Está en la página 1de 3

´

´

Practicas´

de Biotecnolog´ıa Animal, XIX Semestre, Practica´

6, 2015

RECUPERACI ON DE OVULOS DE OVARIOS DE

VACUNOS

Carlos Francisco Munoz˜

Salas

Resumen La recoleccion´ de ovulos´ es una de las tecnicas´ basicas´ en la biotecnolog´ıa reproductiva. La capacidad de generar embriones in vitro nace a partir de poder obtener los ovulos y los espermatozoides en buen estado. Para obtener los ovulos´ se debieron utilizar ovarios recolectados en el camal y dos tecnicas´ diferentes: aspirado y diseccion.´ Luego tambien´ se evaluo´ el estado de los ovocitos mediante su observacion´ al microscopio. Sin embargo no se pudo obtener los ovarios frescos y se utilizo´ un ovario conservado en formol de hace unas semanas. No se pudieron observar ovocitos despues de la extraccion´ debido al tiempo que llevaba el ovario. Abstract The egg collection is one of the basic techniques in reproductive biotechnology. The ability to generate embryos in vitro comes from to get the eggs and sperm in good condition. For the eggs we should have used ovaries collected at the slaughterhouse and two different techniques: aspirated and dissection. Then the state of the oocytes was also evaluated by microscope observation. But we could not get the fresh ovaries and ovarian preserved in formaldehyde a few weeks ago was used. No oocytes were observed after extraction due to the time the ovary had.

1 Programa Profesional de Ingenier´ıa Biotecnologica,´

*: carlosfms2810@gmail.com

Universidad Catolica´

de Santa Mar´ıa, Arequipa, Peru´

´

Indice

Introduccion´

Marco Teorico´

1

2 Materiales y Metodos´

1

1

2

2.1 Materiales

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

. 2

2.2 Metodos´

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

. 2

 

Extraccion´

por aspirado Extraccion´

por corte

 

3

Resultados y Discusion´

 

2

3.1

Resultados

 

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

.

. 2

Extraccion´

por aspirado Extraccion´

por corte

 

4 Discusion´

5 Conclusiones

6 Recomendaciones

Referencias

2

2

2

2

Introduccion´

La recuperacion´ de ovocitos a partir de ovarios ya sea

de animales sacrificados o vivos, es una de las tecnicas´ que

mas´ auge y aplicacion´

cesitan los ovocitos paradiferentes tecnicas´ de reproduccion´

como la fecundacion´ in vitro, la transferencia de embriones,

la clonacion,´

Esta tecnica´ nos permitira´ obtener ovocitos que posterior- mente seran embriones, para mejorar la eficiencia reproducti-

esta teniendo en la actualidad. Se ne-

etc.

va. El recolectar ovocitos ayuda a no perder esos potenciales terneros, sino que aunque la madre ya halla sido sacrificada

aun´

nacion´

nucleo y se les implantara´ un nucleo de una celula´ del animal que se desea clonar.

delicadas y

que se requiere que esten en buen estado para su fertilizacion,´

por lo tanto se debe dominar tanto la extraccion´

luacion´

de reproduccion.´

para la extraccion´

de los fol´ıculos; mientras que los indicadores para la calidad de los ovocitos son: la esfericidad, estado de la zona pelucida´ y tamano˜

como la eva-

puede generar descendencia. Tambien nos ayuda en la clo-

como fuente de ovocitos,a los cuales se les retirara´ el

somatica´

Se debe recordar que los ovocitos son celulas´

de los ovocitos para garantizar el exito´

Los metodos´

de extraccion´

en el programa convencionales

de ovocitos son el aspirado y la diseccion´

fueron : preparar y capacitar

en la obtencion´ de ovocitos de ovarios de vacunos y determinar la calidad de los ovocitos.

Los objetivos de esta practica´

1. Marco Teorico´

Para poder aplicar la tecnica´ de recuperacion´ de ovocitos se necesita un amplio conocimiento de la anatom´ıa y fisiolog´ıa de los ovarios, ya que son los organos´ responsables de la la gametogenesis´ y la maduracion´ de los ovocitos. Los Ovarios son los organos´ principales del aparato re- productor femenino. Tienen dos funciones: la produccion´ de ovulos´ y la produccion´ de hormonas, principalmente estroge-´ nos y progesterona, durante los distintos estad´ıos del ciclo

´ ´

RECUPERACI ON DE OVULOS DE OVARIOS DE VACUNOS — 2/3

estral. En la superficie del ovario se pueden encontrar dos estructuras diferentes: Fol´ıculos y Cuerpo Luteo. Los fol´ıculos son estructuras llenos de fluidos, que contie-

nen los ovulos´ en desarrollo. Usualmente se pueden encontrar

varios fol´ıculos en cada ovario, que var´ıan en tamano˜ desde

apenas visibles, hasta 20 mm en diametro.´ El fol´ıculo mas´ grande sobre el ovario es considerado el dominante, y es el

que probablemente ovule cuando el animal entre en celo. Con

el tiempo, mas del 95% de los otros fol´ıculos entran en regre- sion´ y mueren sin ovular, siendo reemplazados por una nueva generacion´ de fol´ıculos en crecimiento.

La otra estructura que se encuentra en la superficie del

ovario es el cuerpo luteo (CL). El CL crece sobre el sitio de la ovulacion´ del celo anterior. A menos que haya habido mas´ de

una

El CL normalmente tendra´ una corona sobre su estructura, lo

cual facilita su identificacion´ durante la palpacion´ rectal. El

CL tambien puede tener una cavidad llena de fluidos, pero una

pared mas gruesa, por lo tanto tendra´ una textura mas tosca al tacto. El CL en lat´ın significa c¸uerpo amarillo A unque en su superficie, esta estructura tiene apariencia oscura, un corte transversal revela un amarillo rojizo en su interior. [1]

La aplicacion´ de los procedimientos de fertilizacion´ in

se debe hallar solo un CL en uno de los Ovarios.

ovalacion,´

vitro(FTV) en la reproduccion´ bovina se ha incrementado en

los ultimos´ anos˜ y en un futuro puede llegar a ser utilizada

en programas de gran escala en la produccion´ comercial de embriones in vitro. Dentro de este concepto, la recoleccion´ de ovocitos es un paso necesario para poder llegar a establecer

estos programas de FIV.

Los ovarios contienen un elevado numero´ de fol´ıculos que se encuentran en diferentes estados de desarrollo (primordia- les, en crecimiento, atresicos),´ de los cuales solamente una pequena˜ proporcion´ va a ser utilizada durante la vida reproduc- tiva del animal. La recoleccion´ de ovocitos permite recuperar

y aprovechar fol´ıculos no ovulatorios, que bajo condiciones

fisiologicas´ se tornar´ıan en fol´ıculos atresicos.´ La obtencion´ de ovarios provenientes de vacas sacrificadas en el matadero suministra una fuente abundante de ovocitos obtenidos a bajo costo, provenientes de animales en diferentes

estados del ciclo estral, que pueden ser madurados, fertilizados

y cultivados in vitro hasta estados avanzados del desarrollo embrionario. [2]

Los ovarios, colectados de hembras faenadas son transpor- tados en termos que contienen suero isotonico´ a 35-37 C. La aspiracion´ de los COCs, se realiza aproximadamente dentro de 4 a 6 horas despues´ de faenados los animales. Todos los fol´ıculos que no presentan indicios de atresia folicular, entre 2 y 8 mm de diametro,´ son aspirados. La recuperacion´ es mo- derada y la calidad (capacidad de los ovocitos de completar la meiosis) es buena, en comparacion´ con la tecnica´ de des- menuzamiento (con una hoja de afeitar, se corta la superficie

del ovario) en la cual la recuperacion´ es alta, pero la calidad

de los ovocitos es baja. Esto se debe mas´ que nada a que se recuperan ovocitos de fol´ıculos muy pequenos˜ no antrales que no han alcanzado el tamano˜ adecuado para ser madurados in

vitro. [3]

2. Materiales y Metodos´

2.1 Materiales

1. Ovarios de vaca recolectados del camal

2. Suero fisiologico

3. Placas de Petri

4. Jeringas hipodermicas´

5. Bistur´ı

6. Pinzas

7. Guantes

8. Microscopio

2.2

Metodos´

Primero se coloco´ el ovario en el suero fisiologico´

dentro

de una placa Petri y se procedio´ con los metodos´

de extraccion.´

2.2.1 Extraccion´

por aspirado

Se aseguro´ el ovario con las pinzas y se procedio´ a ubi- car uno de los fol´ıculos, luego se aspiro´ el liquido folicular utilizando una jeringa hipodermica´ y se deposito´ el aspira- do en una placa de Petri con suero fisiologico. Se realizo´ su evaluacion´ a traves del microscopio.

2.2.2 Extraccion´

por corte

Nuevamente se aseguro´ el ovario con las pinzas y se ubico´ uno de los fol´ıculos, luego se realizo´ un corte trans- versal y un corte longitudinal en el fol´ıculo con el bistur´ı y se recolecto´ el liquido folicular en una placa de petri con suero fisiologico.´ Se evaluo´ el estado de los ovulos en el microsco- pio.

3. Resultados y Discusion´

3.1 Resultados

3.1.1 Extraccion´

por aspirado

Se consiguio´ aspirar buena parte del liquido folicular, sin

de los ovulos

microscopica´

y del liquido folicular no se encontraron ovulos

embargo, al realizar la evaluacion´

3.1.2 Extraccion´

por corte

Realizados los cortes, el liquido folicular cayo´ a la placa con suero fisiologico,´ sin mebargo al igual que en la extraccion´ por aspirado no se encontraron ovulos.´

4. Discusion´

El hecho de haber utilizado un ovario que llevaba mas´ de una semana siendo conservado en formol puede ser el respon- sable directo de la no presencia de ovulos.´ Sabemos por la

literatura que los ovulos son extraidos de ovarios recolectados del matadero en un tiempo maximo´ de 8 horas, desde la muer-

te del animal. Por lo tanto despues de una semana es muy poco

probable poder encontrar algun´ ovulo´ vivo. El mal olor del ovario indicaba que ya hab´ıa cierto grado de descomposicion.´

´

´

RECUPERACI ON DE OVULOS DE OVARIOS DE VACUNOS — 3/3

El metodo´

de extraccion´

que ha parecido mas´ efectivo ha

que el metodo´

se ha

sido el de corte, ya que es mucho mas´ rapido´

por aspirado y requiere menos intervencion.´ reportado que es mas´ eficiente.

Tambien´

5. Conclusiones

Debido al tiempo transcurrido entre la recoleccion´reportado que es mas´ eficiente. Tambien´ 5. Conclusiones del ovario y la extraccion´ contrar ovocitos en

del

Debido al tiempo transcurrido entre la recoleccion´ del ovario y la extraccion´ contrar ovocitos en el

ovario y la extraccion´

contrar ovocitos en el liquido folicular.

El metodo´

aspirado.

de los ovocitos, no se pudo en-

por

por corte es mas´ eficiente que el metodo´

6. Recomendaciones

Como una autocr´ıtica: el no poder conseguir los ovarios del matadero nos significo´ el no poder obtener los ovocitos, por lo tanto es mejor prevenir e informarse mejor acerca de como obtener y en que horarios se debe ir a obtener los ova- rios.

Referencias

[1] Dr. Ray Nebel Mel DeJarnett. Anatom´ıa y fisiolog´ıa de la

reproduccion´

bovina.

[2] Nicolas´ Velarde Choque. Recuperacion´ de ovocitos reco- lectados de vacas criollas post mortem´ del sur del peru.´ Ciencia y desarrollo, 2005.

[3] MsC Dras. Yael Filipiak y Clara Larocca. BIOTECNO-

´

´

´

LOG IA EN REPRODUCCI ON BOVINA MANUAL TE ORI-

´

CO - PR ACTICO. Universidad de la Republica,´

2012.