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1. OBJETIVO

Definir los lineamientos técnicos para la estimación de incertidumbre de los métodos de

ensayo realizados por Ambitest S.A.S

2. ALCANCE

El presente procedimiento aplica a los métodos de ensayo verificado y objeto de acreditación

del laboratorio.

3. RESPONSABLES

El personal designado por el laboratorio para la estimación de la incertidumbre en referencia

a la presente guía es:

- Coordinador técnico
- Analistas

4. DEFINICIONES

4.1 Incertidumbre de medida: Es un parámetro asociado al resultado de una medición,

que caracteriza la dispersión de los valores que puedan atribuirse razonablemente al
mesurando.
4.2 Mesurando: Es la magnitud particular objeto de una medición, en análisis químico
corresponde a la concentración de un analito.
4.3 Incertidumbre Combinada U c : Es una estimación de la desviación estándar igual a la
raíz de la varianza total obtenida por combinación de todos los componentes de la
incertidumbre.
4.4 Incertidumbre Expandida U : Proporciona el intervalo en el cual el valor de la medida
se encontrará con un alto nivel de confianza. Se obtiene por la multiplicación de las
incertidumbres estándar combinadas por un factor de cubrimiento. El factor es basado en el
nivel de confianza deseado. Para un nivel de confianza del 95%, k es 2 (valor crítico de t para
el análisis de más de seis datos).

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5. ESTIMACION DE INCERTIDUMBRE EN METODOS DE ENSAYOS

FISICOQUIMICOS

5.1 IDENTIFICACIÓN DE LAS FUENTES

El desarrollo de una metodología involucra varias posibles fuentes de incertidumbre, que

pueden incluir muestreo, condiciones de almacenamiento, efectos de matriz, condiciones
ambientales determinaciones de peso, equipo volumétrico, pureza de reactivos,
estequiometria, verificación y otras aproximaciones incorporadas en el método de medición,
procedimiento y mesurando definido.

Las posibles fuentes son, pero no se limitan a:

 Efectos de temperatura
 Errores de pesaje
 Mediciones de pipetas
 Aforo de balones
 Mediciones de buretas
 Pureza de los reactivos
 Lectura en el equipo
 Concentración del patrón
 Precisión
 Heterogeneidad de la muestra

5.2. CÁLCULO DE LA INCERTIDUMBRE DEBIDA A OPERACIONES BÁSICAS

5.2.1 Muestreo

Existen varios tipos de métodos que son aplicables para la estimación de la incertidumbre
utilizando el enfoque empírico algunos de ellos son: El método duplicado (#1). Si un
muestreador usa varios protocolos de muestreo en el Método #2, se puede detectar cualquier
sesgo entre los protocolos. Si varios muestreadores aplican un único protocolo (Método #3,
que es equivalente a un ensayo colaborativo en muestreo: CTS o ensayo de desempeño del
método), entonces se puede detectar el sesgo entre diferentes muestreadores e incluirlo en
la estimación de la incertidumbre. Este modelo de efectos aleatorios considera una medición
de la concentración del analito (x), de muestras por duplicado, el método 1 es utilizado para
la estimación de la incertidumbre, se realizó duplicado de una muestra tomada en un mismo
punto, con un mismo protocolo, por dos analistas, para una total de ocho muestras. Se

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calcula la desviación estándar de las medidas dividido en la raíz cuadrada del número de
s
medidas: Um=
√n

5.2.2. Incertidumbre estándar de la Reproducibilidad de la medición

Este aporte se debe al procesamiento de blancos fortificados de laboratorio (estándar alto y

bajo) y diferente analista, se calcula la desviación estándar de las medidas dividido en la raíz
cuadrada del número de medidas:

s
Ur=
√n

5.2.1.1 Cuadrado de la incertidumbre estándar de la reproducibilidad de la

medición
El cuadrado de la incertidumbre estándar corresponde al cuadrado de la incertidumbre
estándar dividido en la concentración del estándar.
2
2 Ur
U A =( )
Con. std

5.2.2. LECTURA EN EL EQUIPO

5.2.2.1. Incertidumbre estándar Espectrofotómetro

 La incertidumbre estándar del espectrofotómetro, aparece reportada en el
certificado de calibración del equipo, para cada una de las lecturas de absorbancia. Se
define como la incertidumbre combinada (µ) del equipo dividido en el factor de
cobertura k=2.

μ
U a=
k

 Cuadrado de la incertidumbre estándar espectrofotómetro

El cuadrado de la incertidumbre estándar corresponde al cuadrado de la incertidumbre
estándar dividido en la longitud de onda.

2 Ua
U a =( )
λ

 Incertidumbre estándar de la resolución espectrofotómetro

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La incertidumbre estándar de la resolución está definida como la división de la resolución del

equipo en la raíz de seis.
Resolucion
U b=
√6

 Cuadrado de la incertidumbre estándar de la resolución

El cuadrado de la incertidumbre se expresa como:
2 2
U b =U b

5.2.2.2. Incertidumbre estándar de la balanza

 Esta contribución se obtiene a partir de la incertidumbre (µ) del certificado de

calibración entregado por el proveedor del servicio. Se divide por factor de cobertura
2,2 establecido por proveedor con un nivel de confianza del 95% con una distribución
normal.
μ
U c=
2.2
 Cuadrado de la incertidumbre estándar de la balanza
El cuadrado de la incertidumbre se expresa como:
2 2
U c =U c

 Incertidumbre estándar de la resolución balanza

La incertidumbre estándar de la resolución está definida como la división de la resolución del
equipo en la raíz de seis.
Resolucion
Ud=
√6

 Cuadrado de la incertidumbre estándar de la resolución

El cuadrado de la incertidumbre se expresa como:
2 2
U d =U d

5.2.2.3. Sumatoria de la Incertidumbre de los equipos (U 2)

La sumatoria incertidumbre de los equipos corresponde a la suma de los cuadrados U a2, Ub2,
Uc2 y Ud2.
U B2=U a2 +U b2 +U c 2 + U d2

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5.2.3. INCERTIDUMBRE CURVA DE CALIBRACIÓN

 Desviación estándar residual: Se determina los valores de la ecuación de la recta
y=mx + b, se determina la desviación estándar residual (S y/x) expresada como:

√
S y / x=
 Desviación estándar x: la cual está dada por:
∑ ( y−Y )2
n−2

S xx =∑ ¿ ¿
 Desviación estándar curva de calibración
Se calcula la contribución a la incertidumbre de la curva de calibración, definida como:
Sy
x
U e= ¿
Pendiente
 Cuadrado de la incertidumbre estándar curva de calibración
El cuadrado de la incertidumbre se expresa como:
2 2
U C =U e
5.2.4. INCERTIDUMBRE REACTIVO
Este tipo de contribución se obtiene a partir de la información de pureza indicada en la
etiqueta del reactivo. ( X  µ) o en los certificados de análisis correspondientes.

 Incertidumbre estándar de la pureza del reactivo

El valor de su pureza y su incertidumbre normalmente vienen expresados en porcentaje, por
lo tanto, se deben dividir entre 100 antes de calcular la incertidumbre estándar.

μ
U f=
√3
Se asume √ 3 para la distribución rectangular, cuando no se especifica el intervalo de
confianza ni la forma o simetría de la distribución (Guía Eurachem).

 Cuadrado de la incertidumbre estándar relativa para la pureza

Con el valor nominal de la pureza, calculamos la (Incertidumbre Estándar Relativa), la que
corresponde a la relación entre la incertidumbre combinada y la pureza, así:

Uf
U D2=
Pureza

5.2.5. MEDICIÓN DEL VOLUMEN

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 Incertidumbre estándar de la micropipeta para la toma de alícuota

(estándar, muestra o blanco).
Esta incertidumbre se obtiene del valor µ indicado en el material volumétrico o en el
certificado de calibración.

μ
U g=
√6
 Cuadrado de la incertidumbre estándar micropipeta
El cuadrado de la incertidumbre se expresa como:
2 2
U g =U g

 Incertidumbre estándar efecto de la temperatura del material volumétrico

Esta contribución se obtiene a partir de una variación estimada en la temperatura de 3°C del
coeficiente de expansión de volumen para el agua 2,1 ¿ 10−4°C y el volumen del material
volumétrico utilizado para la medición de la muestra ( x ). Se asume 3 °C, como una variación
normal en un laboratorio, que debe mantener la temperatura de sus ensayos prácticamente
constante.
[ x × 0.00021 ]
Uh=
√3
 Cuadrado de la incertidumbre estándar curva de calibración
El cuadrado de la incertidumbre se expresa como:

U h2=U h2

 Suma cuadrados Incertidumbre estándar medición volumen

La incertidumbre combinada de la dilución del reactivo corresponde a la raíz cuadrada de la
suma de los cuadrados de u10 a u12

U E =( ug +u h)
2 2 2

5.2.6. INCERTIDUMBRE COMBINADA

Calculamos la incertidumbre combinada sumando todos las U2 y aplicamos raíz:

√
U Combinada= ( U A +U B +U C +U D +U E +U m )
2 2 2 2 2 2

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5.2.7. INCERTIDUMBRE EXPANDIDA

De acuerdo a la definición de la incertidumbre expandida obtenemos:

Uexpandida=2× U Combinada

Donde 2 corresponde al factor k de cobertura, de acuerdo al nivel de confianza del 95%.

6. ESTIMACION DE INCERTIDUMBRE EN METODOS DE ENSAYOS

MICROBIOLOGICOS

En los ensayos microbiológicos la incertidumbre se estima combinando la desviación estándar

Repetibilidad (Sr) y Reproductibilidad (SR) de los ensayos.

Uc = Incertidumbre combinada
Ue = Incertidumbre expandida

6.1 IDENTIFICACIÓN DE FUENTES

Se identifican las posibles fuentes de incertidumbre que pueden afectar el resultado de un

ensayo.

 Calibración de la balanza
 Medición de pipeta
 Volumen de las muestras
 Temperatura de la incubación
 Tiempo de incubación
 Cepas de referencia
 Bolsas de Quanti tray

6.2 Calculo de incertidumbre estándar relativa a la repetibilidad (IERr)

Transformamos los resultados del recuento a log en base 10. Se le calcula:

6.2.1 Promedio
Se calcula sumando todos los datos transformados entre el número de datos totales.

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6.2.2 Desviación estándar y Repetibilidad (Sr)

 Se obtiene la media.
 Calcula el cuadrado de la distancia a la media para cada dato.
 Sumar los valores que resultaron del paso anterior.
 Dividir entre el número de datos.
 Sacar la raíz cuadrada.

Donde.
X= Variable
Xi= Observación de la variable
x̄= Media
N= Numero de observaciones

6.2.3. Porcentaje de la desviación estándar relativa (%RDS)

Se calcula teniendo el valor de la desviación estándar entre el promedio por 100.

Desviancion estandar
%RDS= ∗100
Promedio

6.2.4. Incertidumbre expandida relativa (IER)

La incertidumbre expandida relativa se obtiene a partir del valor de la repetibilidad entre el
promedio.

Sr
IER=
Promedio

6.3 Calculo de incertidumbre estándar relativa a la Reproducibilidad (IERR)

Teniendo el conteo de los dos días, transformamos los resultados a log en base 10. Se
calcula:

6.3.1 Varianza.
 Se obtiene la media.
 Calcula el cuadrado de la distancia a la media para cada dato.

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 Sumar los valores que resultaron del paso anterior.

 Dividir entre el número de datos.

Donde:
X= Variable
Xi= Observación de la variable
x̄= Media
n= Numero de observaciones

6.3.2 Promedio
Se calcula sumando todos los resultados del conteo ya transformados entre el número de
datos.

6.3.2. Varianza (VAR)

Se suman todos los datos de la varianza y se divide por el número de datos.

6.3.3 SR (Precisión intermedia)

Se calcula por la raíz de la sumatoria de la varianzas.

SR=√∑ (VAR )

6.3.4 Incertidumbre expandida relativa (IER)

La incertidumbre expandida relativa se obtiene a partir del valor de la repetibilidad entre el
promedio.

SR
IER=
Promedio

6.4 Incertidumbre combinada (Uc)

Calculamos la incertidumbre combinada total sumando todos las IER elevados al cuadrado y
aplicamos raíz:

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U c = √ ( Sr +SR )
2 2

6.5 Incertidumbre expandida (Ue)

Calculamos la incertidumbre expandida total multiplicando la incertidumbre combinada por k

Ue= Uc * K
donde K=2

6. DOCUMENTOS ASOCIADOS

No Aplica
7. ANEXOS

ANEXO 1. INCERTIDUMBRE TABLA PERIODICA

8. BIBLIOGRAFIA

EURACHEM/CITAC Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Sec GUM, 2008.

Guía para la expresión de la incertidumbre de medida, evaluación de datos de medición,
JCGM 100:2008, tercera edición.

EURACHEM/CITAC Guide Incertidumbre de medición derivada del muestreo. Una guía de

métodos y enfoques. Segunda edición inglesa 2019. Primera edición española 2021.
Producida conjuntamente con Eurolab, Nordtest, y SC Analytical Methods Committee.

9. CONTROL DE CAMBIOS

REVISIÓ FECHA
DESCRIPCIÓN DEL CAMBIO
N (aa/mm/dd)
0 Elaboración del documento y emisión inicial. 30/06/2010
1 Se adaptó el documento al diseño aprobado por el laboratorio 23/09/2014
2 Se adaptó el documento al nuevo diseño aprobado por el laboratorio 2016/01/08
modificando código, logo, formato de fecha y márgenes. Se modificó

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numeración del procedimiento.

3 Actualización ítem 1, 2 y 3 2020/06/26
Se modifico el procedimiento de cálculo de la incertidumbre y se
4 2021/03/23
identificaron las fuentes de incertidumbre para microbiología
Se agrego el procedimiento para la estimación de la incertidumbre
5 2021/08/27
del muestreo.

10. APROBACIONES
Elaborado por: Jeimy Revisado por: Janeth Aprobado por: Favio
Aguillon Pacheco Rojas
Cargo: Coordinadora Técnica Cargo: Coordinadora Calidad Cargo: Gerente

Firma: ________________
Firma: Firma:___________________
___________________ _

Fecha: 2021/08/27 Fecha: 2021/08/27 Fecha: 2021/08/27

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