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INSTITUTO DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICO

PBLICO TRUJILLO

LABORATORIO CLNICO IV

MTODOS Y TCNICAS DEL ESTUDIO


MICROBIOLGICO II

PROFESOR:

BLGO. MBLGO. FREDDY VALLEJO LEN

ALUMNO (A):

TEMA:

MTODOS DE ESTUDIO DE LOS HONGOS


PATGENOS

TRUJILLO PER

2017
I. INTRODUCCIN:

Las micosis son enfermedades producidas por el crecimiento de un hongo en el


organismo o sobre la superficie corporal. En la mayora de la gente sana las
infecciones por hongos son leves, afectan slo a la piel, el cabello, las uas, u otras
zonas superficiales, y se resuelven espontneamente. Comprenden la tia y el pie de
atleta. Sin embargo, en las personas con un sistema inmunolgico deteriorado, este
tipo de infecciones, denominadas dermatofitosis, pueden persistir durante largo
tiempo. Los organismos responsables de las dermatofitosis pertenecen al gnero
Microsporum, Epidermophyton y Trichophyton.

Los hongos tambin pueden invadir los rganos internos del organismo, en
especial los pulmones, donde las infecciones se parecen a la neumona o a la
tuberculosis pulmonar. Son tpicas de enfermos cuyo sistema inmune ha quedado
deprimido por procesos como el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA),
frmacos antitumorales, o radiacin. Tambin aparecen en pacientes tratados con
hormonas esteroideas, como el cortisol, en sujetos con diabetes y en quienes han
seguido tratamiento antibitico durante mucho tiempo. Los dos hongos que se suelen
aislar en estos casos son Cryptococcus y Aspergillus, los cuales reciben el nombre de
patgenos oportunistas.

Los hongos que pertenecen al gnero Candida, en especial Candida albicans


(el cual produce candidiasis), pueden infectar los rganos internos y las membranas
mucosas de la boca, garganta y tracto genital. En las personas con inmunidad
deteriorada, este organismo puede originar una infeccin crnica.

Hay muchos frmacos para tratar las infecciones por hongos, entre los que se
incluyen medicamentos orales e intravenosos, as como muchos agentes de
aplicacin tpica (local). Los individuos con una infeccin crnica por Candida,
Histoplasma o Cryptococcus pueden necesitar tratamiento a largo plazo con un
frmaco oral o intravenoso.

Entre los principales mtodos de estudio de los hongos tenemos los mtodos
directos como la observacin macroscpica de la muestra y la observacin
microscpica que son el examen en fresco (con hidrxido de potasio, lactofenol, tinta
china o cinta de celulosa), la coloracin diferencial (Gram, Ziehl Neelsen o Giemsa).
Tambin se emplean los cultivos (en medios comunes como el agar Sabouraud o en
medios mejorados como agar sangre o BHI), inoculaciones en animales (ratones,
cobayos, conejos, ratas) y el estudio anatomopatolgico (con coloraciones para
tejidos como hematoxilina eosina, cido para amino saliclico). Entre los mtodos
indirectos se emplean las intrademoreacciones, reacciones serolgicas (aglutinacin,
precipitacin, fijacin de complemento) e inmunofluorescencia.

Los objetivos de la presente prctica son:

1. Familiarizar al estudiante con las principales estructuras fngicas de hongos


patgenos.
2. Aislar e identificar algunos hongos causantes de micosis humanas.
3. Adiestrarse en el diagnstico de laboratorio de algunas micosis humanas.
II. MATERIAL Y MTODOS:

A) Materiales:
1. Material Biolgico:
Muestras de secreciones, raspados de piel, pelo o cualquier otro fluido
biolgico.
2. Material de Laboratorio:
Placas de Petri.
Asa de bacteriolgica.
Hisopos estriles.
Mechero.
Alcohol.
Lminas portaobjeto.
Laminas cubreobjeto.
Cinta de celofn adhesiva
Abatelenguas o varilla de vidrio
Pinzas
Gasa
3. Reactivos:
Agar Sabouraud.
Hidrxido de Potasio al 10%.
Solucin salina fisiolgica.
Azul de metileno al 1%.
Glicerina al 50%.
Azul de lactofenol.
Blsamo de Canad.
Eosina, solucin al 1%, si es posible (de lo contrario, examinar sin
tincin).
Esmalte.
4. Equipos:
Microscopio.
Incubadora.

B) Procedimiento:
1. Examen de piel para la ptiriasis versicolor:
Escoja una placa de piel Infectada que se est extendiendo rpidamente.
Humedezca la parte que va a examinar con la gasa empapada en la
solucin de eosina.
Djese secar durante 1 minuto (si se ha espolvoreado talco en la piel, no
tome la muestra sin lavarla primero.)
Corte una tira de la cinta adhesiva de celofn, aproximadamente de 5 cm
de longitud. Colquela sobre la placa cutnea de manera que sobrepase
uno de los bordes.
Pegue la cinta de celofn a la piel y presione con firmeza de un extremo al
otro haciendo pasar varias veces sobre la cinta un abatelenguas o una
varilla de vidrio.
Quite de la piel la cinta adhesiva con una pinza.
Colquela inmediatamente sobre un portaobjetos con el lado adherente
hacia abajo.
Examine con el microscopio todo el portaobjetos (empleando el objetivo x
40) hasta que vea un racimo de grnulos voluminosos (esporas) (fig. 6.9).
Si la piel se ha tratado con eosina estos grnulos sern blancos sobre un
fondo rosceo; tambin son visibles en preparaciones no teidas.
Coloque el objetivo de inmersin en aceite para examinar los detalles:
(a) Esporas:
se encontrarn en conglomerados o racimos
son redondas o ligeramente rectangulares
miden 3 8 m de dimetro
sus paredes son ms bien gruesas
algunas veces se hallan en proceso de producir brotes visibles.
(b) Filamentos de micelio (ms difciles de observar):
son bastoncillos largos, doblados y torcidos
miden 20 40 m de longitud
miden 5 m de anchura
semejan dedos y poseen ramificaciones.

2. Aislamiento de hongos causantes de micosis:


Realizar una observacin microscpica de la muestra. Si es secrecin
vaginal u otro fludo biolgico se pueden realizar coloraciones Gram o
exmenes en fresco, en el caso de raspados de piel o pelo se observan con
KOH al 10% (dejar que acte por 20 o calentarlo a la llama del mechero).
Hay que tener presente que las levaduras son Gram positivas y que en los
dermatofitos se observan hifas artrosporadas.
Si alguna observacin es positiva realizar el aislamiento en agar
Sabouraud. Los raspados de pelo son colocados en el agar y se incuban a
temperatura ambiente observando el crecimiento a los 5 a 7 das y si es una
levadura proceder al aislamiento en siembra como en el caso de bacterias
incubando a 37C por 1 a 2 das o a temperatura ambiente por 2 a 3 das.
Realizar observaciones macroscpicas y microscpicas de las colonias
para identificar el gnero al que pertenecen.
En el caso de crecimiento de levadura de alguna secrecin (por ejemplo
secrecin vaginal) realizar la prueba de filamentacin rpida (tubo
germinal).

3. Microcultivo:
En placas Petri estriles colocar un recipiente sobre el cual se sostenga una
lmina portaobjeto conteniendo una pequea porcin de agar Sabouraud.
Luego agregar un inculo de la colonia de un hongo y cubrir con un
cubreobjeto.
En la placa Petri agregar algodn conteniendo glicerina al 50% para la
conservacin de la humedad.
Dejar incubar a temperatura ambiental (hongos ambientales).
Llevar a la incubadora a 37C, previa eliminacin de algodn con glicerina
al 50%, hasta que se sequen las hifas y se adhieran al portaobjeto y
cubreobjeto.
Observar las lminas al microscopio con azul de lactofenol.
Si se desea conservar los preparados se puede agregar blsamo de Canad
se sellan las lmina cubre y portaobjeto con esmalte.
4. Filamentacin rpida (prueba rpida para la identificacin de Candida
albicans):
Se toma una pequea porcin de la colonia con un asa de platino
esterilizada y se siembra en 0,5 ml de suero humano.
Se incuba a 37C por 2 horas, al cabo de las cuales, se observara
microscpicamente la formacin de un tubo germinal sin constriccin en
su punto de origen y con forma caracterstica de "espejo de mano".
III. RESULTADOS:
IV. DISCUSIN:
V. CONCLUSIONES:
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

INGRAHAM, J. y cols. 1998. Introduccin a la Microbiologa. Tomo I. Edit.


Revert, S.A. Barcelona. Espaa. Pgs. 63-73.

JAWETZ, E. y cols. 1996. Microbiologa Mdica. 15 edicin. Edit. El Ateneo.


Buenos Aires. Argentina. Pgs. 63-71.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DEPARTAMENTO DE


MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA.1982. Gua de prcticas. UNT.
Trujillo. Per. Pgs.26-29.

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS. FACULTAD DE


MEDICINA. 1986. Microbiologa. UNMSM. Lima. Per. Pgs. 8-10.

TORTORA, G. y cols. 1993. Introduccin a la Microbioloa. 3 edicin. Edit.


Acribia. Zaragoza. Espaa.
VII. CUESTIONARIO:

1. Seale qu elementos estructurales permiten diferenciar un hongo de una


bacteria.

2. Cul es el mtodo de eleccin rpido y prctico para el diagnstico de pitiriasis


versicolor?

3. Qu estructura permite dar un diagnstico de micosis causada por Microsporum


canis?

4. Qu hongo causante de dermatofitosis produce una pigmentacin roja en el


reverso de la colonia?

5. Cul es el procedimiento de trabajo ms til para el diagnstico de


esporotricosis?

6. Cmo se diferencia en la cromomicosis de la faeohifomicosis?

7. Seale las caractersticas macroscpicas y microscpicas de los grnulos


maduromicticos.

8. Qu hongo dimrficos patgenos conoce?

9. Cul es el significado del hallazgo en un examen en fresco de la estructura


caracterstica de Paracoccidioides brasiliensis?

10. Qu estructuras microscpicas se observan en una candidiasis?


ANEXO: CLAVES TAXONMICAS PARA DERMATOFITOS

1. Macroconidios presentes.............................................................................................. 2
No se observan macroconidios.................................................................................... 6
2. Macroconidios en forma de huso, de paredes gruesas y rugosas y frecuentemente con
un pico terminal caracterstico. Estn formadas normalmente por ms de seis clulas
(Figura 1.3a).................................................................................M. canis (Figura 1.4)
Macroconidios, cuando se presentan, similares a los de M. canis, aunque de mayor
longitud y con paredes ms lisas.Se observan formas con una constriccin en la zona
central del macroconidio (Figura 1.3b). Con frecuencia la presencia de
macroconidios es escasa, o no se llegan a observar. Clamidosporas terminales (Figura
1.3k) e hifas pectinadas caractersticas (Figura 1.3). En contraste con M. canis, no
se desarrolla o presenta crecimiento escaso en el medio de
arroz...........................................................................................................M.
audouinii
Macroconidios de paredes delgadas............................................................................. 3
3. Macroconidios de paredes rugosas.............................................................................. 4
Macroconidios de paredes lisas................................................................................... 5
4. Macroconidios abundantes, fusiformes y simtricos, conteniendo hasta seis clulas
(Figura 1.3c)........................................................................... M. gypseum (Figura 1.5)
5. Macroconidios alargados en forma de cigarro habano (Figura 1.3d) no siempre
presentes. Abundantes microconidios redondeados formando grupos que asemejan
racimos de uva inmadura (Figura 1.3i). Presencia de hifas espiriladas (Figura 1.3n).
Ureasa positivo. Ensayo de perforacin del pelo
positivo.......................................................................T. mentagrophytes b (Figura 1.6)
Microconidios piriformes, estrechos, en forma de lgrima, aislados y dispuestos
lateralmente en las hifas (Figura 1.3j). Macroconidios generalmente no presentes.
Cuando se presentan, similares a los de T. mentagrophytes (Figura 1.3e). Reverso de
la colonia rojiza; se estimula la produccin de este pigmento rojizo en PDA. Ureasa
negativo. Ensayo de perforacin del pelo negativo.................................... T. rubrum c
Macroconidios ovales en forma de porra, aislados o en racimos (Figura 1.3f).
Ausencia de microconidios.
Clamidosporas abundantes................................................... E. floccosum (Figura 1.7)
6. Microconidios abundantes........................................................................................... 7
Microconidios escasos o no se observan..................................................................... 8
7. Abundantes microconidios redondeados formando grupos que asemejan racimos de
uva inmaduros (Figura 1.3i).
Presencia de hifas espiriladas (Figura 1.3n). Ureasa positivo. Ensayo de perforacin
del pelo positivo............................................................................T. mentagrophytes b
Microconidios piriformes y estrechos, en forma de lgrima, aislados y dispuestos
lateralmente en las hifas (Figura 1.3j) Reverso de la colonia rojizo; se estimula la
produccin de este pigmento en PDA. Ureasa negativo.
Ensayo de perforacin del pelo negativo.................................................... T. rubrumc
Microconidios de mayor tamao, en forma de porra ms o menos alargados. Algunos
en forma de globo (Figura 1.3h). Crece poco en ausencia de tiamina. Infeccin del
pelo tipo endotrix...................................................................T. tonsurans (Figura 1.8)
8. Crecimiento moderadamente rpido (colonias > 15 mm de dimetro en 7 das)........ 9
Crecimiento lento (colonias < 10 mm de dimetro en 7 das)................................... 10
9. Microconidios, si se detectan, pequeos, en bajo nmero y en forma de porra.
Similares a los de otras Microsporum spp. (Figura 1.3g). Clamidosporas terminales
(Figura 1.3k) e hifas pectinadas caractersticas (Figura 1.3). No se desarrolla o
presenta un crecimiento escaso en el medio de arroz................................M.
audouinii
10. Colonias color prpura oscuro, violeta. No se detectan conidios. Escaso crecimiento
en ausencia de tiamina.
Infeccin del pelo tipo endotrix................................................................ T. violaceum
Colonias con coloraciones claras, blanquecinas, grisceas, marronceas................. 11
11. Clamidosporas en cadenas largas densamente compactadas (Figura 1.3l). Algunas
hifas en candelabro (Figura 1.3o) y/o terminadas en cabeza de clavo (Figura 1.3p).
La mayora de cepas requieren tiaminad o tiamina e inositol. Infeccin del pelo tipo
ectotrix megasporado..............................................................................T. verrucosum
No se observan conidios. Tpicas hifas en candelabro (Figura 1.3o) y/o terminadas en
cabeza de clavo (Figura 1.3p). No requieren tiamina. Infeccin del pelo tipo
fvico..........................................................................................................
schoenleinii
b: Trichophyton mentagrophytes est considerado como un complejo de especies (T.
mentagrophytes var. mentagrophytes (variedad granular), T. mentagrophytesvar.
erinacei, T. mentagrophytes var. interdigitale, T. mentagrophytes var. Nodular (T.
krajdenii), T. mentagrophytes var. quinckeanum). Segn autores algunas de estas
variedades son consideradas como especies independientes o sinnimos de T.
mentagrophytes. En contraste con T. mentagrophytes var.mentagrophytes, T.
mentagrophytes var. erinacei y T. mentagrophytes var. interdigitale pueden presentar
microconidios alargados (en forma de porra de pequeo tamao) en vez de
redondeados.
c: T. rubrum est considerado como un complejo de especies. Para algunos autores
las especies T. fischeri, T. kanei, T. raubitscheckii, son consideradas como variedades
o sinnimos de Trichophyton rubrum. Algunas de las diferencias que presentan son:
T. fischeri (especie no patgena), T. kanei (ausencia de microconidios; ureasa
positivo dbil), T. raubitscheckii (ureasa positivo).
d: Se han descrito cepas aisladas de tias de ovejas que no necesitan tiamina o
inositol (T. verrucosum var. autotrophicum). En un estudio sobre los requerimientos
nutricionales de esta especie se cita que el 84% de las cepas se desarrollaron en el
medio conteniendo tiamina e inositol, el 16% en el medio conteniendo tiamina y
ninguna cepa se desarroll en el medio sin vitamina.
Figura 1.3: ESQUEMA DE CONIDIOS
Diferentes tipos de macroconidios (a-f), microconidios (g-j), clamidosporas (k-m) e
hifas (n-p) (consultar clave taxonmicas).