AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS

INTRODUCCIÓN:

Es la forma comúú n de denominar a las bacterias Gram Negativas. Reciben este nombre porqúe súelen
encontrarse en el intestino de los mamíúferos. Las especies qúe poseen flagelos son moú viles; el resto,
inmoú viles. La capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo sirven para
diferenciar los geú neros. Los qúe no realizan la fermentacioú n son patoú genos, los fermentadores,
saprofitos.

CLASIFICACIÓN:

Las enterobacterias constitúyen la familia Enterobacteriaceae.

Se clasifican en cinco tribús: Escherichieas, Klebsielleas, Proteeas, Yersineas y Erwinieas. Cada úna
comprende diversos geú neros.

IMPORTANCIA DE RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS EN ALIMENTOS:

Enterobacterias patoú genas:

La presencia de Enterobacterias patoú genas en los alimentos súpone ún grave riesgo para los
consúmidores qúe van a ingerirlos. Debemos garantizar la aúsencia de este tipo de microorganismos en
los alimentos.

• Bacillús cereús
• Clostridiúm botúlinúm
• Clostridiúm perfringens
• Escherichia coli
• Listeria monocytogenes
• Salmonella
• Shigella
• Staphylococcús aúreús
• Yersinia enterocolitica

AISLAMIENTO DE LAS ENTEREBACTERIAS:

1. Agar Mc Conkey:

La bacteria E. coli forma colonias rojas por ún viraje del indicador de pH (rojo neútro), dando como
resúltado lactosa +.

La bacteria Salmonella typhi forma colonias incoloras y no vira el indicador de pH, por lo qúe es lactosa
- . Este medio se útiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de faú cil desarrollo, aerobios y
anaerobios facúltativos. Permite diferenciar bacterias qúe útilizan o no, lactosa en múestras clíúnicas, de
agúa y alimentos.

Fúndamento:

En el medio de cúltivo, las peptonas, aportan los nútrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los
agentes selectivos qúe inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentacioú n de
la lactosa, disminúye el pH alrededor de la colonia. Esto prodúce
ún viraje del color del indicador de pH (rojo neútro), la absorcioú n
en las colonias, y la precipitacioú n de las sales biliares. Los
microorganismos no fermentadores de lactosa prodúcen colonias
incoloras.

Preparacioú n: Súspender 50 g del polvo por litro de agúa destilada.

Reposar 5 minútos y mezclar hasta úniformar. Calentar
súavemente y hervir 1 a 2 minútos hasta disolver. Esterilizar en
aútoclave a 121°C dúrante 15 minútos. Incúbacioú n Dúrante 18-48
horas, a 35-37 ºC, en atmoú sfera aeroú bica

Resúltados:

2. Salmonella Shigella Agar:

Medio de cúltivo útilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algúnas especies de Shigella spp.
a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cúales se sospeche sú presencia.

Fúndamento:

Es ún medio de cúltivo selectivo y diferencial. La selectividad, estaú dada por la sales biliares y el verde
brillante, qúe inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoríúa de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteús spp. Es diferencial debido a la fermentacioú n de la lactosa, y a la formacioú n
de aú cido súlfhíúdrico a partir del tiosúlfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de
lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH,
obtenieú ndose colonias rosadas o rojas sobre ún fondo rojizo. Salmonella,
Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen
bien en el medio de cúltivo, y prodúcen colonias transparentes.

La prodúccioú n de aú cido súlfhíúdrico se evidencia como colonias con

centro negro debido a la formacioú n de súlfúro de hierro.

Preparacioú n: Súspender 60 g del polvo por litro de agúa destilada.

Reposar 5 minútos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebúllicioú n
dúrante 2 o 3 minútos. No esterilizar en aútoclave. Enfriar a 45-50°C y
distribúir únos 20 ml por placa. Secar la súperficie del medio únos minútos en la estúfa.

Resúltados:
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS:

A. E.coli:

E. coli. estaú integrada por bacilos Gram negativos no esporúlados,

moú viles con flagelos peritricos o inmoú viles, aerobios-anaerobios
facúltativos, capaces de crecer en agar MacConkey y en medios simples
con o sin agregado de NaCl, fermentadores y oxidativos en medios con
glúcosa ú otros carbohidratos, catalasa positivos, oxidasa negativos,
redúctores de nitratos a nitritos, y poseedores de úna proporcioú n G+C
de 39 a 59% en sú DNA.

Se trata de bacterias de raú pido crecimiento y amplia distribúcioú n en el súelo, el agúa, vegetales y gran
variedad de animales. E. coli es la especie tipo del geú nero Escherichia. Inclúye geú rmenes generalmente
moú viles, qúe prodúcen aú cido y gas a partir de la glúcosa, la arabinosa, y habitúalmente de la lactosa y
otros azúú cares.

Prodúcen reaccioú n positiva de rojo de metilo, y negativa de Vogúes-Proskaúer. Son H2S, úreasa y
fenilalanina negativos, pero en general son indol positivos y decarboxilan la lisina.

E. coli coloniza el tracto gastrointestinal a las pocas horas de vida del ninñ o, y establece con el húeú sped
úna relacioú n estable de mútúo beneficio.Como integrante de la flora normal del hombre y de múchos
animales, se lo considera ún germen indicador de contaminacioú n fecal cúando estaú presente en el
ambiente, agúa y alimentos, júnto con otros similares agrúpados bajo la denominacioú n de "bacterias
coliformes".

B. Salmonella typhi:

Salmonella es ún geú nero de bacteria qúe pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos
gram negativos, anaerobios facúltativos, con flagelos períútricos y qúe no desarrollan caú psúla ni esporas.
Son bacterias moú viles qúe prodúcen súlfúro de hidroú geno (H2S). Fermentan glúcosa por poseer úna
enzima especializada, pero no lactosa, y no prodúcen úreasa. Es ún agente zoonoú tico de distribúcioú n
úniversal. Se transmite por contacto directo o contaminacioú n crúzada dúrante la manipúlacioú n, en el
procesado de alimentos o en el hogar, tambieú n por víúa sexúal.

Claú sicamente se distingúíúan tres úú nicas especies patoú genas primarias: S. typhy, S. cholerae-súis y S.
enteritidis.

Patogenia:
Prodúce salmonelosis con ún períúodo de incúbacioú n de entre 5 horas y 5 díúas, diarrea y dolor
abdominal, a traveú s de las heces del enfermo se elimina ún gran núú mero de esta bacteria y fiebre
enteú rica con ún periodo de incúbacioú n de 7 a 28 díúas, caúsante de dolor de cabeza, fiebre, dolor
abdominal y diarrea, erúpcioú n maú cúlo-papúlosa en pecho y espalda, los enfermos presentan ún períúodo
de convalecencia entre 1 y 8 semanas, las personas cúradas eliminan Salmonella. Tambieú n púede
ocasionar fiebres enteú ricas o infeccioú n intestinal por intoxicacioú n con algúnos alimentos.

Resultados de Pruebas:

PRUEBAS BIOQUIMICAS:

I. Prueba del indol

La prúeba del indol es úna prúeba bioqúíúmica realizada en especies bacterianas para determinar la
habilidad del organismo de romper el indol del aminoaú cido triptoú fano. Esta divisioú n molecúlar es
lograda por úna serie de enzimas intracelúlares diferentes, ún sistema qúe en conjúnto se le llama con
frecúencia triptofanasa. Se genera el indol por úna desaminacioú n redúctiva del triptoú fano via la
moleú cúla intermediaria aú cido indolpirúú vico.

Las triptofanasas catalizan la reaccioú n de desaminacioú n, dúrante el cúal

se remúeve el grúpo amino (NH2) de la moleú cúla de triptoú fano. Los
prodúctos finales de la reaccioú n son el indol, aú cido pirúú vico, amoníúaco
(NH3) y energíúa. Como coenzima de la reaccioú n se reqúiere al fosfato de
piridoxal Tal como ocúrre con múchas prúebas bioqúíúmicas, los
resúltados de úna prúeba de indol se indican con el cambio de color qúe
sigúe a la reaccioú n. Esta prúeba es positiva cúando se múestra ún anillo
de color anaranjado. Ello es debido a la presencia de escatol, tambieú n
conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible prodúcto de la
degradacioú n del triptoú fano

Bacteria indol positiva Bacteria indol negativa

• Escherichia coli • La mayoríúa de los Bacillús spp.,

• La mayoríúa de los Proteús spp. • Pastúrella haemolytica, Pastúrella

• Plesiomonas shigelloides, • Actinobacillús spp., úreae,

• Pastúrella múltocida, Pastúrella • Salmonella spp.,

 II. Prueba del Citrato:

En el medio de cúltivo, el fosfato monoamoú nico es la úú nica fúente de nitroú geno y el citrato de sodio es la
úú nica fúente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de
fosfato forman ún sistema búffer, el magnesio es cofactor enzimaú tico.

El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y pirúvato. Este úú ltimo, en presencia de

ún medio alcalino, da origen a aú cidos orgaú nicos qúe, al ser útilizados como fúente de carbono, prodúcen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azúl y
esto es indicativo de la prodúccioú n de citrato permeasa.

Resúltados:

-Positivo: crecimiento y color azúl en el pico, alcalinidad.

-Negativo: el medio permanece de color verde debido a qúe no hay

desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

CONCLUSIONES:

 Las enterobacterias son Gram negativas y contienen maú s de 30 geú neros y maú s de 100 especies
qúe púeden tenermorfologíúa de bacilos o cocos.
 La capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo sirven para diferenciar
los geú neros. Los qúe no realizan la fermentacioú n son patoú genos, los fermentadores, saprofitos.
 La capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo sirven para diferenciar
los geú neros. Los qúe no realizan la fermentacioú n son patoú genos, los fermentadores, saprofitos.
 Algúnos de las enterobacterias qúe se encúentran en los alimentos no son patoú genos, pero se
debe tener cúidado con los patogenos ya qúe provocan múchas enfermedades. Esa es la razoú n
por la cúal se debe hacer ún búen manejo de los alimentos y tener búena higiene.