultivo. Ello evitará la condensación de la humedad

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ambiental en la superficie del medio y el retraso del crecimiento microbiano.

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No utilizar nunca medios de cultivo con excesiva deshidratación. En los medios líquidos ésta se
manifiesta por una disminución de volumen o un aumento de concentración y en los medios
sólidos por la disminución del espesor, agrietamiento o el cambio de color.
Se cultivan células de plantas, animales y humanos en un caldo de cultivo en el laboratorio. Las
células de humanos y tejidos se pueden obtener de biopsias, post-mortem, placentas o de
procedimientos quirúrgicos. Se pueden cultivar una amplia variedad de cultivos de células, así como
células de cáncer y sangre humanas para investigar cómo los virus provocan infecciones; las células
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de la placenta humana se pueden utilizar para probar si los medicamentos pueden atravesar la
placenta, o células de las articulaciones humanas para estudiar medicamentos contra el reuma.
Hibridoma:
Es una línea celular híbrida obtenida mediante la fusión de un linfocito B productor del anticuerpo
específico de interés, con una línea celular de mieloma (linfocito B canceroso) que no produce una
inmunoglobulina propia. Se obtiene así una línea celular inmortal capaz de producir el anticuerpo
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monoclonal de interés, que puede recuperarse del medio.
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2. Anticuerpos monoclonales. Metodologías de producción.

Aplicaciones en diagnóstico, terapéutica y producción de otras
moléculas
Anticuerpo monoclonal:
Un anticuerpo monoclonal es un anticuerpo homogéneo producido por una célula híbrida producto
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de la fusión de un clon de linfocitos B descendiente de una sola y única célula madre y una célula
plasmática tumoral.
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Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos idénticos porque son producidos por un solo tipo de
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célula del sistema inmune, es decir, todos los clones proceden de una sola célula madre. Es posible
producir anticuerpos monoclonales que se unan específicamente con cualquier molécula con
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carácter antigénico. Este fenómeno es de gran utilidad en bioquímica, biología molecular y

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medicina.
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2.1. Metodologías de producción

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Si una sustancia extraña (antígeno) se inyecta en el cuerpo de un ratón o un humano, alguna de las
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células B de su sistema inmune se transformará en células plasmáticas y empezará a producir

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anticuerpos que se unirán a ese antígeno. Cada célula B produce un solo tipo de anticuerpo, pero
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diferentes linfocitos B producirán anticuerpos estructuralmente diferentes que se unen a distintas

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partes del antígeno. Esta mezcla fisiológica natural de anticuerpos es conocida como antisuero
policlonal.
Para producir anticuerpos monoclonales, primero se extraen células B del bazo de un animal que ha
sido expuesto al antígeno. Estas células B son fusionadas en presencia de PEG (polietilenglicol) con
células tumorales de mieloma múltiple que pueden crecer indefinidamente en cultivo celular. Esta
fusión hace a las membranas celulares más permeables. Estas células fusionadas híbridas, llamadas
hibridomas pueden multiplicarse rápida e indefinidamente, puesto que son células tumorales,
pudiendo producir gran cantidad de anticuerpos. Los hibridomas son suficientemente diluidos y
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cultivados para obtener un número diferente de determinadas colonias, las cuales producen sólo un
tipo de anticuerpo. Los anticuerpos de diferentes colonias son analizados para conocer su capacidad
de unirse a un antígeno determinado, por ejemplo con un tipo de test llamado ELISA, y para
seleccionarse y aislarse de la manera más efectiva.
El proceso de producción de anticuerpos monoclonales es complejo. Primero se disgrega el bazo del
ratón inmunizado, donde se acumulan los linfocitos B que tienen una escasa viabilidad en cultivo, y
se fusionan con células de mieloma deficientes en enzimas implicados en la síntesis del nuevo ADN
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como la timidina quinasa (TK) o la hipoxantina guanina fosforibosil transferasa (HGPRT). Los
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productos de la fusión celular (hibridomas) son cultivados en medio HAT (de hipoxantina,
a.
aminopterina y timidina) donde las células mielómicas son eliminadas. Solamente pueden crecer en
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el medio de cultivo HAT las células que son producto de la fusión entre un linfocito y una célula de
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mieloma.
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Las células híbridas obtenidas tras el proceso de fusión contienen un número elevado de
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cromosomas (72 del mieloma y 40 del linfocito B) que en las sucesivas divisiones celulares se irán
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perdiendo hasta oscilar entre los 70 y los 80 cromosomas. Como consecuencia de dicho proceso,
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algunas células pierden la capacidad de secreción de anticuerpos o bien funciones básicas para la
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viabilidad celular. Por ello, tan pronto como se identifica como positivo un pocillo, se somete a un
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proceso de clonación para evitar el crecimiento de células no productoras que al ser

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metabólicamente más eficientes acabarían por dominar el cultivo.

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Los anticuerpos monoclonales pueden ser producidos en cultivos celulares o en animales. Cuando
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las células de un hibridoma son inyectadas en cultivos de tejidos como el peritoneo (cavidad
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peritoneal), producen tumores que sintetizan un fluido rico en anticuerpos llamado líquido ascítico.
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Se conoce la tecnología necesaria para la producción de anticuerpos en ausencia de inmunización
del animal. Es la denominada tecnología de los anticuerpos recombinantes. Los avances en la
tecnología génica han facilitado en gran medida la manipulación genética, producción, identificación
y conjugación de fragmentos de anticuerpos recombinantes, obteniéndose nuevos anticuerpos
multivalentes y multiespecíficos.
Estas tecnologías han permitido desarrollar estrategias de screening de anticuerpos monoclonales
fuera del cuerpo humano. Para ello es necesario disponer, en primer lugar de enormes librerías de
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genes de anticuerpos, habitualmente mediante amplificación PCR de cADN de linfocitos, o,
alternativamente, mediante síntesis in vitro de genes usando cebadores randomizados ("randomized
wobble"). El método de 'screening' de estas librerías debe tener una eficiencia comparable a la del
sistema inmune, lo que se puede conseguir exponiendo en la superficie de microorganismos los
anticuerpos producidos. Ejemplos de los microorganismos empleados son los fagos filamentosos
como M13 o bacterias. Esta presentación en superficie permite establecer un enlace físico entre la
función de unión al antígeno y el gen del anticuerpo, de forma que la afinidad al antígeno permite
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aislar el microorganismo portador del gen del anticuerpo de interés entre millones de otros. Una vez
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aislado el clon específico se amplifica para la producción del anticuerpo de interés por ejemplo en E.
coli.
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2.2. Aplicaciones en diagnóstico, terapéutica y producción de
otras moléculas es
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Una vez que se han producido anticuerpos monoclonales que se unen a determinadas sustancias,
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éstos pueden ser usados para detectar la presencia y cantidad de esta sustancia, gracias a la prueba
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de Western blot, que detecta una sustancia en una solución o con una prueba de
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inmunofluorescencia, que detecta una sustancia en una célula entera. Los anticuerpos monoclonales
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también son usados para purificar una sustancia con técnicas llamadas inmunoprecipitación y
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cromatografía.
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Los anticuerpos monoclonales muestran una serie de ventajas sobre los anticuerpos policlonales
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como:
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Mayor homogeneidad.
Reproductibilidad de sus efectos, como consecuencia de su homogeneidad.
Mayor capacidad potencial de seleccionar los mejores anticuerpos en afinidad, tipo de
reconocimiento.
Los anticuerpos monoclonales se utilizan en muchos campos. A continuación destacamos los
principales:
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Investigación biomédica
Como la identificación y clonación de genes, la identificación y aislamiento de proteínas, la

activación de enzimas, conocimiento de la estructura molecular y morfogénesis.
Diagnóstico
En medicina, gracias a la gran especificidad y capacidad prácticamente ilimitada de los

anticuerpos monoclonales para reconocer cualquier estructura química, permite la
detección de hormonas, vitaminas, citocinas; la monitorización de drogas, detección de
enfermedades infecciosas en microbiología; la detección de alérgenos en alergia,
hematología, marcadores tumorales e infartos de miocardio, aplicaciones forenses,
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inmunoescintografía. En las técnicas diagnósticas se emplean diversas herramientas de
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biología molecular como ELISA, EIA, citometría, inmunohistoquímica, inmufluorescencia.
Los anticuerpos monoclonales son unas de las sustancias más utilizadas en los laboratorios
a.
de diagnóstico.
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Catálisis
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Los anticuerpos monoclonales se han utilizado como catalizadores de múltiples reacciones
químicas.
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Biosensores
Los anticuerpos monoclonales acoplados a transductores electrónicos pueden detectar

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tanto moléculas orgánicas como inorgánicas como la contaminación de metales pesados

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en alimentos y agua, detección de gases tóxicos, etc. Un biosensor es un instrumento

analítico formado por un material biológico inmovilizado como una enzima, anticuerpo,
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célula entera, orgánulo o combinaciones de los mismos, en íntimo contacto con un sistema
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transductor adecuado que convierta la señal bioquímica en una señal eléctrica

cuantificable.
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Tratamiento
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Las aplicaciones terapéuticas constituyen el campo más importante de los anticuerpos

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monoclonales, ya que son capaces de destruir células, incluidas las tumorales, mediante
distintos mecanismos. Se emplean en el tratamiento de diversas enfermedades
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autoinmunes como la artritis reumatoide, el cáncer o para evitar el rechazo tras un

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trasplante. Existen varios anticuerpos monoclonales aprobados para su uso en

determinadas enfermedades.
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3. Producción de proteínas terapéuticas en cultivos de células

animales
El uso de proteínas terapéuticas o biofármacos en el tratamiento de diversas enfermedades
crónicas o deficiencias hereditarias, se ha venido implementando cada vez más en los últimos 30
años. Las proteínas terapéuticas son producidas en sistemas heterólogos in-vitro mediante
tecnología de ADN recombinante. Actualmente, se desarrollan nuevos y mejores sistemas de
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expresión, implementando nuevos plásmidos, adición de elementos genéticos del gen adicional y
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optimización de codones. También se desarrollan cepas mutantes que asimilan nutrientes de forma
eficiente, aumentando la producción de proteínas recombinantes terapéuticas y/o reducen la
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producción de compuestos tóxicos que afectan su producción, como también se desarrollan procesos
ec
de cultivo cada vez más eficientes para producir las proteínas terapéuticas. Los modelos usados en
n
la industria son bacterias, levaduras, células de insecto y células de mamífero.
es
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La biotecnología ha impactado el área de la medicina, principalmente con su contribución al
conocimiento a nivel molecular de la causa de diversas enfermedades, lo cual ha generado una

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revolución en la industria farmacéutica con la producción de biofármacos contra enfermedades

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específicas.
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Un biofármaco es una molécula biológica con fines terapéuticos obtenida a partir de un organismo
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vivo, ya sea a partir de bacterias, hongos, células animales, levaduras, entre otros. Estas moléculas
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presentan mayor acción terapéutica y menos reacciones secundarias, al ser prácticamente

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homólogas a las producidas por el organismo. Esto se traduce en que el paciente en la actualidad
puede acceder a tratamientos más eficaces y seguros. La gran mayoría de estos biofármacos son
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proteínas recombinantes. La obtención de proteínas recombinantes se logra mediante la inserción

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del gen que expresa la proteína de interés en un organismo diferente. La expresión de estas
proteínas se ha convertido en una herramienta muy popular, ya que es posible obtener altas
cantidades de proteína con bajos costos de producción y altas purezas de una o varias proteínas de
interés.
Un aspecto importante de estas proteínas de uso terapéutico es que son específicas contra
padecimientos que antes se consideraban incurables, o bien cuando el medicamento existente sólo
lograba controlar la enfermedad, en la mayoría de los casos de manera ineficaz.
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Por otro lado, actualmente cerca del 60% de proteínas recombinantes terapéuticas aprobadas
para consumo humano, son producidas en células de mamífero de ovario de hámster chino (CHO) y
de riñón de hámster bebé (BHK), ya que, presentan la capacidad de producir las proteínas de
manera bien plegada, con las modificaciones postraduccionales necesarias para ser altamente
similares a las endógenas. Sin embargo, los costos asociados a los medios de cultivo y adaptación de
las células animales hacen de este sistema el más costoso para la producción de una proteína en
especial.
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Otro aspecto donde el volumen de cultivo puede verse afectado es por los niveles de expresión de
co
las proteínas en los diferentes hospederos y la complejidad de las proteínas a ser expresadas. Si bien
a.
es cierto, E. coli presenta altas productividades de producción (del orden de 10–15 g/L de la proteína
ec
de interés), la complejidad de las proteínas que puede producir es baja. Por otra parte, las células
n
animales pueden producir proteínas de características complejas pero con muy bajos rendimientos
de producción. es
po
Los orígenes del cultivo de células animales se remontan a mediados del siglo XIX, donde el
ru
desarrollo de las técnicas microbiológicas y del cultivo de bacterias empezaron a ofrecer a los
.g
científicos de aquella época la posibilidad y la visión de realizar cultivos de cepas específicas de

al
manera aislada. No obstante, la historia “formal” de éste comenzó a finales del siglo XIX cuando se
tu
hicieron los primeros intentos para promover el crecimiento de órganos de diferentes animales
ir
sumergiéndolos en fluidos biológicos.

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Sin embargo, no es hasta 1907 cuando se considera al cultivo celular como un método para estudiar
pu
el comportamiento de las células animales independientemente de las variaciones sistémicas. En

m
estos años se realizaron los primeros experimentos exitosos para mantener viables ciertos conjuntos
ca
de células no disgregadas o explantes de diferentes tejidos, pero el crecimiento solamente se limitó a
la migración de células desde el tejido con la ocasional presencia de mitosis.
A partir de la década de 1920 se inició el subcultivo de fibroblastos, pero no es hasta 1943 cuando se
estableció la primera línea celular continua de fibroblastos de ratón. En 1952 se generó la primera
línea celular de origen humano (HeLa) a partir de un carcinoma cervical derivado de la presencia del
virus de papiloma serotipo siendo actualmente una de las líneas celulares más ampliamente utilizada
con diferentes fines. Lo anterior, junto con el desarrollo de otras líneas celulares en cultivo, dio
20 / 35
pauta para iniciar la propagación viral en líneas celulares, culminando en la producción a gran
escala de vacunas tales como la de la polio (1954), y, posteriormente, las de la rabia y la rubéola
(1964-1969) entre otras aplicaciones.
Dado que el cultivo de células a partir de un tejido primario se usó ampliamente en esta época y por
más de 50 años, éste recibió el nombre genérico de “cultivo de tejidos”, aunque actualmente el uso
del cultivo de células dispersas de un solo linaje celular es mucho más utilizado. Innovaciones tales
como el desarrollo de medios de cultivo, el uso de antibióticos, las técnicas de tripsinización para el
m
pasaje de células y el suplemento con suero fetal bovino del medio de cultivo, permitieron el
co
desarrollo de cultivos de células animales de diferentes orígenes.
a.
En los años 1960’s se establecieron las dos líneas celulares más utilizadas para la producción de
ec
biofármacos en la actualidad, las cuales son las células CHO (Chinese Hamster Ovarium) y la línea
n
es
BHK21 (Baby Hamster Kidney), la cual proviene de riñón de cría de hámster. Sin embargo, su uso
para este fin fue explotado principalmente a partir de los años 1980´s.
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El desarrollo de diferentes líneas celulares continuas de origen linfoblástico empezó a reflejar los
riesgos en el manejo de líneas celulares dándose a conocer la posible contaminación cruzada con
células HeLa en varios linajes celulares. A partir de los años 1970’s y con los logros obtenidos
manipulando el ADN, los métodos que posteriormente conformarían lo que hoy conocemos como
tecnología del ADN recombinante, se realizaron los primeros ensayos de transferencia de ADN en
células animales.
En esta década, también se desarrolló el primer linaje celular “artificial” proveniente de células
21 / 35
murinas denominado hibridoma, el cual fue diseñado originalmente para la producción de
anticuerpos monoclonales con aplicación terapéutica. Sin embargo, la presencia de virus murinos
endógenos en el sistema biológico limitó esta aplicación, desarrollándose primeramente su uso como
herramienta diagnóstica la cual es explotada ampliamente hasta nuestros días. Asimismo, se inició el
estudio de la totipotencialidad de las células madre embrionarias, cuyo desarrollo actual se ve de
manifiesto en la Ingeniería de Órganos y Tejidos.
En los años 1980’s, el avance en investigación básica a lo largo de décadas de estudio se puso de
m
manifiesto cuando se identificaron los mecanismos de regulación de la expresión genética, dándose
co
a conocer la regulación del ciclo celular, y desarrollándose líneas celulares especializadas así como
a.
los primeros cultivos para reconstitución de piel. En esta época se llevó a cabo, por primera vez, la
ec
producción de la primera proteína recombinante en células de mamífero, constituyéndose en el
n
primer biofármaco producido por ingeniería genética en este tipo de sistemas.
es
A partir de la década de 1990, el incremento en la producción de biofármacos utilizando la
po
tecnología del cultivo de células animales modificadas por medio de la tecnología del ADN
ru
recombinante aumentó de manera exponencial debido a que las proteínas recombinantes generadas
.g
en sistemas bacterianos, de levaduras ó por medio del cultivo de células vegetales no tenían la
al
calidad requerida por la industria biofarmacéutica en comparación con el producto generado por
tu
medio del cultivo de células animales. En esta década, se ponen de manifiesto las ventajas
ir
fundamentales que ofrece la generación de biofármacos por medio de esta tecnología sobre otros
sv
sistemas de producción para la producción de proteínas de interés farmacéutico. Tales ventajas son:
pu
el plegamiento correcto de la proteína (la proteína traducida adquiere su estructura tridimensional
correcta en el interior del retículo endoplásmico y en el citoplasma); la glicosilación compleja (en el

m
retículo endoplásmico y aparato de Golgi de las células animales se agregan cadenas complejas de
ca
azúcar en sitios específicos, produciéndose la O, la S ó la N glicosilaciones, lo que brinda actividad a
la proteína, dirige a sitios blanco y permite un mayor tiempo de vida media de ésta en el torrente
sanguíneo), y, la secreción del producto al medio de cultivo en la mayoría de los casos (facilitando el
proceso de purificación posterior).
Así, que el estudio de las condiciones, parámetros y medios de cultivo para lograr que el sistema de
expresión en células animales fuera competitivo impulsó el conocimiento en el área de la
bioingeniería, ayudando al diseño de nuevos tipos de reactores y modos de operación que
22 / 35
permitieron incrementar las productividades, con lo cual los cultivos celulares se convirtieron en una
alternativa para la industria biofarmacéutica. Asimismo, el uso de células de insecto como sistema
de producción de proteínas recombinantes por medio de la infección con baculovirus es, a día de
hoy, una realidad como sistema de expresión recombinante.
Por otra parte, el cultivo de órganos, la ingeniería de tejidos y el cultivo de células embrionarias
eran ya actividades rutinarias a finales del siglo pasado a nivel de ciencia básica. Ya en el siglo XXI,
con la genómica y el desarrollo del Proyecto del Genoma Humano, se ha despertado el interés por
m
otras “ómicas”: como son la proteómica, metabolómica, farmacogenómica, transcriptómica,
co
glicómica, interactómica, etc. La necesidad de cultivos de células animales como base ineludible de
a.
la ingeniería de tejidos, de órganos y en terapia génica, impulsa a una reconceptualización de la
ec
medicina y de la farmacia actual.
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es
Es necesario aclarar que aun cuando en la actualidad el cultivo de células animales ha ofrecido las
ventajas en la producción de proteínas glicosiladas complejas, también presenta limitantes

po
importantes al compararlo con otros sistemas de expresión de biofármacos, tales como bacterias y
ru
levaduras recombinantes. Dichos limitantes son los largos tiempos de cultivo, ocasionados por las
.g
bajas velocidades de crecimiento; el uso de suplementos (tales como el suero de diferentes

al
mamíferos) y medios de cultivo costosos (principalmente aquéllos que son definidos); la fragilidad de
tu
las células a los esfuerzos de corte por lo que los reactores utilizados tienen diseños especiales en
ir
los sistemas de agitación y aireación, los cuales están en constante optimización.

sv
Otro limitante parcial es la potencial presencia de virus animales en los productos biofármacéuticos,
pu
los cuales son principalmente huéspedes endógenos de las líneas celulares productoras, al día de
m
hoy, este problema se ha resuelto mediante el uso de sistemas de detección viral confiables,
ca
restringiendo el uso de suplementos potencialmente contaminados como es el suero de origen
animal y por la operación unitaria de inactivación viral al final del proceso de producción.
23 / 35
4. Fermentaciones microbianas, genómica y biotecnología para

la salud
Fermentación:
Es un proceso catabólico de oxidación incompleta, que no requiere oxígeno, siendo el producto final
un compuesto orgánico. Estos productos finales son los que caracterizan los diversos tipos de
m
fermentaciones.
co
Fue descubierta por Louis Pasteur, que la describió como la vie sans l´air (la vida sin el aire). La
a.
fermentación típica es llevada a cabo por las levaduras. También algunos metazoos y protistas son
ec
capaces de realizarla.
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es
El proceso de fermentación es anaeróbico ya que se produce en ausencia de oxígeno; ello significa
que el aceptor final de los electrones del NADH producido en la glucólisis no es el oxígeno, sino un
po
compuesto orgánico que se reducirá para poder reoxidar el NADH a NAD+. El compuesto orgánico
ru
que se reduce (acetaldehído, piruvato,…) es un derivado del sustrato que se ha oxidado

.g
anteriormente.
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La fermentación microbiana es el uso de microorganismos para generar un producto de consumo

tu
humano o utilidad veterinaria, ya sea alterado genéticamente o no. Entre los productos generados se
ir
encuentran: bebidas alcohólicas, enzimas, comidas y aditivos de comida, vitaminas, vacunas,

sv
antibióticos, etc.
pu
Anteriormente, las bacterias habían sido utilizadas para la producción de vino y antibióticos, cosa
m
que no se ha dejado de hacer. La utilización de la biotecnología en la fermentación microbiana

ca
empezó en el 1973 con el gen del African clawed toad que fue insertado en el laboratorio en la
bacteria de Escerichia coli. Éste fue el primer experimento de ingeniería genética y con esto
comenzó la era de la tecnología de ADN recombinante. El primer medicamento generado mediante
la utilización de estas dos técnicas (fermentación microbiana y ADN recombinante) fue una forma de
insulina.
La fermentación microbiana es el método más aplicado en la biotecnología. La ventaja de la
fermentación microbiana es que, al utilizar bacterias y levaduras que crecen rápidamente en un
24 / 35
medio a bajo costo, ofrecen una alta expresión de los niveles de la proteína que deseamos obtener,
de las cuales a veces secretan en el medio y esto hace más fácil la purificación. También estos
microorganismos pueden resistir fuertes tratamientos comparados con las células animales. Sin
embargo, existen ciertas limitaciones en la utilización de bacterias y hongos para procesos
industriales ya que no llevan a cabo procesos post-translacionales como lo es la glicosilación
(bacterias). Muchas veces estos organismos liberan proteasas junto con la proteína de interés,
también puede haber presencia de endotoxinas en el caso de las bacterias y muchas veces las
m
bacterias forman cuerpos de inclusión lo que dificulta la tarea de recolectar el producto.
co
Entre los principales microorganismos utilizados se encuentran: E. coli y B. subtilis. E. coli es el
a.
organismo más común como fuente de producción de proteína recombinante ya que se conoce su
ec
mapa genético. B. subtilis ha sido utilizado principalmente por su gran tendencia de secretar
n
proteínas en su ambiente. La fermentación de bacterias y hongos ofrecen la opción más económica y
algunos criterios la convierten en la respuesta más obvia.es

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La genómica es el conjunto de ciencias y técnicas dedicadas al estudio integral del funcionamiento,
el contenido, la evolución y el origen de los genomas. Es una de las áreas más vanguardistas de la
biología. La genómica usa conocimientos derivados de distintas ciencias como la biología molecular,
la bioquímica, la informática, la estadística, las matemáticas, la física, etc.
Las ciencias genómicas han tenido un importante auge en los últimos años, sobre todo gracias a las
tecnologías avanzadas de secuenciación de ADN, a los avances en bioinformática, y a las técnicas
cada vez más sofisticadas para realizar análisis de genomas completos. El desarrollo de la genómica
25 / 35
ha contribuido al avance de distintos campos de la ciencia como la medicina, la agricultura, etc.;
gracias al descubrimiento de secuencias de genes necesarias para la producción de proteínas de
importancia médica y a la comparación de secuencias genómicas de distintos organismos. Por
ejemplo, en varios países como Estados Unidos, la Unión Europea y Japón se han realizado enormes
proyectos para secuenciar el genoma de diversos organismos modelo. Probablemente el más
conocido es el Proyecto Genoma Humano. En la actualidad se cuenta además con importantes
servidores de acceso público, como el del NCBI (National Center for Biotechnology Information), que
m
permiten que cualquier usuario con conexión a Internet acceda a la secuencia completa del genoma
co
de decenas de organismos y a las secuencias de cientos de miles de genes de distintos organismos.
a.
La Biotecnología aporta nuevas herramientas diagnósticas que son especialmente útiles cuando los
ec
microorganismos son difíciles de cultivar, ya que permiten su identificación sin necesidad de
n
aislarlos. Hasta hace muy poco tiempo todos los métodos se basaban en el cultivo microbiológico, la
es
tinción histológica, o las pruebas químicas y determinaciones en suero, métodos en general largos y
po
tediosos que requerían mucha mano de obra y eran muy difíciles de automatizar. El desarrollo de los
inmunodiagnósticos con los anticuerpos monoclonales y de las técnicas que analizan el material
ru
genético como la hibridación y secuenciación del ADN o RNA con la ayuda inestimable de la PCR
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han sido un logro biotecnológico decisivo para introducir el concepto del diagnóstico rápido,
al
sensible y preciso. Si además se tiene en cuenta que esta metodología permite su robotización y
tu
automatización, el futuro del diagnóstico molecular y genético es muy esperanzador.

ir
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En el campo de la salud del ser humano, la biotecnología tiene diversas aplicaciones: alimentación,
pu
prevención de enfermedades hereditarias, terapia génica y la producción de sustancias terapéuticas
y de vacunas.
m
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La biotecnología puede ofrecer más y mejores opciones sanitarias a los pacientes. Las pruebas
diagnósticas y tratamientos nuevos e innovadores están modificando el modo en que se previenen
algunas enfermedades humanas y en que se tratan otras. Este gran cambio sanitario se encuentra en
sus etapas iniciales, con medicamentos, pruebas diagnósticas y tecnologías novedosas en desarrollo
que tienen un gran potencial para mejorar las vidas de los pacientes.
Farmacogenómica
Un movimiento importante en la asistencia sanitaria es la farmacogenómica. La farmacogenómica
26 / 35
aprovecha el hecho de que las personas poseen genomas únicos que representan su constitución
genética. Es probable que cada genoma reaccione de manera diferente a un fármaco y una dosis
concretos.
El reto consiste en identificar el fármaco y la dosis que actuarán de forma más óptima en cada
persona o en grupos de personas que comparten una genética semejante. Al conocer la constitución
genética de un paciente, un médico puede recetar mejor un medicamento y la dosis que actuará
óptimamente para combatir una enfermedad particular. Los avances en la tecnología del ADN son
m
las claves de la farmacogenómica y la medicina personalizada. Estos avances permiten analizar e
co
identificar la constitución genética única de una persona y, a continuación, comparar las diferencias
a.
con la población en general. El conocimiento del genoma humano, de las variaciones del genoma
ec
entre las personas y de las variaciones de las proteínas codificadas producidas permite que los
n
investigadores desarrollen fármacos que aborden las necesidades individuales de cada paciente. La
es
farmacogenómica y la medicina personalizada se muestran prometedoras para mejorar los ensayos
po
clínicos de fármacos nuevos, hacer avanzar la tecnología de cribado de enfermedades y dar lugar a
una asistencia sanitaria individualizada más eficaz y a avances en medicina preventiva.

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Estudios genéticos
al
tu
La industria biotecnológica ha deparado enormes avances en el estudio y diagnóstico de las
enfermedades genéticas. El descubrimiento de los polimorfismos de un solo nucleótido (SNPs), o

ir
sv
cambios de la secuencia de ADN en un único nucleótido, fue uno de los adelantos más importantes
en los estudios genéticos. Los SNPs representan una de las formas más frecuentes de variación
pu
genética entre los sujetos.

m
ca
Cuando se produce un SNP en una secuencia génica que codifica una proteína concreta, puede
modificar esa proteína y causar una enfermedad o aumentar la predisposición de un paciente a esa
enfermedad. La utilización de tecnología para detectar SNPs permite un diagnóstico más exacto de
enfermedades genéticas y, por consiguiente, facilita la toma de decisiones terapéuticas. Los estudios
genéticos aportan a los pacientes el conocimiento del posible riesgo de sufrir determinadas
enfermedades, así como posibles oportunidades de prevención.
27 / 35
Terapia génica
La terapia génica es un campo emergente de la genética aplicada en la que se utilizan técnicas de
ADN recombinante. En este caso, se emplean las propias moléculas de ADN recombinante con fines
de tratamiento. La terapia génica consiste en la introducción de genes, creados mediante tecnología
del ADN recombinante, en las células y los tejidos de los pacientes para tratar sus enfermedades.
Los científicos están estudiando terapias génicas para tratar varias enfermedades humanas
hereditarias en las que intervienen genes defectuosos. La idea es sustituirlos por genes funcionales
m
nuevos.
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Desde el inicio del primer ensayo clínico en 1990, la investigación en terapia génica se ha extendido
tu
en gran medida, con un número cada vez mayor de ensayos en seres humanos. Este campo, aún en
ir
fases experimentales, centra sus esfuerzos en pacientes con enfermedades graves y potencialmente
sv
mortales que suelen contar con pocas opciones terapéuticas o en los que han fracasado todos los
pu
tratamientos disponibles.
m
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Células madre
Células madre:
Son células no especializadas que pueden renovarse de manera indefinida para producir más células
madre. Pueden madurar y desarrollar funciones especializadas o diferenciarse en unas condiciones
de crecimiento determinadas. En último término, las células madre se diferencian para formar todos
los tipos diferentes de células que conforman el organismo. El amplio potencial de una célula madre
indiferenciada de transformarse en diversas células diferentes es el centro de atención de la
28 / 35
investigación con células madre.
El tratamiento con células madre, que aún se encuentra en fases experimentales, supone hacerlas
crecer en el laboratorio y guiarlas hacia un tipo celular deseado mediante la adición de distintos
factores de crecimiento. A continuación se implantan quirúrgicamente las células diferenciadas. La
teoría es que las células madre pueden integrarse en el tejido patológico, sustituir a las células
patológicas y neutralizar los efectos de la enfermedad. También podrían desarrollarse terapias
celulares en las que se implanten células madre indiferenciadas junto con factores de crecimiento
m
para guiar su diferenciación en el organismo del paciente. El objetivo es sustituir las células
co
lesionadas por células sanas y exentas de enfermedad, de ahí el término medicina regenerativa que
a.
recibe esta estrategia. La esperanza es que las células madre, dirigidas a diferenciarse en tipos
ec
celulares específicos, podrían ser una fuente renovable de células y tejidos de sustitución utilizados
n
para tratar una amplia variedad de enfermedades.
es
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Nanotecnología
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La nanotecnología tiene que ver con la manipulación de moléculas y estructuras a escala

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nanométrica (milmillonésima parte de un metro) o atómica. La aplicación de la nanotecnología para

al
mejorar la salud humana se denomina nanomedicina. En la nanomedicina biotecnológica se emplean

tu
organismos vivos o sus componentes a una escala muy pequeña.

ir
Un ejemplo de nanomedicina es el uso experimental de nanoproyectiles que actúan selectivamente y

sv
destruyen las células neoplásicas a escala celular. Los nanoproyectiles son lentes metálicas
pu
nanoscópicas que se hacen llegar selectivamente a órganos concretos o tumores a través del
m
torrente circulatorio. Los nanoproyectiles tienen la capacidad de captar luz infrarroja aplicada a
ca
través de la piel de un paciente con cáncer y convertirla en calor, que destruye únicamente las
células neoplásicas objetivo.
Las nanopartículas conocidas como buckyballs, unas moléculas de carbono con una forma y una
construcción exclusivas, también presentan potencial de hacer llegar medicamentos a moléculas o
células objetivo. Quizá hagan posible la aplicación de fármacos que no se disuelven en agua.
Además, debido a su pequeño tamaño, permiten administrar una mayor cantidad de fármaco por
volumen. Los científicos están trabajando con nanopartículas para desatascar las arterias
obstruidas.
29 / 35
Nuevos sistemas de administración de fármacos
Los investigadores biomédicos están estudiando nuevas formas de administrar fármacos en el
interior del organismo que podrían mejorar su eficacia. Un ejemplo es el desarrollo de partículas
microscópicas denominadas microesferas que poseen orificios diminutos con el diámetro suficiente
para transportar y aplicar medicamentos a sus objetivos. Están elaboradas con materiales que se
asemejan a las grasas naturales que hay en las membranas celulares y se administran en forma de
pulverización nebulizada en la nariz o la boca.
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En la actualidad, existen tratamientos con microesferas para combatir el cáncer de pulmón y

tu
enfermedades respiratorias. La investigación actual está estudiando el empleo de microesferas para

ir
aplicar fármacos antineoplásicos en tumores activos y su uso con anestésicos en el tratamiento del
sv
dolor.
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Vacuna
m
Una vacuna contra un organismo patógeno consiste en un antígeno (por lo general una proteína o un
ca
polisacárido) procedente de ese organismo patógeno, que una vez administrado en el organismo
receptor estimula su sistema inmunológico y le protege a la infección. Una vacuna debe cumplir
varios requisitos: conferir protección completa y duradera, preferiblemente de por vida, contra la
enfermedad, sin efectos adversos o nocivos para el paciente y que sea estable y barata para poder
ser utilizada masivamente. Hace tan solo aproximadamente un siglo que se supo que las
enfermedades infecciosas eran producidas por microorganismos y prácticamente al mismo tiempo se
descubrió que estas enfermedades podían ser prevenidas mediante la administración de vacunas. La
vacunación ha contribuido decisivamente a la atenuación de grandes plagas de la humanidad como
30 / 35
la viruela, la poliomielitis, el cólera o el sarampión. De hecho, se puede afirmar que la curva
ascendente que presenta la demografía humana desde finales del siglo XIX se debe en buena parte
al empleo masivo de vacunas durante la infancia.
¿Cuáles de las siguientes opciones describen la fermentación microbiana?
Es el uso de microorganismos para generar un producto de consumo humano o utilidad

veterinaria, ya sea alterado genéticamente o no.
m
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Es el conjunto de ciencias y técnicas dedicadas al estudio integral del funcionamiento, el
contenido, la evolución y el origen de los genomas.
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Es el método más aplicado en la biotecnología.
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Aporta nuevas herramientas diagnósticas que son especialmente útiles cuando los
microorganismos son difíciles de cultivar.
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Glosario
Catalizador: 1. Sustancia que hace más rápida o más lenta la velocidad de una reacción
química sin participar en ella 2. Persona o cosa que aviva y da empuje a algo, o que atrae y
agrupa fuerzas, ideas o sentimientos.
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Recuerda
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos, es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de
los microorganismos es el cultivo.
Para que las bacterias y los hongos puedan desarrollarse en un medio artificial, además de
m
tener los nutrientes necesarios, se deben cumplir una serie de condiciones: atmosféricas, de
co
temperatura, tiempo de incubación, pH del medio y presión osmótica. El hecho de que cada
a.
bacteria tenga unas necesidades diferentes puede aprovecharse para fabricar medios de
ec
cultivo con diferentes composiciones y así poder aislar determinados patógenos.
Los anticuerpos monoclonales son anticuerpos idénticos porque son producidos por un solo
n
es
tipo de célula del sistema inmune, es decir, todos los clones proceden de una sola célula madre.
Es posible producir anticuerpos monoclonales que se unan específicamente con cualquier

po
molécula con carácter antigénico. Este fenómeno es de gran utilidad en bioquímica, biología
ru
molecular y medicina.
.g
Las proteínas terapéuticas son producidas en sistemas heterólogos in-vitro mediante

al
tecnología de ADN recombinante.

tu
Un biofármaco es una molécula biológica con fines terapéuticos obtenida a partir de un

ir
organismo vivo, ya sea a partir de bacterias, hongos, células animales, levaduras, entre otros.
sv
Estas moléculas presentan mayor acción terapéutica y menos reacciones secundarias, al ser
pu
prácticamente homólogas a las producidas por el organismo.
La fermentación microbiana es el uso de microorganismos para generar un producto de

m
consumo humano o utilidad veterinaria, ya sea alterado genéticamente o no. Entre los
ca
productos generados se encuentran: bebidas alcohólicas, enzimas, comidas y aditivos de
comida, vitaminas, vacunas, antibióticos, etc.
La farmacogenómica aprovecha el hecho de que las personas poseen genomas únicos que
representan su constitución genética. Es probable que cada genoma reaccione de manera
diferente a un fármaco y una dosis concretos.
La terapia génica consiste en la introducción de genes, creados mediante tecnología del ADN
recombinante, en las células y los tejidos de los pacientes para tratar sus enfermedades.
33 / 35
Autoevaluación
¿Qué nombre reciben los microorganismos que crecen bien en atmósferas con
menor presión de oxígeno?
Anaerobios.
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Capnófilos.
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a.
Microaerófilos.
n ec
El suero y la leche se consideran:
es
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Sustancias inhibidoras del crecimiento.

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Indicadores.
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Sustancias enriquecedoras.
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¿Qué es un hibridoma?
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Una línea celular híbrida obtenida mediante la fusión de un linfocito B con una línea
celular de mieloma.
Una célula híbrida obtenida mediante la conjugación de dos especies bacterianas.
Un anticuerpo producido por una célula híbrida.
Completa el espacio en blanco del siguiente enunciado: “La fermentación,
34 / 35
entendida como un proceso catabólico de oxidación incompleta sin necesidad de

oxígeno, fue descubierta por ________________”.
Robert Hooke.
Louis Pasteur.
m
James Watson.
co
a.
Completa el espacio en blanco del siguiente enunciado: “Las _______________
ec
conocidas como buckyballs, unas moléculas de carbono con una forma y una
construcción exclusivas, también presentan potencial de hacer llegar
n
medicamentos a moléculas o células objetivo”.
es
po
Biomoléculas.
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Nanopartículas.
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Vacunas.
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[AFO009750] Especialista en Biología Molecular y Citogenética

[MOD009024] Biología Molecular y Citogenética

realización de diferentes procedimientos o ensayos biológicos, pues pueden cultivarse en el

laboratorio gran variedad de células procedentes de tejidos y organismos diferentes.

Conocer las condiciones, componentes y métodos de preparación de los medios de cultivo.

Describir la metodología de producción de los anticuerpos monoclonales así como sus

Describir el proceso de producción de proteínas terapéuticas en cultivos de células animales.

Identificar las aplicaciones de los cultivos celulares en el ámbito de la salud.

1. Métodos de fusión celular, hibridomas, obtención, selección

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos, es observar su

crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material

alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los

además de un grado apropiado de acidez o alcalinidad.

bases púricas y pirimidínicas, aminoácidos, etc.).

de estratos corporales y peptona a la que se irán añadiendo los demás componentes.

1.1. Condiciones necesarias para el desarrollo de los patógenos

nutrientes necesarios, se deben cumplir una serie de condiciones: atmosféricas, de temperatura,

composiciones y así poder aislar determinados patógenos.

Anaerobios facultativos: pueden crecer en condiciones aerobias o anaerobias.

emplean principalmente para cultivos en placas.

Técnica de evacuación/reemplazo: en este procedimiento se precisa primero crear el vacío

que permite controlar si se ha producido o no la atmósfera anaeróbica.

Técnica que emplea un sistema generador de H 2 y CO 2: para este sistema se emplean

Generador descartable de H2-CO2: que consiste en una envoltura sellada de papel de

bicarbonato sódico, mientras que la otra contiene borohidruro de sodio. Cuando se

producido, en presencia del catalizador, reacciona con el oxígeno presente y produce

Indicador de anaerobiosis: los hay de tipo bacteriológico y químico. Los bacteriológicos

consisten en introducir en la jarra de cultivo de un aerobio estricto; si éste crece, indica un

fallo en el establecimiento de la atmósfera de anaerobiosis. Los químicos son los más

del periodo de incubación (como ocurre con los anteriores).

Catalizador en frío: consta de unas bolitas de alúmina recubiertas de paladio. Este

bacterias, así como por el exceso de humedad.

ésta en la jarra y cerrarla en menos de un minuto.

mejor a temperatura ambiente, próxima a los 30º C.

Es muy importante que la temperatura de incubación se mantenga en los límites establecidos

un recipiente con agua en el estante inferior de la estufa.

Las bacterias se desarrollan generalmente en un pH próximo a la neutralidad, aunque algunas

exigen un pH específico distinto.

para la preparación: sustancias inhibidoras de crecimiento, indicadores, sustancias enriquecedoras

Los componentes básicos de los medios de cultivo son:

pueden formar precipitados con otros compuestos del medio de cultivo.

nitrógeno, aunque también lo son de carbono, azufre, etc.

Agentes solidificantes: están contenidos en los medios sólidos y semisólidos. El agar es el

Sustancias inhibidoras de crecimiento: son sustancias que impiden el crecimiento de los

Indicadores: se utilizan para detectar variaciones en la acidez o alcalinidad del medio

Sustancias enriquecedoras: son sustancias que se añaden para favorecer el crecimiento de

empleados están el tioglicolato sódico, la cisteína, o el ácido ascórbico.

pruebas de identificación bioquímica.

Sales minerales: sulfatos y fosfatos de calcio, potasio, magnesio, hierro, etc.

Tampones estabilizadores del pH: ya que el pH puede variar durante el proceso de

preparación del medio, es necesario estabilizarlo. La desestabilización también puede ser

consecuencia de la acumulación de los productos del metabolismo bacteriano.

1.3. Preparación de los medios de cultivo

La manipulación adecuada de determinados ingredientes nutritivos permite obtener una fuente de

esterilización. Actualmente se pueden adquirir también medios sólidos ya preparados y dispuestos

comercialización es colocar los medios en tubos y en placa, listos para su inoculación.

Aunque la práctica de adquirir los medios de cultivo se ha extendido enormemente, facilitando el

Pesar los componentes del cultivo.

Disolución de los componentes del cultivo.

Conservación de los medios de cultivo.

utilizar en la preparación de los medios de cultivo:

Vasos de precipitados de 250 a 500ml.

Matraces Erlenmeyer de 250 a 500 ml.