Villanueva A. Carlos E.

Biotecnología Microbiana

ESTEQUIOMETRIA MICROBIANA

1. CONCEPTOS Y APLICACIÓN EN BIOPROCESOS

Estudia las relaciones aritméticas entre las masas o volúmenes de los reactantes y los
productos en una reacción química llevada a cabo por los microorganismos.

Los cálculos estequiométricos permiten determinar las relaciones másicas y molares entre
los reactantes y los productos finales en los procesos fermentativos.

¿Cual es la concentración final de microorganismos o productos obtenidos respecto de la

concentración de los componentes (sustratos) del medio de cultivo ?

Esta información se deduce de las ecuaciones de reacción escrita y balanceadas

correctamente y de los pesos atómicos pertinentes.

Por ejemplo:

Reactantes Productos

1. 2 H2 + O2  2 H2 O
4g 32 g 36 g
36 g

2. C6H1206 + 6 O2  6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP

180 g 192 g 264 g 108 g
372 g 372 g

Durante las reacciones químicas o bioquímicas los átomos y moléculas se reordenan para
formar nuevos grupos pero se conservan las cantidades siguientes:

1. La masa total de reactantes = masa total de productos; y

2. El numero de átomos de cada elemento (C,H,O) en los reactantes = numero de
átomos de cada elemento (C,H,O) en los productos.

Sin embargo, no existe una ley correspondiente para la conservación de moles, es decir,
moles de reactantes # moles de productos

La estequiometría es de aplicación en bioprocesos porque permite:

1. El balance de masa y energía
2. Determinar el rendimiento teórico y compararlo con el rendimiento actual del
producto.
3. Chequear la consistencia de datos de la fermentación experimental
4. Formulación del medio de nutrientes
El crecimiento microbiano (rx = dx /dt = µX) y la formación de productos (rp = dp/dt = qp .
X) son procesos complejos que reflejan la cinética y estequiometría global de cientos de
reacciones intracelulares.
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Discutiremos:
¿Como son formuladas las ecuaciones de reacción para el crecimiento microbiano y
la síntesis de productos (metabolitos) ?

2. ESTEQUIOMETRIA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Cuando ocurre crecimiento celular (rx = dx /dt = µX), las células (biomasa, X) constituye
un producto de la reacción y debe ser representada en la ecuación de reacción
estequiométrica.

A. PLANTEAMIENTO DE LA ECUACION DE CRECIMIENTO CELULAR

a. El crecimiento celular obedece a la ley de la conservación de la masa y podemos

escribir la siguiente ecuación para expresar el crecimiento celular aerobio.

CwHxOyNz + a O2 + b HgOhNi  c CHαOβNγ + d CO2 + e H2 O

Formula quimica Formula quimica Formula quimica

sustrato fuente N2 biomasa seca

Glucosa: C6H1206
W=6
X =2
Y =6
Z = carece

Donde: a, b, c, d, e son los coeficientes estequiométricos

b. La ecuación es escrita sobre la base de 1 mol de sustrato. Por lo tanto: a moles de O2

son consumidos y d moles de CO2 son formados por mol de sustrato reactante.

c. La figura representa esta conversión a nivel celular.

Bioconversión
del sustrato, oxigeno y fuente de nitrógeno para crecimiento celular

CwHxOyNz ----------- --------- c CHαOβNγ

a O2 ---------- -------- d CO2

b HgOhNi ---------- --------- e H2 O

CELULA

d. No se incluye multitud de compuestos tales como ATP y NADH, no sujetos a intercambio

neto con el ambiente. Las vitaminas y minerales podrían estar incluidos, pero se obvian
por su consumo pequeño. Otras sustancias y productos podrían ser seleccionados si
son apropiados.
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e. La biomasa es representada por la formula CHαOβNγ que es una reflexión de la

composición de la biomasa microbiana.

Los microorganismos (por ej. E. coli) contienen un amplio rango de elementos (Tabla
1). Sin embargo 90 – 95 % de la biomasa puede estar constituida por 4 elementos
mayores: C, H, O, N.

Tabla 1.

En la Tabla 2 son listadas la composición elemental de varias especies en términos de

aquellos 4 elementos.

Tabla 2

Composición elemental y grado de reducción para organismos seleccionados

Organismo Formula elemental Grado de reducción γ

(Relativo al NH3)

Escherichia coli C H 1.77 O 0.49 N 0.24 4.07

Saccharomyces cerevisiae C H 1.83 O 0.56 N 0.17 4.20
Saccharomyces cerevisiae C H 1.81 O 0.51 N 0.17 4.28
Candida utilis C H 1.83 O 0.54 N 0.10 4.45
Candida utilis C H 1.87 O 0.56
Candida utilis C H 1.83 O 0.46
Candida utilis C H 1.87 O 0.56

Promedio C H 1.79 O 0.50 N 0.20 4.9

C H 1.8 O 0.5 N 0.2 puede ser usado como una formula general cuando el análisis de
composición no es disponible.
El peso molecular promedio de biomasa basado sobre cantidades de C, H, O, N,
es por lo tanto 24.6 aunque el 5-10 % de residuo mineral es a menudo adicionado
para contar aquellos elementos no incluidos en la formula.
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B. “FORMULA MINIMA” DE UN MICROORGANISMO PROMEDIO

1. Composición elemental de un microorganismo

 Es el porcentaje de cada elemento contenido en 100 partes de masa celular (tabla 1)

 Se puede definir un “microorganismo promedio“ como aquel cuya composición (%
P/P) de elementos mayoritarios (C,H,O,N) es:

C = 46.5 % ; H = 6.49 ; O = 31.0 % ; N = 10.85

Siendo el contenido de sales 5 %

 La composición elemental de la biomasa se mantiene constante durante el cultivo,

No se modifica mayormente durante un cultivo. Son semejantes para distintos tipos
de microorganismos (bacterias y hongos).
 Sin embargo, la composición macromolecular (proteínas, ácidos nucleicos, etc.)
puede variar sensiblemente.

2. Determinación de “formula mínima” de un microorganismo promedio

 Teniendo en cuenta la composición elemental media anterior es posible escribir

una “formula mínima” de un microorganismo promedio, como:

C H 1.67 O 0.5 N 0.2

Esta formula representa solo el 95 % p/p de la biomasa. Se calcula así:

Cálculo de cocientes atómicos:

Dividir composición centesimal de cada elemento por su peso atómico

C = 46.5 / 12 = 3.88 H = 6.49 / 1 = 6.49
O = 31.0 / 16 = 1.94 N = 10.85 / 14 = 0.78

Obtener relación atómica:

Dividir los cocientes atómicos por el menor de ellos

C = 3.88 / 0.78 = 4.97 H= 6.49 / 0.78 = 8.32

O = 1.94 / 0.78 = 2.49 N= 0.78 / 0.78 = 1

Relacionando al carbono
Dividir relaciones atómicas entre 4.97

C = 1 H = 1.67 0 = 0.5 N = 0.2

Resulta la: “Fórmula mínima” : C H 1.67 O 0.5 N 0.2

Definir 1- “C mol de biomasa ”

Con fines netamente prácticos:

“cantidad de biomasa que contiene un atomo gramo de carbono”

¿Qué peso de células ( o biomasa) corresponde “a un mol “ ? es decir,

¿Cuantos gramos de células ( o biomasa) corresponde “a un mol “ ?

12 (1) + 1 (1.67) + 16 (0.5) + 14 (0.2) 24.47

1C-mol de biomasa = ------------------------------------------------- = ------- = 25.8 g
0.95
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Por tanto una concentración de biomasa ( X en gL-1) es equivalente a:

X/25.8 C-mol de biomasa; o bien: XGx /12 C-mol de biomasa L-1

Donde: Gx es la fracción de carbono de biomasa (0.465 para el “microorganismo

promedio”)

Esta última forma de calcular los C-moles de biomasa es ventajosa ya que solo
requiere conocer Gx, un dato que se puede obtener fácilmente de la bibliografía.

En caso de no existir datos disponibles, se puede suponer Gx = 0.465 sin temor a

cometer errores graves.

Definir 1-C mol de fuente de carbono y energía, y también 1 C mol de producto.

Por ejemplo para :

Glucosa (C6H1206) 1-C mol de glucosa será CH20 = 30 g

Etanol (C2H60) 1-C mol de etanol será CH30 0.5 = 23 g

En general para un compuesto de la forma Cn HLOq Nm 1-C mol estará representado

por C HL/n Oq/n N m/n

C. DETERMINACION DE COEFICIENTES ESTEQUIOMETRICOS

La ecuación de reacción planteada no es completa si no se conocen los coeficientes

estequiométricos a, b, c, d, e

CwHxOyNz + a O2 + b HgOhNi  c CHαOβNγ + d CO2 + e H2 O

PROCEDIMIENTO:

1. Obtención de la formula para biomasa: una vez obtenida, los coeficientes son
evaluados usando procedimientos normales para balances de ecuaciones.

2. Balance elemental y solución de ecuaciones simultaneas

CwHxOyNz + a O2 + b HgOhNi  c CHαOβNγ + d CO2 + e H2 O

Balance de C: w = c+ d
Bañlance de H: x + bg = cα + 2e
Balance de O: y + 2a + bh = cβ + 2d + e
Balance de N: z + bi = cγ

Se tiene 5 coeficientes desconocidos y solo 4 ecuaciones de balance

3. Información adicional: esta es requerida antes que las ecuaciones puedan ser
resueltas. Usualmente es obtenida de experimentos. Un parámetro medible útil es el:

Moles CO2 producido d

Coeficiente estequiométrico, RQ = ---------------------------------- = ---
moles O2 consumido a

4. Determinación de los coeficientes estequiométricos

5. Completar ecuación de reacción.
6. Determinar cantidades de S, N, O
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3. ESTEQUIOMETRIA DE LA FORMACION DE PRODUCTOS

BALANCE QUIMICO:

Los procesos microbianos en los cuales la biomasa microbiana (CHαOβNγ) es el único

producto formado (ej. producción de levadura de panificación), son en la practica
relativamente raros.

Cuando el crecimiento microbiano es acompañado de la producción de uno o varios

metabolitos (CjHkOlNm) la reacción global obedece al principio de la conservación de la
materia y la ecuación estequiométrica del crecimiento puede extenderse para incluir la
síntesis del metabolito de la sgte manera:

CwHxOyNz + a O2 + b HgOhNi  c CHαOβNγ + d CO2 + e H2 O + f CjHkOlNm

Donde: CjHkOlNm : fórmula bruta del conjunto de productos del metabolismo

diferentes a la biomasa, CO2 y H2 O
f : coeficiente estequiométrico para el producto.

APLICACIONES DE LOS CÁLCULOS ESTEQUIOMÉTRICOS

1. Estequiometría de la producción de etanol

1.1. Cálculo del coeficiente rendimiento teórico del etanol

Ejercicio:

Determínese el coeficiente de rendimiento de etanol conociendo que la reacción global

del proceso fermentativo obedece a la siguiente ecuación química:

C6 H12 O6  2C2 H5OH + 2CO2

Solución:

La ecuación corresponde a la reacción principal de la fermentación de etanol: conversión

de glucosa en etanol y dióxido de carbono

Esta ecuación expresa que una molécula de glucosa se descompone para dar 2
moléculas de etanol y dos moléculas de dióxido de carbono

Aplicando los pesos moleculares, la ecuación muestra que la reacción de 180 gramos de
glucosa produce 92 gramos de etanol y 88 gramos de dióxido de carbono.

2 [ 12(2) + (6) + (16) ] 92

Y p/s = ---------------------------------- = ------ = 0.51 gg-1
[ 12(6) + (12) + 16 (6) ] 180

Quiere decir: se formaron 0.51 g de etanol por gramo de glucosa consumida

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2. Estequiometría de la producción de aminoácidos

2.1. Cálculo del coeficiente rendimiento teórico del acido glutámico

Ejercicio:

¿Cual es el rendimiento teórico del acido glutámico a partir de la glucosa y del total de
reactantes consumidos?

La ecuación estequiométrica es:

C6 H12 O6 + NH3 + 3/2 O2  C5 H9NO4 + CO2 + 3H2O

180 g 17 g 48 g 147 g

Solución:

Aplicando los pesos moleculares, la ecuación muestra que la reacción de 180 gramos de
glucosa produce 147 gramos de acido glutámico .

147 g C5 H9NO4 147

Y p/s = ------------------------------- = ------ = 0.81 gg-1
180 g C2 H12 O6 180

147 g C5 H9NO4 147g producto

Y p/s = ------------------------------------------------- = ----------------------- = 0.6 gg-1
180 g C2 H12 O6 + 17 g NH3 + 48 O2 245 g reactantes
Consumidos

El rendimiento es un término muy importante en el análisis bioquímico dada la complejidad

del metabolismo y la existencia de frecuentes reacciones laterales.

2.2. Cálculo de relaciones másicas en la producción de acido glutámico

Ejercicio:

La reacción global para la conversión microbiana de glucosa a acido glutámico es:

C6 H12 O6 + NH3 + 3/2 O2  C5 H9NO4 + CO2 + 3H2O

¿ Qué masa se O2 se necesita para producir 15 g de acido glutámico?

Solución:

Pesos moleculares: Oxigeno = 32

Acido glutámico: 147

En la ecuación, los gramos de acido glutámico se convierten en moles utilizando los

corchetes unidad de pesos moleculares.
Se aplica la ecuación estequiométrica para convertir los moles de acido glutámico en moles
de oxigeno.
Finalmente los moles de oxigeno se convierten en gramos

1 mol glutámico 3/2 mol O2 32 g O2

15 g. glutámico [ --------------------- ] [ -------------------- ] [ ----------- ] = 4.9 g O2
147 glutámico 1 mol glutámico 1 mol 02

Entonces se necesitan 4.9 g de oxigeno. Si existe también crecimiento microbiano se

necesitará una cantidad de oxigeno mayor.

ESTEQUIOMETRIA EN LAS REACCIONES INDUSTRIALES

La ecuación de la fermentación alcohólica: C2 H12 O6  2C2 H5OH + 2CO2 . Sugiere

que todos los reactantes (GLUCOSA) se convierten en los productos especificados
(ETANOL y CO2) y que la reacción progresa hasta el final .

Sin embargo, en los procesos industriales esto no es el caso. En las reacciones

industriales la estequiometría puede no conocerse con exactitud y con el fin de manipular
la reacción convenientemente, los reactantes no se alimentan en las proporciones exactas
indicadas por la ecuación de la reacción. Normalmente se añaden cantidades de algunos
reactantes en exceso, los cuales se encuentran mezclados con el producto una vez que la
reacción ha finalizado. Además los reactantes se consumen en reacciones laterales para
formar productos no descritos en la reacción principal; estos subproductos forman parte
también de la mezcla final de la reacción.

En estas circunstancias se necesita información adicional antes de calcular las cantidades

de producto formado o de reactante consumido.

Algunos términos utilizados para describir las reacciones parciales o laterales son:

REACTANTE LIMITANTE

Reactante que se encuentra presente en la menor cantidad estequiométrica.

Mientras que los otros reactantes pueden estar presentes en menores cantidades absolutas
al mismo tiempo que se consume la última molécula de reactante limitante, en la mezcla
final de la reacción aparecerán cantidades residuales de todos los reactantes excepto del
reactante limitante.

Ejercicio:

Para la reacción de producción del acido glutámico:

C6 H12 O6 + NH3 + 3/2 O2  C5 H9NO4 + CO2 + 3H2O

180 g 17 g 48 g 147 g

¿ Cual es el reactante limitante si se proporcionan 100 g de glucosa, 17 g de NH3 y 48g de

O2 ?

Solución:

La glucosa será el reactante limitante, incluso aunque se disponga de la mayor cantidad de

masa comparada con las demás sustancias.
REACTANTE EN EXCESO

Reactante presente en una cantidad en exceso sobre la necesaria para combinar con aquel
reactante limitante.

Es aquel que permanece en la mezcla de reacción una vez que el reactante limitante se ha
consumido totalmente.

El porcentaje en exceso se calcula utilizando la relación entre la cantidad de material en

exceso y la cantidad necesaria para el consumo completo de reactante limitante.

Moles (masa) presente – moles (masa) necesarios para

reaccionar completamente con el reactante limitante
% en exceso = ------------------------------------------------------------------------------ x 100
moles (masa) necesarios para reaccionar completamente
con el reactante limitante

CANTIDAD REQUERIDA DE REACTANTE

Es la cantidad estequiométrica necesaria para alcanzar la conversión completa del reactante

limitante.

Ejercicio:

En el caso de la producción del acido glutámico:

C6 H12 O6 + NH3 + 3/2 O2  C5 H9NO4 + CO2 + 3H2O

180 g 17 g 48 g 147 g

a. ¿Cuál es la cantidad requerida del reactante NH3 para alcanzar la conversión completa
de 100 g de glucosa ?

b. Si se añaden 17 g de NH3 ¿ Cuál es el % en exceso de NH3?

Solución:

a. Se requiere 17 g de NH3 para la conversión completa de 180 g de glucosa. Por lo tanto,

la cantidad requerida de NH3 para la conversión completa de 100 g de glucosa es:

17 g NH3 x 100 g glucosa

Cantidad requerida de NH3 =___---------------------------------------------------------- = 9.4 g NH3
180 g glucosa

17 g NH3 - 9.4 g NH3

% en exceso de NH3 = --------------------------------- x 100
9.4 g NH3

= 0.80 x 100 = 80%

Las cantidades requeridas y en exceso se basan en la misma cantidad de reactante

limitante incluso solo se produzca una parte de la reacción.