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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS


BIOLÓGICAS

Químico Farmacéutico Industrial


Laboratorio de Fisiología Celular

Grupo: 4FV1
Profesores:
De la Cruz López Fidel
Garcés Ramírez Linda
Rojas Franco Placido
Integrantes del Equipo 3:
 Becerro Teco Ernesto
 Clavel Mosso Said
 Nava Peña Rodrigo M.

“Practica 6. Potencial de acción compuesto”


Introducción.
La función principal de las fibras nerviosas es la conducción del impulso nervioso
(potencial de acción). En el caso de la fibras sensoriales (aferentes) el potencial de
acción es generado en la terminal nerviosa periférica y es conducido hacia la
terminal nerviosa central. El potencial de acción en las fibras motoras (eferentes)
es generado en el cono axónico y es conducido hacia la periferia hasta su efector.
Conducción ortodrómica significa la conducción del impulso nervioso en la
dirección adecuada. La conducción antidrómica significa lo opuesto. Los nervios
periféricos están constituidos por un grupo heterogéneo de fibras nerviosas. La
heterogeneidad de las fibras nerviosas se debe tanto a sus características
geométricas (diámetro), histológicas (presencia o ausencia de mielina),
pertenencia (somáticas o autónomas), funcionales (sensoriales o motoras).
También son heterogéneas en cuanto a propiedades de excitabilidad como sería
la magnitud del estímulo umbral y la duración de su período refractario, tanto
absoluto como relativo. Considerando todas estas características las fibras
nerviosas pueden ser clasificadas de diversas maneras. La clasificación más
general las clasifica como A (alfa, beta, gamma y delta), B y C. Otra clasificación,
la cual es utilizada principalmente para fibras sensoriales musculares, las clasifica
en fibras tipo Ia y Ib, II, III y IV. Independientemente del tipo de fibra nerviosa, la
generación y la conducción del potencial de acción tiene los mismos principios. La
generación del potencial de acción es debida a un potencial electrotónico
producido ya sea por actividad sináptica o por el estímulo aplicado directamente
sobre la terminal nerviosa, libre en muchos casos, o asociada a una estructura con
características específicas. Este potencial electrotónico activa canales iónicos
operados por voltaje generando corrientes catiónicas entrantes y salientes que se
propagan a través y a lo largo de la membrana (axolema) y de los líquidos
intersticial e intracelular (axoplasma). Los responsables de las corrientes iónicas
son canales de sodio y de potasio operados por voltaje que se activan de manera
secuencial, produciendo corrientes iónicas que dan lugar al cambio transitorio del
potencial de membrana conocido como potencial de acción, el cual una vez
producido, con características todo o nada, se propaga a lo largo de la fibra
nerviosa activando automáticamente a los canales iónicos, influidos por el campo
eléctrico del mismo potencial de acción. El potencial de acción es conducido tanto
activamente como pasivamente, la conducción pasiva se realiza en segmentos de
membrana que carecen de canales iónicos operados por voltaje, en la conducción
pasiva intervienen los canales iónicos. Cuando un nervio es dispuesto sobre
electrodos de registro y se aplica un estímulo de magnitud suficiente, es posible
registrar la suma (por sumación espacial) de los potenciales de acción de todas
las fibras que lo constituyen (potencial de acción compuesto). El registro obtenido
de esta manera (electroneurograma) muestra diversos componentes que
corresponden a los diferentes tipos de fibras que constituyen al nervio y que son
separados en base al estímulo umbral y en base a la latencia relativa (debido a su
diferente velocidad de conducción) con que aparecen. Además de investigar el
tipo de fibras que constituyen al nervio, este modelo es útil para ilustrar conceptos
fisiológicos relacionados con las propiedades de excitabilidad de las fibras
nerviosas y de otros tejidos excitables, investigar el efecto de fármacos y
xenobióticos sobre la conducción nerviosa, estudios sobre regeneración y
enfermedades degenerativas (desmielinizantes), etc.

Objetivos.
Medir la respuesta eléctrica de un nervio completo.
Determinar las propiedades de conducción de las fibras que componen a un
nervio.
Determinar el valor de estímulo umbral y estímulo máximo del nervio ciático de
rana toro, utilizando el equipo Biopac.
Determinar la velocidad de propagación del estímulo eléctrico a través del nervio a
diferentes temperaturas, utilizando el programa Biopac.
Determinar el tiempo interestímulo necesario para producir una suma temporal
entre dos estímulos subumbrales.
Determinar el periodo refractario para una población de fibras nerviosas.

Fundamento.
Usando por primera vez el osciloscopio de rayos catódicos como un aparato
indicador, Gasser y Erlanger (1922) pudieron registrar varios picos en el potencial
de acción registrado del nervio ciático de rana. Ellos correlacionaron esos
componentes con las fibras de diámetros diferentes que forman el nervio y
correctamente supusieron que los potenciales de acción generados por las fibras
individuales se suman para dar el potencial de acción compuesto, cuya forma es
regular si la distancia entre los electrodos de estimulación y de registro es corta.
En cambio, si la distancia es grande, el potencial de acción se separa en los
diferentes componentes que corresponden a las fibras con diferentes velocidades
de conducción. Podríamos comparar este potencial de acción con los corredores
en una carrera, que forman un grupo compacto inmediatamente después del inicio
y, debido a sus diferentes velocidades, se separan en grupos conforme aumenta
la distancia.
Es posible registrar el potencial de acción con un microelectrodo sin penetrar en el
axón, colocando dos electrodos separados sobre su superficie y comparando la
carga eléctrica en cada punto. Un electrodo localizado en un punto en el que
existe un potencial de acción será negativo en comparación con el electrodo en el
que no exista un potencial de acción. Conforme se conduce el potencial de acción
hacia el segundo electrodo, la polaridad del registro se invierte. Esta técnica se
utiliza en clínica para valorar la función nerviosa. Los nervios perifericos y muchas
vías centrales contienen una población de axones de diversos diámetros, algunos
mielinizados y otros amielínicos. En consecuencia, los potenciales de acción
circulan a distinta velocidad por los axones individuales, y por esto el registro de
este nervio con un electrodo externo no muestra único sincronico, sino que
presenta una serie de picos que varian en cuanto a su duración (según la
velocidad de conducción de los grupos de axones ) y tamaño (según el numero de
axones dentro de cada grupo de velocidad). Esto se denomina potencial de acción
compuesto, y su forma concreta es característica de la población de axones de
cada nervio. La utilidad clínica de estos registros radica en que permiten mostrar la
disfunción de un grupo concreto de axones asociados con una función específica
en determinados estados patológicos y, además, se trata de una técnica no
invasiva que se puede realizar con electrodos sobre la superficie de la piel.

Período refractario
En 1899 Francis Gotch (1853-1913) y Burchen demostraron que cuando dos
estímulos separados por un intervalo menor de aproximadamente 8 mseg
(dependiendo de la temperatura) eran aplicados al nervio, el segundo estímulo no
producía una perturbación propagada. Esto significaba que inmediatamente
después del estado excitado el nervio se encontraba inexcitable y Adrian y Lucas
(1912) estudiaron con cuidado éste fenómeno usando el músculo como indicador.
Ellos demostraron que durante los primeros 25 mseg después de un estímulo el
nervio no puede ser excitado por otro estímulo de cualquier intensidad (período
refractario absoluto), pero que desde ese momento hasta aproximadamente 12
mseg la excitabilidad del nervio era menor que la normal, pero aumentaba
gradualmente (período refractario relativo) y después, hasta aproximadamente 28
mseg, había un periodo de excitabilidad aumentada (período supernormal).
Posteriormente el nervio regresaba a su estado de excitabilidad antes del primer
estímulo.
Características todo-o-nada
Los experimentos de Keith Lucas en 1909 habían demostrado que al variar la
intensidad del estímulo excitatorio aplicado al nervio ciático se obtenían diferentes
grados de contracción en el músculo y que estos no eran tan numerosos como los
grados de intensidad del estímulo; además, las contracciones ocurrían en
escalones menos numerosos que el número de fibras motoras. Estos resultados
fueron considerados como una indicación de que los diferentes grados de
contracción eran debidos solamente al número de fibras musculares
contrayéndose; en otras palabras, cada fibra nerviosa o muscular podía ser
excitada a su máxima capacidad o no serlo.
Ese hecho ya había sido observado en 1871 por H.P. Bowditch (1840-1911)
estimulando directamente el corazón y la posibilidad de que el fenómeno también
pudiera ser aplicado al nervio había sido discutida en 1902 por Francis Gotch
(1853-1913). Sin embargo, la demostración del caracter todo-o-nada de la
excitación propagada fue obtenida por Adrian (1914), quien pudo demostrar que
después de pasar una regíon anestesiada del nervio ciático, el potencial de acción
recuperaba su máxima amplitud cuando entraba a un área normal.

Metodología.

1. Coloque el módulo MP36 (Biopac) en la parte


superior de su mesa de laboratorio,
I. Montaje del equipo de estimulación y de
conéctelo a la corriente y a la computadora con
registro
el cable USB.
El electrodo de estimulación sirve para aplicar
2. Realice una inspección rápida al módulo
estímulos eléctricos al nervio y debe
MP36, ubique el canal 2 (CH2) en la parte
colocarse en un extremo de la cámara de nervio
delantera y “Analog out” en la parte trasera del
aislado, el electrodo de estimulación
equipo. Es muy importante anticipar que
mide los cambios de voltaje que se dan en el
no debe haber conexión alguna en el canal 1
nervio en respuesta a la aplicación de
(CH1).
estímulos, éste debe colocarse en el otro extremo
3. Encienda la computadora pero no encienda el
de la cámara de nervio aislado.
Biopac.
4. Guíese con la Figura 10 para hacer las
siguientes conexiones:

a) Electrodos bipolares de registro. b) Electrodos bipolares de estimulación.


5. Conecte el cable SS2L al canal 2 (CH2) del 7. Identifique el cable DB9H y conéctelo a “Analog out” del
Biopac (MP36). Biopac.
6. Conecte el terminal rojo Vin(+) del SS2L a la 8. Conecte el terminal rojo St(+) del DB9H a la banda
última banda metálica de la cámara de metálica más externa de la
nervio aislado y conecte el terminal blanco Vin(-) cámara de nervio aislado (al extremo opuesto de donde
del SS2L a la penúltima banda conectó los terminales del
metálica de la cámara. Esto puede moverse SS2L).
después, de acuerdo a la longitud del
nervio disecado. 9. Conecte el terminal negro St(-) del DB9H al cable negro
(GND) del SS2L y conecte
éste último a la banda metálica siguiente de la cámara de
nervio aislado.
10. Encienda el Biopac.

c) Prueba de montaje correcto. 13. Coloque el hilo húmedo en la cámara de


11. Humedezca un trozo de hilo grueso en nervio aislado y aplique un estímulo de
solución Ringer. 0.050 V (50 mV) dando clic en la pestaña inicio
(en la esquina inferior derecha). Debe
12. Abra el archivo PAC-Ciatico-01.gtl, el cual observar el estímulo en el canal 1 y el artefacto
tiene los parámetros de calibración para del estímulo en el canal 2.
el Biopac. Observe que en la parte superior de 14. Si no observa el artefacto, aumente la
la pantalla aparece un rectángulo rojo intensidad del estímulo en intervalos de 0.050
con varios parámetros de estimulación: V, hasta que pueda observarlo.
encendido y apagado, frecuencia, voltaje,
duración y número de pulsos o estímulos y canal 15. Retire el hilo de la cámara y proceda a hacer
de referencia. La señal del la disección del nervio ciático.
estimulador se verá en el canal 1 (CH1) y la
señal de registro en el canal 2 (CH2).
II. Montaje de la preparación de nervio ciático 5. Amarre un trozo de hilo alrededor del nervio
aislado de rana toro. tan cerca de la médula espinal como sea
3. Corte la piel de una de las patas posteriores y posible. Con unas tijeras finas separe el nervio
remuévala hasta descubrir de la médula, de manera que quede
completamente la extremidad. Separe sujeto con el hilo.
cuidadosamente los músculos en la cara 6. Con ayuda de los disectores de vidrio, separe
posterior del muslo y localice el nervio ciático cuidadosamente el nervio, hasta liberar
una porción de 8 a 10 cm.
4. Sin tocar el nervio con objetos metálicos, 7. Coloque el nervio extendido sobre las bandas
descúbralo en ambos sentidos hasta la metálicas de la cámara de nervio
médula espinal por un lado y hasta el extremo aislado y mueva los electrodos de acuerdo a la
distal del fémur por el otro. Corte los longitud del nervio.
músculos que sea necesario.

III. Determinaciones prácticas 1. Abra el archivo PAC-Ciatico-01.gtl, note que


a) Estímulos umbral y máximo la duración del estímulo está fija (0.2
El potencial de acción compuesto requiere una mseg) y considere que para grabar sus registros
cantidad mínima de carga para ser debe cambiar el nombre del archivo
generado pero, a diferencia del potencial de cada vez que haga un cambio.
acción simple, su amplitud aumenta al 2. Aplique un estímulo inicial de 0.050 V (50 mV)
incrementar la magnitud de la estimulación. Esta y observe. Si no hay PAC, aumente
tendencia tiene un límite, y se conoce gradualmente la magnitud del estímulo (a
como estímulo máximo al valor de estimulación intervalos de 0.050 V) hasta que se aprecie la
que induce la máxima amplitud de más leve respuesta del nervio. Este es el
respuesta de un nervio. estímulo umbral.

3. Siga aumentando el voltaje del estímulo,


observe cómo aumenta gradualmente la
b) Velocidad de conducción
amplitud del PAC.
4. Encuentre las características del estímulo 1. Aplique un estímulo de intensidad intermedia
(voltaje y duración) en las que el PAC deja entre el umbral y el máximo. Mida el
de aumentar su amplitud, aunque se siga intervalo que separa el inicio del estímulo del
incrementando el voltaje del estímulo. Éste es inicio del PAC (latencia).
el estímulo máximo.

2. Mida la separación entre el electrodo de


c) Suma temporal
estimulación y el electrodo de registro que
1. Abra el archivo PAC-Ciatico-02.gtl. En este
estén más próximos entre sí en la cámara de
caso se aplican dos estímulos
nervio aislado. Con estos valores calcule
subumbrales con un tiempo de retardo
la velocidad de conducción del nervio (m/s).
determinado entre uno y otro.
3. Repita la operación después de poner unas
2. Aplique estímulos con voltaje ligeramente
gotas de Ringer frío sobre el nervio
menor al del estímulo umbral y con un
ciático.
tiempo de retardo de 25 ms. Observe.
d) Período refractario
3. Repita la experiencia reduciendo el tiempo 1. Abra nuevamente PAC-Ciatico-02.gtl y
interestímulo paulatinamente hasta que aplique estímulos con un voltaje ligeramente
observe un PAC. Este tiempo es el necesario superior al umbral y un tiempo interestímulo de
para que se sumen los potenciales 30 ms. Deben observarse 2 PACs
locales producidos por los estímulos similares en amplitud y duración.
subumbrales. 2. Reduzca gradualmente el tiempo de retardo
Tiempo interestímulo para producir un PAC del segundo estímulo, observando
perceptible: _________________ ms. atentamente la respuesta al segundo estímulo,
4. Ahora reduzca el tiempo interestímulo un hasta que se aprecie una leve reducción
poco más y observe lo que sucede.

e) Curva intensidad-duración
1. Abra la plantilla PAC-Ciatico-03.gtl y ajuste el
voltaje del estímulo ligeramente por
4. Siga reduciendo el tiempo interestímulo, hasta arriba del valor umbral, de modo que el PAC
que la respuesta al segundo estímulo tenga una forma bien definida. Registre las
desaparezca por completo. características del estímulo y mida la amplitud y
duración del PAC.
2. Reduzca el voltaje del estímulo en una
décima parte y aumente su duración hasta
que la respuesta del nervio (PAC) tenga
características parecidas a las que midió
inicialmente. Registre nuevamente la duración y
la magnitud del estímulo.
3. Reduzca nuevamente el voltaje del estímulo y ajuste la duración para tener la
misma
forma (amplitud y duración) del PAC. Registre el nuevo par de valores.
4. Repita el proceso hasta que el estímulo se haya reducido a un punto en el que no
logre generar un PAC aun aumentando la duración (o hasta valor máximo permitido
por
el equipo).
8. Repita el proceso, pero ahora aumente el voltaje y reduzca la duración del
estímulo

Resultados.
Grafica 1. Respuesta umbral del nervio ciático de rana aplicando un estímulo
de 0.230 mV y una duración de 0.2 ms. El potencial de acción compuesto requiere
una cantidad mínima de carga para ser generado.

Grafica 2. Respuesta máxima del nervio ciático de rana aplicando un


estímulo de 0.500 mV y 0.2 ms. Se diferencia del potencial de acción simple, su
amplitud aumenta al incrementar la magnitud de la estimulación. Esta tendencia tiene
un límite, y se conoce como estímulo máximo al valor de estimulación que induce la
máxima amplitud de respuesta de un nervio.

Gráfica 3. Velocidad de conducción del nervio ciático de rana aplicando un


estímulo medio de 0.300 mV a una temperatura ambiente de 22°C. La
velocidad de conducción es de 0.7000 ms.
Puesto que los electrodos de registro están situados a cierta distancia de los de
estimulación, la señal eléctrica toma cierto tiempo en llegar desde su punto de origen
hasta donde es registrada, y la duración de este periodo (llamado latencia) depende
de la velocidad con la que el nervio conduce los impulsos.

Gráfica 4. Velocidad de conducción del nervio ciático de rana aplicando un


estímulo medio de 0.300 mV a una temperatura ambiente de 9°C. La
velocidad de conducción es de 1.900 ms.

Gráfica 5. Suma temporal de dos estímulos subumbrales (amplitud 0.1000


mV) con un tiempo interestímulo de 25 ms. No se observa la generación de
un PAC.
Gráfica 6. Suma temporal de dos estímulos subumbrales (amplitud 0.1000
mV) con un tiempo interestímulo de 0.70 ms. Se observa la generación de un
PAC. Este tiempo es el necesario para que se sumen los potenciales locales
producidos por los estímulos subumbrales.

Gráfica 7.. Periodo refractario. Dos estímulos aplicados al nervio ciático de


rana con un valor ligeramente superior al valor umbral, este valor fue de
0.300 v con un retardo entre los dos estímulos de 0.35 ms. Donde se observa
que ambas respuestas son similares en amplitud y forma.
Disminución del retardo en el segundo estimulo, en un retardo entre los dos
estímulos de 0.20 ms, se observa una disminución de la respuesta del
segundo estimulo.

Discusión.

Las fibras que forman un nervio son de diámetro diferentes y generan potenciales
de acción individuales que se suman para dar un potencial de acción compuesto.
Se utilizo un nervio ciático de rana ya que está formado por varios axones de
distinto diámetro, tanto motoras como sensitivas y tienen diferente velocidad de
conducción. El programa Biopac permitió visualizar y cuantificar tanto los
parámetros de la estimulación nerviosa como los parámetros en tiempo y voltaje
de la respuesta.
Se llevaron a cabo diferentes pruebas para observar las características y
propiedades de un potencial de acción del nervio ciático de rana. Se determino el
estimulo umbral con una intensidad de 0.230mV, en este caso la única que genera
un PAC es la fibra más excitable. Además, un estímulo máximo de intensidad
0.500 mV, a diferencia del umbral en este caso todas las fibras presentes en el
nervio responden al estímulo.
Además, como se observa en los periodos refractarios, se encontró que después
de 0.20 mS desaparece el segundo estimulo.
Se utilizo solución de ringer a temperatura ambiente y a temperatura baja para
determinar la velocidad del potencial de acción compuesto, midiendo la latencia en
donde se observa

Que la solución ringer fría disminuye la velocidad de conducción del potencial


pues disminuye la cinética de los canales iónicos.

Suma y facilitación
Adrian y Lucas (1912) mostraron que hay una forma de aumento de la
excitabilidad que ocurre solamente en el punto donde se aplica un estímulo, lo que
puede demostrarse aplicando dos estímulos inadecuados (debemos entender
subumbrales) y si el segundo sigue al primero por aproximadamente 0.8 ms, se
produce una perturbación propagada. De esto es claro que el primer estímulo no
fue efectivo para producir la perturbación propagada, pero dejó atrás una
alteración de cierto tipo que persistió por un tiempo medible y que se añadió a la
producida por el segundo estímulo. Estas observaciones fueron premonitorias de
las respuestas graduadas, subumbrales, no propagadas, que Katz demostraría en
los 1930's siguiendo una técnica semejante y que Hodgkin registraría directamente
poco tiempo después.

Conclusión.

El potencial de acción compuesto es la suma de varios potenciales de acción


individuales.
El potencial de acción compuesto no implica la ley del todo o nada.
En el registro de un PAC pueden aparecer picos por las diferentes velocidades de
conducción de las fibras.
La velocidad de conducción del potencial de acción compuesto a temperatura
ambiente del nervio ciático de rana es de 0.7 mS.
El potencial de acción del nervio ciático de rana depende del numero y grosor de
los axones de lo conforman.
A mayor intensidad de estímulo menor duración de la propagación.
El potencial de acción depende de la intensidad del estímulo.
Existe una suma de potenciales de acción para generar un potencial de acción
compuesto.

Referencias.

• Berne y Levy.” Fisiología “. 6ta edición. Editorial Elsevier Págs. 67-76


• Boron y Boulpaep. “Fisiología medica”. Editorial Elsevier. Págs. 204-215.