UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA

UNIDAD IZTAPALAPA
LICENCIATURA EN QUÍMICA

Determinación de quinina en una muestra comercial

de agua quinada marca peñafiel por
fluorescencia

TRUJILLO VÁZQUEZ MARTHA RUBI

LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

12/03/15
RESUMEN

La fluorescencia consiste en la absorción de radiación electromagnética por parte de ciertas moléculas, que
pasan a un estado excitado para posteriormente emitir radiación electromagnética. La intensidad de esa
radiación emitida es proporcional a la concentración de fluorógeno en la muestra.

La fluorescencia permite realizar determinaciones analíticas con cierto grado de selectividad y límites de
detección más bajos que los métodos basados en absorción. Sus límites de detección, pueden ir desde algunos
ppm hasta ppb y en algunos casos hasta ppt.
Quinina
La quinina es un alcaloide derivado de la corteza del árbol de la quina (género cinchona):

QUININA

La cantidad de quinina presente en agua quina gasificada puede cuantificarse empleando un método de
fluorescencia debido a que presenta un elevado rendimiento cuántico de emisión. Presenta dos máximos de
excitación, una en torno a los 250nm y otra alrededor de 350 nm. El máximo de emisión es por los 450nm,
independientemente de la longitud de onda a la que se excite. En presencia de carbonatos o cloruros, el
rendimiento cuántico se reduce demasiado (efecto quenching), por lo que es necesario trabajar en ausencia de
estos iones. [1]
Las bebidas de quina no deberán contener más de 0,001% de quinina o 0,01% de bisulfato de quinina o de
clorhidrato de quinina. [2]

Lo que se realizo primeramente fue determinar los máximos de excitación y emisión. Posteriormente se realizo
una regresión lineal entre la concentración de diversas soluciones estándar y la respectiva intensidad de
fluorescencia (emisión) de cada una de ellas. Finalmente, se interpolo el valor medido de la intensidad de
emisión de fluorescencia de una alícuota de una muestra comercial (Peñafiel) para determinar su respectiva
concentración de quinina.

Se obtuvo que el agua quina comercial Peñafiel contiene (25.53± 1.50) ppm de quinina.

OBJETIVOS
 Determinar la cantidad de quinina en agua tónica comercial marca Peñafiel mediante el método
espectrofotométrico de fluorescencia.

Material
 1 matraz volumétrico de 250 mL
 1 matraz volumétrico de 25 mL
 1 matraz volumétrico de 10 mL
 1 micropipeta (100 – 1000 μL)
 1 pipeta graduada de 10 mL
 1 vaso de precipitados de 50 mL
 1 agitador magnético
 1 parrilla con agitación
 1 piceta
Reactivos
 Ácido Sulfúrico Concentrado, H2SO4
 Quinina, C20H24N2O2
 Agua Destilada
 Agua tónica Peñafiel
Equipo
 Fluorómetro
 Celdas para Fluorómetro
PROCEDIMIENTO

Se prepararon las siguientes soluciones acuosas.

Solución A. 250 mL de solución acuosa de H2SO4 0.05 M.

Solución B. 10 mL de solución acuosa que contiene 10 mg de quinina en ácido sulfúrico 0.05 M.

Solución C. 0.25 mL de solución acuosa de 10 ppm de quinina en 25 mL de ácido sulfúrico 0.05 M.

Optimización de los valores de intensidad de fluorescencia para el análisis cuantitativo.

Se preparo una solución estándar de quinina, tomando 0.6 mL de la solución que tenia concentración de
quinina igual a 10 ppm y se llevaron a 10 mL con H2SO4 0.05 M.
Se hizo un barrido previo para obtener los espectros de excitación y emisión de la quinina para valores
intermedios de la apertura de las rendijas (slits) de excitación y emisión

Se selecciono la longitud de onda óptima de excitación para determinar el espectro de emisión de la quinina, la
cual fue de 442 nm. Se abrio más el slit de emisión para optimizar el espectro de emisión de la quinina.

Curva de calibración

Se prepararon las soluciones de acuerdo a la tabla 1, se obtuvo el espectro de emisión (intensidad de

fluorescencia, IF, como función de la longitud de onda), por triplicado, de cada una de ellas a la longitud de
onda de excitación seleccionada (excit).

Solución Estándar H SO
VQuinina (mL) 2
V0.05M4
(mL)
Blanco 0 10
1 0.1 10
2 0.2 10
3 0.3 10
4 0.4 10
5 0.5 10
6 0.6 10

Tabla 1.Praparacion de las soluciones para llevar a cabo la curva de

calibración.

Solución problema

Se elimino el CO2 del agua quinada y se tomaron tomar 3 mL de esa solución. Se diluyo en un matraz de 10 mL
con H2SO4 0.05M. De esta solución se tomo 1 mL y se aforo en un matraz de 10 mL con H2SO4 0.05M. De
esa solución se tomaron 5 mL y se diluyeron en 10 mL.
Se obtuvo el espectro de emisión de la solución problema, por triplicado.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Al realizar las mediciones de intensidad de fluorescencia en el fluorómetro, se observo que la longitud de onda
óptima de excitación se encuentra en 350 nm, mientras que la longitud de onda óptima de emisión se
encuentra en 442 nm. Por tanto, se utilizaron los valores de las mediciones de intensidad de fluorescencia a 442
nm para la construcción de la curva de calibración.

𝐄𝐬𝐭á𝐧𝐝𝐚𝐫 𝑯 𝑺𝑶
Solución 𝐕𝐐𝐮𝐢𝐧𝐢𝐧𝐚 (𝐦𝐋) 𝟐
𝑽𝟎.𝟎𝟓𝑴𝟒
(𝒎𝑳) CQuinina (ppm)
IF promedio
2.29
Blanco 0 10.00 ± 0.02 0 1.92 1.99
1.76
6.29
1 0.1 ± 0.003 10.00 ± 0.02 0.1 ± 0.0049 6.28 6.33
6.42
10.79
2 0.200 ± 0.003 10.00 ± 0.02 0.2 ± 0.0052 10.76 10.71
10.58
16.71
3 0.300 ± 0.003 10.00 ± 0.02 0.3 ± 0.0071 16.82 16.54
16.08
22.06
4 0.400 ± 0.003 10.00 ± 0.02 0.4 ± 0.0091 21.92 21.92
21.88
27.67 27.73
5 0.500 ± 0.003 10.00 ± 0.02 0.5 ± 0.011 27.26
28.25
32.64
6 0.600±0.003 10±0.02 0.6± 0.013 33.65 33.18
33.25

Tabla 2. Intensidad de fluorescencia a 442 nm, con respecto a la concentración de quinina (ppm).

Curva de calibración de quinina

35
Intensidad de fluorescencia

30
25 y = 52.705x + 1.1019
20 R² = 0.9972
15
10
5
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7
Concentración de quinina(ppm)

Grafica 1. Concentración (ppm) vs Intensidad de fluorescencia. Curva de

calibración de quinina.
Se obtuvo las siguientes intensidades de fluorescencia de la muestra problema 20.75, 21.44, 21.68. Al interpolar
estos datos mediante la ecuación de la recta (y= 52.705 + 1.1019), se obtuvo que la concentración de quinina en
la muestra problema es de (0.383±0.0088) ppm (Ver memoria de cálculo).

En total hay (25±1.50) ppm en el agua tónica de marca peñafiel (ver memoria de cálculo).

CONCLUSIONES
De acuerdo a las normas mexicanas (NOM-218-SSA1-2011), las bebidas de quina no deben contener más de 10
ppm de quinina.[2]
De acuerdo a la FDA, las bebidas de agua quinada contienen de 25 a 80 ppm.[3]

La cantidad determinada de quinina (en una muestra marca Peñafiel) por método de espectrofotometría de
fluorescencia es de (25±1.50) ppm. Esta cantidad se encuentra es mayor a la máxima cantidad permisible por las
normas mexicanas. Sin embargo este valor es permitido por la FDA.

REFERENCIAS

1. Universidad Nacional de la Plata. Espectrofotometría de Fluorescencia

http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qa3/guias/2008-TP-06-Espectrofotometria_de_Fluorescencia.pdf
2008
2. PROYECTO de Norma Mexicana PROY-NOM-218-SSA1-2009, Productos y servicios. Bebidas saborizadas
no alcohólicas, sus congelados, productos concentrados para prepararlas y bebidas adicionadas con
cafeína. http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=5172093&fecha=22/12/2010, 2010.
3. http://www.fononova.es/noticias/225-las-bebidas-tonicas-contienen-quinina-que-puede-producir-
sordera.html

MEMORIA DE CÁLCULO

Masa de Quinina:

mQuinina = (0.010 ± 0.00005) g = (160 ± 0.05) mg

Volumen de Aforo de Solución Inicial de Quinina:

VAQuinina = (10.00 ± 0.02) mL

Concentración de Solución Inicial (B) de Quinina

 Inicial
mQuinina
CQuinina =
VAQuinina

2 2
2
1 2
mQuinina
σCInicial = √Sm ( ) + SVA (− 2)
Quinina Quinina
VAQuinina Quinina
(VAQuinina )

inicial
CQuinina = (1 ± 0.0059) mg/mL = (1000.0 ± 5.9) ppm

Solución Estándar de Quinina

Concentración de Solución Inicial de Quinina

Inicial
CQuinina = (1000.0 ± 5.9) ppm

Volumen Utilizado de Solución Inicial de Quinina:

VUQuinina = (250 ± 3) μL = (0.250 ± 0.003) mL

Volumen de Aforo de Solución Estándar de Quinina:

VAEstándar
Quinina = (25.00 ± 0.03) mL

Concentración de Solución Estándar de Quinina

Inicial
Estándar
CQuinina ∗ VUQuinina
CQuinina =
VAEstándar
Quinina

2
2 𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 2 𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙
𝑉𝑈𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝐶𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝐶𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 ∗ 𝑉𝑈𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎
𝜎𝐶 𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 = √𝑆 2𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 ( 𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 ) + 2
𝑆𝑉𝑈 ( 𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 ) + 2
𝑆𝑉𝐴 𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 (− 2 )
𝐶𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎
𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝑉𝐴𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝑉𝐴𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎
(𝑉𝐴𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 )

𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
𝐶𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 = (10 ± 0.19) 𝑝𝑝𝑚

Las concentraciones de quinina y sus respectivas incertidumbres fueron calculadas mediante las siguientes
fórmulas:
 Estándar Estándar
CQuinina ∗ VQuinina
CQuinina = H SO
2 4
V0.05M

2
Estándar Estándar 2 Estándar Estándar 2
2
VQuinina 2
CQuinina 2
CQuinina ∗ VQuinina
σCQuinina √
= SCEstándar ( H SO ) + SVEstándar ( H SO ) + S H2SO4 (− )
Quinina 2
VA0.05M 4 Quinina 2
VA0.05M 4 VA0.05M H SO 2
(VA 2 4 ) 0.05M

REGRESIÓN LINEAL SIMPLE

No. de punto Xi (Xi - Xprom)2 Yi (Yi - Yprom)2 XiYi (Xi-Xprom)(Yi-Yprom) (Xi)2

1 0 0.09 1.99 222.7058778 0 4.477 0
2 0.1 0.04 6.33 112.0069444 0.633 2.116666667 0.01
3 0.2 0.01 10.71 38.48134444 2.142 0.620333333 0.04
4 0.3 0 16.53666667 0.141877778 4.961 0 0.09
5 0.4 0.01 21.92 25.06671111 8.768 0.500666667 0.16
6 0.5 0.04 27.72666667 116.9281778 13.86333333 2.162666667 0.25
7 0.6 0.09 33.18 264.6044444 19.908 4.88 0.36
0.28 779.9353778

Xprom = 0.3 Yprom = 16.91333333 XiYi = 50.27533333 (Xi)2 = 0.91

SX2 = 0.046666667 SY2 = 129.9892296 SXY = 2.459555556 q= 2.153638095

^m = 52.7047619 ± 1.240287437 R2 = 0.997238697

^b= 1.101904762 ± 0.447191995

y a interpolar = 21.290  0.002

x interpolado = 3.8304E-01  8.8123E-03

3 20.750 21.440 21.680 repeticiones

Sensibilidad, Limite de detección y limite de cuantificación.

La sensibilidad es la pendiente de la curva de regresión. m= 52.705

Los límites de detección (LOD) nos indican a partir de que valores es posible diferenciar una señal generada por
una muestra del ruido generado por el equipo.

Los límites de cuantificación (LOQ) nos indican a partir de que valores es posible determinar de manera
cuantitativa la presencia de una sustancia por medio de la señal generada por la misma y medida por el equipo.
Los valores de LOD y LOQ se calculan de la siguiente manera:

LOQy = b + 10sy

LODy = b + 3sy
.

El límite de cuantificación es igual a 0.03685 ppm y el límite de detección es 0.02285.

Cálculo de la concentración de quinina.

DATOS

V10=(10±0.02)mL

V5= (5± 0.05)mL

V1= (1±0.05)mL

V3=(3±0.05)mL

3
0.383 𝑝𝑝𝑚(10𝑚𝐿)๺
𝐶𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 = = 25.53 𝑝𝑝𝑚
5𝑚𝐿(1𝑚𝐿)(3𝑚𝐿)

3 2 2 3 2 3 2 3 2
(𝑉10 ) 3 ∗ 𝑋𝐼𝑁𝑇 ∗ (𝑉10)3 𝑥𝐼𝑁𝑇 𝑉10 𝑥𝐼𝑁𝑇 𝑉10 𝑥𝐼𝑁𝑇 𝑉10
𝜎𝐶 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = √𝑆𝑋𝐼𝑁𝑇
2
( 2
) + 𝑆𝑉10 ( ) + 𝑆𝑉5 2 (− 2 ) + 𝑆𝑉1 2 (− 2 ) + 𝑆𝑉3 2 (− )
𝑄𝑢𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 𝑉5 ∗ 𝑣1 ∗ 𝑣3 𝑉5 ∗ 𝑉1 ∗ 𝑉3 𝑉5 ∗ 𝑉1 ∗ 𝑉3 𝑉5 ∗ 𝑉1 ∗ 𝑉3 𝑉5 ∗ 𝑉1 ∗ 𝑉32

C quinina= (25.53± 1.50) ppm