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CENTRO DE BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL CBI SENA Palmira Programa de Tecnicos en Produccion de Biocombustibles y Tecnologos en Procesos Biotecnologicos.

. Instructor: Jorge Alberto Vasquez.

Ejercicios de estequeometra.
1. Completar la siguiente ecuacin estequeomtrica de un microorganismo que utiliza como fuente de carbono y energa un carbohidrato en aerobiosis. En este caso el nitrgeno no esta presente en el balance aunque representa un promedio del 10.85 % de la composicin mnima del microorganismo mientras que las cenizas representan un 5%. La composicin del microorganismo es C 3.92 H6.5 O1.94 y el rendimiento en biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 0.5. CH2O + O2 C3.92 H6.5 O1.94 + CO2 + H2O

2. Igual que en 1 pero con hidrocarburos como fuente de carbono y energa. Rendimiento en biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 1.00. CH 2 + O2 C3.92 H6.5 O1.94 + CO2 + H2O

3. Completar la siguiente ecuacin estequeomtrica de un microorganismo que utiliza como fuente de carbono y energa glucosa en aerobiosis. Las cenizas representan un 5% de la composicin del organismo. La composicin del microorganismo es C4.4H7.3O1.2 N0.86 y el rendimiento en biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 0.66. C6H12O6 + O2 + NH3 C4.4H7.3O1.2 N0.86 + CO2 + H2O 4. Igual que en 1 pero con hexadecano como fuente de carbono y energa. Rendimiento en biomasa (gr X/ gr sustrato) es de 0.66. C 16H34 + O2 + NH3 C4.4H7.3O1.2 N0.86 + CO2 + H2O 5. Candida utilis convierte glucosa a CO2 y H2O durante el crecimiento. La composicin mnima es CH1.84O0.55 N0.2 ms 5% de cenizas. El rendimiento de YXS es 0.5 g/g. Amonio fue usado como fuente de nitrgeno. Cual es la demanda de oxgeno con crecimiento comparada con la reaccin sin crecimiento? . Sabiendo que la ecuacin de oxidacin de la glucosa es: C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O C. utilis es tambin capaz con de crecer usando como sustrato al etanol produciendo clulas con la misma composicin mnima anterior. Cual es el rendimiento de biomasa mximo en etanol comparado con el de glucosa. 6. Klebsiella aerogenes consume glicerol para producir biomasa en aerobiosis. La biomasa contiene 8% de cenizas, y el rendimiento es de 0.4 g de biomasa por gr de
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glicerol y no se forman otros productos del metabolismo. Cual es el requerimiento de oxgeno en trminos de masa? 7. Methylophilus metylotrophus es usado como fuente de protena unicelular. Este organismo es producido aerobicamente a partir de metanol y con amonio como fuente de nitrgeno. . La frmula molecular de la biomasa es CH 1.68O0.36N0.22 ms 6% de cenizas. Si el rendimiento de biomasa en metanol es 42% del rendimiento termodinmico mximo?. Cual es la demanda mxima de oxgeno. 8. La levadura Saccharomyces cereviseae y la bacteria Zymomonas mobilis produce etanol a partir de glucosa bajo condiciones de anaerobiosis sin otro aceptor de electrones externo. El rendimiento de biomasa a partir de glucosa es de 0.11 g/g para la levadura y de 0.05 g/g para la bacteria. La fuente de nitrgeno es amonio y ambos casos la frmula molecular de la biomasa es CH1.8O0.5N0.2 . cual es el rendimiento de etanol en glucosa en ambos casos? como son los rendimientos comparados con el mximo? 9. En un sistema cultivo continuo de levadura se producen 0.37 g de biomasa por gr de glucosa y se consumen 088 g deO 2 por gr de biomasa formada. La fuente de nitrgeno es amonio y la frmula molecular de la biomasa es CH 1.79O0.56N0.17. Se produce algn otro producto?. 10. Se desea producir protena unicelular para alimentacin animal a partir de Pseudomonas 5401. El sustrato es fuel-oil y la frmula molecular de la biomasa es CH1.83O0.55N0.25. si la concentracin final de biomasa es 25 g/l cual es la mnima concentracin de (NH)2SO4 que debe contener el medio de cultivo si es la nica fuente de nitrgeno disponible. 11. La produccin de protena recombinante en E. coli es proporcional al crecimiento celular. Amonio es la nica fuente de nitrgeno para el consumo aerbico de glucosa. La protena recombinante tiene una frmula general de CH1.55O0.31N0.25 . El rendimiento de biomasa es de 048 g/g y el rendimiento de protena a partir de glucosa es del 22% respecto del celular. cunto amonio se requiere? cual es la demanda de oxgeno? Si el rendimiento de biomasa es de 0.48 g/g para una cepa no recombinante, cual es la diferencia en el requerimiento de amonio y de oxgeno. 12. La ecuacin de la reaccin qumica de conversin de etanol en cido actico es: C2H12O + O2 C2H4O2 + H2O El cido actico es producido a partir de etanol por la bacteria Acetobacter aceti, que tiene una frmula molecular de biomasa de CH 1.8O0.5N0.2.El rendimiento de biomasa a partir del sustrato es de 0.14 g/g y el de producto de 0.92 g/g. Amonio es la fuente de nitrgeno. Como afecta el crecimiento la demanda de oxgeno para la produccin de cido actico?

Problemas Biotecnologa I. Sistemas de Cultivo


1. Se estudi la produccin de actico y ac. butrico por Clostridium acetobutylicum utilizando glucosa como fuente de carbono y energa en cultivos de tipo continuo. Al trabajar a diferentes velocidades de dilucin (D) . Se obtuvieron los siguientes resultados para el rendimiento de biomasa en funcin del sustrato (Yx/s). D(h ) 0.14 0.236 0.332 0.426 0.475 0.6 0.72
-1

Y x/s (g peso seco /mol glucosa) 40 42.5 43.9 44.8 45 46 46.5

* Estimar el coeficiente de mantenimiento (m) y el rendimiento

Respuesta: Yxs = 48; m = 5. 96 10 mol gluc/X h.

-4

Y x/s verdadero

2. Bordetella pertussis es el agente causal de al Tos convulsa o coqueluche. Para obtener vacunas acelulares se desarrollan cultivos en fermentadores para la produccin de antigenos como la toxina pertussis (PT) y lipopolisacaridos (LPS) que luego sern utilizados para la vacunacin a) se inici un sistema continuo de -Bordetella pertussis y se trabajo a distintas velocidades de dilucin (D), siendo la fuente de carbono y energa el glutamato, obtenindose distintos - Y x/s experimentales que se muestran en la siguiente tabla: D (h ) 0.03 0.04
-1

Y x/s (c-mol biomasa/c-mol glucosa) 0.18 .2

0.05 0.06

.22 .24

* calcular el coeficiente de mantenimiento (m) y el Y x/s verdadero. b) se hicieron cultivos en batch y continuo y se obtuvieron los siguientes resultados sist. de cultivo Batch Continuo X0 (g/l) 0.11 Xf (g/l) 1.1 2.1 PT (mg/l) 1.2 2.46 LPS (g/l) 4.87 6.49 (h ) 0.093 0.06
-1

* calcular la productividad para biomasa, PT y LPS para los dos sistemas de cultivo. tener en cuenta que para el cultivo en batch el tiempo lag = 6 hs. y el tiempo muerto= 24 hs.Y considerar que el tiempo en que setarda en establecer el estado estacionario es de de 40 hs y el tiempo total que dur el sistema en estado estacionario fue de 720 hs. c) en le siguiente experimento se trabaj con distintos sustratos limitantes(glutamato, hierro, cistina y fsforo) y se determin la conversin de sustrato a biomasa (Y x/s ) y los rendimientos de producto en funcin de la biomasa ( Y PT / X e Y LPS / X).. los resultados se muestran en la siguiente tabla: sust. limitante glutamato hierro cistina fsforo Y x/s (c-mol X/ c-mol glut.) 0.22 0.17 0.14 0.2 Y PT / X (mg / g X) 1.12 2.02 0.77 0.28 Y LPS / X (g/g) 2.9 5.01 2.59 .72 D (h ) 0.05 0.05 0.05 0.05
-1

* siendo lodatos de c-mol de glutamato= 29.40; c-mol de biomasa= 22.84 y c-mol de PT= 22.9 y la concentracin de glutamato inicial fue de 10.7 g/l. Calcularlas

productividades de biomasa y Pt en cada caso, considerando los datos de c-mol y explique el efecto de cada factor limitante sobre la biomasa y la produccin de PT. (cosiderar la concentracin de sustrato en le fermentador despreciable) Respuesta: a) Yxs = 0.34; m = 0.86 c-mol gluc/ c-mol X h. b) P Batch PT = 0.022mg/l h, P batch LPS = 0.089 ug/l h; P continuo PT = 0.139 mg/l h, P continuo LPS = 0.366 ug/l h; 3. Con el objeto de optimizar un medio de cultivo para producir biomasa de una cepa de Pseudomonas spp. se desarroll un sistema de cultivo continuo. Como sustrato limitante -1 se utliz metanol y la velocidad de dilucin fue de 0.32 h , el pH=7, 0 T = 37 C, agitacin= 800 rpm. La concentracin de metanol inicial (S0) se fue de 1 g/l. En el experimento se fue incrementando la concentracin del mismo hasta 7 g/l paralelamente se fueron agregando otros sustratos, a concentraciones que se indican en la tabla. Se determin la concentracin de biomasa, de sustrato en el fermentador y la formacin de un polisacrido. Los resultados se muestran en la siguiente tabla: S0 (g/l) 1 2 2 3 4 5 5 6 6 6 X (g /l) 0.5256 0.48 1.07 1.61 1.74 1.06 2.64 2.9 2.99 3.07 S residual (g/l) 0.048 1.28 0.047 0.048 0.046 2.67 0.045 0.048 0.046 0.043 MgSO4 (0.2 g/l) KCl (0.02 g/l) Na2HPO4 (0.15 g/l) (NH4)2SO4 (1.5 g/l) CuSO4 (70 g) Y x/s Adicin de nutrientes polisac rido + + -

7 7 7

1.41 3.18 3.61

7.2 520 0.044 FeSO4 (1 mg/l) MnSO4 ( 10 g/l)

+ +

* Explique brevemente los resultados analizando que pasa con el sustrato limitante en cada caso y estime el rendimiento en cada caso 4. Se realiz un cultivo de levaduras en un bioreactor en condiciones similares a las empleadas en el trabajo prctico, los resultados obtenidos en esta experiencia pueden verse en la siguiente tabla: tiempo (h) 0 1 2 3 4 biomasa (g/l) 3.4 4.04 5.76 7.05 10.44 glucosa en el medio (g/L) 42.39 33.72 22.21 8.91 1.01 etanol (g/l) 0.51 1.9 3.6 8.88 9.4

Calcular los siguientes parmetros: , tiempo de duplicacin (td) , Yx/s, qs y qp Respuesta: = 0.28 h-1; td = 2.39 h; Yxs = 0.17; qs= 1.63 g/ gX h ; qp = 0.44 g etanol/ g X h. 5. Se tiene una cepa recombinante de la levadura Hansenula polimorfa a la cual se le ha insertado el gen del interferon humano con el objeto de producirlo industrialmente, para evaluar cuales son las mejores condiciones para la produccin se realiz un sistema de cultivo continuo, donde se trabajo a distintas velocidades de dilucin obtenindose los siguientes resultados: D (h )
-1

biomasa (g/l)

glucosa (g/l)

Interferon (g/l)

0.05 0.08 0.10 0.15 0.22

24.4 24.8 25.1 25.3 25.4

0.05 0.12 0.15 0.20 0.20

15 6 5 13 5

Considere que la concentracin de sustrato limitante (glucosa) en el reservorio fue de 50 g/l. b1) calcule el rendimiento (Yx/s) verdadero b2) se desea realizar un cultivo en batch-alimentado con alimentacin exponencial, en base a los resultados de la tabla elija la velocidad de crecimiento apropiada y justifique su eleccin. Calcule el tiempo total de duracin de cultivo si las condiciones iniciales son: Xo= 5 g/l; Xf= 35 g/l; Vo= 10 l; Vf= 55 l. b3) si la concentracin concentracin en el reservorio de glucosa es de 300 g/l calcule el Flujo inicial (Fo). Respuesta: Yxs G = 0.52; tiempo = 24 hs.; F = 0.049 l/h. 6. Los datos presentados en la siguiente tabla corresponden a la curva de crecimiento de una cepa de E. coli, en base a los mismos determine los siguientes parmetros: , td (tiempo de duplicacin), rendimiento de biomasa en funcin del producto , qs (tasa especfica de consumo de sustrato) y explique: a-A que puede deberse que no se observa fase lag.? b-Determine el qp del producto del metabolismo celular (en este caso cido actico) X0= 0.15 g/l Xf= 4.54 g/l S0= 15 g/l Sf= 4.93 tiempo (hs)
0 1

biomasa (g/l)
0.15 0.21

glucosa (g/l) glucosa consumida (g/l)


15 14.67 0 0.33

ac. actico (g/l)


0.2 0.25

2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

0.3 0.42 0.58 0.82 1.15 1.62 2.28 3.2 4.49 4.53 4.55

14.53 14.34 14.08 13.7 13.18 12.44 11.4 9.94 7.89 5.01 4.93

0.47 0.66 0.92 1.3 1.82 2.56 3.6 5.06 7.11 9.99 10.07

0.23 0.31 0.32 0.35 0.28 0.45 0.42 0.51 1.2 2.8 4.1

Respuesta: = 0.34 h-1; td = 2 h; Yxs = 0.44; qs= 0.77 g/ gX h ; Ypx = 0.90 g etanol/ g X. 7. Grafique (velocidad de crecimiento) en funcin del tiempo en un proceso en batch hasta muerte celular inclusive 8. a . Se estudio el efecto de distintas concentraciones de fuente de nitrgeno (sulfato de amonio) sobre el crecimiento y la produccin de etanol en S. cereviceae creciendo en aerobiosis. La concentracin inicial de glucosa en el reservorio (S R) fue de 20 g/l. Se trabajo con tres concentraciones de sulfato de amonio alta , intermedia y baja. En la siguiente tabla se muestran los resultados de la concentracin de etanol en estado estacionario a distintas D: Alta D Intermedia D etanol (mM) Baja D

etanol (mM)

etanol (mM)

0.05 0.10 0.15 0.20 0.25

0.00 0.00 0.00 25 65

0.05 0.10 0.15 0.20 0.25

0.00 0.00 10 60 90

0.05 0.10 0.15 0.20 0.25

0.00 30 65 150 100

0.30 0.35

100 120

0.30 0.35

134 90

0.30 0.35

70 55

Si tuviera que elegir entre estos cultivos continuos para la produccin de etanol, cual usara?. Justifique su respuesta. Si la glucosa se consume produciendo biomasa, etanol y CO2, como sera el perfil de YXS y de biomasa en un grfico vs. D. (elija solo un de los tres como representativo) 8. b. En otro estudio en sistema continuo de S. cereviceae se estudio el efecto de la velocidad de dilucin vs. biomasa y produccin de etanol en aerobiosis. La concentracin de sustrato limitante, glucosa, en el reservorio fue de 30 g/l. Para cada estado estacionario se observaron los siguientes resultados. D 0.10 0.20 0.29 0.32 0.36 0.41 Biomasa (g/l) 14.2 14.3 14.2 8.5 5.7 3.4 s (g/l) 0.01 0.02 0.01 0.8 2.8 8.0 etanol (g/l) 0.00 0.00 0.00 6.1 9 10.1

En base a este estudio se decidi realizar un sistema en batch-alimentado con el objetivo de obtener biomasa, partiendo de X0 = 5 g/l y V0 = 5 l y con flujo constante de glucosa de F = 300 ml/ h y SR = 250 g/l. Se desea llegar a un volumen final VF = 30 l. Sin embargo se observ produccin de etanol en detrimento de la produccin de biomasa, podra indicar las razones y como las corregira. Justifique. 9. Se estudio el efecto de aumentar la produccin de etanol causada por stress salino. Para esto se trabaj con una concentracin de NaCl de 1 M. Se realizaron por lo tanto dos sistemas continuos uno en anaerobiosis y otro en anaerobiosis + 1 M de NaCl. Se midieron las concentraciones de biomasa y etanol en estado estacionario a distintas velocidades de dilucin. Para el caso de anaerobiosis el grfico de 1/D vs. 1/Y XS arrojo una pendiente de 0.036 y la inversa de la ordenada al origen de 0.138. Para el caso del cultivo en presencia de NaCl el valor de la pendiente fue de 0.36 y la inversa de la
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ordenada al origen de 0.065. Para el cultivo en anaerobiosis los otros datos fueron: MAX -1 = 0.35 h , KS = 0.15 g/l, -1 YPX =3.1 g/g , YPS = 0.429 g/g , qP = 0.62 g/g h y Dcritica = 0.33 h . -1 Para el cultivo en anaerobiosis + 1 M NaCl los otros datos fueron: MAX = 0.30 h , KS = -1 0.15 g/l, YPX = 8.0 g/g , YPS = 0.48 g/g , qP = 1.6 g/g h y Dcritica = 0.28 h . calcule para ambos sistemas la concentracin de biomasa y de producto en estado -1 estacionario si se trabaja a una D de 0.20 h y si la concentracin de glucosa en el reservorio fue de 20 g/l y la concentracin de la misma en estado estacionario fue de 0.2 g/l para ambos sistemas. que sistema usara para producir etanol Justifique. En base a su respuesta mencione que otras variables modificara para aumentar la productividad. Si tuviera que producir etanol pero con un sistema de batch-alimentado para el caso de anaerobiosis en presencia de 1 M de NaCl y tuviera que elegir un sustrato limitante del crecimiento cual usara glucosa o NaCl?. se desea producir etanol por un sistema de batch-alimentado para esto se parte de los siguientes parmetros X0 = 5 g/l, V0 = 5 l , VF = 25 l, XF= 20 g/l. Calcule el tiempo total del proceso. Como hara para a disminuir el tiempo del proceso o lo que es lo mismo aumentar la productividad. Considerar para los clculos el coeficiente de mantenimiento. 10. Lipomyces starkey es una levadura capaz de producir una gran cantidad de lpidos que pueden ser utilizados en la industria alimentaria. Se realizaron estudios sobre el efecto del sustrato que es fuente de carbono y energa, en este caso el etanol. En un sistema continuo se estudi la influencia de distintas concentraciones de etanol en el reservorio de alimentacin determinndose la mxima y la produccin de lpidos totales. El resultado obtenido se muestra en el siguiente grfico:

a) Si se desea obtener una biomasa final de aproximadamente 50 g peso seco/ l y se sabe que el Yx/s (g biomasa/ g etanol) es de 0.475 g/g, que tipo de cultivo realizara Ud. tomando en cuenta el grfico anterior. Justifique la respuesta. b) Se desea realizar un cultivo en batch-alimentado con alimentacin constante ( flujo y sustrato) con el fin de producir lpidos. Disee el proceso partiendo de una concentracin inicial X0 = 4 g/l y un volumen inicial V 0 = 2 l. De acuerdo a su interpretacin del grfico elija la concentracin de sustrato en el reservorio (Sr) y calcule el flujo, el tiempo
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total que durar el proceso paa alcanzar una biomasa final de 50 g peso seco. Tenga en cuenta siempre el grfico anterior. c) Como hara para reducir el tiempo del proceso? haciendo una alimentacin exponencial o aumentando la concentracin de sustrato en el reservorio?. Justifique. D (h-1) 0.04 0.08 0.12 0.20 biomasa (g/l) 45.5 44.0 43.0 41.0 lpidos biomasa) 15.0 25.0 55.0 41.0 (mg/g Yx/s (g biomasa/ g etanol) 0.48 0.50 0.52 0.54

d) En base a los resultados de la tabla con que velocidad de dilucin trabajara para obtener mayor cantidad de lpidos. Justifique brevemente e) Como calculara el coeficiente de mantenimiento y el rendimiento verdadero (YG x/s).

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Ejercicios resueltos de estequeometra


13. En un sistema cultivo continuo de levadura se producen 0.37 g de biomasa por gr de glucosa y se consumen 0.88 g de O2 por gr de biomasa formada. La fuente de nitrgeno es amonio y la frmula molecular de la biomasa es CH 1.79O0.56N0.17. Se produce algn otro producto?. Biomasa C-mol = 12 + (1.79*1) + (16*0.5) + (14*0.17) 0.95

C-mol de biomasa = 26.45 Rendimiento de biomasa en funcin de sustrato.


y X/S
=

0.37 g X g S

* c-mol de glucosa c-mol de biomasa

0.37 * 30 26.45

0.42

c-mol X c-mol S

X = 4 + (1.79*1 ) (2*0.56) (3*0.17) = 4.16


Se produjeron 0.37 g de biomasa que equivalen a 0.014 c-moles, mientras que por cada g de biomasa, es decir 0.038 c-moles, se consumieron 0.88 g de O2. Por lo tanto se consumieron 0.32 g de O2 es decir 0.01 moles de O2. De acuerdo al balance de energa:

y X/S

y P/S

P +

4b
S

= 1

y donde b es el consumo de moles de oxgeno


0.42*4.16 4 + y P/S P S + 4 * 0.01 = 1 4

Como el balance de energa, es decir la suma de los trminos de energa dirigidos a biomasa y a oxgeno es 0.45 1 implica que se form un producto 2. La levadura Saccharomyces cereviseae y la bacteria Zymomonas mobilis produce etanol a partir de glucosa bajo condiciones de anaerobiosis sin otro aceptor de electrones externo. El rendimiento de biomasa a partir de glucosa es de 0.11 g/g para la levadura y de 0.05 g/g para la bacteria. La fuente de nitrgeno es amonio y ambos casos la frmula molecular de la biomasa es CH1.8O0.5N0.2 . a) cual es el rendimiento de etanol en glucosa en ambos casos? b) como son los rendimientos comparados con el mximo?
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a) Segn la ecuacin de balance energtico:

y X/S X

+ y P/S P

+ 4 b

= 1

S
X
S

S
+

S
P = 1
S

Dado que es un proceso anaerbico el trmino 4b/ S se elimina, entonces queda:


y X/S y P/S

Convertir unidades a c-mol Biomasa C-mol =

12 + (1.8*1) + (16*0.5) + (14*0.2) 0.95 C-mol de biomasa = 25.9

Glucosa C6H12O6

frmula mnima CH2O = 12 + (2*1) + 16 = 30

C-mol Glucosa Etanol C2H6O

frmula mnima CH3O0.5 C-mol Etanol = 12 + (3*1) + (16*0.5) = 23

El rendimiento de biomasa para Saccharomyces cereviseae expresados en c-mol ser igual a:


y X/S
=

0.11 g X g S

* c-mol de glucosa c-mol de biomasa

0.11 * 30 25.9

0.127 c-mol X c-mol S

El rendimiento de biomasa para Zymomonas mobilis expresados en c-mol ser igual a:


y X/S
=

0.11 g X g S

* c-mol de glucosa c-mol de biomasa

0.0.5 * 30 25.9

0.058 c-mol X c-mol S

Ahora hay que calcular el grado de reductancia de la biomasa , la glucosa y el etanol: Recordar que el grado de reductancia es igual a:

4 + a - 2b 3c

X = 4 + (1.8*1 ) (2*0.5) (3*0.2) = 4.2 S = 4 + (2*1 ) (2*0.5) = 4


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S = 4 + (3*1 ) (2*0.5) = 6
Para S. cereviseae el yP/S ser
y X/S

y P/S

P = 1

yP/S = 0.58 c-mol X c-mol S 0.127*4.2 + y P/S * 6 = 1 4 4 Para Zymomonas mobilis el yP/S ser yP/S = 0.62 c-mol X c-mol S b) El rendimiento terico mximo debe calcularse como si toda la energa del metabolismo de sustrato fuera dirigido hacia la formacin de producto, por lo tanto:
y P/S

= 1

Rendimiento terico mximo yP/S = 0.67 c-mol X c-mol S. El rendimiento de producto en sustrato para S. cereviseae es un 86.6% respecto del mximo mientras que para Z. mobilis es de un 92.5% del mximo terico

Ejercicios Resueltos de Sistemas de Cultivo


1. Se estudi la produccin de actico y ac. butrico por Clostridium acetobutylicum utilizando glucosa como fuente de carbono y energa en cultivos de tipo continuo. Al trabajar a diferentes velocidades de dilucin (D) . Se obtuvieron los siguientes resultados para el rendimiento de biomasa en funcin del sustrato (Yx/s). D(h ) 0.14 0.236 0.332 0.426 0.475 0.6 0.72
-1

Y x/s (g peso seco /mol glucosa) 40 42.5 43.9 44.8 45 46 46.5

a) Estimar el coeficiente de mantenimiento (m) y el rendimiento Y x/s verdadero De acuerdo a la ecuacin

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1 Y obs

= 1 YG

mS

Si se grfica la inversa de D vs. la inversa del Yx/s observado se obtiene el siguiente grfico.
0,0300 0,0250 0,0200 0,0150 0,0100 0,0050 0,0000 -2,0 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 y = 0,0006x + 0,0209 R2 = 0,9872

Por lo tanto la interseccin en el eje y es = 1/ Y G o sea YG = 47.85 y la pendiente es el mantenimiento mS = 0.006 2. Se tiene una cepa recombinante de la levadura Hansenula polimorfa a la cual se le ha insertado el gen del interferon humano con el objeto de producirlo industrialmente, para evaluar cuales son las mejores condiciones para la produccin se realiz un sistema de cultivo continuo, donde se trabajo a distintas velocidades de dilucin obtenindose los siguientes resultados: D (h ) 0.05 0.08 0.10 0.15 0.22
-1

biomasa (g/l) 24.4 24.8 25.1 25.3 25.4

glucosa (g/l) 0.05 0.12 0.15 0.20 0.20

Interferon (g/l) 15 6 5 13 5

Considere que la concentracin de sustrato limitante (glucosa) en el reservorio fue de 50 g/l. a) se desea realizar un cultivo en batch-alimentado con alimentacin exponencial, en base a los resultados de la tabla elija la velocidad de crecimiento apropiada y justifique su eleccin. b) Calcule el tiempo total de duracin de cultivo si las condiciones iniciales son: c) Xo= 5 g/l; Xf= 35 g/l; Vo= 10 l; Vf= 55 l d) si la concentracin concentracin en el reservorio de glucosa es de 300 g/l calcule el Flujo inicial (Fo). a) Para disear una alimentacin exponencial en un sistema en batch alimentado es necesario saber a que velocidad de crecimiento queremos que crezca el organismo en el proceso. De acuerdo a la tabla que muestra los resultados de un sistema continuo se elige la D o en la cual la productividad es mxima. En este caso se eligi la velocidad de dilucin 0.15

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Productividad = [P] * D Prod. = 13 g/l * 0.15 = 1.95 g/l h interferon. De esta manera podemos disear la alimentacin de acuerdo a la ecuacin:

F SR

Xo Vo e t

YXS

+ mS

Donde se fijan las condiciones iniciales del inculo, vol inicial, etc b) El tiempo total de cultivo para esas condiciones si la alimentacin es exponencial ser: t = ln X V - ln Xo Vo

Por lo tanto t = ln (35 g/l *55l) - ln ( 5g/l * 10 l) 0.15

El tiempo total del proceso ser 24.34 hs.


c) Si diseamos el proceso de tal manera que m = 0.15, Xo= 5 g/l, Vo= 10 l y el Yx/s=0.51. adems consideramos que el mantenimiento es despreciable queda que:

F0 SR
Despejando F0

Xo Vo e t YXS Xo Vo e t YXS SR

F0 F0 =

5 g/l 10 l e 0.150t 0.15 h1 0.51 300 g/l

Por lo tanto F0 = 49 ml /h

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