ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL

DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

TEMA: DETERMINACION DE VITAMINA C

 CURSO:
ANÁLISIS INSTRUMENTAL
 ALUMNO:
GLEYSER BURGOS AGREDA
 DOCENTE:
ING. Moisés toro
 GRUPO: “B”

Noviembre – 2017
Nuevo Chimbote - Perú
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Universidad Nacional del Santa

DETERMINACIÓN DE VITAMINA “C” POR

ESPECTROFOTOMETRÍA

INTRODUCCIÓN
La vitamina C, o ácido ascórbico, es un compuesto hidrosoluble de 6 átomos de carbono
relacionado con la glucosa. Su papel biológico principal parece ser el de actuar como
cofactor en diversas reacciones enzimáticas que tienen lugar en el organismo. El ácido
ascórbico actúa como coenzima de las hidroxilasas de prolina y lisina, encargadas de
hidroxilar la lisina y prolina en el protocolágeno, modificación necesaria para que éste
pueda formar los enlaces cruzados para formar las fibrillas de colágeno. Por ejemplo,
ayuda a la absorción del hierro al reducirlo a su estado ferroso en el estómago; protege la
vitamina A, vitamina E y algunas vitaminas B de la oxidación; también favorece la
utilización del ácido fólico ayudando a la conversión del folato en tetrahidrofolato o
mediante la formación de derivados poliglutamato del tetrahidrofolato. Finalmente, la
vitamina C es un antioxidante biológico que protege al organismo del estrés oxidativo
provocado por las especies oxigeno reactivas. La vitamina C se encuentra principalmente
en alimentos de origen vegetal y puede presentarse en dos formas químicas
interconvertibles: ácido ascórbico (forma reducida) y ácido dehidroascórbico (forma
oxidada), siendo ambas formas funcionales biológicamente y manteniéndose en equilibrio
fisiológico. Si el ácido dehidroascórbico es hidratado se transforma en ácido
dicetogulónico, no activo biológicamente, siendo esta transformación irreversible. Esta
hidratación ocurre espontáneamente en disolución neutra o alcalina.
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O OH
C
OH OH
HO 4 O HO 4 O O C
5
1
O 5
1 O
3 2 3 2 O C
HO OH O O H C OH
Ácido dehidroascórbico
HO C H
CH2 OH

Ácido dicetogulónico

OBJETIVO
 Determinar el efecto de la longitud de onda dominante en el análisis
cuantitativo por espectrofotometría.

FUNDAMENTO
Cada determinación de análisis cuantitativo por espectrofotometría debe realizarse en
una longitud de onda específica a fin de que los datos a obtenerse sean precisos y
exactos.
La determinación del contenido de ácido ascórbico en frutas y vegetales puede
realizarse por diversos métodos. Basa en la reducción del colorante 2 – 6 Diclorofenol
por efecto de la solución estándar de colorante; esta capacidad es determinada
espectrofotométricamente.
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EQUIPOS
 Espectrofotómetro Spectromon 401
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MATERIALES Y METODOS
 Materiales :
Cubetas del Espectrofotómetro
Filtros del Espectrofotometro 480, 520 y 540 nm.
Papel Tissue
Pipetas 1, 2, 3, 4, 5 y 10 ml
Fiolas de 100 y 1000 ml.
Tubos de Prueba.
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 MUESTRAS

CUBETAS DEL FIOLAS FILTROS DEL

ESPECTROFOTROMETRO
ESPECTROFOTOMETRO

PIPETAS
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Reactivos
a) Preparar una solución de ácido oxálico al 0.4 % pesar 4gr. De este ácido
y llevar a volumen de 1000 ml. Con agua destilada.
b) Soluciones estándar (madre) de ácido ascórbico: Preparar una solución
de 0.1 % de ácido ascórbico en una solución ácida de 0.4 % de ácido
oxálico. Pesar 100 mg. de ácido ascórbico y llevar a volumen de 100 ml.
con una solución de ácido Oxálico al 0.4 %.
c) Estándares de trabajo (ET): Tomar 1, 2, 3, 4 y 5 ml. de la solución madre
de ácido ascórbico y llevar a volumen de 100 ml. con una solución de
ácido oxálico al 0.4 %. Esta solución numeradas del 1 al 5 contendrán 1,
2, 3, 4 y 5 mg. de ácido ascórbico por 100 ml. respectivamente.
d) Solución coloreada (Colorantes): pesar 12 mg. de 2 – 6 DFIF , disolver y
llevar a 1000 ml. de volumen con agua destilada. Utilizar agua destilada
hirviente. Almacenar en botella de color oscura y en refrigeración.

2. Preparación de la Curva Estándar.

a) Tomar 4 tubos de prueba y enumerarlas de I al IV y agregar lo siguiente:
I 10 ml. de agua destilada
II 1 ml. de ácido oxálico al 0.4%
III 1 ml. de estándar de trabajo (ET) Nº 1 + 9 ml. de agua
IV 1 ml. del estándar de trabajo (ET) Nº 1
b) Ajustar a cero la Absorbancia usando I y el filtro seleccionado.
c) Al tubo II añadir 9 ml. del colorante y exactamente después de 15
segundos, leer la absorbancia.
d) Ajustar a cero la absorbancia con la solución del tubo III
e) Al tubo IV añadir 9 ml. del colorante y exactamente después de 15
segundos, leer la absorbancia (L2).

3. Método: Preparación de la Muestra.

a) Marcar 50 gr. De muestra fresca con 350 ml. de una solución de ácido
oxálico al 0.4 % en una licuadora por 3 min. y luego filtrar.
b) Determinar L1 como se describió anteriormente (paso 3)
c) En el tubo III colocar 1 ml. de filtrado (muestra) mas 9 ml de agua ajustar
al cero la absorbancia.
d) Luego en el tubo IV colocar 1 ml. de filtrado (muestra) mas 9 ml de
colorante y registrar la absorbancia L2 después de 15 segundos.
e) Calcular (L1 - L2) y obtener la concentración de ácido ascórbico a partir de
la curva estándar.

RESULTADO Y DISCUSIÓN
Presentar curva Estándar.
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Presentar curva Experimental.

Calcular la concentración de ácido ascórbico presente en la muestra a 480, 520 y
540 nm. Discuta de acuerdo a sus datos encontrados cuál de las longitudes de
onda es la más recomendable para el análisis cuantitativo de vitamina C.

[ ] mg/ml L1 L2 L1- L2
2 0.0638 0.0190 0.0448
4 0.0724 0.0133 0.0591
6 0.0704 0.0121 0.0583
8 0.0544 -0.0061 0.0605
10 0.0645 -0.0023 0.0668

Para obtener una grafica con una regresión optima de 0.09767 se modificara los
datos e iliminazmos la concentración en 4mg/100ml ya que por una manipulación
inadecuada del alumno en la soluciones pues existio una variación negativa para
la grafica.

[ ] mg/ml L1 L2 L1-L2
Naranja 0.0735 0.0647 0.0088
piña 0.0759 0.0649 0.011
limon 0.0726 0.0586 0.014
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Absorbancia
0.08

0.07 y = 0.0027x + 0.0402

R² = 0.9767
ABSORBANCIA 0.06

0.05

0.04

0.03

0.02

0.01

0
0 2 4 6 8 10 12

GRAFICA.1

DISCUSION:
Según el ICBF el contenido de Vitamina C que debe tener el limón según la
información nutricional (Tabla 2. Contenido de Vitamina C en Limón) es de 38.7 mg
de vitamina C por 100ml de éste.
Entonces los 5 ml que usamos tendrían que tener la misma concentración.
Al hacer la solución de 5ml de zumo y 35 ml de agua destilada tendríamos
una solución de 40 ml en total
Cuando se usa la formula c1v1=c2v2 da q la solución tendría que tener
alrededor de 4.8 mg de vitamina, éste resultado si da en nuestra curva de
absorbancia, entonces lo que sólo está mal es la lectura L2 que operando
nos da 0.8818 de absorbancia, pero debe ser aproximadamente 0.0256,
entonces hicimos estos cálculos modificando el L2 según la gráfica N.1.

CONCLUSIONES:
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 En primer lugar se puede observar que el zumo de limón es el que

contiene mayor cantidad de ácido ascórbico. Además, como era de
esperar, al realizar la valoración recién exprimido el contenido resultante
es mayor que cuando se realiza con las otras dos condiciones.
 Se determinó la cantidad de vitamina c en una muestra de zumo de
limón, esta prueba permitió conocer la cantidad la cual fue de 34,5 mg.
este resultado está dentro de los rangos permitidos.

I. REFERENCIAS BIBLOGRÁFICAS:
1. Badui, S. 1996. Química de alimentos. Editorial Alambra, México, pp.
54-72.
2. Hart, L.; Fisher, H. 1991. Análisis Moderno de los Alimentos. 2da
reimpresión. Editorial Acribia. Zaragoza, España, pp- 80-92
3. Nielsen, S. 2003. Análisis de los alimentos. Manual de laboratorio.
Editorial Acribia Zaragoza. Tercera edición. España, pp- 60-76
4. VAN DER LAAT, J.1954.Estudio comparativo de ácido cítrico y vitamina
c en el jugo de algunas variedades de Citrus de uso popular. Rev.
Biología Tropical .Vol. 2.ppt 45-58
5. Zago, K.; Garcia, M.; Di Bernardo, M. 2010. Determinación del contenido
de vitamina C en miel de abejas venezolanas por volumetría de óxido-
reducción.