Señalización Celular Por Tirosina Cinasas Receptoras

Un gran grupo de genes en todos los eucariotas codifican proteínas que funcionan como
receptores de la superficie celular de la membrana. Los receptores de membrana se pueden
clasificar en familias distintas en función de los ligandos que reconocen, las respuestas biológicas
que inducen y, más recientemente, de acuerdo con sus estructuras primarias. Una gran variedad
de ligandos se une y regulan la actividad de los receptores de la superficie celular, incluidas las
pequeñas moléculas orgánicas, lípidos, carbohidratos, péptidos y proteínas. Una gran familia de
receptores de la superficie celular está dotada de actividad intrínseca de la proteína tirosina
quinasa. Estos receptores tirosina quinasas (RTK) catalizan la transferencia del fosfato γ de ATP
a los grupos hidroxilo de tirosinas en proteínas diana (Cazador 1998). Los RTK desempeñan un
papel importante en el control de la mayoría de los procesos celulares fundamentales, incluido
el ciclo celular, la migración celular, el metabolismo celular y la supervivencia, así como la
proliferación y diferenciación celular. Todas las tirosinas quinasas receptoras contienen un
dominio de unión a ligando extracelular que generalmente está glicosilado.

El dominio de unión al ligando está conectado al dominio citoplásmico por una única hélice
transmembrana. El dominio citoplásmico contiene un núcleo de proteína tirosina quinasa (PTK)
conservada y secuencias reguladoras adicionales que se someten a autofosforilación y
fosforilación por proteínas quinasas heterólogas (40, 39). Las linfocinas, como la eritropoyetina
y el interferón, también median sus respuestas mediante la fosforilación de la tirosina. Sin
embargo, en lugar de contener una actividad de proteína tirosina quinasa intrínseca, los dominios
citoplásmicos relativamente cortos de estos receptores interactúan a través de interacciones no
covalentes con miembros de la familia Jak de tirosina quinasas no receptoras (14, 43). Aparte de
la falta de enlace covalente a una quinasa, el mecanismo de activación de estos receptores
binarios se asemeja en gran medida al de las tirosina quinasas receptoras (60, 33, 45). El
propósito de esta revisión es describir los conceptos generales que subyacen al mecanismo de
acción de los RTK y las vías de señalización que regulan, al tiempo que intentan arrojar luz sobre
la cuestión de cómo se define la especificidad por la acción de los RTK y cómo una respuesta
biológica específica puede ser generado por la diversidad de vías de señalización activadas por
todos los RTK.

Paradigmas para la activación del receptor

Con la excepción de la familia de receptores de insulina (IR) de RTK, todos los RTK conocidos
(por ejemplo, receptor de EGF, receptor de PDGF) son monómeros en la membrana celular. La
unión del ligando induce la dimerización de estos receptores dando como resultado la
autofosforilación de sus dominios citoplásmicos (84, 60, 45). Los miembros de la familia IR son
dímeros unidos por enlaces disulfuro de dos cadenas polipeptídicas que forman
un heterodímero α 2 β 2 (Van-Obberghen 1994). La unión de la insulina al dominio extracelular
del IR induce un reordenamiento en la estructura heterotetramérica cuaternaria que conduce a
un aumento de la autofosforilación del dominio citoplásmico. Como las formas activas del
receptor de insulina y las RTK monoméricas son ambas diméricas, es probable que los
mecanismos de señalización de los dos tipos de receptores sean muy similares (Hubbard et
al. 1998).

Activación por Dimerización

Aunque todos los RTK se activan por dimerización, diferentes ligandos emplean diferentes
estrategias para inducir el estado dimérico activo. Los estudios estructurales de la hormona del
crecimiento (GH) en complejo con receptor de GH (GHR) y eritropoyetina (EPO) en complejo con
receptor de EPO (EPOR) muestran que estas citoquinas son bivalentes, y un ligando se une
simultáneamente a dos moléculas receptoras para formar un 1: 2 (ligando: receptor)
complejo(55, 45). La dimerización del receptor se estabiliza aún más mediante interacciones
adicionales receptor: receptor.

varios factores de crecimiento son homodímeros (por ejemplo, VEGF, PDGF) que proporcionan
el mecanismo más simple para la dimerización del receptor inducida por ligando. Los receptores
de VEGF (VEGFR) contienen siete dominios similares a inmunoglobulina (Ig) en su dominio
extracelular, de los cuales solo se requieren los dominios de Ig 2 y 3 para la unión al ligando. La
estructura cristalina de VEGF en complejo con el dominio 2 similar a Ig del VEGFR flt-
1 proporciona una vista de la dimerización del receptor inducida por ligando (Wiesmann et
al. 1997). La estructura muestra que una molécula receptora se une en cada una de las dos
uniones entre los protómeros de VEGF para producir un complejo que es casi 2 veces simétrico,
y contiene dos protómeros de VEGF más los dos dominios similares a Ig.

La familia del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) consta de al menos 21 factores de

crecimiento relacionados (Maski y Ornitz1998). Los FGF no pueden activar los receptores de
FGF (FGFR) sin la cooperación de la molécula accesoria proteoglicano sulfato de heparina
(HSPG) ( Yayon et al. 1991). Las estructuras cristalinas de FGF en complejo con el dominio de
unión a ligando de FGFR (que consiste en los dominios de tipo Ig-2 [D2] y -3 [D3]) proporcionan
una vista molecular de la dimerización de FGFR (78, 86) y la activación e ilustran los
determinantes que rigen la especificidad de FGF: FGFR (Plotnikov et al. 2000). Cada estructura
muestra un complejo 2: 2 FGF: FGFR, en el que FGF interactúa ampliamente con D2, D3 y con
el enlazador que conecta estos dos dominios dentro de un receptor (el sitio de unión primario). El
dímero se estabiliza por un sitio de unión secundario que involucra interacciones entre FGF y D2
del segundo receptor en el complejo, así como también por interacciones receptor: receptor. En
contraste con el homodímero de VEGF unido por disulfuro, las dos moléculas de FGF en el
complejo 2: 2 FGF: FGFR no hacen ningún contacto. De hecho, las interacciones entre FGF y
FGFR por sí solas no son suficientes para estabilizar los dímeros de FGFR en la superficie celular
en condiciones fisiológicas normales. Los proteoglicanos de heparina o sulfato de heparano son
esenciales para la dimerización estable de los complejos FGF: FGFR (Spivak-Kroizman et
al. 1994). Se ha demostrado que la heparina se une a un cañón cargado positivamente formado
por un grupo de residuos de Lys y Arg expuestos que se extienden a través de los dominios D2
de los dos receptores en el dímero y las moléculas de FGF unidas adyacentes (Schlessinger et
al.2000). El FGFR de longitud completa contiene un dominio similar a Ig (D1) y un tramo de
residuos ácidos o "caja de ácido" en el enlazador entre D1 y D2. Ni D1 ni la caja de ácido se
requieren para la unión de FGF a FGFR. De hecho, la eliminación de D1 y la caja de ácido mejora
la unión del receptor a FGF y heparina (Wang et al. 1995). Estudios recientes que hemos llevado
a cabo nos llevan a proponer que D1 y la caja de ácido en el FGFR de longitud completa tienen
una función autoinhibitoria (Plotnikov et al. 1999). Se cree que la caja de ácido puede unirse
intramolecularmente al sitio de unión a heparina en D2, compitiendo con la heparina por la unión
a este sitio. De manera similar, D1 puede interactuar intramolecularmente con el dominio de
unión a ligando en D2 y D3 y, por lo tanto, interferir con la unión de FGF a FGFR. Esta
autoinhibición evitaría la activación accidental de FGFR independiente de FGF por HSPG que
son abundantes en la matriz extracelular y en las superficies celulares. Según este punto de
vista, el dominio extracelular de FGFR tiene una función autorreguladora además de sus
funciones en el reconocimiento de ligandos y la dimerización del receptor. Un mecanismo similar
de autoinhibición puede solicitar otras RTK que contienen múltiples dominios similares a Ig en
sus dominios extracelulares (por ejemplo, PDGFR, VEGFR). Como solo 2 de los 5 dominios
similares a Ig de PDGFR, y solo 2 de los 7 dominios de señal tipo Ig de VEGFR son esenciales
para la unión a ligandos, es posible que los dominios similares a Ig no involucrados en la unión
a ligandos puedan desempeñar un papel autorregulador en estos receptores.

El control de la estimulación de FGFR por dos ligandos, FGF y heparina, puede proporcionar un
mecanismo para la activación localizada de FGFR y la estimulación vectorial de la proliferación
o diferenciación celular. La biosíntesis de HSPG en áreas restringidas de la matriz extracelular
de diferentes tejidos puede proporcionar un andamio al cual las células que expresan FGFR
migrarán y en las cuales estas células sobrevivirán, proliferarán o experimentarán diferenciación
cuando se les suministre una molécula de FGF específica. De hecho, se demostró que FGF8 y
FGFR1 son esenciales para la migración celular y el patrón mesodérmico durante la gastrulación
(106, 92).

Recientes estudios bioquímicos y estructurales y experimentos anteriores con anticuerpos anti-

receptores monoclonales han demostrado que solo ciertas formas de dímeros de receptores con
configuraciones únicas de los dominios extracelular y citoplásmico de los RTK y los receptores
de citoquinas conducen a la autofosforilación trans y a la estimulación de PTK (60, 45). La Figura
1 muestra un modelo de cómo las RTK monoméricas ( Figura 1A ) (por ejemplo, EGFR, VEGFR)
o las RTK heterotetraméricas con puentes disulfuro ( Figura 1B)) (por ejemplo, IR, IGF1R) están
activados. Se cree que los monómeros del receptor están en equilibrio con los dímeros del
receptor. Existe una población limitada de dímeros receptores con estructuras cuaternarias de
sus dominios extracelular y citoplásmico en configuraciones que son compatibles con trans-
autofosforilación y estimulación de la actividad de PTK (dímero activo). La unión del ligando al
dominio extracelular estabiliza la formación de dímeros activos y, en consecuencia, la
estimulación con PTK. Proponemos que los dímeros activos existen incluso en ausencia de unión
al ligando, ya que la autofosforilación de RTK puede potenciarse mediante inhibidores de la
proteína tirosina fosfatasas o por sobreexpresión del receptor incluso en ausencia de unión del
ligando.

Figura 1. Unión de ligandos estabiliza la formación

de dímeros activados (A) Los monómeros de
receptores inactivos (verdes) están en equilibrio
con los dímeros de receptores inactivos (verdes) o
activos (azules). Los dímeros de receptores activos
existen en una conformación compatible con la
autofosforilación trans y la estimulación de la
actividad de PTK (azul). La unión de ligandos
estabiliza la formación de dímeros activos y, por
tanto, la activación de PTK. (B) Los dímeros del
receptor de insulina (IR) con puente disulfuro
inactivo (verde) están en equilibrio con los dímeros
activos (azul). La unión a la insulina estabiliza el
estado dimérico activo que conduce a la activación
de PTK.

Figura 1: La unión de ligandos estabiliza la formación de dímeros activados

El papel del receptor de heterooligomerización

La familia EGFR consta de cuatro RTK, EGFR (ErbB1), ErbB2, ErbB3 y ErbB4. Mientras que
EGFR tiene numerosos ligandos (por ejemplo, EGF, TGFα, HB-EGF), no se ha identificado un
ligando para ErbB2. Los ligandos para ErbB3 y ErbB4, los otros dos miembros de esta familia
RTK, son las diversas isoformas de las neuregulinas (NRG). Hace más de una década se
demostró que la estimulación de EGFR inducida por EGF conduce a la activación de ErbB2 por
transducción a través de heterooligomerización (52, 90, 100). Posteriormente, numerosos
estudios han demostrado que la estimulación con EGF o NRG induce una hetero-oligomerización
combinatoria de diferentes pares de miembros de la familia EGFR (10, 60, 74). En ausencia de
un ligando específico para ErbB2, se propuso que este RTK puede funcionar como un socio
heterodimérico de los otros miembros de la familia y podría proporcionar una plataforma adicional
para el reclutamiento de vías de señalización intracelular en respuesta a la estimulación con EGF
o NRG. Además, dado que la secuencia del dominio catalítico ErbB3 sugiere que este receptor
no tiene actividad PTK, se cree que ErbB3 puede funcionar como una plataforma para expandir
el repertorio de proteínas de señalización intracelular reclutadas después de su trans-
fosforilación por otros miembros del EGFR. familia (Carraway y Cantley 1994).

En ausencia de información estructural sobre EGFR, es difícil presentar una imagen molecular
clara con respecto al mecanismo de dimerización del receptor y heterooligomerización. Los
estudios biofísicos han sugerido que EGF es bivalente hacia EGFR y demostraron que EGF
puede conducir a la dimerización del dominio extracelular de EGFR que termina con una
estequiometría de 2: 2 EGF: EGFR (63, 25). Se ha propuesto que la bivalencia de EGF o NRG
es la fuerza impulsora para la heterodimerización de ErbB2 con otros miembros de la familia
EGFR (Tzahar et al. 1997). Sin embargo, en la actualidad no hay evidencia de unión de EGF o
NRG al dominio extracelular de ErbB2 (Ferguson et al. 2000). El mecanismo exacto de
dimerización dependiente de ligando de los miembros de la familia EGFR debe esperar la
determinación de las estructuras tridimensionales de estos complejos. Un mecanismo alternativo
es que dos homodímeros receptores forman un heterodímero. Figura 2muestra un mecanismo
potencial para la formación de heterotetrámero inducida por EGF entre EGFR y ErbB2. De
acuerdo con este escenario, los homodímeros inducidos por EGF forman un complejo
tetramérico con homodímeros no ocupados de ErbB2 por interacciones receptor-receptor. Las
interacciones entre los dos homodímeros en el contexto de un heterotetrámero podrían servir
para estabilizar la formación de un dímero indirectamente por la unión del factor de
crecimiento. Por ejemplo, la unión de dos proteínas ErbB2 monoméricas a un homodímero de
EGFR inducido por EGF puede causar la homodimerización de las moléculas de ErbB2 seguida
de su autofosforilación trans y la consiguiente activación (35, 80, 29, 36). El mecanismo de
formación de heterotetrámero entre ErbB3 y ErbB4 puede ser diferente, ya que ambos receptores
se unen a NRG y pueden experimentar homodimerización dependiente de NRG ( Figura 2). En
este caso, los homodímeros de ErbB3 pueden interactuar con los homodímeros de ErbB4
inducidos por NRG, que a su vez fosforilarán los dominios citoplásmicos de las proteínas ErbB3
por trans-fosforilación. En otras palabras, los homodímeros de ErbB3 pueden de hecho ser
sustratos preferidos de ErbB4 dentro del contexto de un complejo heterotetramérico.

Figura 2. Activación de miembros de la familia EGFR por la

formación de hetero-tetrámero (A) La unión a EGF induce la
formación de homodímeros de EGFR activados (azul) (paso
1). La unión de dos proteínas de ErbB2 (verde) monoméricas
(paso 2) a un dímero de EGFR activado (azul) induce la
homodimerización de las moléculas de ErbB2 (cian) seguida
de autofosforilación y activación de ErbB2 (paso 3). (B) Un
esquema general para la activación de miembros de la familia
EGFR por formación de hetero-tetrámero (EGFR 5 B1, ErbB2
5 B2, ErbB3 5 B3 y ErbB4 5 B4). (1) Formación de hetero-
tetramero entre un homodímero de EGFR inducido por EGF
(B1) y dos moléculas de ErbB2 (B2). Dos moléculas de ErbB2
se dimerizan mediante la unión a un dímero de EGFR activado
(como en el panel A). Las flechas marcan la autofosforilación
entre dos EGFR (B1) o entre dos moléculas de ErbB2 (B2).
Las flechas rotas marcan la transfosforilación potencial entre
B1 y B2 o entre B2 y B1. (2) Formación de hetero-tetramer
entre un homodímero de EGFR inducido por EGF (B1) y un
homodímero de ErbB3 inducido por NRG (B3). Las flechas
marcan la autofosforilación de B1 y la transfosforilación de B3
por B1. (3) Formación de hetero-tetramer entre un
homodímero ErbB3 inducido por NRG (B3) y un homodímero
ErbB4 inducido por NRG (B4). Las flechas marcan la
autofosforilación de B4 y la transfosforilación de B3 por B4.
(4) Formación de hetero-tetramero entre un homodímero de
EGFR inducido por EGF (B1) y un homodímero de ErbB4
inducido por NRG (B4). Las flechas marcan la
autofosforilación de B1 y B4. Las flechas rotas marcan el
potencial de transfosforilación entre B1 y B4 o entre B4 y B1.
Figura 2 Activación de miembros de la familia EGFR por formación de hetero-tetrámero

Los estudios estructurales del núcleo catalítico de varias RTK, junto con los estudios bioquímicos
y cinéticos de la fosforilación y activación del receptor, han proporcionado información sobre el
mecanismo mediante el cual la dimerización de RTK activa la actividad enzimática
(38, 73, 37). La imagen emergente es que la oligomerización del receptor aumenta la
concentración local de la PTK, lo que lleva a una transfosforilación más eficiente de los residuos
de tirosina en el bucle de activación del dominio catalítico (Hubbard et al. 1998). Los estudios
estructurales han demostrado que, tras la fosforilación de la tirosina, el bucle de activación adopta
una configuración "abierta" que permite el acceso a ATP y sustratos, y permite la
fosfotransferencia de MgATP a las tirosinas en el propio receptor y en las proteínas celulares
involucradas en la transmisión de señales.

Mecanismo de activación de proteínas de señalización.

Además de su papel central en el control de la proteína tirosina quinasa, la autofosforilación de

tirosina de RTK es crucial para el reclutamiento y activación de una variedad de proteínas de
señalización. La mayoría de los sitios de autofosforilación de tirosina se encuentran en regiones
no catalíticas de la molécula receptora. Estos sitios funcionan como sitios de unión para los
dominios SH2 (homología de Src 2) o PTB (unión a fosfotirosina) de una variedad de proteínas
de señalización. La unión mediada por el dominio SH2 de proteínas de señalización a sitios de
autofosforilación de tirosina proporciona un mecanismo para el ensamblaje y reclutamiento de
complejos de señalización por las tirosina quinasas receptoras activadas. Según este punto de
vista, cada RTK debe considerarse no solo como un receptor con actividad tirosina quinasa sino
también como una plataforma para el reconocimiento y reclutamiento de un complemento
específico de proteínas de señalización (Pawson y Schlessinger 1993).

Dominios modulares de las proteínas de señalización

Las proteínas de señalización que contienen dominios SH2 y PTB son de naturaleza modular
(57, 77, 69). Muchas de estas proteínas contienen actividades enzimáticas intrínsecas y módulos
de proteínas que producen interacciones con otras proteínas, con fosfolípidos o con ácidos
nucleicos. Los módulos de proteínas involucrados en los procesos de señalización celular varían
en tamaño desde 50 a 120 aminoácidos. La Figura 3 muestra varios módulos de proteínas que
han demostrado estar involucrados en la señalización celular aguas abajo de los RTK y otros
receptores de la superficie celular. Los dominios SH2 se unen específicamente a distintas
secuencias de aminoácidos definidas por 1 a 6 residuos C-terminal al resto pTyr (Songyang et
al. 1993), mientras que los dominios PTB se unen a pTyr dentro del contexto de secuencias
específicas de 3 a 5 residuos en su extremo N (Margolis 1999). Ciertos dominios PTB se unen a
secuencias peptídicas no fosforiladas, mientras que otros reconocen igualmente bien tanto las
secuencias que contienen fosfotirosina como las que no contienen fosforilación (Margolis
1999). Los dominios SH3 se unen específicamente al motivo de secuencia rica en prolina PXXP,
mientras que los dominios WW se unen preferentemente a otro motivo rico en prolina PXPX
(Kuriyan y Cowburn 1997). Los dominios de homología de Pleckstrin (PH) comprenden una gran
familia de más de cien dominios. Mientras que ciertos dominios de PH se unen específicamente
a PtdIns (4,5) P 2 , otro subconjunto de dominios de PH se une preferentemente a los productos
de fosfoinositido-3-quinasas (quinasa PI-3) inducida por agonistas (24, 61, 62, 13). Como solo
un pequeño subconjunto de dominios de PH se une específicamente a los fosfoinositidos o a sus
grupos principales solubles, los ligandos fisiológicos de la mayoría de los dominios de PH aún
no se han identificado. Sin embargo, la unión débil y no específica de la mayoría de los dominios
de PH a los fosfoinositidos puede compensarse por la naturaleza oligomérica de ciertas proteínas
que contienen dominios de PH que conducen a una fuerte asociación de membrana (Lemmon y
Ferguson 2000). Finalmente, los dominios FYVE comprenden otra familia de módulos de
proteínas pequeñas que reconocen específicamente PtdIns-3-P (Fruman et al. 1999), y los
dominios PDZ pertenecen a otra gran familia de módulos de proteínas independientes que se
unen específicamente a residuos hidrófobos en los extremos C de sus proteínas objetivo
(Gomperts 1996)

Una gran familia de proteínas que contienen el dominio SH2 posee actividades enzimáticas
intrínsecas, como la actividad de la PTK (quinasas Src), la actividad de la proteína tirosina
fosfatasa (PTP) (Shp2), la actividad de la fosfolipasa C (PLCγ) o la actividad de Ras-GAP entre
otras actividades. Otra familia de proteínas contiene solo dominios SH2 o SH3. Estas proteínas
adaptadoras (por ejemplo, Grb2, Nck, Crk, Shc) utilizan sus dominios SH2 y SH3 para mediar en
las interacciones que unen diferentes proteínas involucradas en la transducción de señales. Por
ejemplo, la proteína adaptadora Grb2 conecta una variedad de receptores de superficie a la
cascada de señalización de la quinasa Ras / MAP. Grb2 interactúa con las RTK activadas a
través de su dominio SH2 y recluta el factor de liberación de nucleótido de guanina Sos cerca de
su proteína objetivo Ras en la membrana celular (85, 75).

Figura 3. Módulos de proteínas y proteínas de acoplamiento que

participan en la señalización mediante receptores de tirosina quinasas
(A) Módulos de proteínas implicados en el control de las vías de
señalización intracelular. Las RTK activadas, fosforiladas en tirosina,
forman un complejo con los dominios SH2 y PTB de las proteínas de
señalización. Los dominios SH2 se unen a los sitios pTyr en los
receptores activados, mientras que los dominios PTB se unen a las
regiones fosforiladas y no fosforiladas de tirosina en los RTK. Los
dominios de PH se unen a diferentes fosfoinositidos que conducen a
la asociación de membrana. Los dominios SH3 y WW se unen a
secuencias ricas en prolina en proteínas diana. Los dominios PDZ se
unen a residuos hidrófobos en los extremos C de las proteínas diana.
Los dominios FYVE se unen específicamente a PdtIns (3) P. Mientras
que las proteínas adaptadoras como Grb2 o Nck contienen solo los
dominios SH2 y SH3, otras proteínas de señalización contienen
actividades enzimáticas adicionales como las proteínas quinasas (Src,
PKB), la PTPasa (Shp2) fosfolipasa C (PLCg), Ras-GAP o Rho-GRF
( Vav). (B) Proteínas de acoplamiento que funcionan como
plataformas para el reclutamiento de proteínas de señalización. Todas
las proteínas de acoplamiento contienen una región de
direccionamiento de membrana en sus extremos N. FRS2 se dirige a
la membrana por miristoilación, y LAT se dirige a la membrana
celular por un dominio transmembrana (TM) y por paltotolación. La
mayoría de las proteínas de acoplamiento están dirigidas a la
membrana celular por sus dominios PH. Las proteínas de
acoplamiento contienen múltiples sitios de fosforilación de pTyr que
funcionan como sitios de unión para los dominios SH2 de una
variedad de proteínas de señalización.
Proteínas de acoplamiento

El reclutamiento de membrana inducido por agonistas de las proteínas de señalización

estimuladas por la fosforilación de tirosina también está mediado por una familia de proteínas de
acoplamiento. La figura 3 muestra un diagrama esquemático de varias proteínas de
acoplamiento. Todas las proteínas de acoplamiento contienen en su extremo N una señal de
direccionamiento de membrana y en su extremo C una gran región que contiene múltiples sitios
de unión para los dominios SH2 de las proteínas de señalización (91, 56). Algunas proteínas de
acoplamiento están asociadas con la membrana celular por un anclaje de miristilo (por ejemplo,
FRS2), mientras que otras tienen su propio dominio transmembrana (por ejemplo, LAT) (Zhang
et al. 1998a). Sin embargo, la mayoría de las proteínas de acoplamiento contienen un dominio
PH en su extremo N. Las proteínas de acoplamiento como Gab1 se asocian con la membrana
celular mediante la unión de su dominio PH a PtdIns (3,4,5) P 3 en respuesta a la estimulación
inducida por agonistas de la PI-3 quinasa (Rodrigues et al.2000). Además de la señal de
direccionamiento de membrana, la mayoría de las proteínas de acoplamiento contienen dominios
específicos como los dominios PTB que son responsables de la formación de complejos con un
conjunto particular de receptores de la superficie celular. Los dominios PTB de IRS1 e IRS2, por
ejemplo, se unen específicamente a IR, IGF1-R o IL4-R. Los dominios PTB de FRS2α y FRS2β,
por otro lado, se unen preferentemente a FGFR o NGFR. Se ha demostrado que las proteínas
de acoplamiento funcionan como plataformas para el reclutamiento de proteínas de señalización
en respuesta a la estimulación del receptor. De hecho, la mayoría de las proteínas de
señalización que se activan en respuesta a la estimulación con insulina o FGF se reclutan a
través de las familias de proteínas de acoplamiento IRS o FRS y no por su unión directa a IR o
FGFR.
Paradigmas para la activación de proteínas efectoras

Aunque muchas proteínas sirven como sustratos de, y son activadas por, RTKs, parece que hay
tres mecanismos generales diferentes de cómo se activan las proteínas de señalización en
respuesta a la estimulación de RTK. La Figura 4resume tres sistemas efectores que ejemplifican
estos paradigmas no mutuamente exclusivos para la activación de proteínas efectoras por RTK.

Figura 4 Paradigmas para la activación de proteínas de señalización en respuesta a la

activación RTK
Figura 4. Paradigmas para la activación de proteínas de señalización en respuesta a la activación de RTK Se requieren
al menos dos eventos moleculares separados para la activación inducida por RTK de moléculas de señalización.
Como muchas dianas proteicas de las RTK están ubicadas en la membrana celular, la translocación a la membrana
celular es esencial para la activación de muchas proteínas efectoras. (A) Activación de PKB (también conocida como
Akt) por translocación de membrana. PtdIns (3,4,5) P3 generado en respuesta a la estimulación del factor de
crecimiento sirve como un sitio de unión para los dominios PH de PDK1 y PKB. La translocación de la membrana
se acompaña de la liberación de una autoinhibición que conduce a la activación de las actividades de la quinasa PDK1
y PKB. La activación completa de PKB requiere la fosforilación por PDK1 (y también por PDK2?). La PKB activada
fosforila una variedad de proteínas diana que previenen la muerte apoptótica y regulan varios procesos metabólicos.
(B) Activación por un cambio conformacional. La unión de los dominios SH2 de p85, la subunidad reguladora de la
PI-3 quinasa a los sitios pTyr en receptores activados, libera una restricción autoinhibitoria que estimula el dominio
catalítico (p110). PI-3 cinasa cataliza la fosforilación de las 39 posiciones del anillo de inositol de PtdIns (4) P y
PtdIns (4,5) P2 para generar PtdIns (3,4) P2 y PtdIns (3,4,5) P3, respectivamente . (C) Activación por fosforilación
de tirosina. La unión de los dominios SH2 de PLCg a sitios pTyr en receptores activados facilita la fosforilación de
tirosina de PLCg así como la translocación de membrana; un proceso mediado en parte por la unión del dominio PH
a los productos de la PI-3 quinasa. La fosforilación de la tirosina es esencial para la activación de PLCg que conduce
a la hidrólisis de PtdIns (4,5) P2 y la generación de los dos segundos mensajeros Ins (1,4,5) P3 y diaciglicosol.

Activación por Translocación de Membrana. La activación de la PI-3 quinasa inducida por PDGF
conduce a la generación de los segundos mensajeros PtdIns (3,4) P 2 y PtdIns (3,4,5) P 3 . La
generación de estos segundos mensajeros desempeña un papel crucial en la activación de PDK1
y PKB (también conocida como AKT), dos proteínas quinasas altamente conservadas que
desempeñan un papel importante en la estimulación de la supervivencia celular, la síntesis de
proteínas y los procesos metabólicos ( Figura 4A ) . PDK1 tiene un dominio PH en el término C
de la proteína a través del cual se une a PtdIns (3,4,5) P 3 que conduce a la translocación de
membrana (1, 2). PKB, que también se recluta a la membrana a través de su dominio del dominio
PH N-terminal a los productos de la quinasa PI-3 (26, 27), está fosforilada por PDK1 en Thr308
en su bucle de activación. Se ha propuesto que una proteína quinasa aún no identificada (PDK2
hipotética) es responsable de la fosforilación de PKB en Ser473 que conduce a la estimulación
completa de la actividad de PKB. Sin embargo, recientemente se informó que la fosforilación de
Ser473 está mediada por la autofosforilación PKB (95, 96[este número de Cell ]).

Activación por un cambio conformacional. Existe buena evidencia de que la unión mediada por
el dominio SH2 de ciertas proteínas de señalización a las fosfotirosinas en los receptores
activados induce un cambio conformacional que libera una autoinhibición que resulta en la
estimulación de la actividad enzimática. Por ejemplo, la actividad de la proteína tirosina quinasa
de Src se activa cuando su dominio SH2 se une a los sitios de autofosforilación de tirosina en
PDGFR (94, 105). De manera similar, la unión de p85, la subunidad reguladora de la PI-3
quinasa, a las fosfotirosinas en el PDGFR o IRS1 causa cambios conformacionales en la p85
que se transmiten a la subunidad catalítica p110, lo que lleva a un aumento de la actividad de la
quinasa PI-3 ( Figura 4B ). Además, al unirse a PDGFR o IRS1 fosforilada en tirosina, la PI-3
quinasa se transloca a la membrana celular donde se encuentra su sustrato PtdIns (4,5) P 2 .

Activación por Fosforilación de Tirosina. Se ha demostrado que la fosforilación de tirosina de

ciertas proteínas diana es necesaria para la estimulación por ligando de su actividad enzimática
( Figura 4C ). En respuesta a la activación del receptor de EGF, PDGF o FGF, los dominios SH2
de PLCγ se unen a fosfotirosinas específicas en las colas C-terminales de estos receptores. La
unión de PLCγ al receptor activado facilita su eficiente fosforilación de tirosina por el RTK. La
activación de la actividad de la fosfolipasa C inducida por PDGF se abroga en células que
expresan PLCγ mutado en los sitios de fosforilación de tirosina ( Kim et al. 1991). La activación
de PLCγ también depende de la generación inducida por agonistas de productos de PI-3
quinasa. Tanto la fosforilación de tirosina como la translocación de membrana de PLCγ mediante
la unión de su dominio PH a PtdIns (3,4,5) P 3 son esenciales para la activación completa de la
actividad de la fosfolipasa-C que conduce a la generación de los dos segundos mensajeros
diacilglicerol e Ins (1, 4,5) P 3 (Falasca et al. 1998).
Como muchos de los objetivos de los RTK están ligados a la membrana, la translocación de la
membrana de los componentes de señalización clave es crítica en el proceso de transducción
de la señal. Al menos dos eventos moleculares deben tener lugar antes de que se produzca la
activación inducida por agonistas de cada una de las proteínas efectoras descritas en la Figura
4 . La activación de PKB, por ejemplo, requiere la translocación a la membrana plasmática y la
fosforilación por PDK1 en un residuo clave de Thr. Además, se propuso que la translocación de
PKB a la membrana celular esté acompañada por la liberación de una autoinhibición, lo que
sugiere que también puede tener lugar un cambio conformacional en PKB y puede ser necesario
para la fosforilación por PDK1 y para la activación de la quinasa ( Figura 4A). La activación de la
PI-3 quinasa inducida por PDGF está mediada por un cambio conformacional en la PI-3 quinasa
inducida por la unión de p85 a los sitios pTyr en PDGFR activados ( Figura 4B ). La estimulación
de PLCγ, por otro lado, depende tanto de la fosforilación de tirosina como de la activación de la
quinasa PI-3 ( Figura 4C ). La translocación de membrana es esencial para la activación de la
cinasa PI-3 y PLCγ, ya que PtdIns (4,5) P 2 , el sustrato de estas dos enzimas se encuentra en
la membrana celular.
Vías de señalización intracelular
El rápido progreso en la comprensión de las vías de señalización intracelular que tuvieron lugar
durante la década de 1990 se debió en gran medida a la convergencia de la información
generada por múltiples disciplinas científicas. Proteínas similares fueron identificadas
repetidamente aplicando metodologías totalmente diferentes. Se han descubierto componentes
clave de las vías de señalización en estudios bioquímicos en los que las proteínas celulares se
aislaron, clonaron y analizaron. El invertebrado C. elegans y DrosophilaSe han encontrado
homólogos de las mismas proteínas en pantallas genéticas. Además, en muchos casos, las
mismas proteínas se han identificado como productos de genes que están mutados en diferentes
enfermedades humanas, como el cáncer, los trastornos óseos graves, las inmunodeficiencias y
las enfermedades neurológicas. Está empezando a surgir una imagen con respecto a los
diferentes componentes de varias vías de transducción de señales y redes de señalización que
son activadas por los receptores de la superficie celular ( Figura 5 ). Los principios generales que
gobiernan el flujo de información espaciotemporal de la superficie celular al núcleo, y los modos
de comunicación entre las diferentes vías de señalización se están revelando.

Figura 5 Vías de
señalización activadas por RTKs
 Figura 5. Vías de señalización activadas por RTK (A) Las diferentes vías de señalización se presentan
como distintos casetes de señalización (cajas de colores). En varios casos, los casetes de señalización
no incluyen todos los componentes conocidos de una ruta determinada. También se muestran
ejemplos de señales estimulantes e inhibitorias para las diferentes vías. Por ejemplo, además de la
activación de la cascada de señalización MAP quinasa, Ras activa la quinasa PI-3 y Cdc42. La
estimulación de la PI-3 quinasa conduce a la activación de PDK1 y PKB, dos quinasas que regulan
diversos procesos metabólicos y previenen la muerte apoptótica. Además, la activación de la PI-3
quinasa estimula la generación de peróxido de hidrógeno que a su vez oxida y bloquea la acción de
una proteína inhibitoria tirosina fosfatasa (PTP). Los casetes de señalización presentados en la figura
regulan la actividad de múltiples objetivos citoplásmicos. Sin embargo, las vías de señalización de
Ras / MAP, STAT, JNK y PI-3 cinasa también regulan la actividad de los factores transcripcionales
por fosforilación y por otros mecanismos. (B) Mecanismos para la atenuación y terminación de la
activación de RTK. En varios casos, la actividad de las RTK puede ser regulada negativamente por
los antagonistas de ligando o por hetero oligomerización con variantes de receptores de interferencia
dominantes que ocurren naturalmente. La actividad PTK de EGFR se atenúa por la fosforilación
inducida por PKC en la región de yuxtamembrana. La desfosforilación de residuos de pTyr
reguladores clave por las proteínas tirosina fosfatasas (PTP) puede inhibir la actividad de la quinasa
o eliminar los sitios de acoplamiento. Un mecanismo importante para la terminación de la señal es a
través de la endocitosis y degradación del receptor. La proteína oncogénica Cbl se une a los sitios
pTyr en RTK activados a través de su dominio similar a SH2. El dominio de dedo RING de Cbl
funciona como una ubiquitina-ligasa que conduce a la ubiquitinación y degradación del receptor por
el proteosoma.

La cascada de señalización Ras / MAP quinasa

Todos los RTK y muchos otros receptores de la superficie celular estimulan el intercambio de
GTP por el GDP en la proteína G pequeña Ras. Tanto los estudios bioquímicos como los
genéticos han demostrado que Ras está activado por el factor de intercambio de nucleótidos
guanina, Sos. La proteína adaptadora Grb2 juega un papel importante en este proceso al formar
un complejo con Sos a través de sus dominios SH3. El complejo Grb2 / Sos se recluta en una
RTK activada a través de la unión del dominio SH2 de Grb2 a los sitios pTyr específicos del
receptor, lo que permite trasladar el Sos a la membrana plasmática donde está cerca de Ras y
puede estimular el intercambio de GTP por el GDP (85, 75, 5[este número de Cell ]). El
reclutamiento de membrana de Sos también se puede lograr mediante la unión de Grb2 / Sos a
Shc, otra proteína adaptadora que forma un complejo con muchos receptores a través de su
dominio PTB (Margolis 1999). Alternativamente, los complejos de Grb2 / Sos pueden reclutarse
a la membrana celular mediante la unión a proteínas de acoplamiento ligadas a la membrana,
como IRS1 o FRS2α, que se fosforilan en tirosina en respuesta a la activación de ciertos RTK
(91, 56). También hay evidencia de que el dominio PH de Sos es esencial para la translocación
de membrana y para la activación completa de Ras. Una vez en el estado de unión a GTP activo,
Ras interactúa con varias proteínas efectoras como la quinasa Raf y PI-3 para estimular
numerosos procesos intracelulares. Raf activado estimula la MAP-quinasa-quinasa (MAPKK,
MEK) mediante la fosforilación de un residuo clave de Ser en el bucle de activación. MAPKK
luego fosforila MAPK (ERK) en los residuos Thr y Tyr en el bucle de activación que conduce a
su activación. La MAPK activada fosforila una variedad de sustratos citoplásmicos y ligados a la
membrana (por ejemplo, EGFR, Sos). Además, MAPK se traslada rápidamente al núcleo donde
fosforila y activa los factores de transcripción (50, 41). El casete de señalización compuesto por
MAPKKK, MAPKK y MAPK está altamente conservado en la evolución y existen varias cascadas
MAPK en levaduras, en invertebrados y vertebrados(102, 66, 30). Estas cascadas de
señalización altamente conservadas desempeñan un papel importante en el control de los
procesos metabólicos, el ciclo celular, la migración celular y la forma celular, así como en la
proliferación y diferenciación celular (Davis 2000 [este número de Cell ]).

Metabolismo de fosfoinositol y señalización celular

La activación de los RTK conduce a una rápida estimulación del metabolismo del fosfoinositol y
la generación de segundos mensajeros múltiples (81, 13). PLCγ es rápidamente reclutado por
una RTK activada a través de la unión de sus dominios SH2 a los sitios pTyr en las moléculas
receptoras. Tras la activación, PLCγ hidroliza su sustrato PtdIns (4,5) P 2 para formar dos
segundos mensajeros, diacilglicerol e Ins (1,4,5) P 3 . Al unirse a receptores intracelulares
específicos, Ins (1,4,5) P 3 estimula la liberación de Ca 2+ de las tiendas intracelulares. El
Ca 2+luego se une a la calmodulina, que a su vez activa una familia de proteínas quinasas
dependientes de Ca 2+ / calmodulina. Además, tanto el diacilglicerol como el Ca 2+ activan a los
miembros de la familia de proteínas quinasas PKC. Los segundos mensajeros generados por
PtdIns (4,5) P 2. la hidrólisis estimula una variedad de respuestas intracelulares además de la
fosforilación y activación de factores transcripcionales (50, 41).

La fosfolípido quinasa PI-3 quinasa se activa prácticamente en todas las RTK. Un grupo de PI-3
quinasas son heterodímeros compuestos por una subunidad reguladora p85, que contiene dos
dominios SH2 y uno SH3 y una subunidad catalítica designada p110. Al igual que otras proteínas
que contienen el dominio SH2, la PI-3 cinasa forma un complejo con sitios pTyr en receptores
activados o con proteínas de acoplamiento fosforiladas en tirosina, como IRS1 y Gab1. La cinasa
PI-3 activada fosforila los PtdIns (4) P y PtdIns (4,5) P 2 para generar los segundos mensajeros
PtdIns (3,4) P 2 y PtdIns (3,4,5) P 3 . PtdIns (3,4,5) P 3 media la translocación de la membrana de
una variedad de proteínas de señalización, como las proteínas tirosina quinasas no receptoras
Btk e Itk, las Ser / Thr quinasas PDK1 y PKB, el factor de intercambio de Arf Grp1, la proteína de
acoplamiento Gab1 y PLCγ1, entre muchos otros (81, 13). La translocación de la membrana está
mediada a través de la unión de sus dominios PH a los productos de la PI-3 cinasa inducidos por
agonistas, lo que lleva a su activación y posterior estimulación de una variedad de respuestas
celulares ( Figura 4). Una respuesta importante es la estimulación de la supervivencia celular. Se
ha demostrado que la activación de PKB dependiente de la quinasa PI-3 conduce a la
fosforilación e inactivación de BAD. La fosforilación de BAD previene la muerte celular apoptótica
al bloquear su formación de complejos con las proteínas apoptóticas Bcl-2 y Bcl-xl ( Figura 4A )
(Datta et al.1999). Otro mecanismo para la inhibición de la apoptosis es a través de la
fosforilación inducida por PKB del factor de transcripción FKHR1 (Brunet et al. 1999), que a su
vez suprime la expresión génica proapoptótica. La activación de PDK1 inducida por insulina
conduce a la fosforilación y activación de la quinasa S-6. Además, la glucógeno sintasa quinasa-
3 (GSK-3) y la fosfofruckokinase, dos enzimas que se regulan en respuesta a la estimulación de
la insulina, son fosforiladas por PKB. PDK1 y PKB pueden desempeñar un papel en el control de
la síntesis de proteínas, la gluconeogénesis y la glucólisis en respuesta a la estimulación de la
insulina (Toker y Newton 2000a).

La PI-3 quinasa también desempeña un papel importante en la generación de peróxido de

hidrógeno inducida por el factor de crecimiento. Se ha demostrado recientemente que H inducida
por PDGF 2 O 2 generación es dependiente de la activación de PI-3 quinasa y la Rac pequeña
proteína G (Bae et al. 2000). Estudios anteriores demostraron que la activación de la NADPH
sintasa, el complejo enzimático que cataliza la producción de peróxido de hidrógeno, es un
efector de Rac. Curiosamente, la generación inducida por EGF de H 2 O 2 es esencial para la
autofosforilación de tirosina sostenida y la activación de EGFR (Bae et al. 1997). El peróxido de
hidrógeno que se genera en respuesta a la estimulación con EGF oxida e inactiva una proteína
tirosina fosfatasa (PTP) que desfosforila el EGFR activado (58, 4). La regulación de la actividad
de la quinasa EGFR no es el único papel del peróxido de hidrógeno en respuesta a la
estimulación del factor de crecimiento. Existe buena evidencia de que el H 2 O 2 desempeña un
papel activo en el control de múltiples procesos celulares

La actividad de las proteínas efectoras que dependen de la activación de la PI-3 quinasa puede
ser regulada negativamente por PTEN y SHIP, dos fosfatasas específicas de fosfoinositido que
desfosforilan las posiciones 3 'y 5' del anillo de inositol de fosfoinositidos, respectivamente
(6, 67). PTEN es una proteína supresora de tumores que se encuentra mutada en una variedad
de cánceres humanos que conducen a una estimulación aberrante de la vía de supervivencia
celular (Maehama y Dixon 1998).
Translocación nuclear de STATs

Todas las linfocinas inducen la transcripción génica activando la vía de señalización JAK / STAT
(14, 43). La unión de las linfocinas a sus complejos receptores binarios conduce a la activación
de JAK y la posterior fosforilación de la tirosina de STAT. A esto le sigue la unión del dominio
SH2 de STAT a los sitios pTyr en STAT homotípicos o heterotípicos que permiten la formación
de homodímeros o heterodímeros STAT. Las STAT diméricas migran al núcleo para activar la
transcripción en una secuencia de ADN objetivo designada como elemento GAS. Además de su
papel central en la señalización a través de receptores de linfocinas, existe una buena evidencia
de que las STAT desempeñan un papel en la señalización a través de RTK. La estimulación con
PDGF, EGF o FGF conduce a una rápida fosforilación de la tirosina y la migración de STAT al
núcleo y la transcripción de genes de ADN diana. El programa de transcripción iniciado por STAT
es un componente integral del programa genético inducido por la estimulación del factor de
crecimiento. Además, existe buena evidencia de que STAT3 desempeña un papel en la
transformación oncogénica inducida por PTK, ya que las formas constitutivamente diméricas de
STAT3 promueven la formación de tumores.

Mecanismo de atenuación y terminación de la señal.

La actividad de los RTK debe estar bien regulada y adecuadamente equilibrada para poder
mediar en sus tareas celulares normales y sus muchas respuestas fisiológicas. De hecho, la
expresión o disfunción aberrante de las RTK es responsable de varias enfermedades y trastornos
del desarrollo. Es de esperar, por lo tanto, que existan varios mecanismos para la atenuación y
terminación de la actividad RTK inducida por los ligandos estimuladores.
Ligandos antagonistas

En Drosophila , la activación del homólogo de EGFR por un factor similar a EGF (por ejemplo,
Spitz) conduce a la expresión de una proteína similar a EGF secretada denominada Argos. Los
experimentos genéticos y bioquímicos sugieren que Argos se une a EGFR, compite con Spitz
por la unión al receptor e inhibe la actividad de EGFR ( Figura 5B ). Se ha propuesto que la
expresión regulada de un agonista de EGFR (Spitz) y un antagonista de EGFR (Argos) es
esencial para el control de varias redes reguladoras en las que el EGFR desempeña un papel
importante en el desarrollo de Drosophila (Casci y Freeman 1999). No se ha identificado ningún
homólogo de vertebrados de Argos y el mecanismo de su actividad antagónica aún no se conoce
(Jin et al. 2000).

Otro ejemplo de un antagonista de RTK proviene de la familia de las angiopoyetinas. Las

angiopoyetinas pertenecen a una familia de proteínas multiméricas que regulan la
vascularización de los mamíferos y la angiogénesis. Las angiopoyetinas se unen
específicamente y activan Tie2, una RTK expresada en la superficie de las células endoteliales
que está implicada en el control de la vascularización y la angiogénesis. Curiosamente, un grupo
de angiopoyetinas inhibe las respuestas biológicas mediadas por el receptor Tie2 (

Maisonpierre et al. 1997). Se cree que la expresión espaciotemporal de las angiopoyetinas

estimulantes e inhibitorias es crítica para modelar y remodelar el sistema vascular durante el
desarrollo. Además, el grado de oligomerización del receptor inducido por las angiopoyetinas
inhibitorias o estimulantes puede determinar el resultado biológico.
Heterooligomerización con receptores mutantes

Además de las transcripciones que codifican RTK de longitud completa, ciertos tejidos expresan
variantes de receptores solubles o ligados a la membrana que son naturales y que son deficientes
en la actividad de RTK. La expresión de un mutante de deleción inactivo en la misma célula
puede resultar en una inhibición negativa dominante del receptor de longitud completa a través
de la generación de heterodímeros o hetero-oligómeros inactivos (Jaye et al. 1992). Se cree que
una función biológica de las variantes de receptores mutantes coexpresadas en la misma célula
con receptores de longitud completa es proporcionar un mecanismo para atenuar la señal
generada por la estimulación por ligando del receptor de longitud completa ( Figura 5B ).
Inhibición de la actividad RTK

La activación de la proteína quinasa-C (PKC) por los receptores acoplados a la proteína G o por
PDGF o forbolésteres (PMA) da como resultado la fosforilación de EGFR en múltiples residuos
de Ser y Thr, incluido Thr654 en el dominio yuxtamembrana de EGFR. La fosforilación de EGFR
inducida por PKC da como resultado una inhibición de su actividad PTK y una fuerte inhibición
de la unión de EGF al dominio de unión al ligando extracelular (12, 17). Por tanto, la fosforilación
mediada por PKC del dominio yuxtamembrana de EGFR parece proporcionar un mecanismo de
retroalimentación negativa para el control de la actividad del receptor.

SOCS ( s uppressor o f c ytokine s ignaling) pertenece a una familia de proteínas que funcionan
como reguladores negativos para la inhibición por retroalimentación en respuesta a la
estimulación de citoquinas (Hilton et al. 1998). Se ha demostrado que las proteínas SOCS
inhiben la señalización en respuesta a la estimulación con citoquinas mediante la unión directa
al dominio PTK de JAK a través de sus dominios SH2. Ahora hay evidencia de que la
estimulación con insulina induce la expresión de SOCS-3 y que SOCS-3 se une directamente al
IR, lo que sugiere que un mecanismo de retroalimentación negativa similar puede tener lugar en
la señalización a través de RTK (Emmanuelli et al. 2000).
Inhibición por tirosina fosfatasas

Las proteínas tirosina fosfatasas (PTP) desempeñan un papel importante en el control de la

actividad RTK y las vías de señalización que regulan. Prácticamente todas las RTK pueden
activarse, incluso en ausencia de unión a ligando, mediante el tratamiento de células con
inhibidores de PTP. Este experimento demuestra que la actividad de las RTK está siendo
monitoreada y verificada continuamente por PTP inhibitorias. La actividad de la proteína tirosina
quinasa de la mayoría de las RTK está regulada positivamente por uno o varios sitios de
fosfotirosina en el bucle de activación. Las proteínas tirosina fosfatasas que desfosforilan estos
residuos de p-Tyr reguladores inhibirán la actividad de RTK y las respuestas biológicas mediadas
por efectores posteriores que dependen de la actividad de PTK. Recientemente se demostró que
la alteración génica dirigida de PTP1B en ratones conduce a la hiperfosforilación de IR e IRS1 y
a la sensibilización de la señalización a través del IR in vitro y en los ratones mutantes. Estos
datos argumentan que PTP1B es un importante regulador negativo de IR (Elchebly et al. 1999).
Endocitosis y Degradación del Receptor

La estimulación del factor de crecimiento da como resultado una endocitosis rápida y la

degradación tanto del receptor como del ligando. La unión del ligando induce la agrupación de
receptores en las fosas recubiertas en la superficie celular, seguida de la endocitosis, la
migración a cuerpos multivesiculares y la degradación final por las enzimas lisosomales. Se ha
demostrado que la degradación de EGFR depende de la actividad de la proteína tirosina quinasa
y que un mutante del receptor de quinasa negativo se recicla a la superficie celular para su
reutilización (Ullrich y Schlessinger 1990). La rápida endocitosis y la degradación del EGFR
activado y otras RTK atenúan la señal generada en la superficie celular en respuesta a la
estimulación del factor de crecimiento. Estudios recientes sugieren que la proteína oncogénica
Cbl desempeña un papel en la regulación de la degradación de EGFR y PDGFR. Cbl contiene
varios subdominios, incluido un dominio similar a SH2 que es responsable de la unión a RTK
activados, y un dominio de dedo RING que funciona como una ubiquitina ligasa. La unión de
EGFR o PDGFR a Cbl conduce a la ubiquitinación del receptor y la posterior degradación por el
proteosoma (Joazeiro et al. 1999 ( Figura 5B ). Por otro lado, la formación de complejos con
receptores activados da como resultado la fosforilación de tirosina de Cbl seguida por el
reclutamiento de proteínas de señalización tales como PI-3 quinasa, argumentando que Cbl
también puede funcionar como una proteína de acoplamiento para el reclutamiento de proteínas
efectoras.
Acoplamiento con vías de señalización heteróloga

En los últimos años se ha hecho evidente que los RTK y las vías de señalización que activan
forman parte de una gran red de señalización que puede regularse mediante múltiples señales
extracelulares como la adhesión celular, los agonistas de los receptores acoplados a proteínas
G, las linfoquinas o las señales de estrés (Carpintero 1999). También se ha demostrado que la
adhesión celular a través de receptores de integrina conduce a la activación de varias RTK,
incluidos los receptores para insulina, EGF, PDGF y FGF, lo que da lugar a la fosforilación de
tirosina de proteínas diana y la activación de vías de señalización que normalmente son activadas
por estos receptores. Se ha propuesto que la activación del receptor inducida por la adhesión
celular está mediada por el coagulo de integrinas con RTK, aunque no se comprende el
mecanismo preciso de formación de complejos entre las integrinas y las RTK.

También se ha demostrado que las RTK se activan por la despolarización de la membrana, por
varias respuestas al estrés que incluyen condiciones hiperosmóticas y radiación ultravioleta, así
como por receptores acoplados a proteína G (Carpintero 1999). Se ha demostrado que los
agonistas de varios receptores acoplados a proteínas G (p. Ej., Endotelina, ácido lisofosfatídico,
angiotensina y trombina) estimulan la fosforilación de tirosina de EGFR o PDGFR. También se
ha propuesto que EGFR y PDGFR, así como las PTK no receptoras, Src y PYK2, son cruciales
para acoplar la estimulación de los receptores acoplados a la proteína G con la cascada de
señalización de la quinasa Ras / MAP (sesenta y cinco, 32). Sin embargo, aún no está claro cómo
las rutas dependientes de Gi y Gq activan estas proteínas tirosina quinasas. Además, la
estimulación de la MAP quinasa inducida por los receptores acoplados a la proteína G es normal
en fibroblastos deficientes en EGFR o en quinasas Src.

También existe buena evidencia de acoplamiento entre la señalización de EGFR y la vía de

señalización activada por la transformación de los receptores del factor de crecimiento β
(TGFβ). La familia de citocinas TGFβ media en sus respuestas biológicas uniéndose y activando
un complejo hetero-tetramérico compuesto de receptores con actividad Ser / Thr designado
receptor-I y -II de TGFβ (Massagué et al. 2000[este número de Cell ]). La estimulación de los
receptores de TGFβ da como resultado la fosforilación de las proteínas Smad, seguida de su
translocación al núcleo celular y la consiguiente mejora de la actividad transcripcional de los
genes diana. EGF ejerce una respuesta inhibitoria en la señalización de TGFβ, al inducir la
fosforilación de proteínas Smad en sitios específicos que evitan la translocación nuclear y causan
una inhibición de la actividad transcripcional (54, 18, 109).

Ya es evidente que las vías de señalización no funcionan de manera aislada, y no pueden

presentarse o considerarse de una manera lineal simple como lo propondrían los análisis
genéticos. Una imagen más realista es que las vías de señalización están unidas entre sí en una
gran red de proteínas que está sujeta a múltiples entradas estimulantes e inhibitorias, así como
a mecanismos complejos de retroalimentación. Dicha complejidad es esencial para mediar las
respuestas pleiotrópicas de los factores de crecimiento en el desarrollo y en el animal adulto.

Factores que determinan la especificidad de las vías de señalización

Una pregunta sin respuesta importante en el campo de la transducción de señales concierne al

origen de la especificidad de la señal. ¿Cómo se transmiten la gran cantidad de señales
extracelulares para inducir respuestas biológicas específicas? No está nada claro cómo la
activación de una RTK dada en la membrana celular por un ligando específico podría utilizar el
repertorio actualmente conocido de vías de señalización intracelular para transducir una
respuesta biológica única. La insulina y el NGF, por ejemplo, estimulan respuestas biológicas
únicas en sus tejidos diana. Sin embargo, las vías de señalización intracelular que son activadas
por la insulina, NGF u otros factores de crecimiento son muy similares. En otros casos, la
activación de las mismas moléculas de señalización en diferentes células conduce a respuestas
distintas. ¿Por qué, por ejemplo, ¿La estimulación de la PI-3 quinasa por la insulina en las células
musculares se traduce en una mejora de los procesos metabólicos, mientras que la estimulación
de la PI-3 quinasa por el NGF en las células neuronales produce una señal
antiapoptótica? Además, ¿cuáles son los factores que determinan el resultado biológico de una
señal generada por un receptor tirosina quinasa en un contexto celular diferente? ¿Por qué la
estimulación de una RTK (p. Ej., TrkA, FGFR, Ret) en los fibroblastos produce una proliferación
celular mientras que la estimulación de la misma RTK en las células neuronales produce una
diferenciación celular? Se han propuesto varios mecanismos para el control de la especificidad
en la señalización celular. ¿Cuáles son los factores que determinan el resultado biológico de una
señal generada por un receptor tirosina quinasa en un contexto celular diferente? ¿Por qué la
estimulación de una RTK (p. Ej., TrkA, FGFR, Ret) en los fibroblastos produce una proliferación
celular mientras que la estimulación de la misma RTK en las células neuronales produce una
diferenciación celular? Se han propuesto varios mecanismos para el control de la especificidad
en la señalización celular. ¿Cuáles son los factores que determinan el resultado biológico de una
señal generada por un receptor tirosina quinasa en un contexto celular diferente? ¿Por qué la
estimulación de una RTK (p. Ej., TrkA, FGFR, Ret) en los fibroblastos produce una proliferación
celular mientras que la estimulación de la misma RTK en las células neuronales produce una
diferenciación celular? Se han propuesto varios mecanismos para el control de la especificidad
en la señalización celular.
Control combinatorio

La especificidad de la señal se puede definir en parte por un control combinatorio. Cada RTK
recluta y activa un conjunto único de proteínas de señalización a través de sus propios sitios de
autofosforilación de tirosina y por medio de los sitios de fosforilación de tirosina en proteínas de
acoplamiento estrechamente asociadas (por ejemplo, Gab1, FRS2). El reclutamiento
combinatorio de un complemento particular de proteínas de señalización de un conjunto común
preexistente de casetes de señalización es un mecanismo para el control de la especificidad de
la señal. Este proceso está regulado aún más por el reclutamiento diferencial de proteínas
estimulantes e inhibidoras por los diferentes receptores y las proteínas efectoras de flujo
descendente que conducen a un ajuste fino de las respuestas celulares.
El papel de las proteínas del andamio

Se ha demostrado que las proteínas de andamiaje que se unen simultáneamente a varias

proteínas pueden aislar componentes clave de las vías de señalización de las cascadas de
señalización estrechamente relacionadas (Whitmarsh y Davis 1998). En la levadura, se ha
demostrado que la proteína de andamiaje Ste5 interactúa con una proteína G activada por
feromonas y con componentes de la cascada de MAP quinasa. Ste5 forma un complejo con
Ste11, Ste7 y Fus3P que conduce al aislamiento de la cascada de MAP quinasa inducida por
feromonas a partir de vías de señalización estrechamente relacionadas. Otro ejemplo es JIB, una
proteína que funciona como una proteína de andamiaje en la cascada de señalización JNK en
células de mamíferos (Davis 2000). También hay evidencia de que miembros particulares de la
cascada MAPK forman un complejo con una quinasa activadora corriente arriba específica y una
quinasa efectora corriente abajo para proporcionar aislamiento de otras cascadas MAP quinasa
(Kallunki et al. 1994). Queda por determinar si las RTK inducen respuestas biológicas específicas
utilizando proteínas de andamio específicas.
Compartimentación celular

En los últimos años se ha hecho evidente que la localización celular de proteínas involucradas
en la señalización celular tiene un profundo impacto en su actividad biológica. Dado que muchos
de los objetivos de las RTK se encuentran en la membrana celular, se requiere la translocación
de la membrana para la activación de muchos procesos celulares. La unión de los dominios SH2,
PTB o SH3 a los receptores activados o a las proteínas de acoplamiento ligadas a la membrana
conduce a la translocación de la membrana. Además, la translocación de la membrana está
regulada en parte por los dominios PH o FYVE, dos módulos de proteínas que se unen a
diferentes fosfoinositidos. Se ha demostrado que la unión de proteínas que contienen dominios
PDZ a sus secuencias diana canónicas en el extremo C de las proteínas de señalización inducirá
el ensamblaje de conjuntos específicos de proteínas de señalización en regiones específicas en
la cara interna de la membrana celular.

Se ha propuesto que una variedad de proteínas involucradas en la señalización celular se

concentran en microdominios ricos en colesterol denominados "balsas de membrana" (Simons y
Ikonen 1997). Se piensa que las "balsas de membrana" funcionan como sitios de ensamblaje de
proteínas involucradas en la señalización celular, incluidos los receptores de la superficie celular,
proteínas similares a GPI, quinasas Src y proteínas Ras (Marrón y londres 2000). Sin embargo,
aún no está claro si existen balsas de membrana en el contexto de las células vivas (Edidin 1997)
o si este fenómeno representa un artefacto causado por la solubilización del detergente.

La translocación de proteínas STAT de la membrana celular al núcleo es otro ejemplo del papel
de la localización de proteínas en la señalización celular (14, 43). Inicialmente, las proteínas
STAT se unen a los dominios citoplásmicos de los receptores de linfoquinas cerca de las
proteínas tirosina quinasas de la familia JAK. La estimulación del receptor de linfocinas o RTK
conduce a la fosforilación de la tirosina de STAT, lo que da como resultado una dimerización
homotípica o heterotípica seguida por la translocación nuclear y la regulación de la transcripción
de genes diana.
Duración y amplitud de la señal

Las vías de señalización celular podrían considerarse como componentes de circuitos

intracelulares generados por redes de proteínas. Según esta visión, la transmisión de la señal y
el resultado biológico deberían verse afectados por consideraciones cuantitativas, como la
duración de la señal y la intensidad de la señal (Marshall 1995). Por ejemplo, las RTK que
inducen la estimulación transitoria de MAPK (por ejemplo, EGFR, IR) estimulan la proliferación
de células PC12, mientras que las RTK que estimulan una respuesta MAPK sostenida y robusta
(por ejemplo, NGFR, FGFR) promueven la diferenciación neuronal de las mismas células. De
hecho, la sobreexpresión de IR o EGFR en células PC12 conduce a una respuesta MAPK
sostenida que produce una diferenciación celular, aunque los mismos receptores dan una
respuesta proliferativa cuando se expresan a niveles más bajos. Estos experimentos muestran
que el resultado biológico (proliferación versus diferenciación) está determinado por la
modulación cuantitativa del umbral de señal (Marshall 1995 ). El umbral de la señal se puede
determinar por la actividad específica de un RTK determinado y por la acción equilibrada de las
diversas señales inhibitorias o estimuladoras que se activan mediante el RTK. Por ejemplo, la
señal generada por un RTK puede prolongarse mediante la generación de peróxido de hidrógeno
que bloquea las proteínas inhibidoras tirosina fosfatasas o mediante la fosforilación de proteínas
de acoplamiento que promueven la amplificación de la señal mediante el reclutamiento de
múltiples moléculas de señalización. Las vías de señalización también están sujetas a múltiples
mecanismos de retroalimentación negativa a nivel del propio receptor por la proteína inhibitoria
tirosina fosfatasas y por la endocitosis y degradación del receptor. Además, la actividad
específica de las proteínas efectoras clave puede ser regulada negativamente por señales
inhibitorias. Por ejemplo, Las respuestas de MAPK son inhibidas por las proteínas fosfatasas que
desfosforilan e inactivan esta enzima. Las dos fosfoinositidas fosfatasas PTEN y SHIP
desfosforilan específicamente el fosfato 3 'o 5' de los PtdIns (3,4,5) PEl anillo de 3 inositol,
respectivamente, conduce a la inhibición de las respuestas celulares mediadas por los productos
de la PI-3 quinasa. El equilibrio entre las diversas respuestas estimulantes e inhibitorias
determinará en última instancia la intensidad y la duración de las señales que se transmiten a
través de las redes de cascadas de señalización luego de su inicio en la superficie celular en
respuesta a la estimulación con RTK.
Contexto celular

El resultado biológico de las señales generadas en la superficie celular en respuesta a la

estimulación con RTK depende en gran medida del contexto celular. El mismo RTK inducirá una
respuesta totalmente diferente cuando se expresa en diferentes células o en diferentes etapas
de diferenciación de un linaje celular particular (Sahni et al. 1999). Por ejemplo, en el desarrollo
temprano, el FGFR1 desempeña un papel importante en el control de la migración celular, un
proceso crucial para el patrón mesodérmico y la gastrulación. La estimulación de FGFR1 en los
fibroblastos, por otro lado, conduce a la proliferación celular, mientras que la estimulación de
FGFR1 expresada en células neuronales induce la supervivencia y diferenciación celular. La
explicación más plausible para estas observaciones es que diferentes células expresan proteínas
efectoras específicas del tipo de célula y factores de transcripción que median en las diferentes
respuestas. Según este punto de vista, las RTK y sus vías de señalización son capaces de
alimentarse en múltiples procesos, regulando así la actividad de diferentes proteínas efectoras y
factores transcripcionales en diferentes entornos celulares. Por lo tanto, una entrada similar
puede generar una salida diferente en un contexto celular diferente.

Finalmente, hay una buena evidencia de que las cascadas de señalización críticas están
reguladas por pasos múltiples y paralelos que conducen a la redundancia en las vías de
señalización. Por ejemplo, el receptor de EGF activado recluta la proteína adaptadora Grb2
directa e indirectamente a través de Shc y Gab1. Por lo tanto, los mutantes de EGFR defectuosos
en la unión de Grb2 son capaces de reclutar la proteína adaptadora Grb2 indirectamente, lo que
resulta en una activación eficiente de la cascada de señalización de Ras / MAP quinasa. Otro
ejemplo es la redundancia observada en la expresión y función de las quinasas Src (Klinghoffer
et al. 1999). Mientras que la mayoría de las células expresan al menos tres de los nueve
miembros conocidos de la familia Src, la expresión de una única quinasa Src es suficiente para
mediar una señal intracelular que requiere una quinasa de la familia Src.

Conclusiones

Han pasado 20 años desde que se descubrió la fosforilación de la proteína tirosina (

Hunter y Sefton 1980
). Las últimas dos décadas han visto un rápido progreso en la caracterización de las proteínas
tirosina quinasas, las vías de señalización que activan y los mecanismos subyacentes a su acción
y regulación. Con la completa determinación de las secuencias de los genomas de C. elegans,
Drosophila y Homo sapiens , toda la plétora de quinasas, fosfatasas y proteínas de señalización
se ha vuelto accesible para los bioquímicos y genetistas interesados en descifrar los roles
desempeñados por los RTK en Procesos biológicos normales y en situaciones patológicas.
Ya está claro que las vías de señalización activadas por RTK están interconectadas con otras
vías de señalización a través de redes de proteínas que están sujetas a múltiples mecanismos
de retroalimentación positiva y negativa. La herramienta frecuentemente aplicada de la alteración
de genes específicos utilizada por los genetistas para analizar las vías de señalización se
complica por la existencia de vías de señalización redundantes y porque los componentes clave
a veces son compartidos por múltiples cascadas de señalización. En consecuencia, se deben
desarrollar y aplicar herramientas más sofisticadas para el análisis de las vías de señalización
celular. Se necesitan nuevas técnicas para la determinación de la localización de proteínas
(Teruel y Meyer 2000[este número de Cell ]) y la medición de la cinética de las reacciones
celulares en el contexto de las células vivas e incluso en el animal vivo. Además, análisis
detallados de los patrones de expresión génica mediante análisis de microarrays de genes que
se expresan en respuesta a la estimulación del factor de crecimiento (Fambrough et al. 1999) de
células derivadas de tejidos normales o patológicos revelarán nuevos enlaces entre las vías de
señalización. Finalmente, los bioquímicos y genetistas modernos deberán adoptar enfoques que
hayan sido desarrollados por ingenieros para describir redes complicadas (por ejemplo, análisis
del sistema) a fin de obtener una perspectiva coherente y realista sobre la señalización celular