INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

Químico Farmacéutico Industrial

Laboratorio de Fisiología Celular

Grupo: 4FV1
Profesores:
De la Cruz López Fidel
Garcés Ramírez Linda
Rojas Franco Placido

“Practica 6. Potencial de acción compuesto”

INTRODUCCIÓN.
La función principal de las fibras nerviosas es la conducción del impulso nervioso
(potencial de acción). En el caso de las fibras sensoriales (aferentes) el potencial de
acción es generado en la terminal nerviosa periférica y es conducido hacia la
terminal nerviosa central. El potencial de acción en las fibras motoras (eferentes) es
generado en el cono axónico y es conducido hacia la periferia hasta su efector.
Conducción ortodrómica significa la conducción del impulso nervioso en la dirección
adecuada. La conducción antidrómica significa lo opuesto. Los nervios periféricos
están constituidos por un grupo heterogéneo de fibras nerviosas. La heterogeneidad
de las fibras nerviosas se debe tanto a sus características geométricas (diámetro),
histológicas (presencia o ausencia de mielina), pertenencia (somáticas o
autónomas), funcionales (sensoriales o motoras). También son heterogéneas en
cuanto a propiedades de excitabilidad como sería la magnitud del estímulo umbral
y la duración de su período refractario, tanto absoluto como relativo. Considerando
todas estas características las fibras nerviosas pueden ser clasificadas de diversas
maneras. La clasificación más general las clasifica como A (alfa, beta, gamma y
delta), B y C. Otra clasificación, la cual es utilizada principalmente para fibras
sensoriales musculares, las clasifica en fibras tipo Ia y Ib, II, III y IV.
Independientemente del tipo de fibra nerviosa, la generación y la conducción del
potencial de acción tiene los mismos principios. La generación del potencial de
acción es debida a un potencial electrotónico producido ya sea por actividad
sináptica o por el estímulo aplicado directamente sobre la terminal nerviosa, libre en
muchos casos, o asociada a una estructura con características específicas. Este
potencial electrotónico activa canales iónicos operados por voltaje generando
corrientes catiónicas entrantes y salientes que se propagan a través y a lo largo de
la membrana (axolema) y de los líquidos intersticial e intracelular (axoplasma). Los
responsables de las corrientes iónicas son canales de sodio y de potasio operados
por voltaje que se activan de manera secuencial, produciendo corrientes iónicas que
dan lugar al cambio transitorio del potencial de membrana conocido como potencial
de acción, el cual una vez producido, con características todo o nada, se propaga a
lo largo de la fibra nerviosa activando automáticamente a los canales iónicos,
influidos por el campo eléctrico del mismo potencial de acción. El potencial de acción
es conducido tanto activamente como pasivamente, la conducción pasiva se realiza
en segmentos de membrana que carecen de canales iónicos operados por voltaje,
en la conducción pasiva intervienen los canales iónicos. Cuando un nervio es
dispuesto sobre electrodos de registro y se aplica un estímulo de magnitud
suficiente, es posible registrar la suma (por sumación espacial) de los potenciales
de acción de todas las fibras que lo constituyen (potencial de acción compuesto). El
registro obtenido de esta manera (electroneurograma) muestra diversos
componentes que corresponden a los diferentes tipos de fibras que constituyen al
nervio y que son separados en base al estímulo umbral y en base a la latencia
relativa (debido a su diferente velocidad de conducción) con que aparecen. Además
de investigar el tipo de fibras que constituyen al nervio, este modelo es útil para
ilustrar conceptos fisiológicos relacionados con las propiedades de excitabilidad de
las fibras nerviosas y de otros tejidos excitables, investigar el efecto de fármacos y
xenobióticos sobre la conducción nerviosa, estudios sobre regeneración y
enfermedades degenerativas (desmielinizantes), etc.

OBJETIVOS.
  Medir la respuesta eléctrica de un nervio completo.
 Determinar las propiedades de conducción de las fibras que componen a un
nervio.
 Determinar el valor de estímulo umbral y estímulo máximo del nervio ciático
de rana toro, utilizando el equipo Biopac.
 Determinar la velocidad de propagación del estímulo eléctrico a través del
nervio a diferentes temperaturas, utilizando el programa Biopac.
 Determinar el tiempo interestímulo necesario para producir una suma
temporal entre dos estímulos subumbrales.
 Determinar el periodo refractario para una población de fibras nerviosas.

FUNDAMENTO
Usando por primera vez el osciloscopio de rayos catódicos como un aparato
indicador, Gasser y Erlanger (1922) pudieron registrar varios picos en el potencial
de acción registrado del nervio ciático de rana. Ellos correlacionaron esos
componentes con las fibras de diámetros diferentes que forman el nervio y
correctamente supusieron que los potenciales de acción generados por las fibras
individuales se suman para dar el potencial de acción compuesto, cuya forma es
regular si la distancia entre los electrodos de estimulación y de registro es corta. En
cambio, si la distancia es grande, el potencial de acción se separa en los diferentes
componentes que corresponden a las fibras con diferentes velocidades de
conducción. Podríamos comparar este potencial de acción con los corredores en
una carrera, que forman un grupo compacto inmediatamente después del inicio y,
debido a sus diferentes velocidades, se separan en grupos conforme aumenta la
distancia.
Es posible registrar el potencial de acción con un microelectrodo sin penetrar en el
axón, colocando dos electrodos separados sobre su superficie y comparando la
carga eléctrica en cada punto. Un electrodo localizado en un punto en el que existe
un potencial de acción será negativo en comparación con el electrodo en el que no
exista un potencial de acción. Conforme se conduce el potencial de acción hacia el
segundo electrodo, la polaridad del registro se invierte. Esta técnica se utiliza en
clínica para valorar la función nerviosa. Los nervios perifericos y muchas vías
centrales contienen una población de axones de diversos diámetros, algunos
mielinizados y otros amielínicos. En consecuencia, los potenciales de acción
circulan a distinta velocidad por los axones individuales, y por esto el registro de
este nervio con un electrodo externo no muestra único sincronico, sino que presenta
una serie de picos que varian en cuanto a su duración (según la velocidad de
conducción de los grupos de axones ) y tamaño (según el numero de axones dentro
de cada grupo de velocidad). Esto se denomina potencial de acción compuesto, y
su forma concreta es característica de la población de axones de cada nervio. La
utilidad clínica de estos registros radica en que permiten mostrar la disfunción de un
grupo concreto de axones asociados con una función específica en determinados
estados patológicos y, además, se trata de una técnica no invasiva que se puede
realizar con electrodos sobre la superficie de la piel.

Período refractario
En 1899 Francis Gotch (1853-1913) y Burchen demostraron que cuando dos
estímulos separados por un intervalo menor de aproximadamente 8 mseg
(dependiendo de la temperatura) eran aplicados al nervio, el segundo estímulo no
producía una perturbación propagada. Esto significaba que inmediatamente
después del estado excitado el nervio se encontraba inexcitable y Adrian y Lucas
(1912) estudiaron con cuidado éste fenómeno usando el músculo como indicador.
Ellos demostraron que durante los primeros 25 mseg después de un estímulo el
nervio no puede ser excitado por otro estímulo de cualquier intensidad (período
refractario absoluto), pero que desde ese momento hasta aproximadamente 12
mseg la excitabilidad del nervio era menor que la normal, pero aumentaba
gradualmente (período refractario relativo) y después, hasta aproximadamente 28
mseg, había un periodo de excitabilidad aumentada (período supernormal).
Posteriormente el nervio regresaba a su estado de excitabilidad antes del primer
estímulo.
Características todo-o-nada
Los experimentos de Keith Lucas en 1909 habían demostrado que al variar la
intensidad del estímulo excitatorio aplicado al nervio ciático se obtenían diferentes
grados de contracción en el músculo y que estos no eran tan numerosos como los
grados de intensidad del estímulo; además, las contracciones ocurrían en escalones
menos numerosos que el número de fibras motoras. Estos resultados fueron
considerados como una indicación de que los diferentes grados de contracción eran
debidos solamente al número de fibras musculares contrayéndose; en otras
palabras, cada fibra nerviosa o muscular podía ser excitada a su máxima capacidad
o no serlo.
Ese hecho ya había sido observado en 1871 por H.P. Bowditch (1840-1911)
estimulando directamente el corazón y la posibilidad de que el fenómeno también
pudiera ser aplicado al nervio había sido discutida en 1902 por Francis Gotch (1853-
1913). Sin embargo, la demostración del caracter todo-o-nada de la excitación
propagada fue obtenida por Adrian (1914), quien pudo demostrar que después de
pasar una regíon anestesiada del nervio ciático, el potencial de acción recuperaba
su máxima amplitud cuando entraba a un área normal.

METODOLOGÍA.

I. Montaje del equipo de estimulación y de
registro
El electrodo de estimulación sirve para aplicar
estímulos eléctricos al nervio y debe
colocarse en un extremo de la cámara de nervio
aislado, el electrodo de estimulación
mide los cambios de voltaje que se dan en el
nervio en respuesta a la aplicación de
estímulos, éste debe colocarse en el otro extremo
de la cámara de nervio aislado.
a) Electrodos bipolares de registro.
5. Conecte el cable SS2L al canal 2 (CH2) del
Biopac (MP36).
6. Conecte el terminal rojo Vin(+) del SS2L a la
última banda metálica de la cámara de
nervio aislado y conecte el terminal blanco Vin(-)
del SS2L a la penúltima banda
metálica de la cámara. Esto puede moverse
después, de acuerdo a la longitud del
nervio disecado.
c) Prueba de montaje correcto.
11. Humedezca un trozo de hilo grueso en
solución Ringer.
12. Abra el archivo PAC-Ciatico-01.gtl, el cual
tiene los parámetros de calibración para
el Biopac. Observe que en la parte superior de
la pantalla aparece un rectángulo rojo
con varios parámetros de estimulación:
encendido y apagado, frecuencia, voltaje,
duración y número de pulsos o estímulos y canal
de referencia. La señal del
estimulador se verá en el canal 1 (CH1) y la
señal de registro en el canal 2 (CH2).
II. Montaje de la preparación de nervio ciático
aislado de rana toro.
3. Corte la piel de una de las patas posteriores y
remuévala hasta descubrir
completamente la extremidad. Separe
cuidadosamente los músculos en la cara
posterior del muslo y localice el nervio ciático
4. Sin tocar el nervio con objetos metálicos,
descúbralo en ambos sentidos hasta la
médula espinal por un lado y hasta el extremo
distal del fémur por el otro. Corte los
músculos que sea necesario.
III. Determinaciones prácticas
a) Estímulos umbral y máximo
El potencial de acción compuesto requiere una
cantidad mínima de carga para ser
generado pero, a diferencia del potencial de
acción simple, su amplitud aumenta al
incrementar la magnitud de la estimulación. Esta
tendencia tiene un límite, y se conoce
como estímulo máximo al valor de estimulación
que induce la máxima amplitud de
respuesta de un nervio.
1. Coloque el módulo MP36 (Biopac) en la parte
superior de su mesa de laboratorio,
conéctelo a la corriente y a la computadora con
el cable USB.
2. Realice una inspección rápida al módulo
MP36, ubique el canal 2 (CH2) en la parte
delantera y “Analog out” en la parte trasera del
equipo. Es muy importante anticipar que
no debe haber conexión alguna en el canal 1
(CH1).
3. Encienda la computadora pero no encienda el
Biopac.
4. Guíese con la Figura 10 para hacer las
siguientes conexiones:
b) Electrodos bipolares de estimulación.
7. Identifique el cable DB9H y conéctelo a “Analog out” del
Biopac.
8. Conecte el terminal rojo St(+) del DB9H a la banda
metálica más externa de la
cámara de nervio aislado (al extremo opuesto de donde
conectó los terminales del
SS2L).
9. Conecte el terminal negro St(-) del DB9H al cable negro
(GND) del SS2L y conecte
éste último a la banda metálica siguiente de la cámara de
nervio aislado.
10. Encienda el Biopac.
13. Coloque el hilo húmedo en la cámara de
nervio aislado y aplique un estímulo de
0.050 V (50 mV) dando clic en la pestaña inicio
(en la esquina inferior derecha). Debe
observar el estímulo en el canal 1 y el artefacto
del estímulo en el canal 2.
14. Si no observa el artefacto, aumente la
intensidad del estímulo en intervalos de 0.050
V, hasta que pueda observarlo.
15. Retire el hilo de la cámara y proceda a hacer
la disección del nervio ciático.
5. Amarre un trozo de hilo alrededor del nervio
tan cerca de la médula espinal como sea
posible. Con unas tijeras finas separe el nervio
de la médula, de manera que quede
sujeto con el hilo.
6. Con ayuda de los disectores de vidrio, separe
cuidadosamente el nervio, hasta liberar
una porción de 8 a 10 cm.
7. Coloque el nervio extendido sobre las bandas
metálicas de la cámara de nervio
aislado y mueva los electrodos de acuerdo a la
longitud del nervio.
1. Abra el archivo PAC-Ciatico-01.gtl, note que
la duración del estímulo está fija (0.2
mseg) y considere que para grabar sus registros
debe cambiar el nombre del archivo
cada vez que haga un cambio.
2. Aplique un estímulo inicial de 0.050 V (50 mV)
y observe. Si no hay PAC, aumente
gradualmente la magnitud del estímulo (a
intervalos de 0.050 V) hasta que se aprecie la
más leve respuesta del nervio. Este es el
estímulo umbral.
 3. Siga aumentando el voltaje del estímulo,
observe cómo aumenta gradualmente la
amplitud del PAC.
4. Encuentre las características del estímulo
(voltaje y duración) en las que el PAC deja
de aumentar su amplitud, aunque se siga
incrementando el voltaje del estímulo. Éste es
el estímulo máximo.
2. Mida la separación entre el electrodo de
estimulación y el electrodo de registro que
estén más próximos entre sí en la cámara de
nervio aislado. Con estos valores calcule
la velocidad de conducción del nervio (m/s).
3. Repita la operación después de poner unas
gotas de Ringer frío sobre el nervio
ciático.
3. Repita la experiencia reduciendo el tiempo
interestímulo paulatinamente hasta que
observe un PAC. Este tiempo es el necesario
para que se sumen los potenciales
locales producidos por los estímulos
subumbrales.
Tiempo interestímulo para producir un PAC
perceptible: _________________ ms.
4. Ahora reduzca el tiempo interestímulo un
poco más y observe lo que sucede.
4. Siga reduciendo el tiempo interestímulo, hasta
que la respuesta al segundo estímulo
desaparezca por completo.
b) Velocidad de conducción
1. Aplique un estímulo de intensidad intermedia
entre el umbral y el máximo. Mida el
intervalo que separa el inicio del estímulo del
inicio del PAC (latencia).
c) Suma temporal
1. Abra el archivo PAC-Ciatico-02.gtl. En este
caso se aplican dos estímulos
subumbrales con un tiempo de retardo
determinado entre uno y otro.
2. Aplique estímulos con voltaje ligeramente
menor al del estímulo umbral y con un
tiempo de retardo de 25 ms. Observe.
d) Período refractario
1. Abra nuevamente PAC-Ciatico-02.gtl y
aplique estímulos con un voltaje ligeramente
superior al umbral y un tiempo interestímulo de
30 ms. Deben observarse 2 PACs
similares en amplitud y duración.
2. Reduzca gradualmente el tiempo de retardo
del segundo estímulo, observando
atentamente la respuesta al segundo estímulo,
hasta que se aprecie una leve reducción
e) Curva intensidad-duración
1. Abra la plantilla PAC-Ciatico-03.gtl y ajuste el
voltaje del estímulo ligeramente por
arriba del valor umbral, de modo que el PAC
tenga una forma bien definida. Registre las
características del estímulo y mida la amplitud y
duración del PAC.
2. Reduzca el voltaje del estímulo en una
décima parte y aumente su duración hasta
3. Reduzca nuevamente el voltaje del estímulo y ajuste la duración para tener la
misma
forma (amplitud y duración) del PAC. Registre el nuevo par de valores.
4. Repita el proceso hasta que el estímulo se haya reducido a un punto en el que no
logre generar un PAC aun aumentando la duración (o hasta valor máximo permitido
por
el equipo).
8. Repita el proceso, pero ahora aumente el voltaje y reduzca la duración del
estímulo

RESULTADO.

Grafica 1. Respuesta umbral del nervio ciático de rana aplicando un estímulo

de 0.230 mV y una duración de 0.2 ms. El potencial de acción compuesto requiere
una cantidad mínima de carga para ser generado.
Grafica 2. Respuesta máxima del nervio ciático de rana aplicando un
estímulo de 0.500 mV y 0.2 ms. Se diferencia del potencial de acción simple, su
amplitud aumenta al incrementar la magnitud de la estimulación. Esta tendencia tiene
un límite, y se conoce como estímulo máximo al valor de estimulación que induce la
máxima amplitud de respuesta de un nervio.

Gráfica 3. Velocidad de conducción del nervio ciático de rana aplicando un

estímulo medio de 0.300 mV a una temperatura ambiente de 22°C. La
velocidad de conducción es de 0.7000 ms.
Puesto que los electrodos de registro están situados a cierta distancia de los de
estimulación, la señal eléctrica toma cierto tiempo en llegar desde su punto de origen
hasta donde es registrada, y la duración de este periodo (llamado latencia) depende
de la velocidad con la que el nervio conduce los impulsos.
Gráfica 4. Velocidad de conducción del nervio ciático de rana aplicando un
estímulo medio de 0.300 mV a una temperatura ambiente de 9°C. La
velocidad de conducción es de 1.900 ms.

Gráfica 5. Suma temporal de dos estímulos subumbrales (amplitud 0.1000

mV) con un tiempo interestímulo de 25 ms. No se observa la generación de
un PAC.
Gráfica 6. Suma temporal de dos estímulos subumbrales (amplitud 0.1000
mV) con un tiempo interestímulo de 0.70 ms. Se observa la generación de un
PAC. Este tiempo es el necesario para que se sumen los potenciales locales
producidos por los estímulos subumbrales.

Gráfica 7.. Periodo refractario. Dos estímulos aplicados al nervio ciático de

rana con un valor ligeramente superior al valor umbral, este valor fue de
0.300 v con un retardo entre los dos estímulos de 0.35 ms. Donde se observa
que ambas respuestas son similares en amplitud y forma.
Disminución del retardo en el segundo estimulo, en un retardo entre los dos
estímulos de 0.20 ms, se observa una disminución de la respuesta del
segundo estimulo.

DISCUSIÓN.
Las fibras que forman un nervio son de diámetro diferentes y generan potenciales
de acción individuales que se suman para dar un potencial de acción compuesto.
Se utilizó un nervio ciático de rana ya que está formado por varios axones de distinto
diámetro, tanto motoras como sensitivas y tienen diferente velocidad de conducción.
El programa Biopac permitió visualizar y cuantificar tanto los parámetros de la
estimulación nerviosa como los parámetros en tiempo y voltaje de la respuesta.
Se llevaron a cabo diferentes pruebas para observar las características y
propiedades de un potencial de acción del nervio ciático de rana. Se determinó el
estimulo umbral con una intensidad de 0.230mV, en este caso la única que genera
un PAC es la fibra más excitable. Además, un estímulo máximo de intensidad 0.500
mV, a diferencia del umbral en este caso todas las fibras presentes en el nervio
responden al estímulo.
Además, como se observa en los periodos refractarios, se encontró que después
de 0.20 mS desaparece el segundo estimulo.
Se utilizó solución de ringer a temperatura ambiente y a temperatura baja para
determinar la velocidad del potencial de acción compuesto, midiendo la latencia en
donde se observa

Que la solución ringer fría disminuye la velocidad de conducción del potencial pues
disminuye la cinética de los canales iónicos.

Suma y facilitación
Adrian y Lucas (1912) mostraron que hay una forma de aumento de la excitabilidad
que ocurre solamente en el punto donde se aplica un estímulo, lo que puede
demostrarse aplicando dos estímulos inadecuados (debemos entender
subumbrales) y si el segundo sigue al primero por aproximadamente 0.8 ms, se
produce una perturbación propagada. De esto es claro que el primer estímulo no
fue efectivo para producir la perturbación propagada, pero dejó atrás una alteración
de cierto tipo que persistió por un tiempo medible y que se añadió a la producida
por el segundo estímulo. Estas observaciones fueron premonitorias de las
respuestas graduadas, subumbrales, no propagadas, que Katz demostraría en los
1930's siguiendo una técnica semejante y que Hodgkin registraría directamente
poco tiempo después.

CONCLUSIÓN

 El potencial de acción compuesto es la suma de varios potenciales de acción

individuales.
 El potencial de acción compuesto no implica la ley del todo o nada.
 En el registro de un PAC pueden aparecer picos por las diferentes
velocidades de conducción de las fibras.
 La velocidad de conducción del potencial de acción compuesto a temperatura
ambiente del nervio ciático de rana es de 0.7 mS.
 El potencial de acción del nervio ciático de rana depende del número y grosor
de los axones de lo conforman.
 A mayor intensidad de estímulo menor duración de la propagación.
 El potencial de acción depende de la intensidad del estímulo.
 Existe una suma de potenciales de acción para generar un potencial de
acción compuesto.

BIBLIOGRAFÍA.

• Berne y Levy.” Fisiología “. 6ta edición. Editorial Elsevier Págs. 67-76

• Boron y Boulpaep. “Fisiología medica”. Editorial Elsevier. Págs. 204-215.