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I. INTRODUCCION:
La vida depende de una serie ordenada de reacciones químicas que son catalizadas por enzimas formadas
para este fin. Las enzimas son proteínas relativamente frágiles con tendencia a sufrir desnaturalización e
inactivación, es decir alteraciones en su conformación, por efecto de diversos agentes físicos y químicos
como: temperatura, ácidos, álcalis fuertes, sales pesadas, pH, etc.
La finalidad de la presente práctica, es evidenciar las características proteicas de las enzimas y que
expuestas a la acción de diversos agentes físicos y químicos hacen variar su comportamiento y actividad
catalítica.
SISTEMA A.
TUBOS
COMPONENTES (en ml) I II III IV V VI
Amilasa al 1% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
NaOH 1N - 2.4 - - - -
HCl 3N - - 2.4 - - -
Ácido Tricloro acético 20% - - - 2.4 - -
Sulfato de Cobre al 20% - - - - 2.4 -
Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6 2.4 - - - - 2.4
TUBOS
TUBOS
IV. CUESTIONARIO:
1. Explique cuál es el mecanismo de acción de las sales pesadas sobre la proteína (enzima).
2. ¿Cómo actúan los ácidos y bases fuertes sobre la proteína (enzima)? Identifique cuáles son los ácidos
y fuertes empleados.
3. Explique los tipos de enlaces fuertes y débiles que existen entre los aminoácidos para conformar una
determinada proteína.
4. Explique la teoría de la acción molecular de las enzimas sobre sus respectivos sustratos.
6. ¿Cómo repercute la modificación de la estructura proteica, producida por agentes físicos y químicos,
sobre la actividad enzimática?
NDETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICAN
I. INTRODUCCION:
Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biológico que tienen un alto
grado de especificidad y eficiencia; permitiendo que las reacciones químicas dentro de la célula ocurran
rápidamente a través de vías bien definidas. Sin estas proteínas especializadas, la vida tal como es no
podría existir.
Para poder mostrar la actividad enzimática se debe tener presente fundamentalmente que cada reacción
química debe ser catalizada por una determinada enzima. El reactante o sustancia química que reacciona
para dar un producto en un sistema enzimático se llama sustrato, entonces en un organismo vivo habría
tantos sistemas enzimáticos como sustratos reaccionantes.
Debido que se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una reacción dada, solo
muy pocas enzimas pueden medirse directamente.
En general, la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrada de dos maneras:
1. Verificando el sustrato no transformado (SUSTRATO RESIDUAL) después de un tiempo
determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura.
2. Verificando los productos liberados después de un tiempo determinado de incubación en
condiciones específicas de pH y temperatura.
La finalidad del presente trabajo experimental es determinar la actividad enzimática, utilizando la enzima
amilasa salival que tiene la capacidad de degradar el almidón en maltosa (disacárido reductor) y algo de
glucosa; verificando tanto el sustrato residual y los productos formados en dicha reacción.
SISTEMA A:
TUBOS
COMPONENTES I II
Solución de almidón pH 6.0 al 1% 5 ml. 5 ml.
Inmediatamente cumplidos los 10 minutos. De cada uno de los tubos del sistema anterior,
transferir 0.5 ml. a este nuevo sistema.
TUBOS
COMPONENTES I II
Ácido clorhídrico 0.05 N 5 ml. 5 ml.
De los tubos I y II: Sistema A 0.5 ml. 0.5 ml.
Solución yodada 0.5 ml. 0.5 ml.
Mezclar, observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color
resultante.
TUBOS
COMPONENTES I II
De los tubos I y II: Sistema A 1ml. 1ml.
Solución Cúprica alcalina 1ml. 1ml.
Hervir 8 minutos
Enfriar
Mezclar, observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color
resultante
IV. CUESTIONARIO:
2. Explique la acción bioquímica de cada uno de los componentes en los pasos seguidos para determinar
la actividad enzimática.
3. Elabore un gráfica para demostrar la acción de una enzima sobre su sustrato, donde se observe la
energía de activación y el estado de transición.