Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Ratón Disección
Ratón Disección
AISLAMIENTO DE LINFOCITOS.
1.- INTRODUCCIÓN
Los ratones deben ser manipulados con cuidado pero con decisión para evitar estresar al
animal, lo que puede resultar en mordeduras o arañazos al experimentador y en daños innecesarios al
animal. Debe tenerse en cuenta que los ratones son más agresivos que las ratas y tenderán a morder
instintivamente.
2.- OBJETIVOS
- Sujetar manualmente los ratones para ser correctamente inyectados, sin riesgo personal y sin dañar
al animal.
- Extraer sangre y preparar suero.
- Anestesiar ratones por inhalación
- Abrir el abdomen y extraer el bazo.
- Localizar y extraer ganglios linfáticos.
- Abrir el tórax y extraer el timo.
- Disgregar los tejidos para obtener células viables.
3.- EQUIPAMIENTO
4.- REACTIVOS
- Etanol 70%
- Eter dietílico anestésico
- Tampón PBS pH 7.2
- Suero fisiológico
5.- MÉTODO
1.- Cargar una jeringuilla con la suspensión a inyectar (en nuestro caso 2.5 ml de suero fisiológico)
expulsar las burbujas de aire y dejar preparada.
2.- Sacar al ratón de la jaula asiéndolo con una mano por la base del rabo y situarlo sobre la tapa para
que se agarre a las barras.
3.- Con los dedos pulgar e índice de la otra mano agarrar por la piel de la nuca.
4.- Situar el rabo por detrás del dedo meñique para inmovilizar al ratón con una sola mano.
5.- Lavar el abdomen con etanol y dejar secar.
6.- Colocar al ratón ligeramente cabeza abajo.
7.- Introducir la aguja en el cuadrante inferior izquierdo (o derecho) del abdomen a un lado de la
línea media.
8.- Inyectar con presión moderada.
1.- Cargar la jeringuilla con el líquido a inyectar (2.5 ml de suero fisiológico) y expulsar el aire.
2.- Situar al ratón sobre sus patas encima de un secante.
3.- Sujetar por la piel del área interescapular con los dedos índice y pulgar.
4.- Introducir la aguja bajo la piel entre los dedos.
5.- Inyectar con presión moderada.
1.- Colocar un trozo grande de algodón en un vaso de precipitado y empapar ligeramente con éter
dietílico (Evitar su inhalación directa. Muy inflamable). Tapar y dejar evaporar dos minutos.
2.- Preparar un tubo de 50 ml con un algodón humedecido en éter y guardar tapado. Servirá para
suplementar anestesia si se requiere más tarde.
3.- Introducir al animal en el recipiente y tapar.
4.- Cuando se observe que el animal se tiende y su respiración es lenta y regular, puede extraerse.
5.- Si se requiriera aplicar un suplemento anestésico durante las manipulaciones siguientes, puede
colocarse unos segundos en la cabeza del animal el tubo de 50 ml con el algodón humedecido en éter.
1.- Sacrificar al animal por dislocación cervical: Colocar un mango de bisturí detrás de las orejas,
cruzando la nuca, tirar del rabo hacia atrás con la otra mano mientras se presiona hacia abajo en la
nuca.
2.- Colocarlo de espaldas sobre un papel secante.
3.- Esterilizar con alcohol la zona de la línea media.
4.- Cortar por la línea media con tijeras.
5.- Retirara la piel con los dedos.
Bazo:
Ganglios:
Timo:
1.- Depositar las piezas en pocillos o placas de petri pequeñas en las que previamente se ha
añadido PBS estéril.
2.- Limpiar de tejido graso y conectivo.
3.- Pinchar repetidas veces con una aguja.
4.- Presionar suavemente con el émbolo de una jeringuilla.
5.- Aspirar el líquido que baña la pieza y depositarlo en un tubo.
6.- Reemplazar con PBS limpio y repetir los pasos 4 a 6 hasta que solo quede la cápsula.
7.- Cuando todo el líquido esté en el tubo, dejar sedimentar los trozos de tejido no disgregado y
transferir el líquido claro a un tubo limpio.
8.- Centrifugar a 400xg 5 minutos, decantar y añadir 1ml de medio de cultivo.