Columnas de HPLC XBridge™

[ 1 ]
Versatilidad y rendimiento inigualables
La familia de columnas de HPLC XBridge™ está diseñada para obtener la máxima flexibilidad en

el desarrollo de métodos de HPLC. Se pueden desarrollar separaciones robustas en menos tiempo

y con mayor confianza, permitiendo que los usuarios de sistemas cromatográficos aprovechen

plenamente la potencia del pH. Combinando vanguardistas procesos de enlazado, “endcapping”

y síntesis de partículas con una fabricación y calidad que lideran el sector, las columnas XBridge

constituyen la solución de confianza para las separaciones cromatográficas más exigentes.

■ Flexibilidad para funcionar a lo largo de un rango de pH y temperaturas de fase
móvil sin precedentes

■ Transferencia perfecta de métodos a la tecnología UltraPerformance LC®.

■ Incomparable vida útil de la columna.

Tecnología BEH

Introducida por primera vez en 1999 a través de la familia XTerra ® de columnas de HPLC, la tecnología de partículas híbridas (HPT, siglas inglesas)* orgánicas/inorgánicas, patentada por Waters,

superó significativas limitaciones de los materiales de relleno de fase reversa con base de sílice: en especial la inestabilidad hidrolítica a pH alto. La HPT de segunda generación, llamada BEH

Technology™, incorporada tanto en las columnas ACQUITY UPLC® BEH como en las columnas de HPLC XBridge, marca un nuevo hito en la cromatografía. Finalmente se puede utilizar toda la potencia

del pH en el desarrollo sistemático de métodos para LC.

*Patentes de los EE.UU. 6.686.035; 7.223.473; 7.250.214.

Sínt esis de pa rt ículas pa ra la t ecnología BEH

En la síntesis de partículas BEH, el monómero bis (trietoxisilil) etano contiene

un puente de etileno en su estructura. Este puente de etileno imparte
a la estructura de la partícula de sílice la resistencia a la disolución
a pH elevado que tienen los polímeros, sin sacrificar en absoluto
la integridad estructural ni la eficacia de la partícula de sílice.

E tO CH 2 CH 2 OE t OE t
Si Si O Si O Et E tO OEt
EtO
O O 4 E tO Si CH 2 Si(OH)4
O
EtO
Si
OEt
+ CH 2 Si OEt
Si Si O Si O Et EtO EtO OEt -
O 3OH
E tO OE t OEt
n
Polietoxisilano Tetraetoxisilano Bis(trietoxisilil)etano O O OH O OH OH O O OH OH

(BPEOS) (TEOS) (BTEE) O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O

O O O O O O O O O O

Anal. Chem. 2003, 75, 6781-6788 Disolución de pa rt ículas a pH el evado

O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O

O O O O O O O O O O

Núcleo

Partícula de sílice Partícula XBridge

Si(OH)4

-
3OH

O O OH O OH OH O O OH OH OH OH OH OH OH CH2 CH2 O OH OH

O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si Si Si Si Si Si Si Si Si Si
O O O O O O O O O O O

CH2 CH2
O O O O O O O O O O O O O O O O O O
CH2 CH2

O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si Si Si Si Si Si Si Si Si Si
O O O O O O O O O O O

O O O O O O O O O O CH2 CH2 O O O O O O O O

Núcleo Núcleo

OH OH OH OH OH CH2 CH2 O OH OH

O Si O Si O
■Si Sólo
O Si hay
O
que
Si O
hidrolizar
Si O Si 4 enlaces.
O Si O Si O Si O
■ Hay que hidrolizar hasta 6 enlaces.
CH2 CH2
O O O O O O O O
■ Si(OH)4
CH tiene una elevada solubilidad
2 CH en el agua. 2 ■ Hidrófoba, menos reactiva que la sílice.
O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O

CH2 CH2 ■O La sílice

O esO fácilOde disolver
O O a pHO> 7. O ■ Se forman enlaces Si-O-Si mientras
Núcleo
otros se rompen.
■ Pérdida de eficacia.
[ 4 ]
 Tecnología BEH

Beneficios de la t ecnología híbrida

Atributo de la partícula híbrida

Beneficio para la RP-HPLC
Los grupos híbridos superficiales reducen la concentración
superficial de silanol. Reducción de los factores de cola USP de los picos para las bases.
Los grupos puente internos confieren una elevada interconectividad. Mayor estabilidad química y mecánica.
Los grupos híbridos internos y superficiales añaden hidrofobicidad. Mayor estabilidad de la columna a pH alto.

La tecnología BEH ofrece a los usuarios de sistemas cromatográficos la flexibilidad de transferencia entre las plataformas cromatográficas
UltraPerformance LC, analítica y preparativa. Combinando la tecnología BEH con el diseño de columna patentado de óptima densidad del lecho
(OBD™), las columnas XBridge Prep OBD ofrecen una elevada capacidad de carga, máxima eficacia y larga vida útil de la columna. Tanto las
partículas XBridge HPLC como las partículas ACQUITY UPLC BEH de 1,7 µm tienen tecnología BEH, permitiendo así una transferencia directa
de las separaciones por HPLC a la tecnología UPLC. Tanto si un usuario de sistemas cromatográficos está interesado en separaciones por UPLC
de menos de 2 µm, como en el desarrollo de métodos de purificación o en separaciones de escala analítica, la tecnología BEH ofrece soluciones
precisas y fiables.

P roduc tos con t ecnología BEH

Columnas XBridge

Columnas ACQUITY UPLC BEH Columnas XBridge OBD Prep

Columnas BEH de bioseparación

Tecnología de Separación de Péptidos

Tecnología de Separación de Oligonucleótidos
[ 5 ]
xbridge c18 /c 8

XBridge C18 /C 8

Las dos fases enlazadas de HPLC más populares, C18 y C8, son las fases de primera elección en el desarrollo de métodos de LC. Útiles para una amplia
variedad de separaciones, estas columnas son conocidas por todos los científicos dedicados a la separación. Las columnas XBridge C18 y C8 ofrecen
O
flexibilidad para el desarrollo de métodos. Mediante el uso de enlaces trifuncionales y un “endcapping” avanzado, se observa
O Si una excelente reproduc-
O
ibilidad, rendimiento y vida útil de la columna a lo largo de todo el rango de pH (1-12).

O O

Características de las columnas XBridge C18 y C8 O Si O Si

O O

Tipo de ligando Trifuncional C18 Trifuncional C8

O CH 3

Tamaños de partícula disponibles (µm) O Si 2.5, 3.5, 5, 10 2.5, 3.5,Polar

O Si
5,Group
10
O CH3
Densidad del ligando* 3.1 µmol/m2 3.2 µmol/m2
Fase enlazada

Carga de carbono* 18% 13%

CH 3
Tipo de “endcapping” O Si
Patentado
Polar Group
Patentado
O
O Si
Intervalo de pH CH3 1-12 O 1-12
Límites de temp. a pH bajo 80 °C 60 °C
Límites de temp. a pH alto O
45 °C 45 °C
O Si
Farmacopea de los Estados Unidos. O
L1 L7

Diámetro de poro* 135Å 135Å

Partícula BEH

Volumen de poro* 0.7 mL/g 0.7 mL/g

Superficie* 185 m2/g 185 m2/g

* Valores nominales.

Estabilidad a pH bajo Estabilidad a pH alto

La inestabilidad a pH bajo se debe a la escisión de los enlaces de
siloxano por hidrólisis ácida. Para mejorar la estabilidad a pH bajo de
las fases enlazadas, hay que reducir la tasa de hidrólisis. Los tipos
de química XBridge C18, C8 y Fenilo utilizan uniones trifuncionales y
“endcapping” patentados para conseguirlo. En ensayos acelerados en
condiciones de pH bajo, las columnas XBridge C18 presentan una mínima
pérdida de retención (mayor estabilidad hidrolítica) en comparación
con las columnas rellenas con fases preparadas empleando silanos
monofuncionales.
La degradación de las partículas cromatográficas de base sílice a un
pH elevado se debe al ataque nucleófilo de los iones hidróxido sobre
sus enlaces siloxánicos estructurales. Cromatográficamente, esto
ocasiona vacíos en la columna, degradación de la forma de los picos
o pérdida de eficacia. Las partículas XBridge incorporan puentes de
etileno dentro de la matriz de sílice, que confieren resistencia a la
disolución de la partícula. Tendrían que romperse hasta seis enlaces
siloxánicos para liberar una sola unidad con puentes de etileno de
una partícula. La estabilidad química queda demostrada en el ensayo
acelerado a pH alto que se ilustra más abajo.

Horas en TFA al 1% a 80 ˚C hasta una pérdida de retención del 20% Horas en TEA 50 mM a 50 ˚C hasta una pérdida de eficacia del 50%
0 20 40 60 80 100 0 50 100 150 200

XBridge C18 XBridge C18

Zorbax® SB C18 XTerra MS C18

SunFire C18
Gemini™ C18
Intersil® ODS-3
Zorbax® Extend C18
Ace® C18
Luna® C18 (2)
Gemini™ C18

Luna® C18 (2) YMC™ Pro C18

[ 6 ]
 xbridge c18 /c 8

El pH como herramienta para un óptimo desarrollo de métodos

En la cromatografía de fase reversa, el pH de la fase móvil puede producir cambios en la selectividad y capacidad de retención a los compuestos
ionizables. Los compuestos ácidos presentan mayor retención a valores del pH por debajo de su pKa, y los compuestos básicos presentan una
retención más prolongada a valores del pH por encima de su pKa. Muchos compuestos farmacológicamente activos son ionizables; así, una columna
con un intervalo útil de pH más amplio permite mayor flexibilidad para el desarrollo de métodos farmacéuticos. Las columnas XBridge tienen un
amplio intervalo útil de pH (pH 1-12), lo cual ofrece una flexibilidad inigualable para el desarrollo de métodos.

Columna: XBridge C18, 3.0 x 100 mm, 3.5 µm 0.5

pH 2
Fase móvil A1: Fosfato potásico 100 mM, pH 2
Fase móvil A2: Fosfato potásico 100 mM, pH 7
Forma deficiente de los picos
Fase móvil A3: Fosfato potásico 100 mM, pH 12 AU Sobrecarga de la columna
Fase móvil B: ACN Baja retención: ionizado
Fase móvil C: H 2O
Caudal: 0.6 mL/min 0
Gradiente: Tiempo Perfil
0.5
(min) %A %B %C
0.0 20 5 75
pH 7
15.0 20 50 30 Mejor forma de los picos
AU
Temperatura: 30 °C Mejor retención: 50% ionizado
Volumen de inyección: 20 µL @ 30 mg/mL en agua
Coelución
Detection: UV @ 215 nm
Instrumento: Waters Alliance® 2695 con PDA 2996 0
0.5

pH 12
AU
La mejor forma de los picos
Buena retención: 100% no ionizado
La mejor resolución
0
0 5 10 15 min

El clorhidrato de lincomicina es un fármaco antibiótico bien establecido, utilizado en medicina humana y veterinaria, efectivo prin-
cipalmente contra patógenos grampositivos. El actual método USP adolece de una forma deficiente de los picos y de poca sensibili-
dad. Para desarrollar un método óptimo, se puede utilizar el pH para obtener mejor forma de los picos y mejor resolución.

Columna: XBridge C18, 3.0 x 100 mm, 3.5 µm

Fase móvil A: Fosfato potásico 100 mM, pH 12
Fase móvil B: Acetonitrilo Excelente carga
Fase móvil C: Agua
7.3%
Gradiente: Tiempo Perfil
(min) %A %B %C
Resolución optimizada
0.0 20 15 65
15.0 20 35 45
1.1% Excelente forma de picos
Caudal: 0.6 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL @ 30 mg/mL en agua
Temperatura: 30 °C
Detección: UV @ 215 nm 0.25%
Instrumento: Waters Alliance 2695 with 2996 PDA

0 5 10 15 min

Una vez seleccionado el pH, se optimizó la pendiente del gradiente para mejorar la resolución.

[ 7 ]
 XBridge C18 /C 8

Cambio ent re pH alto y bajo Sacando pa rt ido de los tam pones de fosfato

La capacidad de cambiar entre un pH alto y uno Los tampones de fosfato poseen una singular selectividad, excelente transparencia UV
bajo en una sola columna puede permitir una y buena capacidad de tamponamiento a múltiples valores del pKa. No obstante, debido
espectacular reducción del tiempo de parada del a la naturaleza agresiva del fosfato, las columnas tradicionales de sílice presentan con
instrumento, así como significativas reducciones frecuencia una vida útil muy reducida. Las columnas XBridge demuestran un rendimiento
de coste cuando se trabaja a múltiples niveles excelente con tampones de fosfato en todo el intervalo de pH, debido a la resistencia
de pH. Tradicionalmente, se asignan columnas química mejorada de las partículas con tecnología BEH.
diferentes para cada nivel de pH, para evitar
la degradación prematura de la columna. Las 3 4 5
2
partículas de tecnología BEH, cuando se combinan 6

con fases enlazadas y “endcapping” novedosos pH 2

1
e innovadores, permiten el uso de las columnas
de HPLC XBridge a un pH más elevado que las
columnas convencionales, pero permiten el “cambio 0 1 2 3 4 5 6 7 8 min
de pH” sin reducción en el rendimiento. En otras 3 4 5
2 6
palabras, una sola columna XBridge puede utilizarse 1
para trabajar en condiciones de pH tanto bajo pH 7
como alto, eliminando así el tiempo necesario para
cambiar de columna, y la necesidad de disponer de
múltiples columnas para trabajar a pH bajo y alto 0 1 2 3 4 5 6 7 8 min

por separado. 3
2
5
6 4

pH 12
1

Columna XBridge V0

N
V0 0 1 2N 3Iny. nº 2 4 5 6 7 8 min
B = base A B Iny. nº 2 B = base A
A = ácido
B
A = ácido
N = neutro N = neutro

Iny. nº 4800 Iny. nº 1724

Eliminando el sangrado en MS
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 min 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 min

La espectrometría de masas, en combinación con la HPLC, ofrece a los químicos

analíticos mayor sensibilidad y selectividad. Para obtener todos los beneficios
V0
Gemini™ Column de la LC/MS, es esencial la utilización de columnas de LC de baja degradación.
La tecnología BEH incorporada a las columnas XBridge elimina prácticamente la
A N Iny. nº 2
B = base
A = ácido
B degradación de la LC/MS, al ofrecer mayor sensibilidad hidrolítica y resistencia de
N = neutro
las partículas. Como se puede ver más abajo, en comparación con una exploración de
fondo por MS, se observa una degradación mínima.
Iny. nº 1724
3.0E+07
Sin columna
n 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 min XBridge C18
2.5E+07

En esta evaluación se investigó el efecto

Recuento de iones

2.0E+07

de cambiar el pH de la fase móvil de forma

agresiva para cada inyección, empleando una 1.5E+07

mezcla de compuestos ácidos, básicos y neutros.

1.0E+07
Cada columna fue equilibrada primero a pH 3,
seguido de una sola inyección de la mezcla de 5.0E+06

prueba. La columna fue equilibrada después

a pH 10, seguido de una sola inyección de la 0.0E+00
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 min
mezcla de prueba. Esta secuencia se repitió para
varios miles de inyecciones sin deterioro de la
columna XBridge C18. [ 8 ]
 XBridge C18 /C 8

Re p roducibilidad pa ra el desa rrollo de métodos

Waters sigue siendo la referencia del sector para la reproducibilidad lote a lote. Desde
la gama de columnas Symmetry ® en 1994 y continuando con las gamas de columnas
de HPLC XTerra, Atlantis® y SunFire™, las columnas de Waters ofrecen resultados
constantes. Las columnas XBridge se fabrican en las mismas instalaciones certificadas
cGMP, ISO9001 e ISO13485 que producen estas gamas de columnas de HPLC,
líderes en el sector. Los científicos dedicados al desarrollo de métodos pueden tener
la garantía de que las separaciones obtenidas hoy serán reproducibles año tras año.

5 µm

5 µm

10 µm
3.5 µm
3.5 µm
0 10 20 30 min
Instalaciones de fabricación de Waters

Estabilidad pa ra un rendimiento fiabl e

Las instalaciones de vanguardia de Waters
fabrican columnas de HPLC y de UPLC que
La tecnología BEH produce partículas diseñadas para mejorar el rendimiento de la
aumentan al máximo el rendimiento del
columna y prolongar su vida útil en condiciones operativas de LC extremas y exigentes.
laboratorio. Somos fabricantes originales de
Utilizando técnicas punteras de síntesis, Waters ha diseñado y fabricado columnas de
partículas de sílice e híbridas, y podemos vigilar
LC capaces de ofrecer una vida útil que supera con mucho la de las principales marcas
y controlar continuamente todo el proceso
de columnas convencionales de HPLC, en condiciones de pH tanto bajo como alto.
de fabricación a lo largo de la vida útil del
producto. Esto permite obtener un control y
Análisis del lote 1 XBridge C18, pH 2
una repetibilidad sin precedentes entre lotes de
Análisis del lote 3 XBridge C18, pH 11.3 material.
Análisis del lote 13 1 análisis de lote = 500 volúmenes
de la columna
Análisis del lote 15

Análisis del lote 34

Análisis del lote 36

0 5 10 15 20 25 30 min

Los resultados de arriba se obtuvieron como parte de una extensa evaluación La Corporación Waters ha recibido los
de columnas de HPLC realizada por una importante empresa farmacéutica. Se siguientes registros y certificaciones:
evaluó un total de 18 columnas en condiciones exigentes para determinar la
• Registrada por la Food y Drug Administration
estabilidad de la eficacia y de la selectividad durante un uso prolongado, así
de los EE.UU.: cGMP y dispositivos médicos
como la reproducibilidad entre lotes. Esta evaluación dio lugar a la selección
de Clase 1.
de las columnas de HPLC XBridge como la principal columna de desarrollo de
métodos a nivel mundial. • ISO9001:2000

Datos cortesía de Novartis. • ISO13485:2003

[ 9 ]
XBridge Fenilo
O
O Si
O

XBridge Fenilo
O

Las columnas fenilo se utilizan con frecuencia en separaciones donde se necesita una selectividadOalternativa,
O
Si
especialmente cuando los analitos
de interés contienen un anillo aromático. Tradicionalmente, las columnas de fenilo se han utilizado poco, debido a su inadecuada estabilidad en
condiciones de pH bajo. Los científicos dedicados al desarrollo de métodos ya no se ven limitados por el pH cuando utilizan una columna de LC de
CH 3

fenilo. Gracias al novedoso enlazado y “endcapping” de la tecnología de partículas BEH, las columnas
O Si XBridge Fenilo ofrecen excelente estabilidad a Polar Group

CH
pH bajo y alto, dando lugar a la columna fenilo más estable y reproducible del mercado.
3

O
Características de las columnas XBridge Fenilo O Si
O

Tipo de ligando Trifuncional C6 Fenilo

Tamaños de partícula disponibles (µm) 2.5, 3.5, 5
Densidad del ligando* 3.0 µmol/m2
Carga de carbono*
Fase enlazada

15%
Tipo de “endcapping” Patentado
Intervalo de pH 1-12
Límites de temp. a pH bajo 80 °C
Límites de temp. a pH alto 45 °C
Farmacopea de los Estados Unidos. L11

Diámetro de poro* 135Å

Partícula BEH

Volumen de poro* 0.7 mL/g

Superficie* 185 m2/g

* Valores nominales.

Exc el ent e rendimiento

Las columnas XBridge Fenilo combinan una unión trifuncional del ligando fenilo-hexilo con técnicas patentadas de “endcapping” para obtener una
estabilidad a pH bajo que lidera el sector, sin dejar de ofrecer una excelente forma de picos.

Estabilidad a pH bajo que lidera el sector Excelente forma de los picos

Sonda: Etilparabeno
100

XBridge™ Phenyl Amitriptilina

90 NUSP = 9300
Agilent Zorbax® SB-Phenyl T USP = 1.20
XBridge Fenilo
% retención inicial

80
Phenomemex Luna Phenyl-Hexyl
® ®

70 Varian Pursuit® Diphenyl

Agilent Zorbax® Eclipse XDB Phenyl

60
Amitriptilina
Restek Ultra Phenyl
Zorbax SB Fenilo NUSP = 920
®

50
T USP = 6.59
0 20 40 60 80 100

Horas en TFA al 1% en H2O pH 1,0 a 80 ˚C

10 20 30 40 50 60 70 80 90 min

[ 10 ]
 XBridge Fenilo

Singula r sel ec t iv idad Ácidos 12

Bases 9
11 XBridge Fenilo
Las columnas XBridge Fenilo ofrecen una selectividad alternativa con 1 2
4,5 8
67
10
3
respecto a las columnas alquílicas de cadena recta, así como a las
columnas con grupos polares integrados, en especial para compuestos 12

9,10
que contienen un grupo aromático. Esto proporciona gran flexibilidad 11
XBridge C18
6 7 8
4 5
1 2 3
para desarrollar métodos ortogonales para separaciones difíciles.
12

9 XBridge Shield RP18

6 7 11
8
2 1 3 4 10
5

4 8 12 16 20 min

Con diferentes ligandos se pueden observar cambios de

selectividad. Como se ilustra aquí, el ligando fenilo ofrece mejor
retención y una selectividad alternativa para los antidepresivos
tricíclicos (picos 6, 7 con respecto al pico 8).

Uso del pH bajo pa ra enf renta rse a desafíos de desa rrollo de métodos

La separación de ácidos aromáticos ha sido históricamente difícil, utilizando columnas C18 tradicionales. Estos compuestos son derivados del fenol
y poseen anillos aromáticos; por tanto, construir una columna de fenilo es una solución lógica. No obstante, se ha demostrado que el pH bajo es
crítico para obtener una separación efectiva en esta clase de compuestos, lo cual es problemático para la mayoría de las columnas de fenilo que hay
en el mercado, en cuanto a la estabilidad. Las columnas XBridge Fenilo ofrecen la solución. No solo se consigue la selectividad deseada (mediante
interacciones pi-pi), sino que la estabilidad química mejorada favorece la vida útil de la columna y un funcionamiento consistente a pH bajo.

Columna: XBridge Phenyl Volumen de inyección: 20 µL

4.6 × 100 mm, 3.5 µm Disolvente de la muestra: 10 µg/mL of all analytes in H2O
Número de referencia: 186003334 Temperatura de la columna: 35 °C
Fase móvil A: H 2O Temperatura de la muestra: 20 °C
Fase móvil B: ACN Detección: UV @ 280 nm
Fase móvil C: NH4HCOOH 100 mM, pH 3 Velocidad de adquisición: 5 points/sec
Caudal: 1 mL/min Filtro respuesta: 1.0
1 Gradiente: Tiempo Perfil Lavado de la aguja: 5/95 MeOH/H2O
(min) %A %B %C Instrumento: Alliance 2695 con PDA 2996
7
0.0 85 5 10
8.00 65 25 10
10.00 10 80 10 Compuestos
11.00 10 80 10 1. Ácido gálico
6 12.00 85 5 10 2. Ácido protocatéquico
2 4
3
15.00 85 5 10 3. Ácido 3,4 dihidroxifenilacético
4. Ácido 4-hidroxibenzoico
5. Picrolam
6. Ácido vainíllico
9 10
8
5 7. Ácido siríngico
8. Ácido salicílico
9. Ácido 2,4-diclorofenoxiacético
(Weed-B-Gone)
10. Ácido 2-(2,4,5-triclorofenoxi)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 min propanoico (Silvex)

En diversos herbicidas comunes, entre ellos Silvex, Picloram y Weed-B-Gone, se utilizan ácidos aromáticos. Muchos otros ácidos
orgánicos son analitos ácidos muy polares que pueden ser difíciles de retener en las columnas C18 tradicionales, y sin embargo se
retienen bien utilizando las columnas XBridge Fenilo.s.

[ 11 ]
XBridge Shield RP18

XBridge Shield RP18

O
Las columnas que contienen grupos polares embebidos se están volviendo más populares entre los O Sicientíficos dedicados al desarrollo de métodos, debido
O
a su selectividad alternativa en comparación con los tipos de química C18 tradicionales. El XBridge Shield RP18 ofrece una selectividad complementaria
así como una excelente forma de los picos para las bases. La tecnología Shield patentada* incorpora un grupo carbamato integrado en la fase unida,
que protege los silanoles superficiales. Además, esta funcionalidad permite la compatibilidad conOfases móviles totalmente acuosas sin riesgo de
O Si
deshumectación de los poros, permitiendo una retención fiable y consistente. O

*Patente de los EE.UU. 5.374.755 [Neue et al.]

CH 3
O Si Polar Group

Características de la columna XBridge Shield RP18 CH3

Tipo de ligando Monofuncional de grupo polar integrado

O
Tamaños de partícula disponibles (µm) O Si 2.5, 3.5, 5, 10
O
Densidad del ligando* 3.3 µmol/m2
Carga de carbono* 17%
Fase unida

Tipo de “endcapping” TMS

Intervalo de pH 2-11
Límites de temp. a pH bajo 30 °C
Límites de temp. a pH alto 45 °C
Farmacopea de los Estados Unidos. L1

Diámetro de poro* 135Å

Partícula BEH

Volumen de poro* 0.7 mL/g

Superficie* 185 m2/g

* Valores nominales.

¿Qué es la t ecnología Shield? Beneficios de la tecnología Shield:

A principios de la década de 1990 se crearon fases enlazadas

novedosas en las que se integraban grupos funcionales polares en
cadenas alquílicas C18 y C8. Uno de los principales beneficios era
una reducción de las interacciones silanólicas con los analitos básicos,
permitiendo una mejora de la forma de los picos. Estos materiales de
primera generación se preparaban mediante una modificación superficial
de dos pasos, en una mezcla de grupos amino derivados y no derivados,
que variaban de un lote a otro. Así, los analitos eran retenidos mediante
mecanismos de fase reversa y de intercambio aniónico.
Los materiales de segunda generación se preparan utilizando una
modificación superficial de un paso, en la que el grupo funcional se
integra en un silano. Una sola reacción superficial con el silano da
lugar a una única estructura posible del ligando, sin posibilidad alguna
de intercambio aniónico. Este enfoque resultó ofrecer una excelente
reproducibilidad entre lotes. La eliminación de los mecanismos
de intercambio aniónico es también importante, ya que previene
la posibilidad de interacciones secundarias con analitos cargados
negativamente.
n Reducción de las interacciones silanólicas con los analitos básicos.
Esta desactivación o protección ocasiona una mejora de la forma de
los picos para los analitos básicos.
n Se observa también una singular selectividad para las fases unidas
con grupos polares embebidos, reduciéndose generalmente los
factores de retención de los analitos polares y básicos, y quedando
la retenció de los analitos no polares relativamente inalterada.
n Las fases enlazadas Shield ofrecen tiempos de retención del analito
estables y reproducibles en fases móviles 100% acuosas. Las fases
alquílicas convencionales adolecen de deshumectación en estas
condiciones, y los tiempos de retención se reducen significativamente.
Referencia bibliográfica
A Review of Waters’ Bonded Phase Shield Technology and Its Use
in High Performance Liquid Chromatography (HPLC) White Paper
Referencia bibliográfica 720000207EN

[ 12 ]
 XBridge Shield RP18

O pt imiza r la sel ec t iv idad pa ra el desa rrollo de métodos

Para desarrollar métodos cromatográficos, algunas de las herramientas disponibles para el científico dedicado a la separación incluyen el pH, la
química de la columna y el modificador orgánico. La columna XBridge Shield RP18 ofrece una selectividad alternativa, junto con la capacidad
de funcionar correctamente en una amplia gama de pH y con diversos eluyentes. Utilizando estas herramientas clave, el usuario de sistemas
cromatográficos puede optimizar rápidamente las condiciones de prueba necesarias para lograr una separación efectiva.

Ácidos
10
Bases
5 7,12
pH 10 2 9

6 XBridge™ C18
3 11 8
Metanol
1 4

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min

10

5 12
8,9
2 XBridge™ Shield RP18
6
3 11 Metanol
1 7
4

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
10

5
2

8 12 XBridge™ Shield RP18

3 11 6
1 Acetonitrilo
9

4 7

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min

Grandes cambios de selectividad cuando se comparan las químicas de columnas ortogonales en diferentes modificadores orgánicos.

Exc el ent e se pa ración de bases

Algunas columnas C18 muestran interacciones secundarias con los compuestos básicos, debido a un débil intercambio catiónico con los silanoles
superficiales residuales, dando lugar a una asimetría deficiente de los picos. La columna XBridge Shield RP18, con tecnología Shield patentada,
reduce la interacción silanólica con los analitos básicos, produciendo picos simétricos muy eficientes.

Columna: XBridge Shield RP18, Gradiente: Tiempo Perfil Volumen de inyección: 20 µL

4.6 X 50 mm, 3.5 µm (min) %A %B %C Concentración y diluyente
Número de referencia: 186003042 0 90 0 10 de la muestra: 10 µg/mL in H2O

Fase móvil A: H 2O 2 30 60 10 Temperatura: 35 °C

2
Fase móvil B: MeOH 10 16 74 10 Detección: UV @ 254
1
Fase móvil C: NH4HCO3 100 mM 11 90 0 10 Velocidad de adquisición: 5 points/second
0.06 Constante de tiempo: 1.0
Caudal: 1.0 mL/min 13 90 0 10
3
Lavado de la aguja: 5/95 MeOH/H2O

4 Instrumento: Alliance 2695 con PDA 2996

5
0.04
6
7 Compuestos
AU

1. Nordoxepina

0.02 2. Trimetoprim
3. Nortriptilina
4. Doxepina
5. Imipramina
0.00
6. Amitriptilina
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 min 7. Trimipramina

[ 13 ]
 O
O

XBridge HILIC
O
O Si
O

XBridge HILIC
CH 3
O Si Polar Group

La cromatografía de interacción hidrófila (HILIC, siglas inglesas) es una técnica cromatográfica que puede emplearse
CH para mejorar la retención 3

de especies muy polares, que se retienen muy poco por cromatografía de fase reversa. Las columnas XBridge HILIC ofrecen una selectividad
alternativa a las columnas de fase reversa, al tiempo que mejoran la forma de los picos, la retención y la vida
O
útil de la columna, en comparación
con las columnas HILIC con base de sílice. Gracias a la fuerte y consistente tecnología BEH, las columnas XBridge
O Si
O
HILIC establecen un nuevo
estándar de rendimiento para las separaciones HILIC.

Características de la columna XBridge Shield RP18

Tipo de ligando BEH no enlazado

Tamaños de partícula disponibles (µm) 2.5, 3.5, 5

Fase unida

Intervalo de pH 1-8
Límites de temp. a pH bajo 45 °C
Límites de temp. a pH alto 45 °C
Farmacopea de los Estados Unidos. L3

Diámetro de poro* 130Å

Partícula BEH

Volumen de poro* 0.7 mL/g

Superficie* 185 m2/g

* Valores nominales.

RETENCIÓN MEJORADA SELECTIVIDAD COMPLEMENTARIA

Los mecanismos de retención de HILIC son una compleja combinación
de partición, intercambio iónico y enlaces de hidrógeno, dando lugar a
una retención mejorada para analitos polares. La retención tiene lugar
con una fase estacionaria polar en combinación con fases móviles
compuestas de acetonitrilo a concentraciones superiores al 80%, que
ofrecen una retención notablemente mayor que la fase reversa.
Las columnas XBridge HILIC ofrecen una selectividad complementaria
a las columnas de fase reversa. En algunos casos, se observa una
inversión del orden de elución, además de una mejor retención, lo cual
puede ser ventajoso cuando se desarrollan separaciones ortogonales
para analitos polares.

3
Compuestos
2
1. 6-acetilmorfina
N+
HO 1 2. Morfina
Colina 3. Morfina-3-β-glucurónido

XBridge C18 de fase reversa

XBridge C18 de fase reversa
Factor de retención = 0
3

1
V 0 = 0.33 min 2

XBridge HILIC
V 0 = 0.35 min XBridge HILIC
Factor de retención = 1,8 0 1 2 3 4 5 6 min

0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 min XBridge HILIC ofrece una selectividad alternativa a la fase
reversa. Los metabolitos polares de morfina se retienen más en
El XBridge HILIC ofrece retención donde la fase reversa no condiciones HILIC.
consigue retención alguna.
[ 14 ]
 XBridge HILIC

ESTABILIDAD QUÍMICA

Con frecuencia se necesita un pH intermedio en la fase móvil para alterar el estado de carga del analito o del sustrato, a fin de promover la
retención. Para los materiales con base de sílice, esto provoca frecuentemente una disolución de las partículas, ocasionando una reducción de la
vida útil de la columna. Las columnas XBridge HILIC están fabricadas con tecnología BEH, que permite una excepcional longevidad de la columna,
permitiendo varios miles de inyecciones sin reducción del rendimiento debida a la degradación química.
1
3
2
Columna: XBridge HILIC, 2.1 x 50 mm, 3.5 μm
Inyección 10 Fase móvil A: Acetonitrilo:agua 95:5 con NH4+ CH3COO- 10 mM pH 5,5
Fase móvil B: Acetonitrilo:agua 50:50 con NH4+ CH3COO- 10 mM pH 5,5
Caudal: 0.5 mL/min
Gradiente: 1 – 99% B a lo largo de 2 minutos, 1% B a 2,1 min, parar 0,4 min
Volumen de inyección: 2.0 μL
Temperatura: 30 ˚C
Detección: UV @ 254 nm

Inyección1000
Compuestos
1. Uracilo
2. 5-fluorocitosina
3. Citosina

Inyección 2000
La XBridge HILIC muestra una excepcional resistencia
química, que permite una prolongada vida útil de la
columna.
0 1 2 min

SENSIBILIDAD MEJORADA PARA ESPECTROMETRÍA DE MASAS PASOS REDUCIDOS DE MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS

La utilización de HILIC ha adquirido popularidad, principalmente debido a
la amplia adopción de la espectrometría de masas como detector, y a la
necesidad de mejorar la sensibilidad para la cuantificación de analitos po-
lares. A diferencia de la fase reversa, que utiliza fases móviles altamente
acuosas para inducir la retención de los compuestos polares, con HILIC
se emplea una fase móvil rica en acetonitrilo. Esta fase móvil altamente
orgánica se desolvata con facilidad, permitiendo una mejora en la eficacia
de ionización y en la respuesta de la espectrometría de masas.
Intensidad
3.0 x 107
Cuando se utilizan métodos de extracción en fase sólida (SPE, siglas
inglesas) para la limpieza de las muestras, con frecuencia se utiliza
una fracción altamente orgánica, para eluir selectivamente los
analitos de interés del dispositivo. Antes de inyectar esta fracción en
una columna de fase reversa, hay que evaporar primero la fracción
orgánica y después reconstituirla con una porción de disolvente
acuoso. Estos dos pasos son frecuentemente los pasos más largos de
un procedimiento de SPE. Con las columnas XBridge HILIC, la fracción
altamente orgánica se puede inyectar directamente, con lo que se
elimina la necesidad de evaporación y se aumenta el rendimiento de
las muestras.

HO Opiáceos en plasma humano

Placa µElution Oasis® MCS
2.0 x 107
O H
NCH3 Condicionar/equilibrar:
200 µL CH3OH/ 200 µL de H2O
O
1.0 x 107 XBridge C18 de fase reversa O Cargar:
2 1 300 µL de plasma humano
6-acetilmorfina enriquecido con un 2% H3PO4
10 ng/mL añadidos a plasma humano
Lavado 1:200 µL de HCOOH
al 2% en H2O
Intensidad
2 Lavado 2:
3.0 x 107 HO 200 µL CH3OH
1
Lavado 3:
Respuesta 10,5 x Respuesta 8,6 x O H
200 µL CH3CN
NCH3
2.0 x 107
O HO Eluir: 50 µL de NH4OH
N+ N+ al 5% en CH3CN
O HO Morfina
1.0 x 10
XBridge HILIC
7
10 ng/mL añadidos a plasma humano Inyección directa del eluato:
1. Acetilcolina (Ach) 2. Colina (Ch) elimina los largos pasos de
evaporación y reconstitución.
0 2 4 6 min

0.2 1.0 2.0 min

La XBridge HILIC ofrece una inyección directa de los eluyentes

La XBridge HILIC ofrece una respuesta mejorada de la espec- de SPE, aumentando así el rendimiento de las muestras.
trometría de masas, permitiendo límites de detección más bajos.
[ 15 ]
Tecnología UPLC

En 2004, Waters revolucionó la ciencia de la separación por LC con la creación del sistema ACQUITY UltraPerformance LC (UPLC). Las
separaciones de alta resolución por UPLC se realizan en un sistema capaz de utilizar plenamente unas columnas de LC que están eficazmente
rellenas de partículas de menos de 2 µm, con tolerancia a la presión. La tecnología BEH es uno de los principales elementos habilitadores que hay
tras esta nueva plataforma de separación, y ofrece la eficacia, resistencia e intervalo de pH necesarios para las separaciones por UPLC.

Como las columnas ACQUITY UPLC BEH y las XBridge HPLC incorporan la misma tecnología BEH, los métodos se pueden transferir sin problemas
entre estas plataformas de partículas. Las separaciones cromatográficas se pueden transferir sin esfuerzo entre la tecnología de UPLC, la escala
analítica y la preparativa. Los usuarios de sistemas cromatográficos pueden aprovechar una amplia variedad de tamaños de partículas (esto es, 1,7,
2,5, 3,5, 5 y 10 µm) conservando la eficacia del método.

T ecnología UPLC: v elocidad y resolución

UPLC
0.08
2.1 x 30 mm, 1.7 µm

Rs (2,3) = 2.90

Absorbancia a 270 nm
VELOCIDAD
EXTREMA

0.00 0.50 1.00 1.50

0.08 2.1 x 50 mm, 1.7 µm

Rs (2,3) = 4.58
HPLC
Absorbancia a 270 nm

VELOCIDAD CON
2.1 x 150 mm, 5.0 µm RESOLUCIÓN
0.04
Rs (2,3) = 4.57

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50

Absorbancia a 270 nm

0.04 2.1 x 100 mm, 1.7 µm

Rs (2,3) = 6.18
Absorbancia a 270 nm

RESOLUCIÓN
0.00 5.00 10.00 15.00 20.00
CON VELOCIDAD

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00

0.04 2.1 x 150 mm, 1.7 µm

Rs (2,3) = 7.42
Absorbancia a 270 nm

RESOLUCIÓN
EXTREMA

0.00 2.00 4.00 6.00 7.00

Para separaciones isocráticas, la resolución (Rs) es proporcional

al tamaño de la partícula. Por tanto, las partículas más
pequeñas ofrecen mayor resolución.

[ 16 ]
 Desarrollo de métodos más rápido con la tecnología UPLC
HPLC
Protocolo de desarrollo de métodos
pH 3 / Acetonitrilo
pH 3 / Metanol
pH 10 / Acetonitrilo
pH 10 / Metanol
26.8 Horas
TIEMPO TOTAL DE SCREENING
Tiempo de análisis: 6,7 horas/columna x 4 columnas
El desarrollo de métodos utilizando un enfoque de screening
sistemático es uno de los modos más rápidos y efectivos para
crear nuevas separaciones de HPLC. Evaluando combinaciones de
pH, química de la columna y modificador orgánico, se racionaliza
la información necesaria para permitir una decisión segura
acerca del modo de continuar con un método. Pero ¿y si los datos
pudieran obtenerse aún más deprisa? La respuesta está en la
tecnología de UPLC.
UPLC
Protocolo de desarrollo de métodos
pH 3 / Acetonitrilo
pH 3 / Metanol
pH 10 / Acetonitrilo
pH 10 / Metanol
8 Horas
TIEMPO TOTAL DE Screening
Tiempo de screening: 2 horas/columna x 4 columnas
Se ilustra aquí un protocolo convencional de desarrollo de métodos
utilizando tecnología HPLC y UPLC. Ambas técnicas proporcionan
la misma cantidad de información. La diferencia es la cantidad de
tiempo de laboratorio necesaria para obtener esta información. ¡En
este ejemplo, la tecnología UPLC dio la respuesta en 1/3 del tiempo!
Este protocolo completo se puede terminar en un solo día laborable,
manteniendo la misma calidad de la información. La tecnología
UPLC aumenta considerablemente la velocidad de desarrollo de
métodos y la eficacia del funcionamiento de un laboratorio.
Tecnología PREPARATIVA OBD

Alcanza r un nuevo niv el de du ración de las columnas p re pa rat ivas

La escasa vida útil y el rendimiento irregular de las columnas preparativas han sido fuente
de inquietud significativa para el químico dedicado a la purificación. Hay que reducir el
coste por purificación, y la pérdida de muestras por fallo prematuro de la columna debe ser
reducida al mínimo. Tras muchos años de investigación acerca del relleno y del diseño de
las columnas, Waters creó el diseño de columna preparativa con óptima densidad del lecho
(OBD)*, resolviendo eficazmente estos problemas. Este formato es reconocido en el sector como el que ofrece las columnas
preparativas más estables, eficaces y reproducibles.

La combinación de los robustos rellenos XBridge y el diseño OBD eleva el rendimiento de las columnas preparativas a un
nuevo nivel y garantiza una escalabilidad directa, una eficacia máxima y una larga vida útil de las columnas.
*Patente del Reino Unido nº GB2408469.

Eficacia máxima/un 30% menos de contrapresión

Fase móvil A: 0,1% de DEA en agua Compuestos

Fase móvil B: 0,1% de DEA en acetonitrilo 1. Labetolol (50 mg/mL)
Concentración de la muestra: 300 mg/mL en DMSO 2. Quinina (50 mg/mL)
Instrumento: Sistema AutoPurification® 3. Diltiacem (50 mg/mL)
Detección: UV @ 260 nm 4. Verapamilo (100 mg/mL)
5. Amitriptilina (50 mg/mL)

XTerra Prep MS C18, 19 x 50 mm, 5 µm
Volumen de inyección: 660 µL
Carga total: 198 mg
Presión máxima: 1000 psi
1 2
Caudal: 23.8 mL/min XBridge Prep C18, 19 x 50 mm, 5 µm Caudal: 23.8 mL/min
Gradiente: Tiempo Perfil 0Volumen de 4 660 µL 6
2 inyección: 8 10 min
Gradiente: Tiempo Perfil
3 (min) %A %B Carga total: 198 mg 3 (min) %A %B
0.0 95 5 Maximum 0.0 95 5
1.79 95 5 Contrapresión máxima: 700 psi 5 1.79 95 5
5
6.79 5 95 6.79 5 95
4 2 4
7.79 5 95 7.79 5 95
1

0 2 4 6 8 10 min 0 2 4 6 8 10 min

Las columnas XBridge Prep ofrecen la misma elevada capacidad de carga y fiabilidad que se espera de nuestros
productos XTerra Prep, generando al tiempo menor contrapresión en la columna y mayor eficacia.
0 2 4 6 8 10 min

Transferencia directa

Fase móvil A: Acetato amónico 10 mM, pH 10 Compuestos

Fase móvil B: Acetonitrilo/bicarbonato amónico 100 mM (90/10) 1. Econazol (100 mg/mL)
Caudal: 1,06 min/mL (ana); 18 min/mL (prep) 2. Miconazol (100 mg/mL)
Gradiente: Gradiente de 10 min, desde el 5% de A al 95% de B
Detección: UV @ 270 nm 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min

2 2
1 1

XBridge C18, 4.6 x 100 mm, 5 µm XBridge Prep C18, 19 x 100 mm, 5 µm
Volumen de inyección: 30 µL Volumen de inyección: 510 µL
Carga total: 6 mg Carga total: 102 mg

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min

El diseño de la columna preparativa OBD ofrece una densidad del lecho relleno equivalente a la de la columna
analítica, garantizando por tanto una transferencia directa.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 min

[ 18 ]
 Tecnología PREPARATIVA OBD

Beneficios del pH en el aislamiento y en la pu rificación Reducir el cost e am p liando

la v ida út il de la columna
Carga de bases
La demanda de aislamiento rápido de compuestos con
Bases elevada pureza exige integridad y estabilidad de la
XBridge C18 1. Nordoxepina
2. Doxepina
columna preparativa. Las materias primas complejas,
100

1,2 x 5 en las ordenadas

3. Amitriptilina de escasa solubilidad, se disuelven con frecuencia en
%
3
0.1 mg pH 2.3 disolventes fuertes, como el DMSO. Esta combinación
de escasa solubilidad y los choques de presión
-1
100
asociados a los grandes volúmenes de inyección de
1 2
x 20 en las ordenadas
eluyente orgánico puro es la principal responsable del
3
%
0.1 mg pH 7 fallo precoz de la columna, y del colapso del lecho
cromatográfico.
-8

El diseño OBD muestra una resistencia excepcional

100
1
2 3
al fallo mecánico del lecho cromatográfico y ofrece
%
0.5 mg pH 10 un rendimiento constante de una columna a otra,
reduciendo el coste mediante una vida útil prolongada
0
0 2 4 6 8 10 min

El pH elevado para analitos básicos ofrece la mejor capacidad de carga,

así como la mejor retención y separación.

Carga de ácidos

Ácidos
XBridge C18 1. Oxacilina
2. Cloxacilina
100
1 3. Dicloxacilina

2
% 3 0.8 mg pH 2.3 Inyección 1
0

100

% 1
0.3 mg pH 7
2 3

0
100

% 0.2 mg pH 10
1
2 3
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min

El pH bajo para analitos ácidos ofrece la más alta capacidad de carga,

así como la mejor retención y separación.
Inyección 7.000

Referencia bibliográfica

Folleto de las columnas preparativas de óptima

densidad del lecho (OBD).
Referencia bibliográfica 720002336EN

[ 19 ]
Tecnología de separación de péptidos

Las columnas con tecnología de separación de péptidos de Waters incorporan partículas con tecnología BEH. Están
especialmente testadas con un mapa de péptidos para garantizar la estabilidad de los métodos de separación de péptidos,
así como un comportamiento predecible, con la diversidad de muestras que se encuentran en proteómica, caracterización de
proteínas y síntesis peptídica. Disponibles en tamaños de poro de 130 Å o de 300 Å y en tamaños de partícula desde 1,7
µm hasta 10 µm, ofrecen:

n Picos estrechos y simétricos para obtener la máxima resolución.

n Excelente separación de una amplia diversidad de péptidos.

n Excelente forma y retención de los picos en ácido fórmico y en ácido trifluoroacético, para obtener una
óptima cromatografía.

n Transferencia directa de los métodos desde la tecnología UPLC de menos de 2 µm hasta las separaciones preparatorias por HPLC

Las columnas con tecnología BEH pueden emplearse para aumentar la resolución de digestiones peptídicas complejas.
Utilizando las partículas de UPLC BEH de 1,7 µm en dimensiones de columna más largas, el usuario de sistemas
cromatográficos puede conseguir una resolución extrema. El poder de resolución de una columna de LC se puede expresar
por su cociente de longitud a tamaño de partícula (l/dp). Las columnas con cocientes l/dp más elevados ofrecen mayor
eficacia y se utilizan para las separaciones más difíciles. Un ejemplo serían las columnas ACQUITY UPLC BEH con
tecnología de separación de péptidos, que están disponibles con una longitud de 150 mm. Su cociente l/dp es superior a
88.000 y ofrecen eficacias de > 35.000 placas por separación.

Ma pa p e pt ídico de mayor resolución con UPLC

HPLC
Capacidad de picos = 372

30 40 50 60 70 80 90 min

UPLC
Capacidad de picos = 723

30 40 50 60 70 80 90 min

Se muestra arriba la resolución de una mezcla peptídica compleja de una digestión proteica con fosforilasa b. En
comparación con el uso de tecnología tradicional de HPLC, se obtiene mejor resolución de los componentes en un
sistema ACQUITY UPLC de Waters, utilizando columnas con tecnología de separación de péptidos de Waters, que
contienen partículas BEH de 1,7 µm.

[ 20 ]
 Tecnología de separación de oligonucleótidos

Las columnas con tecnología de separación de oligonucleótidos (OST, siglas inglesas) de Waters utilizan la tecnología BEH
de partículas híbridas, y están disponibles en formatos de partículas de 1,7 µm para UPLC y de 2,5 µm para HPLC. Esto
proporciona la flexibilidad necesaria para cubrir una amplia diversidad de necesidades analíticas y de purificación, sin dejar
de ofrecer una excepcional resolución y vida útil de la columna.

La separación de muestras de oligonucleótidos sintéticos destritilados se basa en el método convencional de cromatografía de

fase reversa con par iónico. Las columnas ACQUITY UPLC OST C18 y XBridge OST C18 son las adecuadas para este tipo de
análisis y ofrecen:

n Una eficacia de separación equivalente o mejor que la de los métodos PAGE-CGE o HPLC de intercambio iónico.

n La capacidad de resolver largas secuencias de oligonucleótidos gracias a la mayor potencia de resolución obtenida empleando
partículas de menos de 3 µm.

n Una amplia oferta de columnas escalables para cubrir las necesidades de aislamiento de escala en el laboratorio.

n Excepcional vida útil de la columna para reducir el coste por análisis.

Exc e p cional du ración de las columnas

Separación de una cadena de un 55–25mero de oligodesoxitimidina destritilada

Columna: XBridge OST C18, 2.5 µm (2.1 x 50 mm)
Fase móvil: A: 10% de MeOH / 90% de (HFIP 385 mM + TEA 14,3 mM)
B: 25% de MeOH / 75% de (HFIP 385 mM + TEA 14,3 mM)
Temperatura de
la columna TEA: 60 °C
Gradiente: 0 – 100% de B en 30 min (10-25% MeOH).
Caudal: 1.0 mL/min
Detección: 260 nm, 5 barridos por segundo
Sistema HPLC: Alliance Bio 2796 de Waters con PDA

Inyección nº 4 Inyección nº 1001

Las columnas XBridge OST C18 son adecuadas para la purificación de oligonucleótidos destritilados, debido a su disponibilidad
en diversos tamaños de columna. El científico dedicado a la separación tiene la posibilidad de seleccionar el tamaño de
columna más adecuado, basándose en la cantidad de muestra de oligonucleótido disponible. Esto permite la máxima
resolución de los componentes y la máxima recuperación del producto de interés en secuencias fallidas no deseadas.

Guía de selección de columnas XBridge OST C18 para la purificación de oligonucleótidos destritilados.
Columna (mm) Carga de masas aprox. (µmoles)** Caudal (mL/min)
2.1 x 50 0.04 0.2
4.6 x 50 0.20 1.0
10.0 x 50 1.00 4.5
19.0 x 50* 4.00 16.0
30.0 x 50* 9.00 40.0
50.0 x 50* 25.00 110.0

* Columna OST especial

** Los valores son solo aproximados y varían en función de la longitud del oligonucleótido, su composición de bases
y el método de recogida de fracciones utilizado.

[ 21 ]
Soluciones XBridge: productos farmacéuticos

n Análisis de cafeína y sus metabolitos

La cafeína es un estimulante del sistema nervioso central y del metabolismo, y se utiliza tanto en situaciones sociales
como en medicina, para reducir la fatiga física y restaurar la alerta mental cuando se produce una debilidad o somnolencia
inusuales. La cafeína estimula el sistema nervioso central primero a los niveles superiores, ocasionando un aumento de la
alerta y de la vigilia, un raciocino más rápido y claro, mayor concentración y mejor coordinación corporal general.

XBridge Phenyl, 4.6 × 100 mm, 3.5 µm

Las columnas XBridge Fenilo ofrecen una Compuestos
1. Ácido 1,7-dimetilúrico
Columna:
Número de referencia: 186003334

separación rápida y consistente para el análisis 2. 1-metilxantina Fase móvil A: H 2O

3. Ácido 1,3-dimetilúrico Fase móvil B: ACN
de la cafeína y sus metabolitos. 4. 1,7-dimetilxantina Fase móvil C: 100 mM NH4HCO3
5. Teobromina Caudal: 1.0 mL/min
3 6. Cafeína Gradiente: Tiempo Perfil
(min) %A %B %C
0.0 89 1 10
9.00 66 24 10
10.00 89 1 10
4
20.00 89 1 10
Volumen de inyección: 10 µL
Muestra: Cafeína (10 µg/mL), teobromina (10 µg/mL),
2 1-metilxantina (10 µg/mL), ácido 1,3-dimetilúrico
(10 µg/mL), 1,7-dimetilxantina
6 (10 µg/mL), ácido 1,7-dimetilúrico (10 µg/mL)
5 en H2O/NH4HCO3 (90/10)
1 Temp. de la columna: 30 °C
Temp. de la muestra: 15 °C
Detección: UV @ 280 nm
Velocidad de adquisición: 5 puntos/s
Respuesta del filtro: 0.2
Instrumento: Waters Alliance 2695 con PDA 2998

0 2 4 6 8 min

n Análisis de estatinas
Las estatinas (o inhibidores de la HMG-CoA reductasa) forman una clase de agentes hipolipidemiantes, empleados como
fármacos para reducir los niveles de colesterol en personas que padecen enfermedad cardiovascular o corren riesgo de
padecerla. Reducen el colesterol inhibiendo la enzima HMG-CoA reductasa, que es una enzima limitadora de la velocidad
de la vía del mevalonato, implicada en la síntesis del colesterol. La inhibición de esta enzima en el hígado estimula los
receptores de LDL, ocasionando un aumento del aclaramiento de lipoproteínas de baja densidad (LDL, siglas inglesas) del
torrente circulatorio, y una reducción de los niveles de colesterol en sangre.

Además de la actividad liporreductora, las estatinas presentan propiedades ligadas a la prevención de la ateroesclerosis. Los
investigadores especulan también que las estatinas ayudan a prevenir la enfermedad cardiovascular, inhibiendo la formación
de trombos, estabilizando los niveles de placa, mejorando la función endotelial y moderando las respuestas inflamatorias.

Las columnas XBridge Shield RP18 separan
eficazmente compuestos estrechamente
relacionados, permitiendo su rápida identificación.
2
1 3
Compuestos Columna: XBridge Shield RP18, 4.6 x 50 mm, 3.5 µm
1. Pravastatina Número de referencia: 186003042
2. Atorvastatina Fase móvil A: H2O
3. Lovastatina
4. Simvastatina
Fase móvil B: ACN
Fase móvil C: NH4HCO3 100 mM, pH 10
Caudal: 1.2 mL/min
Volumen de inyección: 20 µL
Concentración y diluyente
de la muestra: 10 µg/mL en H2O
Temperatura: 30 °C
4
Detección: UV @ 248
Velocidad de adquisición: 5 puntos/segundo
Filtro respuesta: 1.0
Lavado de la aguja: 5/95 MeOH/H2O
Instrumento: Waters Alliance 2695 con PDA 2996

0 1 3 5 7 min

[ 22 ]
 Soluciones XBridge: seguridad alimentaria

n Análisis de aditivos y conservantes alimentarios

La sacarina es un edulcorante artificial. El ácido 4-hidroxibenzoico es conocido principalmente como la base para la
preparación de sus ésteres, llamados parabenos, que se utilizan como conservantes. El ácido deshidroacético, el metil
parabeno y el ácido sórbico son conservantes empleados en cosméticos y alimentos.

XBridge Phenyl, 4.6 × 100 mm, 3.5 µm

La columna XBridge Fenilo permitió una rápida Compuestos
1. Sacarina
Columna:
Número de referencia:

186003334
cuantificación de los compuestos de interés. 2. Ácido 4-hidroxibenzoico Fase móvil A: KH2PO4 20 mM, pH 2,5
3. Ácido sórbico Fase móvil B: ACN
4. Metilparabeno Caudal: 1.0 mL/min
5. Ácido deshidroacético Isocratic Mobile
1
Composición de la fase
móvil isocrática: 75%A; 25%B
Volumen de inyección: 10 µL

Muestra: Sacarina (100 µg/mL), ácido 4-hidroxibenzoico

5 (10 µg/mL), ácido deshidroacético

4 (100 µg/mL), metilparabeno (25 µg/mL),
3
2 ácido sórbico (10 µg/mL)
en KH2PO4/ACN (75/25)
Temperatura de la columna: 30 °C
Temperatura de la muestra: 15 °C
Detección: UV @ 240 nm
Velocidad de adquisición: 5 puntos/s
Filtro respuesta: 0.2
IInstrumento: Waters Alliance 2695 con PDA 2996

1 2 3 4 5 6 min

n Análisis de patulina en zumo de manzana

La patulina es una micotoxina producida por varias especies de mohos, que puede aparecer en diversos alimentos,
incluyendo cereales, frutas y quesos. De los hongos capaces de producir patulina, Penicillum expansum es el más común y
se aísla con frecuencia en manzanas podridas. Debido a su toxicidad, diversos organismos reguladores han establecido una
ingesta máxima diaria de patulina, siendo la inquietud principal el consumo de zumo de manzana por los niños.

En este método, la patulina se puede resolver Compuestos Columna: XBridge C18, 4.6 x 100 mm, 3.5 µm
1. Hidroximetilfurfural Número de referencia: 186003033
completamente del hidroximetilfurfural, un 2. Patulina Fase móvil: HCOOH:ACN (95:5, v/v) al 0,1%

compuesto interferente común. Caudal:

Temperatura:
0,75 mL/min
25 °C
Detección: 276 nm
1

3 4 5 6 min

Los datos han sido ofrecidos por cortesía del Dr. Vural Gökmen, Departamento de Ingeniería Alimentaria, Universidad Hacettepe, Ankara, Turquía.

Literature Reference

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[ 23 ]
Soluciones XBridge: medioambientales

n Análisis de explosivos

El método EPA 8330 describe el uso de la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con detección ultravioleta (UV)
para el análisis de muestras que contienen, o se sospecha que contienen, compuestos explosivos. El método 8330 permite la
detección de explosivos en partes por mil millones (ppb, siglas inglesas) en tierra, agua y sedimentos.

Las columnas XBridge Fenilo separaron con

Compuestos
1. HMX
Columna: XBridge Phenyl, 2.1 x 150 mm, 3.5 µm
Número de referencia: 186003324
precisión 14 compuestos explosivos en muestras 2. RDX
Fase móvil: Formiato amónico 10 mM/isopropanol
3. 1,3,5-trinitrobenceno
de interés. 4. 1,3 dinitrobenceno
Caudal: 0.25 mL/min
Inyección: 10 µL
5. Nitrobenceno
6. TNT Temperatura: 40 °C
7. Tetrilo Detección UV @ 254 nm
8. 2 amino-4,6 dinitrotolueno Sistema: Sistema Alliance HPLC de Waters con detector de
9. 2,4 dinitrotolueno absorbancia 2487 doble λ.
4 10. 4 amino-2,6 dinitrotolueno
11. 2,6 dinitrotolueno
3 12. 4-nitrotolueno
13. 2-nitrotolueno
14. 3-nitrotolueno

6 9

8
2
7
1 5
10 11

13 14
12

2 6 10 14 18 22 min

n Análisis de derivatizados con DNPH

Los organismos reguladores de todo el mundo están interesados en medir el formaldehído y otros aldehídos en el aire.
Muchos grupos dedicados a la salud pública están interesados en la implicación de estos aldehídos en la irritación
respiratoria y sus posibles efectos cancerígenos con una exposición prolongada. Los fabricantes de productos que pueden
contribuir a las emisiones de aldehídos al aire, así como contaminantes en interiores, son los fabricantes de materiales de
construcción y productos de madera, tejidos y textiles, y empresas de automoción.

Las columnas XBridge C18 separan rápidamente Compuestos
1. Formaldehído-DNPH
los compuestos de interés para su cuantificación. 2. Acetaldehído-DNPH
3. Acetona-DNPH
4. Crotonaldehído-DNPH
5. Ciclohexanona-DNPH
5 11.00 40 50 10
4
1 2
3 Filtro respuesta: 0.2
Columna: XBridge Phenyl, 3.5 µm, 4.6 × 100 mm
Número de referencia: 186003334
Fase móvil A: H 2O
Fase móvil B: ACN
Fase móvil C: HCOOH al 0,2% en H2O
Caudal: 1.2 mL/min
Gradiente: Tiempo Perfil (min)
(min) %A %B %
C
0.0 40 50 10
2.67 40 50 10
6.67 0 90 10
7.33 40 50 10
Volumen de inyección: 10 µL
Muestra: Acetaldehído-DNPH (10 µg/mL),
acetona-DNPH (10 µg/mL), ciclohexanona-DNPH
(10 µg/mL), formaldehído-DNPH (10 µg/mL),
crotonaldehído-DNPH (10 µg/mL) en
H2O/ACN (60/40)
Temperatura de la columna: 30 °C
Temperatura de la muestra: 15 °C
Detección: UV @ 254 nm
Velocidad de adquisición: 5 puntos/s
Instrumento: Waters Alliance 2695 con PDA 2996

1 3 5 7 min

[ 24 ]
 Soluciones XBridge: medioambientales

n Análisis de aldehídos y cetonas como derivados de la DNPH

Los métodos EPA T011, 554 y 8315 describen el uso de la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) con detección ultravioleta (UV) para
la identificación de aldehídos y cetonas, como derivados de la dinitrofenilhidracina (DNPH) en el agua potable (554); tierra, aire, agua, desechos
o chimeneas obtenidos por el método 0011 (8315 opción 1) al aire libre (T011), y muestras obtenidas en aire de interiores por el método 0100
(8315 opción 2). Los métodos EPA 554 y 8315 opción 1 están dirigidos a los mismos 12 compuestos. Igualmente, los métodos EPA T011 y
8315 opción 2 están dirigidos a los mismos 15 compuestos. Varios analitos son comunes a los cuatro métodos.

En combinación con estos métodos EPA, las columnas XBridge Fenilo Columna: XBridge Phenyl, 4.6 x 150 mm, 3.5 µm
Número de referencia: 186003335
facilitaron la identificación efectiva de derivados de la DNPH en muestras Fase móvil: Agua/tetrahidrofurano/acetonitrilo

medioambientales. Caudal: 1.5 mL/min

Inyección: 20 µL cada uno de mezcla AccuStandard
(M-8315-R1-DNPH y M-8315-R2-DNPH)
2 diluida 1:5 en agua/acetonitrilo 40:60.
1 Temperatura: 35 °C
Detección: UV @ 360 nm
4
Sistema: Sistema Alliance HPLC de Waters con detección UV.
3
5
7
6
8
9
10
11
Derivados DNPH de
12
1. Formaldehído
2. Acetaldehído
3. Propanal
4. Crotonaldehído
5. Butanal
6. Ciclohexanona
7. Pentanal
8. Hexanal
9. Heptanal
10. Octanal
11. Nonanal
12. Decanal

4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 min

1 2
4

12
3 13
11
6
5 Derivados DNPH de
7 1. Formaldehído
8 9 10 2. Acetaldehído
3. Acetona
4. Acroleína
14
5. Propanal
15 6. Crotonaldehído
7. Butanal
8. Benzaldehído
9. Isovaleraldehído
10. Pentanal
11. o-tolualdehído
12. p-tolualdehído
13. m-tolualdehído
14. Hexanal
15. 2-5 dimetilbenzaldehído

4 6 8 10 12 14 16 18 20 min

Referencia bibliográfica

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[ 25 ]
Información para pedidos

Columnas analíticas XBridge

Dimensiones Tipo Tamaño de las C18 C8 Shield RP18 Fenilo HILIC

partículas
1.0 x 50 mm Columna 2.5 µm 186003118 186003164 186003136 186003306 —

2.1 x 10 mm Precolumna 2.5 µm 1860030561 1860030741 1860030651 1860033591 186004455

2.1 x 20 mm IS™ Columna 2.5 µm 186003201 186003167 186003139 186003307 —

2.1 x 30 mm Columna 2.5 µm 186003084 186003099 186003091 186003308 186004456

2.1 x 50 mm Columna 2.5 µm 186003085 186003101 186003092 186003309 186004457
3.0 x 20 mm IS Columna 2.5 µm 186003087 186003168 186003140 186003310 —
3.0 x 20 mm Precolumna 2.5 µm 1860030572 1860030752 1860030662 1860033602 —
3.0 x 30 mm Columna 2.5 µm 186003121 186003169 186003141 186003311 —
3.0 x 50 mm Columna 2.5 µm 186003122 186003170 186003142 186003312 186004458
4.6 x 20 mm IS Columna 2.5 µm 186003088 186003172 186003144 186003313 —
4.6 x 20 mm Precolumna 2.5 µm 1860030582 1860030762 1860030672 1860033612 186004459
4.6 x 30 mm Columna 2.5 µm 186003089 186003173 186003145 186003314 —
4.6 x 50 mm Columna 2.5 µm 186003090 186003174 186003096 186003315 186004460
4.6 x 75 mm Columna 2.5 µm 186003124 186003175 186003146 186003316 186004461

1.0 x 50 mm Columna 3.5 µm 186003126 186003177 186003148 186003317 186004429

1.0 x 100 mm Columna 3.5 µm 186003127 186003178 186003149 186003318 —
1.0 x 150 mm Columna 3.5 µm 186003128 186003179 186003150 186003319 —
2.1 x 10 mm Precolumna 3.5 µm 1860030591 1860030771 1860030681 1860033621 186004430
2.1 x 20 mm IS Columna 3.5 µm 186003019 186003180 186003151 186003320 —
2.1 x 30 mm Columna 3.5 µm 186003020 186003046 186003035 186003321 186004431
2.1 x 50 mm Columna 3.5 µm 186003021 186003047 186003036 186003322 186004432
2.1 x 100 mm Columna 3.5 µm 186003022 186003048 186003037 186003323 186004433
2.1 x 150 mm Columna 3.5 µm 186003023 186003049 186003038 186003324 186004434
3.0 x 20 mm IS Columna 3.5 µm 186003024 186003181 186003152 186003325 —
3.0 x 20 mm Precolumna 3.5 µm 1860030602 1860030782 1860030692 1860033632 —
3.0 x 30 mm Columna 3.5 µm 186003025 186003182 186003153 186003326 —
3.0 x 50 mm Columna 3.5 µm 186003026 186003050 186003039 186003327 186004435
3.0 x 100 mm Columna 3.5 µm 186003027 186003051 186003040 186003328 186004436
3.0 x 150 mm Columna 3.5 µm 186003028 186003052 186003041 186003329 —
4.6 x 20 mm IS Columna 3.5 µm 186003029 186003183 186003154 186003330 —
4.6 x 20 mm Precolumna 3.5 µm 1860030612 1860030792 1860030702 1860033642 186004437
4.6 x 30 mm Columna 3.5 µm 186003030 186003184 186003155 186003331 186004438
4.6 x 50 mm Columna 3.5 µm 186003031 186003053 186003042 186003332 186004439
4.6 x 75 mm Columna 3.5 µm 186003032 186003185 186003043 186003333 —
4.6 x 100 mm Columna 3.5 µm 186003033 186003054 186003044 186003334 186004440
4.6 x 150 mm Columna 3.5 µm 186003034 186003055 186003045 186003335 186004441
4.6 x 250 mm Columna 3.5 µm 186003943 186003963 186003964 186003965 —

2.1 x 10 mm Precolumna 5 µm 1860030621 1860030801 1860030711 1860033661 186004442

2.1 x 20 mm IS Columna 5 µm 186003107 186003186 186003156 186003336 —
2.1 x 30 mm Columna 5 µm 186003129 186003187 186003157 186003337 186004443
2.1 x 50 mm Columna 5 µm 186003108 186003011 186002999 186003338 186004444
2.1 x 100 mm Columna 5 µm 186003109 186003012 186003002 186003339 186004445
2.1 x 150 mm Columna 5 µm 186003110 186003013 186003003 186003340 186004446
3.0 x 20 mm IS Columna 5 µm 186003130 186003188 186003158 186003341 —
3.0 x 20 mm Precolumna 5 µm 1860030632 1860030812 1860030722 1860033672 —
3.0 x 30 mm Columna 5 µm 186003111 186003189 186003159 186003342 —
3.0 x 50 mm Columna 5 µm 186003131 186003190 186003160 186003343 186004447
3.0 x 100 mm Columna 5 µm 186003132 186003191 186003004 186003344 186004448
3.0 x 150 mm Columna 5 µm 186003112 186003014 186003005 186003345 —
3.0 x 250 mm Columna 5 µm 186003133 186003192 186003161 186003346 —
4.6 x 20 mm IS Columna 5 µm 186003134 186003193 186003162 186003347 —
4.6 x 20 mm Precolumna 5 µm 1860030642 1860030822 1860030732 1860033682 186004449
4.6 x 30 mm Columna 5 µm 186003135 186003194 186003163 186003348 186004450
4.6 x 50 mm Columna 5 µm 186003113 186003015 186003006 186003349 186004451
4.6 x 75 mm Columna 5 µm 186003114 186003195 186003007 186003350 —
4.6 x 100 mm Columna 5 µm 186003115 186003016 186003008 186003351 186004452
4.6 x 150 mm Columna 5 µm 186003116 186003017 186003009 186003352 186004453
4.6 x 250 mm Columna 5 µm 186003117 186003018 186003010 186003353 186004454

Pedidos en línea en www.waters.com

[ 26 ]
 ordering informaton

XBridge Preparative Columns

Dimensiones Tipo Tamaño de las partículas C18 C8 Shield RP18 Fenilo

10 x 10 mm PreColumnaa 5 µm 1860029721 1860029911 1860029831 1860033541

10 x 50 mm Columna 5 µm 186002973 186003264 186003257 186003271
10 x 100 mm Columna 5 µm 186003255 186003265 186003258 186003272
10 x 150 mm Columna 5 µm 186002974 186003266 186003259 186003273
10 x 250 mm Columna 5 µm 186003256 186003267 186003260 186003274
19 x 10 mm PreColumnaa 5 µm 1860029752 1860029922 1860029842 1860033552
OBD 19 x 30 mm Columna 5 µm 186002976 186003268 186003261 186003275
OBD 19 x 50 mm Columna 5 µm 186002977 186002993 186002985 186003356
OBD 19 x 100 mm Columna 5 µm 186002978 186002994 186002986 186003357
OBD 19 x 150 mm Columna 5 µm 186002979 186002995 186002987 186003358
OBD 19 x 250 mm Columna 5 µm 186004021 186004023 186004022 186004024
OBD 30 x 50 mm Columna 5 µm 186002980 186002996 186002988 186003277
OBD 30 x 75 mm Columna 5 µm 186002981 186003269 186003262 186003278
OBD 30 x 100 mm Columna 5 µm 186002982 186002997 186002989 186003279
OBD 30 x 150 mm Columna 5 µm 186003284 186003083 186002990 186003276
OBD 30 x 150 mm Columna 5 µm 186004025 — — —
OBD 50 x 50 mm Columna 5 µm 186003933 186003934 186003935 186003936
OBD 50 x 100 mm Columna 5 µm 186003937 186003938 186003939 186003940
OBD 50 x 150 mm Columna 5 µm 186003929 — — —
OBD 50 x 250 mm Columna 5 µm 186004107 — — —

10 x 10 mm PreColumnaa 10 µm 1860038893 1860040033 1860039883 —

10 x 150 mm Columna 10 µm 186003890 186004004 186003989 —
10 x 250 mm Columna 10 µm 186003891 186004005 186003990 —
OBD 19 x 10 mm PreColumnaa 10 µm 1860038924 1860040064 1860039914 —
OBD 19 x 50 mm Columna 10 µm 186003893 186004007 186003992 —
OBD 19 x 100 mm Columna 10 µm 186003901 186004008 186003993 —
OBD 19 x 150 mm Columna 10 µm 186003894 186004009 186003994 —
OBD 19 x 250 mm Columna 10 µm 186003895 186004010 186003995 —
OBD 30 x 100 mm Columna 10 µm 186003930 — — —
OBD 30 x 150 mm Columna 10 µm 186003896 186004011 186003996 —
OBD 30 x 250 mm Columna 10 µm 186003897 186004012 186003997 —
OBD 50 x 50 mm Columna 10 µm 186003898 186004013 186003998 —
OBD 50 x 100 mm Columna 10 µm 186003902 186004014 186003999 —
OBD 50 x 150 mm Columna 10 µm 186003899 186004015 186004001 —
OBD 50 x 250 mm Columna 10 µm 186003900 186004016 186004002 —

XBridge Column Method Validation Kits

Dimensiones Tipo Tamaño de las C18 C8 Shield RP18 Fenilo

partículas
2.1 x 100 mm MVKit 3.5 µm 186003766 186003777 186003788 186003799
3.0 x 100 mm MVKit 3.5 µm 186003767 186003778 186003789 186003800
3.0 x 150 mm MVKit 3.5 µm 186003768 186003779 186003790 186003801
4.6 x 100 mm MVKit 3.5 µm 186003769 186003780 186003791 186003802
4.6 x 150 mm MVKit 3.5 µm 186003770 186003781 186003792 186003803
2.1 x 150 mm MVKit 5 µm 186003771 186003782 186003793 186003804
3.0 x 100 mm MVKit 5 µm 186003772 186003783 186003794 186003805
3.0 x 150 mm MVKit 5 µm 186003773 186003784 186003795 186003806
4.6 x 100 mm MVKit 5 µm 186003774 186003785 186003796 186003807
4.6 x 150 mm MVKit 5 µm 186003775 186003786 186003797 186003808
4.6 x 250 mm MVKit 5 µm 186003776 186003787 186003798 186003809

1 Requiere soporte universal para precolumnas Sentry: 2,1 x 10 mm WAT097958

2 Requiere soporte universal para precolumnas Sentry: 3,0 x 20 mm/4,6 x 20 mm WAT046910
3 Requiere soporte para precolumnas preparativas de 10 x 10 mm 289000779
4 Requiere soporte para precolumnas preparativas de 19 x 10 mm 186000709

Para obtener información acerca Para obtener información acerca

de pedidos para bioseparación y de pedidos de columnas ACQUITY
análisis, visite: UPLC, visite:

www.waters.com/biosep www.waters.com/acquitycolumns
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Oficinas de ventas
Austria y exportación europea (Europa cen- Países Bajos 31 76 508 7200
tral sudoriental, CEI y Oriente Medio)
Noruega 47 6 384 60 50
43 1 877 18 07
Polonia 48 22 833 4400
Australia 61 2 9933 1777
Puerto Rico 1 787 747 8445
Bélgica 32 2 726 1000
Singapur 65 6273 1221
Brasil 55 11 5094-3788
España 34 93 600 9300
Canadá 1 800 252 4752 x2205
Suecia 46 8 555 11 500
China 86 10 8586 8899
Suiza 41 56 676 70 00
CEI/Rusia +7 495 3367000
Taiwán 886 2 2543 1898
República Checa 420 2 617 1 1384
Reino Unido 44 208 238 6100
Dinamarca 45 46 59 8080
Todos los demás países: Waters
Finlandia 09 5659 6288
Corporation EE.UU.
Francia 33 1 30 48 72 00 1 508 478 2000 1 800 252 4752

Alemania 49 6196 400600 www.waters.com

Hong Kong 852 29 64 1800

Hungría 36 1 350 5086

India y subcontinente indio

91 80 2837 1900

Irlanda 353 1 448 1500

Italia 39 02 27 421 1

Japón 81 3 3471 7191

Corea 82 2 820 2700

México 52 55 5200 1860

El sistema de gestión de calidad de las instalaciones de fabricación de Waters
en Taunton, Massachusetts y en Wexford, Irlanda, cumple los estándares
de gestión de calidad y garantía de calidad de la norma internacional ISO
9001:2000. El sistema de gestión de calidad de Waters es auditado periódi-
camente por el organismo de registro para garantizar su cumplimiento.
©2008 Waters Corporation. Waters, T he Science of W hat’s Possible, OBD, Oasis, XBridge,
SunFire, XTerra, BEH Technology, ACQUITY UPLC, Alliance, AflaTest, Atlantis, Symmetry, IS,
ACQUITY, UPLC, UltraPerformance LC y AutoPurification son marcas comerciales de Waters
Corporation. Todas las demás marcas comerciales pertenecen a sus respectivos propietarios.
720001255ES abril de 2008 SC-W P