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Introducción A La Genética Médica PDF
Introducción A La Genética Médica PDF
y seminarios
I
AUTORA PRINCIPAL
COLECTIVO DE AUTORES
II
Guas de clases prcticas
y seminarios
Dra. Araceli Lantigua Cruz
La Habana, 2004
III
Datos CIP- E ditorial Ciencias Mdicas
QZ50
IV
AGRADECIMIENTOS
1
A la Lic. Marcia Cobas Ruiz quien con sus exigencias y aliento
impuls la realizacin de esta obra en un muy poco tiempo.
V
DEDICATORIA
1
Al Comandante Fidel Castro Ruz, por la visin del futuro del
desarrollo de la Gentica Mdica y su repercusin en las Cien-
cias Mdicas, por su eterno sentimiento de justicia social e igual-
dad de posibilidades para todos y por mostrarnos con su sabia
conduccin que un mundo mejor es posible.
VI
PRLOGO
1
Este Texto ha sido diseado para los estudiantes de Ciencias Mdicas, se ha
adaptado al programa de la asignatura Gentica Mdica, pero puede ser de utilidad
para estudiantes de educacin especial, de sicologa, docentes involucrados en la
docencia de preuniversitario y estudiantes y profesionales que de algn modo
necesiten de conocimientos generales de gentica dirigidos hacia el humano y en
especial a la medicina. Aunque no es un texto dirigido a estudios avanzados de
postgrado, podra tambin ser de utilidad para todas las especializaciones mdicas
en especial para la Medicina General Integral y en un primer nivel de informacin,
para estudiantes de diplomados y maestras relacionados con Gentica Mdica y
Asesoramiento Gentico.
Se ha nombrado Introduccin a la Gentica Mdica porque contiene elementos
de Biologa Celular y Molecular, de Embriologa y de las Leyes de Mendel escritos
con el enfoque que se requiere para que el estudiante tenga esta informacin ase-
quible.
Cada Captulo ha sido diseado teniendo en cuenta los conocimientos sobre las
leyes y principios de la gentica general y humana necesarios para la comprensin
de los fundamentos de la Gentica Mdica. Cuenta con un captulo introductorio en
el cual se enfocan antecedentes histricos del desarrollo de la Gentica Mdica y
de la clasificacin etiolgica de los defectos genticos.
Los captulos 2,3 , 4 y 5 facilitan contenidos bsicos actualizados de la biologa
celular y molecular, las caractersticas de la meiosis, piedra angular para la compren-
sin de la trasmisin hereditaria de los genes y caracteres, el fenmeno de la fecun-
dacin y los primeros estadios de divisiones celulares del cigoto hasta la formacin
del blastocisto, enfocando en los mismos los momentos biolgicos ms significati-
vos para la comprensin de mecanismos genticos cuyas anormalidades originan
enfermedades genticas y defectos congnitos.
En los captulos 6, 7 y 12 se abordan los fundamentos tcnicos, mtodos y
herramientas necesarios para el estudio con fines diagnstico del material gentico,
as como la forma en que se exponen sus resultados y su interpretacin.
En los captulos del 8 al 11 se exponen conocimientos acerca de los defectos
cromosmicos y de mutaciones simples del ADN y su repercusin en la etiologa de
enfermedades genticas.
VII
Los captulos 13, 14 y 15 proporcionan conocimientos bsicos que permiten
comprender las posibilidades de aplicacin de las nuevas tecnologas moleculares
del AND, del estudio de la gentica poblacional y su repercusin en la
epidemiologa de enfermedades genticas. Todos estos conocimientos en fun-
cin de la comprensin de objetivos preventivos en la prctica mdica y en pro-
porcionar informacin sobre principios tcnicos del desarrollo de investigaciones
sobre el genoma humano.
El captulo 16 explica los fundamentos genticos de la herencia de rasgos
cuantitativos enfocados al estudio de malformaciones especficas y al novedoso
tema de las enfermedades comunes en general, pero sobre todo a aquellas que se
aprecian como el resultado de la prolongacin de la vida y que por las dificultades
de la comprensin de sus caractersticas genticas y de la participacin ambiental
en ellas se les denomina tambin como enfermedades complejas.
En el captulo 17 se aborda la etiologa de los defectos congnitos y se
detallan aspectos relacionados con los genes y mecanismos celulares que parti-
cipan en la morfognesis, cuyas mutaciones explican su origen gentico y que
adems, proporcionan conocimientos que permiten la comprensin de la accin
de teratgenos que interfieren con estos mecanismos jerrquicamente programa-
dos.
El captulo 18 est dedicado a la prevencin de las enfermedades genticas.
Proporciona informacin acerca del Asesoramiento Gentico y de sus tcnicas y
da la oportunidad de integrar todos los conocimientos expuestos en los captulos
anteriores, finalmente en el captulo 19 se expone un ejemplo de programa de
atencin de una enfermedad gentica en el nivel primario de Salud para el cual se
seleccion la enfermedad gentica ms frecuente en nuestro pas, la anemia de
clulas falciformes.
Aunque el texto fue diseado en un tiempo breve, su contenido ha sido
largamente meditado y en cada captulo se han tenido en cuenta los progresos
que el desarrollo de la gentica en los ltimos aos, sobre todo aquellos surgidos
como una consecuencia de los extraordinarios avances tcnicos en los estudios
del ADN y de los nuevos conocimientos surgidos como producto de las inves-
tigaciones que se desarrollan en el Proyecto del Genoma Humano.
Esperamos que en este texto los estudiantes de Ciencias Mdicas encuentren
los aspectos fundamentales de la gentica humana relacionados con las variacio-
nes genticas del desarrollo y se apoderen de las bases y herramientas necesarias
para abordar la comprensin, atencin y prevencin de aquellas, que por las
caractersticas de su patognesis requieren de atencin mdica y educativa espe-
cializada.
Los autores.
VIII
NDICE
1
1. INTRODUCCIN / 1
Antecedentes / 1
Las enfermedades genticas / 5
2. PANORAMA DE LA BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR / 7
La Biologa Celular / 7
La membrana plsmtica / 8
El sistema de endomembranas / 9
El citoesqueleto / 11
Los ribosomas / 11
El ncleo celular / 12
El ciclo celular / 13
Las ciclinas / 14
Las protenas kinasas dependientes de ciclinas (Cdk) / 16
Los inhibidores de las Cdk (CDI/CKI) / 17
Fosfoprotenas fosfatasas / 17
La Biologa Molecular / 18
Estructura del ADN / 18
La transmisin de la informacin gentica / 20
La replicacin del ADN / 20
La mitosis / 25
3. LA EXPRESIN DE LA INFORMACIN GENTICA / 27
La transcripcin / 27
La traduccin / 30
La conservacin de la informacin gentica / 34
Las mutaciones / 35
Consecuencias de las mutaciones / 36
Reordenamiento de la informacin gentica / 37
La comunicacin intercelular / 38
4. DE LA MEIOSIS AL BLASTOCISTO / 42
La meiosis / 42
Espermatognesis / 47
La ovognesis / 49
IX
El vulo / 50
La fecundacin / 51
La primera divisin mittica del cigoto / 51
Resumen / 52
5. LAS LEYES DE MENDEL / 54
Los experimentos mendelianos / 55
Cruzamiento monohbrido / 56
Anlisis del cruzamiento mendeliano para el carcter color del cotiledn de las semillas / 57
Cruzamiento mendeliano para dos caracteres / 60
Retrocruces / 62
Cruzamiento trihbrido / 63
Resumen / 64
6. LOS CROMOSOMAS HUMANOS Y SU ESTUDIO / 65
Cromatina nuclear / 65
Los cromosomas / 66
Estudio de los cromosomas humanos en clulas en interfase: Cromatina sexual / 67
El cariotipo humano / 69
Tcnicas para la obtencin de cromosomas / 70
Mtodo de coloracin para anlisis cromosmico comn / 71
Resumen / 74
7. CITOGENTICA MOLECULAR / 75
Tcnicas de hibridacin in situ / 75
Mtodos de hibridacin in situ / 76
Resumen / 79
8. MUTACIONES QUE AFECTAN A LOS CROMOSOMAS HUMANOS / 80
Anormalidades o defectos cromosmicos / 81
Aberraciones cromosmicas de nmero / 81
Las aneuploidas como eventos precigticos / 82
Las aneuploidas como eventos postcigticos / 85
La anafase retardada / 86
Aberraciones cromosmicas de estructura / 86
Inversiones y su repercusin en la gametognesis / 92
Las translocaciones / 92
Gametognesis en translocaciones / 93
El fenotipo como expresin de aberraciones cromosmicas no balanceadas / 94
Expresin de las aberraciones cromosmicas autosmicas no balanceadas / 95
Anormalidades de estructuras anatmicas por defecto del desbalance genmico en la
morfognesis / 95
Efectos en el crecimiento y desarrollo / 98
Efectos en el sistema nervioso / 98
Caractersticas fenotpicas de las aberraciones de cromosomas sexuales / 99
X
Resumen / 102
9. TRASMISIN DE SIMPLES MUTACIONES / 104
Determinacin del sexo / 104
Herencias mendelianas en el humano / 107
Simbologa para la confeccin del rbol genealgico / 107
Herencias dominantes, autosmica y ligada al cromosoma X / 109
Herencia autosmica dominante / 109
Herencia dominante ligada al cormosoma X / 111
Resumen de las herencias dominantes / 113
Herencias recesivas, autosmica y ligada al cromosoma X / 113
Herencia autosmica recesiva / 113
Herencia recesiva ligada al cromosoma X / 115
Resumen de las herencias recesivas / 116
Herencia ligada al cromosoma Y / 117
Fenmenos que dificultan el anlisis de la segregacin mendeliana / 117
Herencias influidas por el sexo y limitadas al sexo / 117
Penetrancia de un gen o de una mutacin especfica / 118
Expresividad de un gen o mutacin especfica / 118
Efecto pleitrpico de un gen o mutacin especfica / 119
Heterogeneidad gentica / 119
Inactivacin del cromosoma X / 119
Nuevas mutaciones con expresin dominante / 120
Efecto de letalidad de un genotipo especfico / 120
Resumen / 121
10. INTERFERENCIAS BIOLGICAS DE LA TRANSMISIN DE SIMPLES MUTACIONES / 122
Mutaciones dinmicas / 122
Impronta genmica / 125
Disomas uniparentales / 126
Mosaicismos germinales / 127
Herencia mitocondrial / 127
Otras caractersticas de la transmisin de simples mutaciones y de su expresin / 129
Herencia dignica / 129
Prdida de heterocigocidad / 129
Resumen / 130
11. MUTACIONES MONOGNICAS QUE AFECTAN A DIFERENTES CLASES DE PROTENAS / 131
Clasificacin de las protenas segn su patrn de expresin / 131
Defectos de protenas enzimticas / 132
Protenas de transporte y almacenamiento / 136
Protenas estructurales de clulas y de rganos / 136
Protenas involucradas en la homeostasis / 137
Protenas que se expresan durante el desarrollo / 137
XI
Protenas involucradas en la proliferacin y diferenciacin celular / 138
Protenas que actan en el metabolismo intercelular y la comunicacin entre las clulas / 138
Resumen / 140
12. MTODOS Y APLICACIONES DE ADN RECOMBINANTE / 141
Clonacin del ADN / 141
Clonacin in vivo / 142
Enzimas de restriccin y ligasas. Su papel en la clonacin / 142
Vector / 143
Transformacin del organismo huesped y obtencin del ADN especfico / 145
Mtodos de anlisis molecular / 146
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) / 147
Mtodo de Southern (Southern Blotting) / 149
Northern Blotting y Western Blotting / 150
Estudios de marcadores moleculares por ligamiento / 151
Polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccin / 151
Secuenciacin de ADN / 152
Resumen / 153
13. LIGAMIENTO Y RECOMBINACIN / 154
Ligamiento. Concepto y clasificacin / 154
Clculo de la frecuencia de recombinacin y fase de posicin entre genes ligados / 160
Localizacin de genes ligados / 164
Factores que pueden afectar el entrecruzamiento en animales y plantas / 167
Anlisis de ligamiento en el hombre / 167
Construccin de mapas fsicos / 168
Mapas genticos / 175
Mapas genticos por tcnicas de Biologa Molecular / 181
Resumen / 183
14. MARCADORES GENTICOS / 184
Marcadores genticos / 184
Sistemas de grupos sanguneos como marcadores genticos / 184
Vas de sntesis del sistema ABO / 186
Sistema Rh / 188
Sistema MN / 188
Gentica del sistema de histocompatibilidad mayor (MHC) / 189
Polimorfismos de longitud de fragmentos de restriccin del ADN (RFLP) / 191
Resumen / 192
15. LOS GENES EN LAS POBLACIONES HUMANAS / 193
La gentica poblacional / 194
Ley de Hardy - Weinberg / 194
Determinacin de frecuencias fenotpicas, genotpicas y gnicas entre dos alelos con
dominancia completa / 196
XII
Determinacin de frecuencias fenotpicas, genotpicas y gnicas entre dos alelos
codominantes / 198
Determinacin de frecuencias fenotpicas, genotpicas y gnicas entre alelos mltiples / 199
Frecuencias de genes y genotipos de genes ligados al cromosoma X / 201
Factores que pueden alterar el equilibrio de Hardy - Weinberg en una poblacin / 202
Matrimonios no al azar / 202
Mutaciones / 203
Seleccin contra mutaciones dominantes / 204
Seleccin contra mutaciones recesivas / 204
Seleccin contra mutaciones ligadas al cromosoma X / 204
Ventajas selectivas de heterocigticos / 205
Resumen / 206
16. HERENCIA MULTIFACTORIAL / 208
Frecuencias de genotipos y fenotipos para rasgos discontinuos / 209
Frecuencias de genotipos y fenotipos para rasgos continuos / 211
Herencia multifactorial / 213
Heredabilidad / 214
Modelo de predisposicin gentica / 216
Defectos congnitos de herencia multifatorial / 217
Herencia multifactorial de enfermedades comunes / 218
Susceptibilidad gentica / 219
Riesgos de susceptibilidad gentica / 220
Demostracin de la existencia de un componente gentico en la expresin de una enferme-
dad comn / 221
Mtodos para demostrar heterogeneidad gentica en la herencia multifactorial / 223
Caractersticas comunes a todo rasgo en el que se sospeche herencia multifactorial / 224
Resumen / 225
17. DEFECTOS CONGNITOS DE ORIGEN GENTICO Y AMBIENTAL / 226
Tipos de defectos congnitos / 227
Defectos congnitos y morfognesis / 228
Mecanismos moleculares y celulares del desarrollo embrionario / 229
Eventos moleculares / 230
Eventos celulares / 232
Induccin embrionaria / 235
Control gentico del desarrollo / 235
Genes de segmentacin / 236
Genes hometicos / 237
Cajas pareadas (PAX) / 237
Genes con cajas HMG (Grupo de Alta Movilidad o Higth Movility Group) / 238
Genes T / 238
Factores de transmisin en dedos de zinc / 238
XIII
Genes de transduccin de seales / 239
Receptores de factores de crecimiento fibroblstico / 239
Desarrollo embrionario de las extremidades / 239
Aspectos esquemticos generales para el estudio del desarrollo del esqueleto / 240
Embriologa descriptiva de las extremidades / 241
Origen embrionario de los tejidos y estructuras componentes de las extremidades / 242
Bases moleculares del patrn de formacin del esqueleto apendicular / 242
Etiologa ambiental de defectos congnitos / 244
Agentes teratgenos exgenos / 245
Susceptibilidad gentica al efecto de teratgenos / 247
Condiciones endocrinometablicas maternas anormales / 247
Defectos congnitos de las extremidades / 248
Defectos congnitos debido a fuerzas mecnicas / 249
Defectos congnitos debido a disrupciones / 249
Resumen / 250
18. PREVENCIN DE LAS ENFERMEDADES GENTICAS Y ASESORAMIENTO GENTICO / 251
Servicios de gentica / 251
Servicios asistenciales - preventivos de base individual - familiar / 251
Programas de prevencin con base poblacional / 253
Asesoramiento gentico / 256
Evolucin del concepto de asesoramiento gentico / 256
Modelo mdico - preventivo / 257
Modelo basado en la toma de decisiones (aos 60) / 258
Modelo psicoteraputico / 258
Definicin de asesoramiento gentico / 259
Objetivos del asesoramiento gentico / 260
Principales razones por las que se solicita asesoramiento gentico / 261
Principios del asesoramiento gentico / 261
Componentes bsicos del asesoramiento gentico / 261
Estimacin del riesgo / 263
Clasificacin del riesgo gentico / 265
Comunicacin / 271
Soporte o basamento del asesoramiento gentico / 272
Mtodos de acceso al feto / 273
Aspectos prcticos del asesoramiento gentico / 277
Aspectos psicolgicos del asesoramiento gentico / 280
Aspectos ticos del asesoramiento gentico y de la gentica mdica / 281
19. ANEMIA DE CLULAS FALCIFORMES: UN PROGRAMA DE NIVEL PRIMARIO DE
ATENCIN / 284
Anemia A Hemates falciformes / 284
Resumen / 287
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS / 288
XIV
INTRODUCCIN
Araceli Lantigua Cruz
1
Mencionar la relacin de hechos histricos que han confluido desde el
redescubrimiento de las leyes de Mendel hasta nuestros das, requerira de lar-
gas horas de bsqueda. Cada aporte cientfico ha sido un importante eslabn en
esta larga cadena que nos lleva desde la Gentica General hasta la Gentica
Clnica actual y que sin dudas ha tenido un impacto impresionante en las Cien-
cias Mdicas.
En este primer captulo exponemos un cuadro que menciona apenas pincela-
das sobre hechos relevantes que han dejado una impronta en el desarrollo actual
de las disciplinas de las Gentica Humana, Mdica y Clnica.
ANTECEDENTES
Es prctica habitual comenzar los recuentos sobre la historia de la Gentica con los
trabajos de Mendel a mediados del siglo XIX y su redescubrimiento en los inicios del siglo
XX. Sin embargo, observaciones sobre la herencia biolgica en humanos haban sido
realizadas desde el siglo XVII, aunque no tuvieron ni el significado ni la trascendencia de
los trabajos de Mendel, pues el estudio de la Gentica Humana presenta cierto grado de
complejidad. Estos intentos pioneros estuvieron mejor encaminados ya a principios del
siglo XIX. Como muestra de ello se mencionan los siguientes.
En el ao 1814 Joseph Adams, mdico ingls, public un libro en el que se destacan
las siguientes observaciones:
1
4. La reproduccin de personas afectadas puede estar disminuida y propuso establecer
registros de familias con enfermedades hereditarias.
Qu no hubiera hecho este cientfico con la automatizacin actual de datos.
El profesor alemn de medicina C. F. Nasse hizo el reconocimiento en el ao 1820 de
la transmisin de la hemofilia a travs de mujeres.
Debe tenerse presente que en el siglo XIX el nivel de reconocimiento de una enfer-
medad gentica en el humano se basaba solamente en el anlisis clnico de los signos y
sntomas de enfermedades, el reconocimiento del carcter familiar y la historia de la
enfermedad, en especial la edad de comienzo de los primeros sntomas.
Sin embargo, Mendel hizo sus experimentos con guisantes de lneas puras lo cual le
permiti llegar a sus trascendentales conclusiones. Estas no fueron comprendidas por las
limitaciones de conocimientos del momento.
Durante las ltimos dcadas del siglo XIX se producen algunos descubrimientos im-
portantes. En 1875 Hertwig observ la fertilizacin animal y la continuidad de clulas
nucleadas. Cinco aos despus Fleming observa y descubre las cromtidas hermanas de
los cromosomas en la mitosis. Ya en 1883, von Beneden establece la regularidad de los
cromosomas en los ncleos de clulas hijas. Y para 1888 Boveri establece la individuali-
dad de cada par cromosmico y en ese mismo ao Waldeyer utiliza el trmino cromosoma
(cuerpo que toma color) por las caractersticas de tincin de estas estructuras celulares.
Tambin para ese ao haban culminados los estudios sobre la mitosis. Todos estos acon-
tecimientos hicieron posible la rpida aceptacin de los trabajos de Mendel cuando fue-
ron redescubiertos en los albores del siglo XX.
A partir del redescubrimiento de las leyes de Mendel comienzan a emerger nuevos
conocimientos sobre la gentica de caracteres humanos que vertiginosamente finalizaron
el sigo XX con el proyecto Genoma Humano.
En el ao 1902 Archibald Garrod public un trabajo titulado "La incidencia de la
alcaptonuria: Un estudio en individualidad qumica". Con este trabajo se da inicio al an-
lisis de las leyes de Mendel en humanos e hizo las siguientes observaciones:
2
En 1908, el matemtico ingls Hardy y el mdico alemn Weinberg al mismo tiempo
fundamentan la ley de la distribucin de los genes en las poblaciones humanas, conocida
actualmente como Ley de Hardy Weinberg.
En 1924 Bernstein demuestra que los caracteres A, B y O estn determinados por
genes de un mismo locus o alelos mltiples
Entre los aos 1910 y 1930 los resultados de investigaciones genticas en la mosca de
la fruta (Drosophila melanogaster) aportan nuevos e importantes conocimientos como
ligamiento, no disyuncin, tasa de mutaciones.
Aparecen al estudiar la herencia en el humano conceptos como pleiotropa del gen,
heterogeneidad gentica y variacin en la expresin de los genes.
Las preguntas a partir de qu se considera raro? y por qu es raro? han sido el eje
central de los descubrimientos genticos en el humano.
La Gentica Humana se inicia con la alcaptonuria y se define como tal porque estudia
rasgos que se distinguen como variaciones normales del desarrollo, pero es muy difcil
delimitar el momento en que surge la Gentica Mdica aunque para algunos historiadores
fue a partir de 1950 cuando se unen a los conocimientos anteriores la epidemiologa
gentica y se investiga la prevalencia de enfermedades genticas, su modo de herencia,
heterogeneidad y tasa de mutacin.
Los avances en reas especializadas como la citogentica, la gentica bioqumica y
molecular y la aplicacin de estos conocimientos al diagnstico y cuidado del enfermo
promueven la aparicin de la Gentica Clnica.
La citogentica se hace fuerte en la Gentica Mdica a partir del ao 1959 pero es
bueno sealar que la historia de este campo de desarrollo tcnico de la gentica se ha
dividido en cinco periodos:
3
El ao 1956 marca el inicio de la Gentica Clnica ya que paralelo al desarrollo de la
citogentica se producen nuevos descubrimientos de defectos metablicos y se produce
un importante avance en la Gentica Bioqumica. Entre ellos se destaca el descubrimien-
to del defecto bioqumico de la sicklemia por Pauling y sus colaboradores en el ao 1949.
En 1953 se produjo un hecho trascendental no slo para la Gentica sino para toda la
Biologa, cuando aparece el modelo molecular del ADN propuesto por Watson y Crick. A
partir de ese momento el gen dej de ser slo una intuicin para tomar materialidad en
una molcula especfica. Este trabajo, considerado por muchos, como la hiptesis ms
brillante de la Biologa contempornea, no slo aport el conocimiento sobre la estructura
del ADN sino que adems dej demostrado fehacientemente que esta molcula era la
portadora material de la informacin gentica.
La ltima dcada del siglo XX ha desbordado la imaginacin en recursos tcnicos,
automatizacin, nuevos conocimientos, nuevas posibilidades para personas afectadas,
familiares y para la sociedad. La manipulacin del Genoma Humano ha requerido incor-
porar a la Etica Mdica principios Bioticos, .surgidos por la necesidad de tomar decisio-
nes que no daen la integridad de nuestra propia especie.
El futuro de las Gentica Humana, Mdica y Clnica es difcil de predecir. La incerti-
dumbre sobre nuevos tratamiento y utilizacin de nuevos frmacos dirigidos a enfermos
con genotipos especficos, bajo el control de las grandes industrias farmacuticas, pone
en peligro el principio tico de la justicia, pues los recursos financieros para la produccin
de estos frmacos es muy elevada y habra que preguntarse que personas con un tipo
especfico de defecto gentico tendran la posibilidad de ser tratados. Qu nuevos
recursos tcnicos se inventarn? Qu nuevos conocimientos surgirn? Beneficiarn o
perjudicarn esos nuevos conocimientos a las poblaciones del Tercer Mundo?
Una verdad se abre, para contribuir en lo adelante al desarrollo del Proyecto Genoma
Humano, es necesario tener presente que el punto de partida de ahora en lo adelante es
conocer la epidemiologa de lo que es raro y tener el consentimiento de estudio de las
personas afectadas a fin de dar la respuesta a por qu es raro? y para eso se requiere
del desarrollo de la Gentica Comunitaria, que ser el pilar del futuro desarrollo de las
Gentica Humana y Mdica y que dar respuesta a las exigencias de diagnstico,
tratamiento, prevencin y pronstico que comprometen al desarrollo de la Gentica Clni-
ca. Las Ciencias Mdicas no escapan a tan elevado volumen de informacin y de
exigencias prcticas tanto a nivel preclnico como a nivel clnico. Es necesario preparar-
se para enfrentar un futuro insospechado en el campo de la Gentica del siglo XXI y la
repercusin que es de esperar en la atencin mdica.
4
LAS ENFERMEDADES GENTICAS
X 1000 PERINATALES
15 INFECCIONES
DEFECTOS CONG NITOS
10
5
Tanto los factores perinatales como las infecciones experimentaron una disminucin
gradual en el periodo 1970-1980 reflejo de acciones preventivas concretas. Si observa-
mos la frecuencia de mortalidad por defectos congnitos en ese periodo observaremos
que estas se mantuvieron constantes como era de esperar. A partir del ao 1987 hasta
el 2002 comenzaron a realizarse en Cuba medidas preventivas prenatales para la detec-
cin temprana de defectos congnitos y ofrecer a las parejas involucradas la opcin de
descontinuar la gestacin. Con esta intervencin y la incorporacin de los servicios de
Gentica Clnica a todo el pas, se ha logrado disminuir la tasa de mortalidad debida a
defectos congnitos. Si no hubiese existido accin de prevencin alguna, las frecuencias
se hubieran mantenido similares a las experimentadas en los aos anteriores. Nuestros
indicadores de mortalidad infantil en el primer ao de vida, exhiben tasas muy bajas a
expensas de problemas perinatales y muchsimo menores por infecciones. Estas ltimas
en los dos ltimos aos, inferiores a la mortalidad causada por defectos congnitos.
Los defectos congnitos por si mismos pueden manifestar variaciones en las frecuen-
cias al nacimiento porque sus causas no siempre son de etiologa gentica. Muchas
veces son el resultado del efecto de un agente ambiental, es por eso que los registros de
defectos congnitos ofrecen la posibilidad de tener el papel de vigilancia epidemiolgica
ya que permiten identificar con rapidez si existe algn agente fsico qumico o biolgico
que se encuentre actuando como teratgeno. La identificacin de un fenmeno de este
tipo ofrece la oportunidad de tomar las medidas preventivas pertinentes.
Por su parte las enfermedades genticas obedecen a una serie de afectaciones del
ADN que se pueden clasificar en tres grandes grupos atendiendo al tipo de defecto:
Cada una de estas alteraciones tienen sus peculiaridades al ser analizadas y diagnos-
ticadas.
En los siguientes captulos, los lectores interesados encontraran conocimientos e ins-
trumentos que le permitirn su comprensin etiolgica y la motivacin hacia su diagns-
tico, pronstico, prevencin y tratamientos.
6
PANORAMA DE LA BIOLOGA
CELULAR Y MOLECULAR
Rolando Hernndez Fernndez
2
En 1953 se produce un hecho trascendental en la historia de la Biologa, cuan-
do la revista Nature public el trabajo sobre estructura del ADN de James D.
Watson y Francis H. C. Crick. Este trabajo dio comienzo a una revolucin en el
campo de la Biologa y marc el inicio de la Biologa Molecular. Desde entonces
hasta nuestros das el conocimiento acerca de los mecanismos moleculares relacio-
nados con la herencia biolgica han alcanzado un desarrollo insospechado en
pocas anteriores.
El conocimiento de la estructura molecular del ADN ha permitido esclarecer los
mecanismos relacionados con la duplicacin del ADN, la sntesis de los ARN y de
las protenas, la recombinacin gentica y la mutagnesis, as como los complejos
mecanismos que permiten la autorregulacin de todos esos procesos.
Por si esto fuera poco, a partir de ese descubrimiento se han desarrollado pode-
rosos procedimientos experimentales que han rebasado el marco de la gentica
molecular y han incidido de forma fundamental en el conocimiento de la estructura y
las funciones celulares, de los procesos del desarrollo filo y ontogentico, de la rela-
cin entre el genoma y el ambiente y de las bases moleculares de las enfermedades.
En este captulo nos proponemos hacer un resumen de los principales aspectos
de la Biologa Celular y Molecular como una introduccin panormica para el
resto de los captulos del libro.
LA BIOLOGA CELULAR
La Biologa Celular contempornea tiene como objetivo explicar las funciones de las
clulas a partir del conocimiento de la estructura, las propiedades y las funciones de las
molculas que la forman, especialmente de los agregados supramoleculares. Desde ese
punto de vista la clula eucarionte se presenta como un complejo sistema biomolecular
con un alto grado de organizacin estructural y funcional que constituye la unidad bsica
de los organismos superiores. Sus estructuras estn formadas por agrupaciones de mol-
culas o de macromolculas que forman verdaderos organitos en los cuales se llevan a
7
cabo todas las funciones celulares de una forma armnica y coordinada. Las molculas
que componen estos organitos son los lpidos, las protenas, los cidos nucleicos y los
polisacridos. Dos aspectos destacan en estas clulas, la existencia del ncleo donde se
encuentra confinado el ADN y la existencia de una basta red de estructuras membranosas
que dividen la clula en numerosos compartimentos, de manera que los procesos se
produzcan con relativa independencia uno de otros. As, para realizar funciones comple-
jas es necesario que se genere un flujo de sustancia, energa e informacin no slo entre
la clula y su entorno sino adems entre los diferentes compartimentos intracelulares.
La membrana plasmtica
8
dimetro sea inferior al del poro; canales, que cumplen una funcin similar, pero son
estructuras ms activas que se abren y se cierran en respuesta a determinados estmulos
(cambios de voltaje, unin de un ligando); transportadores que llevan sustancias de un
lado al otro de la membrana, bien a favor de su gradiente de concentracin (transporte
pasivo) o contra el gradiente (transporte activo) en cuyo caso requieren de una fuente de
energa como la hidrlisis del ATP. Otras protenas son enzimas que pueden estar for-
mando parte permanente de la membrana o asociarse temporalmente con sta. Por lti-
mo existen protenas que actan como receptores de seales extracelulares que permiten
adaptar el funcionamiento de la clula a las condiciones especficas del organismo en un
momento dado.
El sistema de endomembranas
A p arato d e G o lgi
N cleo
R etcu lo en d op lsm ico ru go so
P ero x iso m as
L iso so m as
R ib o so m as
Figura 2.1. Se representan esquemticamente los componentes de una clula eucarionte. Por simplicidad
del esquema no se representan los componentes del citoesqueleto.
9
La envoltura nuclear est formada por dos membranas, la externa cubierta temporal-
mente de ribosomas y la interna asociada con la lmina nuclear. Estas membranas se
fusionan en numerosos puntos dejando una abertura cuyas paredes estn cubiertas de
protenas dando lugar al llamado complejo del poro nuclear por donde transitan
macromolculas, tanto desde el ncleo hacia el citoplasma, como en sentido contrario. El
aparato de Golgi est formado por un conjunto de sacos membranosos aplanados que
est muy desarrollado en las clulas secretoras. En su interior las protenas sintetizadas
por los ribosomas unidos al retculo endoplsmico rugoso son modificadas, principalmente
por glicosilaciones, concentradas y empaquetadas para ser enviadas a diferentes lugares,
entre ellos los lisosomas, los peroxisomas y la membrana plasmtica.
Los organitos citoplasmticos membranosos son las mitocondrias, los lisosomas y los
peroxisomas. Las mitocondrias estn formadas por dos membranas, la externa es lisa y
permeable a molculas de hasta 10 kDa, mientras que la interna forma pliegues hacia el
interior llamados crestas y es prcticamente impermeable a casi todas las sustancias con
excepcin del agua, el oxgeno y el dixido de carbono. El espacio limitado por la mem-
brana interna recibe el nombre de matriz y es el asiento de importantes procesos metablicos
principalmente del Ciclo de Krebs. La membrana interna contiene cerca de un 70% de
protenas entre las cuales se encuentran las que forman parte de la cadena transportado-
ra de electrones y la ATP sintetasa que cataliza la formacin del ATP. Muchas de las
otras protenas actan como transportadores, lo cual es necesario debido a la poca per-
meabilidad de la membrana.
Los lisosomas contienen un gran nmero de enzimas hidrolticas capaces de degradar
un gran nmero de sustancias complejas por lo que se han identificado como el sistema
digestivo de la clula. Su membrana contiene un bomba de protones que permite mante-
ner en el interior un pH ms bajo que en el exterior. Como la enzimas tienen su mayor
actividad a ese pH en caso de ruptura de los lisosomas su contenido sera vertido al
citosol, donde el pH ms alto inactivara a las enzimas impidiendo la digestin de los
componentes celulares.
Los peroxisomas son corpsculos membranosos redondeados que contienen un buen
grupo de enzimas oxidativas, entre ellas la catalasa y la peroxidasa, y otras que participan
en la oxidacin de los cidos grasos de cadena muy larga.
Se han descrito numerosas enfermedades debidas a la deficiencia gentica de mu-
chas de las protenas que forman parte del sistema de endomembranas.
10
El citoesqueleto
Los ribosomas
Los ribosomas no son organitos membranosos pues estn formados por cidos
ribonucleicos ribosomales y protenas. Estn formados por dos subunidades de tamao
diferente denominadas L la mayor y S la menor. La subunidad L contiene los ARNr de 28
S, 5,8 S y 5 S y ms de ciencuanta protenas. La subunidad S solo contiene el ARNr de 18
S y unas 35 protenas. Para su funcionamiento requieren adems del concurso de un
buen numero de protenas no ribosomales. La funcin de los ribosomas es la traduccin
gentica o sea, la sntesis de protenas.
11
El ncleo celular
12
EL CICLO CELULAR
1
Las abreviaturas provienen del nombre en ingls, en este caso PDGF: Plateld Derived Growth Factor.
2
Insulin-like Growth Factor.
13
la membrana y avanza hacia el ncleo, donde la fosforilacin de factores de transcripcin
activan la expresin de genes especficos, cuyos productos estn relacionados con los
mecanismos de la proliferacin celular.
Los estudios de transformacin llevados a cabo con virus ADN llevaron a la conclu-
sin de que el ciclo celular exhibe igualmente un control negativo. Las clulas elaboran
protenas cuya funcin es inhibir la progresin del ciclo. Cuando uno de estos virus infec-
ta a una clula, sta produce protenas codificadas por el genoma viral. Se ha podido
comprobar que algunas de ellas se asocian con protenas del hospedero y las mantienen
inactivas. Libres del freno que significa la actividad de las protenas inhibidoras las clu-
las proliferan incontroladamente.
En condiciones normales los mecanismos positivos y negativos forman una intrincada
red molecular cuyo funcionamiento armnico permite que el grado de proliferacin celu-
lar se adapte perfectamente al momento del desarrollo del organismo y a las condiciones
ambientales imperantes.
Los estudios del ciclo celular en muchos organismos han mostrado que en todos ellos
el ciclo celular progresa bsicamente por la intervencin de un nmero reducido de fami-
lias de protenas con funciones similares a las de levaduras.
Las ciclinas
Las ciclinas constituyen una familia de protenas muy diversas de masa molecular
relativamente pequea, 35 a 90 kD, que fueron identificadas y nombradas porque su
sntesis flucta durante el ciclo celular. Presentan una secuencia de 100 residuos de
aminocidos conocida como motivo de ciclinas. Este motivo es necesario para la unin a,
y la activacin de las Cdk correspondientes.
La concentracin intracelular de un tipo particular de ciclina se eleva bruscamente en
un momento del ciclo celular y poco tiempo despus tambin disminuye bruscamente.
Mucho se ha investigado acerca del sistema regulador capaz de generar esas oscilacio-
nes en las concentraciones intracelulares de ciclinas y se han podido identificar al menos
dos sitios de regulacin: la transcripcin gnica y la degradacin de protenas.
En los mamferos el conocimiento del control de la transcripcin de las ciclinas se
limita a la transicin entre la fase G1 y la S. La cascada enzimtica desencadenada por
los factores de crecimiento conduce a la activacin de la ERK(3), una protena de la
familia de las MAPK(4). La ERK por medio de la fosforilacin produce la activacin de
3
Del ingls Extracellular signal Regulated protein Kinases.
4
Del ingls Mitogen Activated Protein Kinases.
14
los factores de transcripcin AP-1 y ETS que estimulan la transcripcin del gen de la
ciclina D. La ciclina D forma complejos con las Cdk4 y la Cdk6. Estos complejos fosforilan
a la protena pRB (protena del gen del retinoblastoma) y eliminan la inhibicin que sta
ejerca sobre el factor de transcripcin de la familia E2F, los cuales son necesarios para
la transcripcin de varios genes cuyos productos estn involucrados en la replicacin del
ADN. Tambin E2F es capaz de estimular la transcripcin de los genes de la ciclina E, la
ciclina A y el propio E2F.
La transcripcin del gen de la ciclina E permite la activacin del complejo Cdk2/
ciclina E que tambin fosforila a pRB. Como E2F controla su propia transcripcin estas
fosforilaciones desencadenan un ciclo de retroaccin positiva que incrementa rpida-
mente la concentracin de E2F y con ello la velocidad de la transcripcin de los genes
que de l dependen, especialmente los relacionados con la replicacin del ADN y de esta
forma se logra la transicin de la fase G1 a la S. El E2F tambin estimula la transcripcin
de la ciclina A que acta con la Cdk2 como compaera formando el complejo Cdk2/
ciclina A. Este complejo, cuya concentracin se incrementa a medida que avanza la fase
S es capaz de fosforilar a E2F haciendo que ste abandone el ADN y con ello se suprime
la transcripcin de los genes dependientes de E2F.
De esta forma todos los genes cuya transcripcin depende de E2F comienzan a
transcribirse lentamente a mediados de G1, despus se incrementa la transcripcin en la
transicin de G1 a S, y prcticamente queda eliminada al final de la etapa S.
Si la regulacin transcripcional est mejor conocida para la ciclinas de la fase G1, la
regulacin por proteolisis est ms estudiada para las ciclinas mitticas, es decir, A y B.
Para arribar a la telofase y poder salir de la mitosis, las clulas promueven la degradacin
proteoltica de las ciclinas. Esta proteolisis se lleva a cabo por el sistema dependiente de
la ubiquitina y requiere de una pequea secuencia de aminocidos localizada hacia el
extremo N terminal de las ciclinas A y B y que se conoce como motivo de autodestruccin.
Esa destruccin se realiza por un gran complejo multiprotenico denominado Complejo
Promotor de la Anafase, o Ciclosoma, que cataliza la transferencia de ubiquitina a varios
sustratos mitticos, entre ellos a las ciclinas. La actividad del complejo promotor de la
anafase permanece elevada durante G1 hasta la aparicin de las ciclinas caractersticas
de esta etapa. Tambin las ciclinas E y D son degradadas por el sistema de la ubiquitina.
En ambos casos se requiere la fosforilacin de las ciclinas. Como se ha podido apreciar
estos diversos mecanismos de regulacin permiten que las ciclinas y con ellas sus Cdk
acompaantes existan solamente en el lugar y en el momento adecuado del ciclo celular
lo que permite que ste progrese de una generacin celular a la siguiente.
15
Las protenas kinasas dependientes de ciclina (Cdk)5
Las protein kinasas dependientes de ciclina (Cdk) son enzimas que transfieren grupos
fosforilos del ATP hacia grupos hidroxilos de serina o treonina de las protenas sustratos.
La progresin del ciclo por G1 en los vertebrados requiere la estimulacin externa por
factores de crecimiento (Figura 2.2). En muchos tipos celulares la respuesta clave a estos
factores de cre-cimiento es la activacin de la Cdk4 u otra ntimamente relacionada con
la Cdk6 las cua-les actan en asociacin con las ciclinas D (D1, D2 y D3). Los complejos
Cdk4/Cdk6/ciclina D hacen progresar las clulas por G1 al suprimir la accin antiproliferante
de la protena pRB, como lo demuestra el hecho de que clulas carentes de pRB progre-
san por G1 en ausencia de Cdk4/ciclina D.
A um enta la activ id ad de
C dk 4/ciclina D . F osfo rilacin
de pR B . B ajo n iv el de
transcrip ci n.
T ransicin G 1 -S . A u m enta la
actividad de C dk 2/ciclina E .
F o sfo rilacin d e pR B . A um en ta
el n iv el de transcripcin .
Figura 2.2. Eventos moleculares que favorecen la progresin del ciclo celular. Ms detalles en el textto.
5
Del ingls Cyclin-Dependent Kinases.
16
La Cdk2 se asocia con la ciclina E en la transicin de la fase G1 a la fase S y poste-
riormente se asocia con la ciclina A haciendo progresar la fase S aunque su papel exacto
no est totalmente establecido.
La concentracin nuclear de la ciclina B se eleva a mediados de la fase G2 y forma
complejos con la Cdk1 al cual se ha llamado Factor Promotor de la Mitosis (MPF del
ingls mitosis promoting factor). Este complejo es el que fosforila la lmina nuclear en la
profase posibilitando la desintegracin de la envoltura nuclear.
Existen como mnimo cuatro mecanismos principales para la regulacin de la activi-
dad de las Cdk. El mecanismo primario de activacin es la unin con las ciclinas, que se
completa en la mayora de las Cdk por la fosforilacin en un residuo especfico de treonina
de la posicin 160. Por otra parte los complejos Cdk/ciclina pueden ser inactivados por al
menos dos mecanismos: la unin con protenas inhibidoras (CDI) y la fosforilacin en
sitios inhibitorios cerca del extremo N terminal.
Fosfoprotenas fosfatasas
Como ya fue sealado la actividad de los complejos Cdk/ciclinas depende del grado de
fosforilacin de la subunidad cataltica. Por lo tanto es el balance entre la actividad de las
kinasas y las fosfatasas lo que en ltima instancia determina el progreso del ciclo celular.
17
Se ha identificado una actividad enzimtica designada KAP (por Kinase associated
phosphatase) que cataliza la hidrlisis del enlace ster fosfrico en la posicin T160. Esta
reaccin solamente se realiza si la Cdk no est unida a su ciclina acompaante pues la
enzima no es capaz de actuar sobre los complejos Cdk/ciclina, bien porque la ciclina inhibe
la actividad de la KAP, bien porque ambas protenas se unen a la Cdk por el mismo sitio.
La desfosforilacin de los sitios inhibitorios es catalizada por fosfoprotenas
fosfatasas pertenecientes a la familia gnica CDC25. En los humanos existen al
menos tres miembros de esta familia denominados Cdc25A, Cdc25B y Cdc25C, de
ellas las dos primeras se expresan en G1 y en la transicin hacia la fase S mientras la
Cdc25C es la isoforma mittica. Estas enzimas requieren ser fosforiladas para su
activacin. La Cdc25A que es necesaria para la iniciacin de la fase S es fosforilada
y activada por el complejo Cdk2/ciclina E que como ya se seal se encuentra acti-
vado al final de la fase G1.
En las desfosforilaciones tambin parecen estar implicadas otras fosfoprotenas
fosfatasas inespecficas como las tipo 1A y 2A.
LA BIOLOGIA MOLECULAR
Se ha calculado que el organismo humano posee 1012 clulas somticas y cada una de
ellas posee en su ncleo 46 molculas de ADN que constituyen el contenido fundamental
de los cromosomas. Adems en cada una de las mitocondrias existe un nmero variable de
molculas de ADN que se diferencia en algunos aspectos de las molculas del ADN nuclear.
Segn el modelo descrito por Watson y Crick el ADN est formado por hebras de
polidesoxinucletidos (esto es, que resultan de la unin de un gran nmero de deso-xinucletidos)
enlazados mediante un enlace fosfodister. Este enlace se establece entre la posicin 3 de un
18
desoxinucletido y la posicin 5 del otro por lo que se denomina 3 5. De esta forma la hebra
posee un extremo con el grupo fosfato de la posicin 5 libre (extremo 5) y el otro que
presenta libre el grupo OH de la posicin 3 (extremo 3). Cada desoxinucletido a su vez est
formado por una base nitrogenada que puede ser purnica o pirimidnica, por la D-2-desoxiribosa
y una o ms molculas de cido fosfrico. Las bases purnicas del ADN son la Adenina (A)
y la Guanina (G), mientras que la pirimidnicas son la Citosina (C) y la Timina (T). Cuando se
forma el polmero hay una zona con una estructura montona pues en ella se alternan la
desoxiribosa y el grupo fosfato a todo lo larga de la cadena, pero tambin una zona diversa
pues las bases nitrogenadas que sobresalen de la estructura montona son diferentes en cada
sector de la molcula. Es precisamente en el orden o sucesin de esas bases nitrogenadas
donde est contenida la informacin gentica (Figura 2.3).
3 5
A T
C G
T A
G C
5 3
Figura 2.3. Diagrama de la estructura secundaria del ADN que muestra el eje covalente principal de
desoxirribosa y fosfato, que forman la doble hlice con giro derecho. Las bases nitrogenadas (no
representadas) se orientan hacia el interior de la molcula perpendiculares al eje covalente principal. Los
pares de bases son obligados adenina con timina y guanina con citosina.
19
Watson y Crick propusieron que la molcula de ADN estaba formada por dos hebras
que se disponan en forma antiparalela, es decir, el extremo 5 de una coincida con el 3
de la otra y adquiran la forma de una doble hlice de giro derecho. La zona montona
estaba dispuesta hacia el exterior mientras que la zona diversa se orientaba hacia el
interior de la molcula, de manera que las bases nitrogenada de una hebra se enfrentaban
a las bases de la otra. Lo ms trascendental del modelo era que la estructura solamente
poda acomodar dos pares de bases, los formados por la Adenina y la Timina (A-T) y por
la citosina y la Guanina (C-G). Las bases de cada par se dice que son complementarias.
Estos pares se mantenan unidos por la formacin de puentes de hidrgeno entre las
bases, dos puentes en el par A-T y tres en el C-G. No exista restriccin alguna para la
sucesin de la bases en una de las hebras, pero la de la otra hebra vena determinada
debido al carcter complementario del apareamiento.
Este modelo permiti ver rpidamente el fundamento de una de las funciones ms tras-
cendentales de los seres vivos, esto es, su reproduccin en seres de su misma especie. Para
ello, las molculas portadoras de la informacin gentica deban duplicarse dando cada una
dos molculas idnticas a las progenitoras. Watson y Crick propusieron que durante ese
proceso las dos hebras del ADN se separaban y cada una de ella serva de molde para la
formacin de la hebra complementaria. Esta idea bsica ha resultado ser cierta, aunque el
mecanismo es mucho ms complejo que lo imaginado en los primeros momentos.
Durante la fase S del ciclo celular se produce la replicacin del ADN, proceso que
consiste en obtener, a partir del ADN celular, dos molculas idnticas de ste. Para este
proceso se requiere el concurso de un gran nmero de protenas enzimticas y no
enzimticas.
20
El proceso global de la replicacin comienza prcticamente durante la telofase de la
mitosis cuando protenas del llamado complejo de reconocimiento del origen (ORC) se
unen a zonas especficas del ADN marcando los sitios donde debe comenzar la replicacin.
En las clulas humanas estos sitios son numerosos y pueden llegar a ser ms de mil en un
solo cromosoma. Al ORC se unen otras protenas formando el complejo prereplicativo
que est totalmente formado en G1 (Figura 2.4).
Figura 2.4. Durante el final de la telofase y la primera mitad del perodo G1 se forma el complejo
prereplicativo formado por el complejo de reconocimiento del origen (ORC) la Cdc6p, la Cdt1p y el
complejo MCM2-7 con actividad de helicasa
Para la formacin de este complejo es necesario que los niveles de actividad de las
Cdk est bajo, como ocurre en estas etapas del ciclo. Cuando al final de G1 se elevan los
niveles de actividad del complejo Cdk2/ciclina E, varias de las protenas que forman el
complejo son fosforiladas lo que permite reclutar a esos sitios a otras protenas que dan
inicio a la replicacin. Como durante todo el resto del ciclo celular los niveles de actividad
de las Cdk son altos, no es posible la formacin de un nuevo complejo replicativo y esto
garantiza que el ADN se replique solamente una vez durante el ciclo celular.(Figura 2.5).
La accin de todas esas protenas permite la abertura de la doble hlice dando
acceso a las bases nitrogenadas. La protena replicativa A (RPA) estabiliza la hebra
simple impidiendo vuelvan a aparearse. Un complejo enzimtico formado por la ADN
polimerasa y una enzima iniciadora (pol /iniciadora) se unen a la zona de hebra
simple que se ha formado. La iniciadora forma un pequeo ARN de unos diez nucleticos
que despus es alargado por la pol unos veinte nucleticos aunque puede llegar hasta
doscientos. (Figura 2.6).
21
Figura 2.5. En la transicin de G1-S aumenta la actividad del complejo Cdk2/cilina E que fosforila varias
protenas del complejo prereplicativo. Si estas protenas estn unidas al ADN permanecen ah, pero si
estn libres no pueden unirse al ADN y esto impide que puedan realizarse dos replicaciones en el mismo
ciclo celular. Por otra parte estas fosforilaciones permiten la asociacin de las protenas Cdc45p y
Mcm10p que de alguna forma propician la apertura del ADN. Esta apertura al parecer es ensanchada por
el complejo MCM2-7. Las hebras son estabilizadas por la RP-A y esto permite la incorporacin de la
ADN polimerasa alfa.
22
Figura 2.6. La ADN polimerasa alfa tiene actividad de iniciadora y sintetiza un fragmento de ARN
complementario al ADN y despus lo alarga con desoxinucletidos hasta formar un polmero de unas 20
unidades que sirven de iniciador o cebador para la sntesis del ADN. En el extremo del iniciador la RF-C
(no representada) monta el PCNA que permite la incorporacin del la ADN polimerasa delta.
23
Al extremo 3 de este polinucletido iniciador se asocia el factor replicativo C (RF-C)
que carga al antgeno nuclear de clulas proliferantes (PCNA) alrededor del ADN. El
PCNA forma un anillo deslizante que rodea al ADN pero sin entrar en contacto directo
con l. Al PCNA se asocia la ADN polimerasa (o la ) que alarga el polmero hasta
cerca de cinco mil nucletidos sin separarse del ADN.
Como las polimerasas solamente alargan la cadena en el sentido 5-3 una de las
hebras se sintetiza de forma continua (hebra conductora) mientras que la otra se tiene
que sintetizar por fragmentos, siendo necesario el concurso del complejo pol /iniciadora
para la formacin de cada fragmento. Los segmentos iniciadores son retirados por la
endonucleasa FEN1, las brechas son rellenadas por la pol (o la ) y la hebra es sellada
por la accin de la ADN ligasa 1 (Figura 2.7).
Figura 2.7. Como las ADN polimerasas alargan las hebras en el sentido 5-3 una de las hebras se sintetiza
de forma continua pero la otra tiene que hacerlo por fragmentos pues el movimiento de la horquilla de
replicacin es contrario al movimiento de la polimerasa
24
El movimiento del sistema sintetizador crea superenrolamientos en el ADN que son
aliviados por la accin de la topoisomerasa I. Cuando dos horquillas de replicacin que
avanzan en sentido contrario (una hacia la otra) se encuentran el proceso termina. Como
en cada cromosoma se forman cientos de horquillas la replicacin del ADN de cada uno
que tienen entre 50 y 350 millones de pares de bases se produce solamente en unas
horas.
Para la replicacin de los extremos del ADN que forma parte de los telmeros existe
una enzima especial (telomerasa) que contiene como cofactor un ARN que le sirve de
molde para el alargamiento de los extremos.
Todo este proceso se realiza con una alta fidelidad de copia pues las ADN polimerasas
cometen un error por cada 108 a 1010 desoxinucletidos incorporados. Una vez terminada
la replicacin la clula entra en el perodo G2. Al inicio de esta etapa se realiza un proceso
de correccin de la sntesis del ADN. Durante su actividad las ADN polimerasas comen-
ten errores tales como la incorporacin de bases incorrectas, la insercin de bases adicio-
nales o la falta de incorporacin de una o ms bases. Se ponen en accin un grupo de
protenas codificadas por los genes MSH1, MSH2, MLH2, PMS1 y PMS2 cuya activi-
dad coordinada es capaz de rectificar los errores cometidos durante la replicacin. De no
reparar los malos apareamientos aparecen mutaciones consistentes en cambios de ba-
ses, pero la no reparacin de inserciones y deleciones dan lugar a la aparicin de
microsatlites que pueden dar lugar a una inestabilidad cromosmica. Un microsatlite es
la repeticin de unos pocos pares de base (generalmente de 1 a 3). Cuando se produce la
elongacin de la replicacin del ADN, en ocasiones se producen deslizamientos en el
movimiento de la ADN polimerasas que en unos casos lleva a que una base sea copia-
da dos veces (inserciones) y en otras al salto de una base que no es copiada (deleciones),
originndose as los microsatlites. La inestabilidad cromosmica originada por los
microsatlites en algunos casos trae como resultado la transformacin cancerosa de la
clula, como sucede con el cncer colorectar no polipsico hereditario.
Una vez rectificado el ADN comienza el proceso de empaquetamiento de la cromatina
que al hacerse cada vez ms compacta da lugar a los cromosomas que se hacen visible
al principio de la mitosis.
La mitosis
25
El estudio de la mitosis se acostumbra a dividir en cuatro fases: profase, metafase,
anafase y telofase.
La profase: Puede decirse que la profase se inicia con la visualizacin de los
cromosomas que este momento an son largos pues no ha terminado su empaquetamiento.
Este empaquetamiento lleva a la desaparicin del nuclolo. Por otra parte se produce la
desintegracin de la envoltura nuclear mientras que en el citoplasma comienza a formar-
se el huso mittico.
La metafase: La condensacin de la cromatina contina as como la formacin del
huso y los cromosomas van asocindose con las fibras del huso hasta que en la metafase
quedan orientados en el centro de la clula, unidas a las fibras del huso por el cinetocoro,
dando lugar a la llamada placa ecuatorial.
La anafase: Una vez que todos los cromosomas se han alineado comienza la anafase
con la separacin de las cromtidas y su migracin hacia los polos del huso mittico.
La telofase: Ya en la telofase se produce la desaparicin del huso, la reaparicin de la
envoltura nuclear, se produce la descondensacin de la cromatina y reaparece el nuclolo.
El proceso termina cuando un anillo fibroso de actina se forma por debajo de la membra-
na plasmtica en la posicin donde estuvo la placa ecuatorial. Este anillo va contrayndose
y produce la estrangulacin de la clula hasta formar dos clulas hijas. Este ltimo fen-
meno recibe el nombre de citocinesis.
De esta forma cada una de las clulas formadas contiene la misma informacin gentica
que a su vez es igual a la de la clula que le dio origen y con ello concluye el proceso de
transmisin de la informacin gentica.
De lo anterior se desprende que la funcin reproductora de los seres vivos se lleva a
cabo mediante dos procesos ms o menos consecutivos, la replicacin del ADN en el
cual la informacin gentica de la clula se duplica y la divisin celular que divide la
informacin duplicada entre las dos clulas hijas. Aunque en los organismos multicelulares
el proceso es ms complejo, los fundamentos moleculares son los mismos.
Los mecanismos de expresin y conservacin de la informacin gentica se estudia-
rn en el siguiente captulo.
26
LA EXPRESIN DE LA
INFORMACIN GENTICA
Rolando Hernndez Fernndez
3
La funcin nica de la molcula de ADN es la de conservar la informacin
gentica. Pero con eso no es suficiente para la formacin de un organismo que
necesita estructuras que realicen las funciones que les son inherentes. Para que
ese organismo funcional aparezca es necesario que la informacin se exprese. Las
molculas encargadas esencialmente de realizar esas funciones son las protenas,
por lo tanto el proceso de expresin de la informacin gentica consiste en la
formacin de toda la dotacin de protenas que posee un organismo y cuyas es-
tructuras estn codificadas en la informacin conservada en el ADN. Este proceso
consta bsicamente de dos etapas; en la primera, la transcripcin, la informacin
del ADN es copiada en una molcula de ARNm y en la segunda, la traduccin, la
molcula del ARNm dirige la sntesis de las protenas. Estos procesos estn separa-
dos fsicamente pues mientras la transcripcin se realiza en el ncleo la traduccin
se lleva a cabo en los ribosomas que estn en el citoplasma.
LA TRANSCRIPCIN
La sntesis del ARNm lo realiza la ARN polimerasa II, una enzima compleja formada
por 8 a 12 subunidades y que adems requiere el concurso de un grupo considerable de
otras protenas, llamadas factores de transcripcin para realizar el proceso. Los factores
de transcripcin pueden ser generales si son necesarios para la transcripcin de cualquier
gen, mientras que se denominan gnico especficos los que hacen falta para un nmero
reducido de genes. Las seales para el inicio de la transcripcin se encuentran en el
promotor, segmento de ADN hacia el extremo 5 del gen que est formado por pequeos
mdulos de seis a ocho nucletidos y entre los cuales existen determinadas distancias que
son importantes para el proceso. El elemento bsico del promotor de la ARN polimerasa
II es la secuencia TATA localizada a unos 30 pares de bases hacia el extremo 5 del gen.
Un grupo de factores generales de transcripcin se une a esta secuencia y permiten la
entrada de la ARN polimerasa que an requiere otros factores generales para poder
comenzar la transcripcin (Figura 3.1).
27
Figura 3.1. En la secuencia TATA del promotor se ensambla en complejo multiprotenico formado por los
factores de transcripcin D, A y B. A este complejo se une la ARN polimerasa II acompaada del factor de
transcripcin E. Posteriormente se incorpora el factor de transcripcin F. Otras protenas (no
representadas) se incorporan posteriormente.
28
Una vez que este complejo multiprotenico est formado comienza la transcripcin
que se detiene rpidamente a menos que la ARN polimerasa sea fosforilada en varios
sitos del dominio carboxilo terminal de la subunidad mayor. La transcripcin no ocurre a
una velocidad constante, existen pausas que la enzima puede superar y paros o detencio-
nes que requieren de protenas adicionales llamadas factores de elongacin para conti-
nuar. Las mutaciones en uno de esos factores de elongacin da lugar a la enfermedad de
von Hippel Lindau. Una seal an desconocida indica el sitio donde la transcripcin debe
terminar (Figura 3.2).
29
Una vez terminada la sntesis del ARNm se producen modificaciones en la molcula
en un proceso conocido como maduracin. Un nucletido de guanina metilada es aadido
al extremo 5 mediante un enlace pirofosfato. Esta estructura conocida como casquete
protege al ARNm de la accin de exonucleasas y adems es importante para la incorpo-
racin a los ribosomas. Tambin el extremo 3 es modificado por la adicin de nucletidos
de adenina hasta un nmero de 250. Esta estructura, conocida como cola de poli(A)
tambin protege al ARNm de la accin de exonucleasas y sirve para la unin de protenas
especficas en el citoplasma que al parecer juegan un papel importante en la traduccin.
Por ltimo son eliminados los intrones en un proceso complejo que requiere el concurso
de varios ARN pequeos nucleares y un nmero considerable de protenas. Los intrones
son eliminados uno a uno desde el extremo 5 hacia el 3. Una vez concluido el proceso de
maduracin el ARNm es transportado hacia el citoplasma a travs del complejo del poro
nuclear. Una vez en el citoplasma es conservado unido a protenas hasta el momento de
la traduccin.
LA TRADUCCIN
30
Los ribosomas se encuentran en un estado de equilibrio dinmico entre la forma aso-
ciada y la disociada. Un factor de iniciacin se une a la subunidad menor y otro a la
mayor provocando el desplazamiento del equilibrio hacia la forma disociada. El metionil-
ARNt que funciona como iniciador se une a la subunidad menor acompaado de otro
factor de iniciacin. Entonces se produce la unin entre el ARNm y la subunidad menor
gracias a otro factor de iniciacin que est asociado al casquete. La subunidad menor
recorre el ARNm hasta que el codon de iniciacin queda apareado con el anticodon del
metionil-ARNt. La iniciacin se completa con la incorporacin de la subunidad mayor
quedando constituido el ribosomal funcional. Se produce entonces la incorporacin de un
aminoacil-ARNt acompaado de un factor de elongacin, la formacin del enlace peptdico
entre la metionina y el aminocido entrante, el ribosoma se mueve un codon sobre el
ARNm gracias al concurso de otro factor de elongacin. Este proceso se repite tantas
veces como aminocidos tengan que ser incorporados a la protena. La aparicin en el
ARNm de un codon de terminacin produce la detencin del ribosoma pues no existe
ningn ARNt capaz de leer ese codon. Entonces se produce la incorporacin de una
protena conocida como factor de liberacin que interacta directamente con el codn de
terminacin y produce la liberacin de la cadena polipeptdica (Figura 3.3).
En muchas ocasiones las cadenas polipeptdicas as formadas no son todava funcionales
y requieren de modificaciones postraduccionales para alcanzar su total funcionabilidad.
Entre estas modificaciones se encuentran: eliminacin de aminocidos de cualquiera de
los dos extremos o de los dos, eliminacin de pptidos internos, modificacin de aminocidos,
formacin de puentes disulfuro, incorporacin de grupos prostticos, etc.
Muchas protenas contienen secuencias especficas de aminocidos que actan como
seales que sirven para dirigirlas hacia el lugar donde van a realizar sus funciones, diga-
mos, el ncleo, las mitocondrias, la membrana plasmtica, o para ser segregadas al exte-
rior. En todos los casos esas seales son reconocidas por otras protenas que actan
como sistema transportador que las lleva a su destino (Figura 3.4).
Las protenas realizan funciones mltiples en el organismo; sirven como soporte o
sostn a muchas estructuras, soportan fuerzas de tensin o estiramiento, participan en los
mecanismos de contraccin y relajacin que dan lugar al movimiento, catalizan las reac-
ciones qumicas del metabolismo, actan como receptores que reciben seales internas o
externas, funcionan como seales que contribuyen a la regulacin de muchos procesos,
participan en mecanismos de defensa contra agresores externos, etc. Es por eso que
cuando se forman las protenas y stas realizan sus funciones se est expresando la
informacin que originalmente estaba codificada en la secuencia de bases del ADN.
31
Figura 3.3. El comienzo de la traduccin se produce por la separacin de las dos subunidades del ribosoma
debido a la accin de factores de traduccin. Despus a la subunidad menor se une el aminoacil-ARNt
iniciador llevado por otro factor de iniciaicn. La subunidad menor se une al casquete del ARNm auxiliado
por otro factor de transcripcin y rastrea al mensajero hasta que el codon de iniciacin se aparea
correctamente con el anticodon del ARNt iniciador. Finalmente se incorpora la subunidad mayor y el
ribosoma est listo para la sntesis de protenas.
32
Figura 3.4. La etapa de la elongacin es la ms larga. Un aminoacil-ARNt se incorpora al ribosoma con el
concurso de un factor de elongacin. Seguidamente se forma el enlace peptdico entre los aminocidos
unidos a los ARNt. Se produce el movimiento del ribosoma un distancia equivlente a un codon. La
incorporacin del siguiente aminoacil-ARNt reinicia el ciclo que se prolonga tantas veces como
aminocidos tenga la protena.
33
LA CONSERVACIN DE LA INFORMACIN GENTICA
La integridad de ninguna otra molcula es tan preciada para la clula como la del
ADN. Dada esa importancia a lo largo de la evolucin se han ido creando numerosos
mecanismos para garantizar esa integridad. En primer lugar est la propia estructura del
ADN. El hecho de que las bases nitrogenadas se encuentren hacia el interior de la mol-
cula proporciona un primer nivel de proteccin. En todos los organismos el ADN est
asociado con protenas que lo rodean y constituyen un segundo nivel de proteccin. En
los organismos eucariontes el ADN est confinado al ncleo celular separado del resto
de la clula por la envoltura nuclear constituida por un doble membrana constituyen as un
tercer nivel de proteccin. Pero por si esto fuera poco, cuando todos estos niveles fallan
y se producen daos al ADN, todos los organismos cuentan con sistemas reparadores.
Las alteraciones ms frecuentes que pueden ocurrir en el ADN son las modificacio-
nes de las bases y las prdidas de bases. En cualquiera de los dos casos pueden producir-
se de forma espontnea o debido a la accin de agentes externos. Los agentes externos
pueden producir tambin la rotura de una de las hebras o de las dos. Estos ltimos daos
resultan muy difciles de reparar y el mecanismo no est todava totalmente conocido.
Aunque existen numerosos mecanismos para la reparacin de las alteraciones o pr-
didas de bases, parece ser que los eucariontes superiores emplean un mecanismo general
que es el denominado reparacin por escisin de nucletidos. Este mecanismo consta de
las siguientes etapas. El producto del gen XP-A reconoce la zona que ha sido daada y
produce el reclutamiento hacia ese sitio del factor de transcripcin TFIIF del cual forman
parte entre otros los productos de los genes XP-B, XP-C, XP-D y XP-G. El XP-G que
tiene actividad de endonucleasa corta la hebra daada unos cinco nucletidos hacia el
extremo 3 de la lesin, mientras que XP-F hace lo mismo unos veinte y cuatro nucletidos
hacia el extremo 5. Participan entonces los productos de los genes XP-B y XP-D que
tienen actividad de helicasa y facilitan la eliminacin del segmento entre los dos cortes
que es precisamente donde est la lesin. La brecha de veinte y nueve nucletidos que
as se ha creado es rellenada por accin de la ADN polimerasa d unida al PCNA y
posteriormente es sellada por una ADN ligasa.
El nombre de estos genes deriva del hecho de que fueron identificados en pacientes
con Xeroderma pigmentosum, una enfermedad hereditaria que afecta la piel y el sistema
nervioso y con una alta predisposicin al desarrollo de cncer del piel.
Un fenmeno interesante es que todas las lesiones del ADN no son reparadas con
igual rapidez. Existe un sistema de prioridades. As las zonas de transcripcin activa son
reparadas con ms rapidez que las inactivas y, adems, en las zonas activas la hebra
molde es reparada ms rpido que la codificante. El estudio de pacientes con el sndrome
34
de Cockaine y de la Tricotiodistrofia, llev a la identificacin de algunos genes que estn
implicados en estos mecanismos y que fueron designados como CS-A y CS-B los afec-
tados en el sndrome de Cockaine y TTD-A y TTD-B los mutados en la tricotiodistrofia.
Otro mecanismo que contribuye a conservar la informacin gentica original de un
organismo es el sistema de modificacin restriccin. Una vez que el ADN ha sido repli-
cado es metilado en bases especficas que forman parte de secuencias especficas. Este
patrn de metilacin es caracterstico de cada organismo y viene a constituir algo as
como la marca de identificacin del ADN propio. En esto consiste la modificacin. Cuan-
do un ADN de otro organismo penetra en una clula se buscan las secuencias especfi-
cas que deben estar metiladas y si no lo estn el ADN forneo es hidrolizado. En esto
consiste la restriccin, de ah que a las enzimas que hidrolizan el ADN de esta forma se
les llame enzimas de restriccin. As, la clula puede distinguir entre el ADN propio y el
ajeno.
Las enzimas de restriccin que hidrolizan el ADN en secuencias especficas han sido
un instrumento invaluable para el desarrollo de la moderna tecnologa del ADN
recombinante y su aplicacin prctica la Ingeniera Gentica.
LAS MUTACIONES
35
con la labilizacin del enlace N-glicosdico, que al romperse forma un sitio apurnico que
de no reparse en el prximo ciclo replicativo puede dar lugar a la incorporacin de cual-
quiera de las cuatro bases.
La luz ultravioleta, los rayos gamma y los rayos X son poderosos agentes mutagnicos
que pueden producir tanto alteraciones de las bases nitrogenadas como las ruptura de
una o las dos hebras del ADN. Un efecto similar a las radiaciones tienen las llamadas
especies reactivas del oxgeno.
Como acabamos de ver las consecuencias de las mutaciones sobre la estructura del
ADN dependen en gran medida del agente causal. Sin embargo, el efecto de esas muta-
ciones se miden ms bien por las alteraciones que pueden provocar en el producto gnico
primario, es decir, en las protenas.
Por su extensin las mutaciones se clasifican en cromosmicas y gnicas. Las prime-
ras afectan grandes sectores del ADN y se hacen visibles al microscopio ptico. Entre
ellas estn las deleciones, las inserciones, las translocaciones, etc. que sern estudiadas
con ms detenimiento en el captulo 7 de citogentica.
Las mutaciones gnicas afectan pequeos sectores del gen y pueden producirse por
cambios, adiciones o sustracciones de bases. El efecto de estas mutaciones sobre el
producto gnico est en dependencia del tipo y de su localizacin. As por ejemplo si las
mutaciones se producen en la zona de regulacin del gen (el promotor) se altera la can-
tidad de protenas que se producen, aumentando o disminuyendo aunque este ltimo caso
es el ms frecuente. Si se produce en la zona de codificacin del gen se altera la actividad
de la protena, siendo la disminucin lo ms frecuente.
Los cambios de bases no siempre producen cambios en los aminocidos de las prote-
nas debido al carcter redundante del cdigo gentico (mutaciones silentes) y en ocasio-
nes se producen mutaciones neutras pues se cambia un aminocido por otro del mismo
tipo. Cuando se cambia un aminocido por otro diferente en polaridad o tamao puede
afectarse la actividad de la protena, como es el caso de la sicklemia que surge como
consecuencia del cambio de glutmico (aminocido polar inico) por valina (aminocido
apolar) en la posicin 6 de la cadena b de la hemoglobina.
La adicin o sustraccin de bases provocan grandes cambios en la protena pues
como fue sealado anteriormente los codones del ARNm se encuentran uno a continua-
cin del otro y por lo tanto la adicin (o sustraccin) de una base modifica todo el marco
de lectura a partir de ese punto.
36
Un tipo particular de mutaciones por cambio de una base es el que ocurre en lo
codones de terminacin. Pueden darse dos situaciones. Si un codon de lectura se trans-
forma en un codon de terminacin la cadena polipeptdica termina abruptamente. Por el
contrario si un codon de terminacin se convierte en un codon de lectura la protena
tendr un exceso de aminocidos como ocurre con la hemoglobina de Constant Spring.
Cuando las mutaciones se producen en las zonas crticas de los intrones pueden dar
lugar a protenas totalmente diferentes e inservibles que la clula degrada rpidamente
dando lugar a una deficiencia cuantitativa.
Todos los sistemas informticos en algn momento deben ser reordenados para faci-
litar el funcionamiento del sistema. Esto sucede igualmente con la informacin gentica.
El fundamento molecular de ese reordenamiento es el proceso de recombinacin gentica
que consiste en el intercambio de grandes segmentos de ADN entre dos molculas. Los
mecanismos moleculares de este proceso en las clulas eucariontes no est totalmente
aclarado pero su existencia no se discute.
La observacin de la recombinacin gentica al nivel del microscopio ptico se ha
realizado durante los estudios de la meiosis. La meiosis es un proceso que ocurre durante
la maduracin de las clulas germinales en los organismos superiores. El proceso consta
de dos divisiones celulares sucesivas sin que medie entre ellas la replicacin del ADN.
Durante la profase de la primera divisin los cromosomas homlogos (el de origen mater-
no y el de origen paterno) se aparean (sinapsis) y se establecen entre ellos vnculos
visibles al microscopio que se denominan entrecruzamientos (crossing over). Durante
esa etapa se produce el intercambio de segmentos grandes de las molculas de ADN que
forman cada una de las cromtidas de los cromosomas homlogos. En la metafase los
cromosomas se colocan en la placa ecuatorial pero en la anafase se produce la migracin
hacia los polos de cromosomas enteros y no de las cromtidas como ocurra en la mitosis.
En la telofase las clulas son reconstruidas al igual que en la mitosis. La segunda divisin
ocurre de inmediato sin producirse la replicacin del ADN y transcurre de forma similar
a la mitosis. Los cromosomas (que ahora son la mitad del nmero original) se disponen en
la placa ecuatorial y en la anafase las cromtidas se separan y una por cada cromosoma
se dirige a los polos celulares que en la telofase servirn para la organizacin de las
clulas hijas. De esta forma, la informacin gentica que estaba cuadruplicada al inicio
de la primera divisin ha sido dividida en cuatro clulas, cada una de las cuales contiene
37
solamente una copia de la informacin gentica de la especie. Cuando en la fecundacin
se unen el gameto masculino y el femenino se restituye el carcter duplicado de la infor-
macin que caracteriza a todas las clulas somticas superiores. (Ver Capitulo 4).
Estos son los procesos bsicos de tratamiento de la informacin gentica en los orga-
nismos. Es el nico tipo de informacin que se transmite equitativamente entre los ante-
cesores y los sucesores. Sin embargo en los organismos pluricelulares es necesario coor-
dinar las acciones de billones de clulas de manera que el organismo funcione como un
todo nico y armnico. En esos organismos se crean flujos de informacin molecular que
permiten su coordinacin y que en ltima instancia tienen su origen en la informacin
gentica.
LA COMUNICACIN INTERCELULAR
Los organismos pluricelulares estn dotados de mecanismos que les permiten coordi-
nar las acciones de todas sus clulas de forma tal que el organismo funcione como un
todo nico y armnico. El fundamento de todo ese mecanismo es el fenmeno de la
comunicacin intercelular, es decir, el flujo de informacin que existe entre las diferentes
clulas y tejidos. En ltima instancia toda esa informacin est contenida como posibili-
dad en el material gentico pero se torna realidad al expresarse esa informacin y dirigir
la sntesis de molculas especficas que funcionan en esos mecanismos. Una vez expre-
sada la informacin gentica se establecen entre las clulas flujos de informacin molecular
cuya funcin fundamental es la de coordinar las funciones de todas las clulas para
conseguir el funcionamiento armnico del organismo.
Los flujos de informacin molecular presentan las siguientes caractersticas generales:
Estn determinados genticamente, por lo tanto las principales molculas implicadas
en ellos son las protenas, aunque pueden existir componentes no protenicos.
La mayor parte de los componentes son enzimas, aunque pueden existir protenas no
enzimticas.
Las principales enzimas son las kinasas y las fosfatasas pues el principal mecanismo
de regulacin del flujo es la fosforilacin y desfosforilacin de protenas.
La fuerza que impulsa el flujo de informacin es por lo general la diferencia de poten-
cial qumico por lo tanto se trata de un fenmeno de transduccin.
Los flujos de informacin suelen ser redundantes, es decir, que varios flujos pueden
tener los mismos efectos.
Los flujos de informacin poseen mecanismos internos para desconectarse rpida-
mente y evitar la permanencia de los efectos por tiempos prolongados.
38
Bsicamente la comunicacin intercelular consista de tres componentes esenciales:
una clula que emite una seal, el medio de propagacin de la seal y otra clula que
capta la seal y elabora una respuesta. Para que el ciclo de comunicacin quede total-
mente establecido la respuesta debe modificar la seal y volver todo al estado anterior.
En este campo la seal es el portador material de informacin. En la informacin molecular
las seales son molculas, independientemente de su naturaleza qumica. As, son seales
las hormonas, los neurotransmisores, las citoquinas, las prostaglandinas, etc. Como con-
secuencia de cambios en el entorno o debido a su propia actividad, las clulas emiten
estas seales hacia el espacio extracelular. Algunas de ellas actan localmente mientras
que otras alcanzan el torrente sanguneo y pueden actuar a larga distancia. Pudiera
intentarse una clasificacin de los sistemas de seales teniendo en cuenta su radio de
accin en tres grupos principales:
Sistemas de seales generales, son aquellas que actan prcticamente en todo el
organismo y estaran representadas por las seales del sistema nervioso, el sistema
endocrino y el sistema inmune.
Sistemas de seales particulares, son las que tienen un radio de accin ms limitado y
por lo general coordinan la actividad de rganos y sistemas particulares, como las seales
del sistema cardiovascular, el digestivo, etc.
Sistemas de seales locales, son las que controlan la actividad de clulas que por lo
general estn cercanas y que para alcanzarlas no necesitan llegar a la sangre, como son
las prostaglandinas, los leucotrienos y los tromboxanos.
La emisin de cada una de estas seales tiene un carcter especfico pues cada clula
tiene que emitir la seal que se corresponda con el estmulo recibido de manera que esas
molculas sean verdaderas portadoras de informacin.
La captacin de esas seales tambin tiene un carcter especfico. Todas las clulas
posen protenas que actan como receptores de seales. Pero cada tipo celular solamen-
te posee una dotacin de receptores lo cual le permite responder a unas seales pero a
otras no. Los receptores pueden estar localizados en la membrana plasmtica o en el
interior de la clula. En este ltimo caso pueden localizarse en el citosol, en los organitos
citoplasmticos o en el ncleo. La localizacin del receptor se corresponde con las pro-
piedades de la seal. Cuando por su naturaleza qumica la seal no puede penetrar a la
clula el receptor se encuentra en la membrana mientras que las que pueden entrar
libremente encuentran su receptor en el interior.
Los receptores de la membrana constan al menos de tres dominios. Un dominio
extracelular que es el que posee el sitio de reconocimiento para la seal, un domino
transmembranal que conecta la parte externa con la interna y un dominio intracelular
cuya funcin es comunicar al interior de la clula la presencia de la seal. En cada tipo de
39
receptor estos dominios tienen estructuras diferentes y funciones diferentes en el domi-
nio intracelular.
De acuerdo con el mecanismo por el cual se produce la transduccin de la seal hacia
el interior de la clula los receptores pueden clasificarse en:
Receptores que son canales inicos: En la misma estructura se encuentra la zona
receptora y el canal inico y la unin de la seal modifica el estado del canal (abierto o
cerrado) modificando el flujo de iones a travs de la membrana lo cual tiene una gran
importancia para el funcionamiento celular especialmente en lo mecanismos de excita-
cin y secrecin.
Receptores que producen la endocitosis de la seal: En este caso la seal pasa
hacia el interior de la clula a realizar sus funciones pero para ello requiere del concurso
de un receptor especfico en la membrana celular.
Receptores acoplados a protenas G: Las protenas G reciben ese nombre porque
se unen a nucletidos de guanina. Cuando estn unidas al GDP no transmiten informacin,
lo que s hacen cuando estn unidas al GTP. En estado no excitado estas protenas estn
unidas al GDP. Cuando la seal se une al receptor, ste acta sobre la protena G y
provoca el cambio de GDP por GTP con lo cual produce su activacin. La protena G
activada acta sobre protenas celulares y modifica su actividad transmitiendo as la in-
formacin recibida por el receptor.
Receptores con actividad enzimtica en el dominio intracelular: Como su nombre
lo indica estos receptores tienen alguna actividad enzimtica especfica en su dominio
intracelular. Cuando la seal se une al receptor se produce una activacin de la parte
enzimtica que cataliza determinada reaccin. Se han descrito receptores con actividad
de tirosil protein kinasa (trannsfieren un grupo fosforilo del ATP hacia residuos de tirosina
que forman parte de protenas), con actividad de seril (o treonil) protein kinasas (stas
transfieren el fosforilo hacia residuos de serina o treonina), con actividad de guanilato
ciclasa (convierten en GTP en GMP cclico), con actividad de fosfotirosil protein fosfatasas
(hidrolizan la fosfotirosina de algunas protenas). En todos los casos se producen modifi-
caciones de la actividad de protenas intracelulares en consonancia con la informacin
recibida por el receptor.
Receptores asociados a enzimas: A diferencia de los anteriores estos receptores no
poseen una actividad enzimtica intrnseca sino que la unin de la seal produce el reclu-
tamiento de determinadas enzimas hacia el receptor. Esta unin provoca la activacin de
la enzima que a su vez modifica la actividad de otras protenas intracelulares.
Receptores intracelulares: Por su parte los receptores intracelulares pueden locali-
zarse en distintos compartimentos. Los que se encuentran en el retculo endoplsmico
son por lo general canales inicos especialmente para el calcio. Los que estn en el
40
citosol o en el ncleo suelen ser factores de transcripcin gnico especficos que una vez
unida la seal actan sobre el ADN modificando el estado de transcripcin de los genes.
La unin de la seal al receptor promueve un proceso de transduccin de la seal que
puede provocar entre otros los siguientes efectos:
41
DE LA MEIOSIS
AL BLASTOCISTO
Araceli Lantigua Cruz
4
La meiosis es un tipo especial de divisin celular propia de las clulas germinales.
Con esta divisin celular se generan los gametos que son clulas altamente espe-
cializadas a partir de cuya unin comienza el desarrollo de una nueva vida. Es
incalculable el nmero de procesos moleculares que ocurren en este fenmeno tan
especial de la vida. Durante el mismo pueden ocurrir muchos errores, algunos de
los cuales se expresan por fallas en la fecundacin, abortos espontneos, defectos
congnitos incompatibles con la vida y que pueden identificarse como fenmenos
de seleccin natural y que escapan de los mecanismos genticos de reparacin
de los mltiples errores que en este delicado proceso deben ocurrir.
Pero tambin la meiosis es un proceso biolgico a partir del cual se garantiza
una gran variabilidad de cualidades en los mltiples caracteres que son genera-
dos por el genoma de las especies de reproduccin sexual y que junto a las muta-
ciones, nos permiten identificar y diferenciar a los individuos inter especies en los
que por supuesto est incluido el Humano.
Este Captulo est dirigido a enfatizar en los mecanismos biolgicos comunes que
tienen lugar en la meiosis en el proceso de obtencin de gametos y en las particu-
laridades que presenta la gametognesis del hombre y de la mujer y cuyas caracte-
rsticas explican un grupo de defectos de origen gentico. Tambin se tratarn los
procesos biolgicos que median entre la fecundacin y la formacin del blastocisto,
necesarios para la comprensin de fenmenos involucrados en la etiologa de en-
fermedades o defectos congnitos que sern abordados en el presente texto.
LA MEIOSIS
En esta divisin celular, las clulas diploides de la lnea germinal dan lugar a clulas
denominadas gametos, que se caracterizan por tener un nmero haploide de cromosomas.
Cmo se originan esas clulas de la lnea germinal?
42
Durante la formacin del embrin en la segunda semana de desarrollo y procedentes
del ectodermo primario, las clulas germinales migran hacia la pared del saco vitelino
recibiendo el nombre en esta etapa de clulas germinales primordiales. Esta lnea celular
(lnea germinal) permanece protegida en este sitio hasta la cuarta o sexta semana en que
migran hacia la pared posterior del embrin, donde continan multiplicndose por mitosis
sucesivas y forman las crestas genitales que representan las gnadas primitivas. Estas
gnadas primitivas se desarrollan en ovarios o testculos en dependencia de la presencia
de los cromosomas X (XX) o de un cromosoma X y un Y (XY) ( ver Captulo 9).
Cada clula germinal humana que dar inicio a la meiosis presenta un nmero diploide
de 46 cromosomas equivalentes a 23 pares. En este proceso de divisin celular deben
ocurrir una serie de eventos que permitan concluir la misma con un contenido haploide
de 23 cromosomas en cada clula o gameto.
La meiosis consta entonces de dos divisiones consecutivas denominadas MEIOSIS
I y MEIOSIS II cada una de ellas transcurre como un proceso continuo que para su
mejor comprensin se ha dividido, como en la mitosis en PROFASE, METAFASE,
ANAFASE Y TELOFASE (Figuras 4.1 y 4.2).
La meiosis I . Comienza despus que la clula germinal ha llegado a la fase G2 de su
ciclo luego de la sntesis del ADN. Esto significa que cada molcula cromosmica de
ADN est doble y unida por el centrmero. En este momento del inicio de la meiosis la
informacin gentica en el ncleo celular es igual a 4n. La figura 4.1 permite comprender
mejor la explicacin.
La profase de la meiosis I es uno de los eventos ms importantes de la meiosis como
aparece en el Captulo 3 el acpite sobre reordenamiento de la informacin gentica.
Durante esta fase los cromosomas sufren un proceso de condensacin progresiva y
se describen cinco subfases denominadas leptoteno, cigoteno, paquiteno, diploteno y
diacinesis. Como en cada una de ellas ocurren fenmenos de importancia gentica es
necesaria la descripcin de los elementos ms significativos.
Leptoteno. Es el inicio de la profase I, lo ms significativo en ella es el comienzo de la
condensacin de los cromosomas que permiten la observacin de zonas ms gruesas del
ADN denominadas crommeros que poseen un patrn caracterstico para cada par
cromosmico.
Cigoteno: Los cromosomas homlogos comienzan a acomodarse por parejas a lo
largo de toda su extensin, a este fenmeno se le denomina sinapsis y es muy preciso de
modo tal que las secuencias de ADN contactan punto a punto a lo largo de la extensin
de las parejas de cromosomas homlogos. Al microscopio electrnico se observa que
gran parte de esta unin est favorecida por lo que se ha denominado complejo
sinaptonmico una estructura formada por protenas involucradas en el entrecruzamien-
43
to del ADN y que son esenciales para los eventos de recombinacin que sern estudiados
en le Captulo 13.
Paquiteno: En esta subfase la sinapsis es completa, los cromosomas estn mucho
ms condensados y es posible visualizar a sus cromtidas por lo que en este estado se les
denomina tetrada y ya ha ocurrido el entrecruzamiento y la recombinacin de zonas del
ADN como consecuencia del mismo.
Diploteno: El complejo sinaptonmico ha desaparecido sin embargo los cromosomas
homlogos se mantienen unidos por unas estructuras denominadas quiasmas que permi-
ten que la pareja de cromosomas homlogos se mantenga unida. Estos quiasmas parecen
ser la evidencia citolgica del intercambio entre las molculas de ADN de las cromtideas
de la pareja de cromosomas homlogos. La observacin de los quiasmas en la
espermatognesis sugiere que hay varios quiasmas por parejas de cromosomas homlogos
y este fenmeno tiene un importante papel en la separacin precisa de ambos homlogos
(disyuncin). La falla en la formacin de quiasmas predispone a la no disyuncin. Los
cromosomas X y Y hacen sinapsis a nivel del extremo de sus brazos cortos y en esa
extensin se produce entrecruzamiento y se visualizan quiasmas (ver Captulo 9).
Diacinesis en esta etapa la pareja de cromosomas homlogos unidas por los quiasmas
alcanzan su mxima condensacin y de esta forma se sitan en el plano ecuatorial en la
metafase I.
La metafase I comienza con la desaparicin de la envoltura nuclear y la formacin del
huso acromtico en tanto que las parejas de cromosomas homlogos se sitan alineados
en el plano ecuatorial y los microtbulos del huso alcanzan a las estructuras protenicas
(cinetocoro) situadas a nivel de los centrmeros de cada cromosoma homlogo para de
esta forma comenzar la separacin de las parejas de cromosomas homlogos.
La anafase I se extiende desde la separacin de cada cromosoma homlogo hasta el
comienzo de la telofase. Lo ms significativo de esta fase de la meiosis es que se reduce
el nmero de cromosomas a la mitad al separarse los cromosomas homlogos. Sin em-
bargo, an la informacin gentica se encuentra doble ya que cada cromosoma homlogo
mantiene sus cromtidas hermanas.
La telofase I como en la mitosis los cromosomas comienzan a descondensarse se reor-
ganiza la membrana nuclear y el citoplasma se separa para dar lugar a dos clulas hijas.
Una vez terminada la meiosis I an las clulas resultantes no son gametos maduros ya
que la informacin gentica como ya explicamos se encuentra doble. Es a partir de este
final de la meiosis I y sin nueva sntesis de ADN que comienza la meiosis II.
La meiosis II transcurre como una mitosis comn, su diferencia est en el nmero de
cromosomas ya que en la meiosis II hay en lugar de 46 cromosomas 23 (Figura 4.2).
Al finalizar la Meiosis II se obtienen cuatro gametos. Cada uno de ellos tiene 23
cromosomas con solo una cromtida. Una caracterstica importante de la meiosis II es la
44
distribucin azarosa de cada uno de los 23 cromosomas una vez ubicados en el plano
ecuatorial de la metafase II.
cr o m m ero
G2
LE PT O T EN O
SN TESIS D E ADN
s in aps is
C IG O TE N O
ttra d a
C ELULA G ERM IN AL
P AQ U ITE N O
q u ia sm a s PROFASE I
D IP LO T EN O
D IAC IN ES IS
Figura 4.1. Esquema de los eventos que tienen lugar en la Meiosis representados solo en dos pares de cro-
mosomas.
45
TELOFASE I
46
El proceso de gametognesis en la mujer recibe el nombre de ovognesis y en el
hombre de espermatognesis.
ESPERMATOGNESIS
47
Figura 4. 3. Esquema de tbulo seminfero y espermatognesis
48
LA OVOGNESIS
Una vez que la gnada primitiva se desarrolla como ovario, las clulas germinales se
multiplican por mitosis sucesivas y en la semana doce del desarrollo del embrionario feme-
nino, comienzan la profase de la meiosis I varios millones de ovogonias que se convierten en
ovocitos primarios y casi inmediatamente se mantienen latentes en este estadio de la meiosis
I rodeados de clulas foliculares constituyendo folculos primordiales (Figura 4.5).
La mayora de estos folculos (al inicio unos 7 millones), degeneran y al nacimiento de
la nia se mantienen entre 2 millones y 700 000. Al arribar a la pubertad solamente
quedan unos 400 000 y unos 5 a 12 de ellos se desarrollan por cada mes y de estos solo
uno madura el resto degeneran. Ya a este nivel de desarrollo el ovocito primario comple-
ta la primera divisin meitica quedando una clula mayor en tamao (el ovocito secun-
dario) y un cuerpo polar. El folculo ha crecido, el ovocito est rodeado por la zona
pelcida y las clulas foliculares; se convierte en un folculo vesicular.
Figura 4. 5. Desarrollo de la meiosis en la mujer, obsrvese que la meiosis I est presente en el cuarto mes
de desarrollo embrionario y termina todos los meses desde la pubertad hasta la menopausia.
La segunda divisin meitica comienza unas tres horas antes de la ovulacin que
ocurre al entrar la divisin en la metafase II. El folculo roto forma una estructura endocrina
que recibe el nombre de cuerpo lteo. Todo este proceso a partir de la pubertad ocurre
cclicamente como parte del ciclo menstrual, aspecto este que se sale de los objetivos de
este captulo.
La meiosis II en la ovognesis culmina cuando el ovocito secundario es alcanzado por
un espermatozoide. Es en ese momento que se completa la meiosis II en el ovocito
secundario y en el Primer cuerpo Polar. Al finalizar la ovognesis quedan cuatro clulas
49
rodeadas por la zona pelcida y la corona radiante: el vulo y los tres cuerpos polares que
eventualmente degeneran.
De no ocurrir la fecundacin la meiosis II de la ovognesis nunca llega a terminar
desapareciendo esta estructura celular en el proceso de la menstruacin.
El vulo
C O R O N A R A D IA N T E
Z O N A P E L U C ID A
GRANULOS
C O R T IC A L E S
50
LA FECUNDACIN
SE G M E N T A C IO N
B L A S T O C IST O
Q U IN T O D IA
51
ADN. Los cromosomas maternos y paternos cuando desaparece la envoltura nuclear
entran en contacto por primera vez despus de las primeras 24 horas comenzando la
primera divisin mittica del cigoto. Esta divisin produce dos clulas simtricas que
dividen el cigoto en dos clulas o primeras blastmeras sin que ocurra cambio alguno en
su tamao que se encuentra limitado por la zona pelcida y la corona radiante. La segun-
da divisin mittica se completa 48 despus de la fecundacin y da lugar a cuatro
blastmeras. En este estado inicial de preembriognesis las blastmeras son
indiferenciadas, la asuencia de una de ellas no deja huellas en el futuro del embrin. Por
este motivo es en esta etapa en la cual pueden hacerse diagnsticos prenatales de
preimplantacin sin riesgos para el feto. Tres das despus de la formacin del cigoto,
existen entre seis a 12 blastmeras y a los cuatro das ya hay entre 16 a 32 clulas cada
vez ms pequeas en su contenido citoplasmtico.
En este momento de pre embriognesis esta estructura recibe el nombre de mrula es
a partir de este estadio cuando comienza a ocurrir el proceso de inactivacin de uno de
los dos cromosomas X cuando se trata de un cigoto femenino (ver ms detalles de la
inactivacin del X en captulos 6 y 9). A partir de este momento del desarrollo las blastmeras
entran en contacto ms estrecho y se desarrollan mecanismos de adhesin diferencial
entre ellas comenzando a presentarse diferencias entre las blastmeras que se encuen-
tran en contacto con la zona ms externa y las que se encuentran en el interior y que
reciben el nombre de masa externa y masa interna respectivamente. En la etapa de 30
clulas la mrula comienza a absorber fluidos que forman una cavidad delimitando per-
fectamente la masa de clulas externas de la interna y formndose el blastocisto que
consiste de una cavidad blastocistica, una masa compacta interna denominada
embrioblstico y una capa de clulas de la masa externa que rodea a toda la estructura y
que recibe el nombre de trofoblasto. Cuando el blastocisto se libera de la cubierta de la
zona pelcida 124 horas (al quinto dia) despus de la fecundacin comienza el proceso
de la implantacin que concluye en la segunda semana despus de la fecundacin.
RESUMEN
52
obtienen cuatro clulas hijas que contienen un nmero haploide de cromosomas. La
profase I de la primera divisin meitica garantiza con el contacto estrecho entre las
parejas de cromosomas homlogos y el intercambio de ADN entre las cromtidas her-
manas que se originen cromosomas con nuevas combinaciones de genes que al final de
la meiosis quedan distribuidos en los cuatro gametos resultantes de forma aleatoria. El
intercambio entre las cromtidas y las combinaciones aleatorias de los cromosomas en
los gametos junto con las nuevas mutaciones que constantemente ocurren, explican la
gran variabilidad entre las especies.
Si bien hay mecanismos meiticos comunes en la formacin de los gametos tambin
hay diferencias sustanciales en el cronograma de la formacin del vulo y del
espermatozoide. En ambos las clulas germinales desde la etapa embrionaria tienen el
mismo destino, sin embargo mientras en el sexo masculino la activacin de la meiosis
comienza en la pubertad con el estmulo de la testosterona y una vez comenzado el
proceso no se detiene en la vida adulta, en el sexo femenino la meiosis comienza en la
semana 12 del desarrollo embrionario mantenindose en profase I hasta que la nia
alcanza la pubertad en que la meiosis I finaliza y comienza la meiosis II pero con la
particularidad de que se limita a la liberacin del ovario a solo un ovocito secundario por
mes. De las cuatro clulas solo una se desarrolla como vulo y tres quedan como cuerpos
polares que despus desaparecen. La produccin de vulos es limitada ya que de un
nmero inicial de 7 millones de folculos conteniendo ovocitos primarios en divisin, al
nacimiento de la nia quedan menos de dos millones y se reducen a 400 000 en la etapa
de la pubertad.
La unin del vulo y del espermatozoide es un fenmeno especial en el que intervie-
nen un gran nmero de procesos moleculares y movimientos celulares complejos que
requieren del buen funcionamiento fisiolgico y anatmico de las estructuras comprome-
tidas en el mismo.
Desde la fecundacin hasta la formacin del blastocisto ocurren mltiples mitosis en un
proceso de segmentacin que se caracteriza porque las clulas resultantes se adaptan con
un citoplasma cada vez menor al mismo contenido limitado por la zona pelcida. Las prime-
ras blastmeras pueden ser utilizadas con fines de diagnstico prenatal de preimplantacin
ya que son altamente indiferenciadas en esta etapa de la vida. A partir del estadio de 30
clulas el contacto entre ellas y genes involucrados en el desarrollo originan la formacin
del blastocisto inicindose as el periodo de implantacin que culmina dos semanas despus
de la fecundacin dando paso a la etapa de desarrollo del embrin. Algunos de los defectos
genticos o ambientales que ocurren desde la fecundacin hasta esta etapa de
preembriognesis sern tambin abordados en varios de los captulos de este texto.
53
LAS LEYES DE MENDEL
54
la homogeneidad de la primera generacin de los hbridos y la heterogeneidad de
la segunda generacin. Finalmente en 1865, en la Sociedad de Naturalistas de
Brunn, el monje Gregor Mendel expuso su trabajo "Experimentos de hibridacin
en plantas". Cuenta la historia que nadie hizo preguntas, nadie comprendi la
magnitud de sus experimentos y conclusiones.
Las obras de Johann Gregor Mendel estuvieron sin tocar en las estanteras de las
bibliotecas hasta marzo de 1900, ao en que Hugo De Vries botnico holands de
52 aos y con gran prestigio cientfico en su poca, publica "La Ley de la segregacin
de los hbridos" en la que hace una tmida referencia al trabajo de Mendel, ese
mismo mes del 1990, Carl Correns profesor alemn de botnica de 36 aos de edad,
presenta el trabajo "Las reglas de Gregor Mendel de la conducta de los descendientes
de hbridos" y Erick von Tscherrmak estudiante austraco de 29 aos presenta el
trabajo titulado "Sobre el cruzamiento artificial del guisante" en el que refiere que
ley el trabajo de Mendel despus de terminar sus experimentos. Con estos trabajos
se redescubren simultneamente las Leyes de la Herencia en tres regiones diferentes
del mundo y a las cuales haba arribado Mendel 35 aos atrs.
La historia de los descubrimientos cientficos est llena de ancdotas interesantes
de los hombres que hicieron aportes significativos, pero todas tienen en comn: las
necesidades del hombre en forma de demandas prcticas de la poca y los
conocimientos cientficos que les antecedieron.
La velocidad con la que la ciencia avanza es abrumadora, la red integrada de
descubrimientos es impresionante, hay que seleccionar temas que permitan comprender
solidamente los conocimientos genticos actuales y uno de ellos es sin dudas el
tema que abordaremos en este captulo y cuyo contenido no tiene menor valor ahora
que el que tuvo el publicado en 1902 por la revista Science con el ttulo "Las leyes
mendelianas de la herencia y la maduracin de las clulas sexuales".
55
de las vainas: 4. lisas y con constricctiones, 5. color de las vainas amarillas o
verdes.
del tallo: 6. si las vainas eran axiales (a lo largo del tallo) o si eran terminales en
la parte superior del tallo y finalmente la 7. altura de la planta muy alta (6 a 7
pies) o muy pequea (3 a 4 pies).
Cruzamiento monohbrido
Analicemos un cruzamiento mendeliano entre dos lneas puras para el carcter color
amarillo y verde del cotiledn.
Mendel poliniz las plantas de guisantes que daban siempre semillas de cotiledn
amarillo con el polen de guisantes que siempre daban semillas de cotiledn verde, pero
tambin lo hizo a la inversa.
La primera generacin o F1 de este cruzamiento dio semillas solamente de cotiledones
amarillos.
56
Cuentan que Mendel cuando lleg la siguiente primavera sembr las semillas hbridas
pero dej que estas se autopolinizaran, las cuid de las plagas y obtuvo resultados que le
permitieron interpretar que el color amarillo se comportaba como dominante pues apare-
ca siempre en la F1 y reapareca en mayor proporcin en la F2, en tanto que al color
verde le denomin recesivo ya que desapareca en la F1 y reapareca en la F2 en menor
proporcin.
Los cuidados que Mendel tuvo al proteger a sus guisantes de plagas estaban funda-
mentados en el hecho de que por primera vez en la historia de la ciencias de la poca se
integraban la biologa y la matemtica, si no hubiera protegido a sus guisantes no hubiera
podido llegar a la proposicin de que la probabilidad de obtener guisantes verdes a partir
de la autofecundacin de un guisante monohbrido sera de 3 a 1 y mucho menos a
proponer la regularidad que hoy conocemos como su primera ley o ley de la segregacin
de los factores que dan lugar a los caracteres estudiados.
En los primeros aos del siglo XX un genetista dans Wilhelm Johannsen denomin
a los factores mendelianos como genes. Seguir la historia de la gentica desde los expe-
rimentos mendelianos nos llevara mucho tiempo y aunque resulta sumamente interesan-
te y de gran motivacin, el propsito de este captulo se puede cumplir con xito en
muchsimo menor tiempo que el que necesit el Profesor Nageli a quien Mendel solicit
su ayuda a mediados del siglo XIX, comprender el valor cientfico de los experimentos
que dieron origen a las conocidas Leyes de Mendel y al valor actual de las mismas en las
investigaciones del Genoma Humano.
Los genetistas dan nombre a los genes y generalmente y muy en especial para
experimentos mendelianos sobre caracteres discontinuos o alternativos como amarillo
o verde, se le nombra a los genes que determinan el carcter dominante con su
primera letra en mayscula por ejemplo el carcter color amarillo dominante ser
representado por la letra A (mayscula) y su cualidad alternativa color verde con
la letra minscula a.
Anlisis del cruzamiento mendeliano para el carcter color del cotiledn de las
semillas
Analicemos las caractersticas genticas de las lneas puras color AMARILLO del
cotiledn y su alternativa VERDE. Si el color amarillo dominante est representado por A
y el verde por a, ambas plantas tienen ambos genes iguales o sea AA los guisantes de
cotiledn amarillo y aa los que tienen el cotiledn verde, mientras que los monohbridos
resultantes sern genticamente Aa. El trmino gentico que se emplea para distinguir
las caractersticas de los genes que expresan un carcter determinado recibe el nombre
de genotipo. Se denomina genotipo homocigtico al que est representado por dos genes
57
que expresan el mismo carcter iguales, tambin sern denominados genotipos
homocigticos dominantes en el caso de que estos genes expresen el carcter dominante
(AA) o recesivo si expresan el carcter recesivo (aa).
El carcter que se expresa debido a determinado genotipo y que podemos estudiar en
algn nivel de observacin, cualquiera que este sea, es denominado fenotipo. Las cua-
lidades alternativas de un carcter son los eventos que realmente son reconocidos en
este nivel de estudio, por lo que podemos decir que es el fenotipo el que realmente puede
ser denominado como dominante o recesivo.
Mientras ms se profundiza en el estudio del fenotipo ms nos acercamos al genotipo
como veremos ms adelante en otros captulos de este texto.
Como ya se conoce el gen es un segmento de ADN que tiene un lugar en el cromosoma,
a este sitio que ocupa un gen en el cromosoma se le denomina locus una palabra del latn cuyo
plural es loci. Significa que en este experimento mendeliano nos referimos al locus donde se
encuentra un segmento de ADN que codifica para una protena cuya expresin se observa en
el fenotipo por la presencia del color amarillo o verde del cotiledn.
Los genes que producen la alternativa color son denominados alelos. Luego los alelos
son formas alternativas del mismo gen que ocupa un locus en igual posicin en dos
cromosomas homlogos y que se originan por mutaciones que ocurren en algn sitio del
segmento de la cadena ADN que limita a este locus.
Los avances alcanzados en la gentica obedecen a la observacin de fenotipos curio-
sos o raros y de investigar por qu no son iguales.
Cada locus puede tener muchos ms de dos alelos como veremos ms adelante en
este texto.
Ahora podemos analizar el experimento de Mendel segn la figura 5.1.
En esta F2 Mendel obtuvo 6022 semillas de cotiledones Amarillos y 2001 semillas de
cotiledones Verdes en una proporcin 3.01 a 1 (75 % Amarillos y 25 % verdes), esto se
repite en los trabajos de Mendel para cada uno de los siete caracteres que estudi y que
le permiti concluir lo que ya hemos visto sobre caracteres dominantes y recesivos, pero
tambin que la autofecundacin de la F1 produce estos caracteres en su fenotipo en una
proporcin 3:1 (3/4, ) y que las proporciones en que aparecen sus factores o genes en
el genotipo es de 1:2:1 (1/4, 2/4,1/4). El color verde solo se expresa si el genotipo es
homocigtico para el carcter recesivo verde.
GAMETOS A a
A AA (Amarillos) Aa (Amarillos)
a aA (Amarillos) aa (Verdes)
58
G U ISA N T ES D E C O T ILE D O N E S X G U ISA N T ES D E C O T ILE D O N E S
A M A R ILLO S VERD ES
AA aa
GA M ETOS
A a
Aa
F1 100% D E LO S G U IS A N T E S C O N
C O T ILE D O N E S A M A R ILLO S
A U T O FE C U N D A C IO N D E LA F1
Aa Aa
A a GA M ETOS A a
Figura 5.1. Cruzamiento de las lneas puras para un solo carcter o cruce monohbrido
Esto significa que los llamados factores mendelianos ahora genes, segregan en los
gametos o sea se separan durante la meiosis en los cromosomas donde se encuentra su
locus. Esta es la primera Ley de Mendel conocida como Ley de la Segregacin.
59
Cruzamiento mendelaliano para dos carcteres
Otro de los experimentos que Mendel realiz fue la observacin de lo que ocurra
cuando se cruzaban lneas puras para dos caracteres (Figura 5.2)
A U T O FE C U N D A C IO N D E LA F1
A aL l A aL l
AL Al aL al GAM ETOS AL Al aL al
Figura 5.2. Cruzamiento de las lneas puras para dos caracteres: adems del color del cotiledn la
superficie lisa o rugosa de las semilllas en un cruce dihbrido.
60
Ahora al combinar los gametos tendremos 16 posibilidades :
GAMETOS AL aL Al al
61
Esto significa que la probabilidad de que una planta sea lisa o rugosa no interfiere o es
independiente de la probabilidad de que sea verde o amarilla.
En esto consiste la segunda Ley de Mendel o sea la trasmisin independiente de los
alelos de los loci que producen estos dos tipos de caracteres con sus dos cualidades de
color y superficie de la semilla. Ley de la Segregacin Independiente y al Azar de los
alelos correspondientes a dos loci.
Retrocruces
Un retrocruce denominado tambin cruce prueba es el cruce que se realiza con uno
de los descendientes obtenida de una F2 con el parental lnea pura para el o los caracte-
res recesivos.
En el caso de los fenotipos de guisantes con cotiledones amarillos, obtenidos de una
F2, estos pueden ser genotpicamente AA Aa en proporciones 1:2, pero....Cmo
saberlo?
62
Si el 50 % es amarilla y lisa y el otro 50 % verde y lisa, el genotipo de la F2 es
AaLL.
Si el 25 % es amarilla y lisa, el 25 % amarilla y rugosa, el 25 % verde y lisa y el
25 % verde y rugosa, el genotipo de la F2 es AaLl.
Cruzamiento trihbrido
63
Este cruzamiento fue una prueba ms de la transmisin independiente y al azar de los
genes que expresan caracteres diferentes y cualidades alternativas de stos.
RESUMEN
Los experimentos mendelianos permitieron descubrir las leyes conocidas como Pri-
mera Ley de la Segregacin y Segunda Ley de la Transmisin Independiente y al Azar de
los caracteres. Ambas leyes se corresponden con la meiosis ya que los genes segregan
con los cromosomas en los gametos y a su vez los cromosomas de origen materno y
paterno se distribuyen independientes y al azar en los gametos.
La presencia de formas alternativas de genes involucrados en la determinacin de un
carcter o alelos fue un evento decisivo para los experimentos mendelianos.
De estos experimentos derivan los conceptos de lneas puras refirindose a los genotipos
homocigticos de generacin en generacin, fenotipos dominante cuando se expresa en
el 100 % de la F1 o primera generacin filial y en el 75 % de la segunda generacin filial
o F2. Los genotipos en estos casos pueden ser homocigticos para el carcter dominante
y heterocigticos, mientras que el fenotipo recesivo desaparece en la F1 para reaparecer
en el 25 % en la F2 y para que se exprese es absolutamente necesario que el genotipo sea
homocigtico para los genes que expresan un carcter recesivo.
64
LOS CROMOSOMAS
HUMANOS Y SU ESTUDIO
Araceli Lantigua Cruz
6
Existen varios enfoques sobre el estudio de los cromosomas humanos, que de-
penden del nivel de profundidad de lo que se quiere conocer, la urgencia del estu-
dio y de los recursos tcnicos con los que se cuenta para hacer el estudio.
Las fases del ciclo celular de una clula somtica, pueden ser clasificados des-
de el punto de vista citolgico en dos grandes momentos de estadio celular: la
interfase y la mitosis. Tanto en una como en la otra es posible obtener informacin
sobre los cromosomas humanos. En la interfase, que comprende los estadios G1, S
y G2, la informacin se obtiene por las caractersticas de la cromatina nuclear y
est relacionada especficamente con los cromosomas humanos X y Y.
Durante la mitosis es posible conocer muchos ms detalles de cada uno de los 46
cromosomas humanos. En el Captulo 1 de este texto se abordaron aspectos relacionados
con la historia de la citogentica, en el presente captulo se exponen los fundamentos de las
tcnicas citogenticas con el propsito de comprender sus resultados e interpretaciones.
CROMATINA NUCLEAR
65
la facultativa, que puede existir en forma genticamente activa (descondensada) o
en forma inactiva y condensada situacin sta propia del cromosoma X.
LOS CROMOSOMAS
66
de los acrocntricos autosmicos, no tiene satlites y en sus brazos largos presenta una
zona extensa de heterocromatina constitutiva.
Hay un cuarto tipo de cromosoma denominado telocntrico, con el centrmero tan
desplazado hacia un extremo que los brazos cortos no se observan. Este tipo de cromosoma
no es caracterstico del humano y una estructura similar pudiera observarse en cromosmas
humanos productos de rearreglos estructurales que sern estudiados ms adelante.
A B C
Figura 6.1 Tipos de cromosomas humanos segn posicin del centrmero. A: metacntrico,
B: submetacntrico y C: acrocntrico.
67
Estudio del cromosoma X
Cuerpo Barr
Figura 6.2. A. Foto de un ncleo en interfase con el cuerpo de Barr sealado por la flecha. B. Esquema de
la imagen de un cuerpo Barr en el ncleo de una clula epitelial.
68
EL CARIOTIPO HUMANO
69
. Grupo E. Est formado por los pares 16, metacntrico y 17 y 18, ambos submetacntricos.
. Grupo F. Incluye a los pares 19 y 20 ambos son los cromosomas metacntricos ms
pequeos del cariotipo humano.
. Grupo G. Est formado por los pares 21 y 22, son los cromosomas acrocntricos
ms pequeos, ambos tienen satlites y de ellos el 21 es el ms pequeo.
. El cromosoma X es submetacntrico y por su tamao corresponde al grupo C
mientras que el cromosoma Y es acrocntrico, por su tamao se incluye en el G.
70
Los componentes celulares de la sangre que se encuentran en mayor proporcin son
los hemates, que por su alto grado de especializacin han perdido su ncleo y se encuen-
tran en una fase G0 de su ciclo celular por lo que, son los leucocitos y en especial los
linfocitos T, las clulas a partir de las cuales podr ser posible, bajo la estimulacin de la
fitohemaglutinina (FHA), que es un agente mitognico (estimula la mitosis), potencializar
la iniciacin del ciclo celular. En 24 horas se obtienen nuevas clulas que ya no requieren
de la accin de la FHA.
Se describen varios protocolos de procedimientos tcnicos para la obtencin de
cromosomas, pero todos se basan en los siguientes pasos:
. Obtencin de una muestra de sangre perifrica, mezclada con heparina para preve-
nir la coagulacin, y no perder la posibilidad de mantener libres a los linfocitos:
. Medio de cultivo enriquecido con suplemento exgeno.
. Uso de FHA, para estimular la mitosis de los linfocitos T.
. Incubacin a 370 durante 72 horas,
. Deteccin de la divisin celular en metafase con el uso de colchicina, producto que
inhibe la formacin del huso acromtico, incubando a 370 por varios minutos.
. Cosechar el cultivo, iniciando este paso, con una primera centrifugacin que permita
la sedimentacin de los elementos formes.
. Extraer el sobrenadante sustituyndolo por igual cantidad de una solucin hipotnica
con lo cual se logra aumentar el volumen celular y separar a los cromosomas lo
suficiente para su identificacin evitando la sobreposicin de los cromosomas.
. Fijacin con cido actico y metanol, para finalmente depositarlos en gotas sobre
una lmina portaobjeto que finalmente ser sometida a diversos mtodos de colo-
racin.
. Observacin bajo microscopio ptico y anlisis del nmero de metafases estimado
segn los objetivos del estudio.
. Fotografa de varias metafases segn sea necesario y finalmente la confeccin de
uno o varios cariotipos.
71
toda la longitud del cromosoma un patrn de seales en forma de bandas que tienen la
caracterstica de ser constantes para cada par cromosmico y para cada especie ya que
las bandas obtenidas parecen estar relacionadas con regiones del ADN ricas en AT y
GC. Los protocolos tcnicos empleados con mayor frecuencia en el anlisis de los
cromosomas humanos son denominados:
Bandas G, refirindose a un patrn constante de bandas claras y oscuras como con-
secuencia del tratamiento de las lminas con soluciones de tripsina y posterior coloracin
con Giemsa. Este tipo de bandas es el ms empleado por los laboratorios que realizan el
servicio citogentico de cariotipos corrientes.
Bandas Q, se basan en el uso de colorantes fluorescentes como la quinacrina, y la
accin de la luz ultravioleta sobre la metafase en observacin. Deja un patrn como el de
las bandas G siendo brillantes las bandas que son oscuras y no brillantes las bandas
claras. Tienen el inconveniente tcnico de necesitar microscopio de fluorescencia.
Bandas R, este patrn de bandas se obtiene al someter las lminas a un proceso de
calor que produce un fenmeno de desnaturalizacin del complejo ADN-protenas de
los cromosomas. Al ser coloreadas las lminas con Giemsa se obtiene un patrn de
bandas que son el reverso del patrn obtenido en las bandas G y Q, de ah el nombre de
bandas R. Esta tcnica se emplea comnmente por laboratorios de algunos pases euro-
peos como Francia.
Existen otros procederes especiales, como las bandas C, para cuya obtencin se
emplea un mtodo de coloracin que destaca las zonas heterocromticas de cada
cromosoma permitiendo identificar con mayor precisin a los cromosomas de los
pares 1, 9 y 16 que presentan una regin variable de heterocromatina pericentromrica
hacia los brazos largos y al cromosoma Y, que presenta una importante extensin de
heterocromatina que ocupa casi los dos tercios del brazo largo hacia el telmero y a la
que ya hemos hecho mencin (Ver cuerpo Y). Estas regiones de heterocromatina son
tiles para reconocer el origen materno o paterno de estos cromosomas cuando se
encuentran presentes.
Bandas de alta resolucin o prometafsicos. Este tipo de bandas se utiliza cuando
se quiere identificar algn pequeo defecto estructural de un cromosoma. Consiste en
aplicar protocolos de bandeo G, Q o R a lminas obtenidas despus de tratar los cultivos
con sustancias que sincronizan la mitosis con el objetivo de obtener un gran nmero de
clulas en prometafase tarda o metafases muy tempranas. Los cromosomas se alargan
y el patrn de bandas que se obtiene es lo suficientemente grande como para identificar
pequeos defectos estructurales. Los cromosomas con este tipo de tcnica pueden tener
un nmero de bandas tan grande como de 550 a 850 o ms, mientras que con las tcnicas
de cromosomas en metafase se alcanzan menos de 400 bandas.
72
No podemos dejar de mencionar a la citogentica molecular, que se basa en el uso de
segmentos de ADN complementarios, obtenidos por tcnicas de ADN recombinante.
Con el uso de estas tcnicas, la distancia entre grandes mutaciones cromosmicas y
mutaciones de un solo gen se acortan y su uso ha permitido cartografiar grandes genes.
Una descripcin de este tipo de tcnica aparece con ms detalles en el Captulo 7.
Describir el cariotipo de forma resumida ha requerido de un acuerdo entre todos los
citogenetistas del mundo. Finalmente se han adoptado un conjunto de abreviaturas y
smbolos con los cuales informar lo que se observa en el anlisis del cariotipo pero de una
forma muy sinttica. En la tabla se muestran los principales. Los defectos genticos
expresados se estudian en el Captulo 8.
73
RESUMEN
74
CITOGENTICA MOLECULAR
Jorge Quintana Aguilar
7
El ao 1977 marca el inicio de la era de la citogentica molecular. Los avances
en este campo de la citogentica son impresionantes.
Con este tipo de estudio se puede lograr identificar defectos submicroscpicos
del ADN y disminuir la brecha que existe entre la deteccin de una simple inser-
cin o delecin de un nucletido, la insercin o delecin de varios de ellos y la
observacin de estos defectos a nivel de la citogentica convencional.
La importancia extrema de estos avances tcnicos motiv la realizacin de este
captulo en el que se exponen las caractersticas y fundamentos que combinan
instrumentos moleculares a partir del ADN recombinante y la citogentica.
75
visualizacin al microscopio con luz ultravioleta. Estos mtodos se pueden combinar con
tcnicas inmunocitoqumicas basadas en reacciones antgeno - anticuerpo para aumentar
la intensidad de las seales fluorescentes.
La Biotina 11 - dUTP y la digoxigenina 11 - dUTP son dos ejemplos de bases anlogas
que pueden ser incorporadas al ADN en lugar de dTTP.
La biotina (vitamina H) tiene la ventaja de poseer una gran afinidad por las protenas
avidina y estreptoavidina, dando lugar a uniones casi irreversibles.
La digoxigenina es un derivado de la digitoxina procedente de la Digitalis purprea y
D. lanata que resulta altamente eficiente en reacciones antigeno anticuerpo en clulas.
Existe una amplia variedad de sondas disponibles comercialmente. Otra alternativa
para la obtencin de sondas se basa en la amplificacin del ADN en vectores y su marca
posterior por medio de la tcnica conocida como "nick translation".
Mediante la FISH pueden detectarse diferentes tipos de secuencias en el genoma
humano, de acuerdo con las sondas utilizadas. Algunas de ellas se citan a continuacin.
La metodologa general utilizada para la FISH sobre ADN descrita por Pinkel y cols.,
en 1986, se basa en los principios siguientes.
76
. Desnaturalizacin del ADN.
. Hibridacin.
. Lavados post hibridacin.
. Marca de la sonda.
. Observacin al microscopio.
77
Figura 7.1. FISH sobre clulas en interfase utilizando sonda centromrica para cromosomas X (Oncor).
Obsrvese el marcaje de 2 cromosomas X.
Figura 7.2. FISH sobre clulas en interfase y cromosomas utilizando sonda centromrica para cromosomas
18 (Oncor) en un caso de trisoma 18.
78
Otros procedimientos, tales como el cariotipo espectral (SKY), la microdiseccin y
pintado reverso de cromosomas, la hibridacin genmica comparativa (CGH) se desa-
rrollan actualmente principalmente en el campo de las investigaciones
Las tcnicas de citogentica molecular se han aplicado a los estudios de cartografa
gentica y de expresin gnica.
RESUMEN
79
MUTACIONES QUE AFECTAN
A LOS CROMOSOMAS HUMANOS
Araceli Lantigua Cruz
8
Una vez perfilados los detalles tcnicos para el estudio de los cromosomas hu-
manos, los investigadores de la gentica de la poca, planearon la aplicacin de
estas tcnicas a ciertos sndromes cuya similitud entre los individuos afectados
sugera un defecto gentico comn.
El primer defecto cromosmicos detectado como causa gentica de un sndro-
me se realiz por Lejeune, en personas que presentaban las caractersticas clni-
cas delineadas en el ao 1866 por Lamgdon Down..
Esto ocurri en el ao 1959, dos aos despus que se reconoci que el nmero
de cromosomas humanos era de 46 y no de 48 como al inicio se haba postulado.
Una vez ms la investigacin de una desviacin del desarrollo da paso a un
nuevo conocimiento y desencadena el inicio de una nueva era que marca la rela-
cin entre la Gentica Mdica y el nacimiento de la Gentica Clnica.
En ese mismo ao se detectan los cariotipos 47,XXY y 45,X como causa de los
sndromes Klinefelter y Turner respectivamente. Le siguieron en orden el descubri-
miento de la trisoma D hoy reconocida como 13, en el ao 1960, el primer defecto
estructural fue identificado tambin por Lejeune en el ao 1963, en nios que
presentaban el sndrome del "maullido del gato". Otros defectos cromosmicos fue-
ron descubiertos entre 1964 y 1965. De 1968 a 1970 se introducen las tcnicas de
bandas y con stas, la posibilidad de la clasificacin inequvoca de todos los
cromosomas humanos comenzando una dcada que ampli el descubrimiento de
nuevos defectos cromosmicos y nuevos enfoques de mutaciones que pueden ser
reconocidas al nivel del nuevo campo de la citogentica.
La tecnologa actual ha logrado avances sorprendentes en el estudio de los
cromosomas humanos. La citogentica por si misma o ampliada con tcnicas
moleculares permiten la deteccin de defectos cada vez ms pequeos que dismi-
nuyen la distancia del desconocimiento de defectos genmicos que median entre
las mutaciones monognicas y las cromosmicas y cuyo conocimiento puede expli-
80
car la etiologa de otras desviaciones genticas del desarrollo y profundizar en las
funciones an desconocidas del genoma humano.
En este captulo vamos a estudiar los conocimientos originados a partir de la
aplicacin de los avances de la tecnologa citogentica en la comprensin de
defectos genticos cromosmicos y los mecanismos que los originan.
81
cromosmico es aportado por un esperma inmaduro entonces se observa una placenta
muy desarrollada que se clasifica como mola idatiforme y poco desarrollo o ausencia de
las estructuras originadas por el embrioblasto.
Las tetraploidas que se han reportado, han sido siempre 92, XXXX o 92, XXYY
sugiriendo que son el resultado de una anormalidad en el "clevage", segmentacin o
divisin del citoplasma, a partir de la primera divisin cigtica.
82
G A M E T O S D IS O M IC O S GAMETOS NULISOMICOS
Figura 8.1 Esquema de la no disyuncin en la primera divisin meitica. Obsrvese que los gametos
diploides para el par cromosmico son heterodismicos con relacin a la informacin gentica contenida en
la pareja cromosmica involucrada.
GAMETO GAMETO
DISOMICO NULISOMICO GAMETOS HAPLOIDES
MONOSOMICO
Figura 8.2 Esquema de la no disyuncin en la segunda divisin meitica. Observe que la informacin
gentica del gameto dismico es igual o isodismica.
83
La no disyuncin puede involucrar a cromosomas autosmicos como las trisomas 21,
13, 18 y a cromosomas sexuales como el sndrome Klinefelter que presenta dos
cromosomas X y un cromosoma Y (trisoma XXY) o el sndrome Turner que presenta
una mososoma del cromosoma X.
Uno de los aspectos ms interesantes es poder conocer en qu momento de la divisin
celular ocurre la no disyuncin. En el sndrome Down se ha podido dilucidar, utilizando
estudios moleculares que ocurre con ms frecuencia en la mujer que en el hombre, que
este fenmeno se incrementa en los gametos femeninos en dependencia de la edad y que
ocurre preferentemente en la meiosis I.
Desde el punto de vista gentico cuando la no disyuncin ocurre en la meiosis I, el
gameto dismico resultante tiene informacin heterodismica, porque en esta divisin
celular se separan los cromosomas homlogos que tienen una informacin gentica pro-
cedentes a su vez de los gametos parentales.
La no disyuncin en la segunda divisin meitica es el resultado de la separacin de las
cromtidas de un cromosoma especfico que van juntas al mismo gameto por lo que recibe
el nombre de isodisoma, ya que la informacin gentica contenida es muy parecida si no
totalmente igual, lo que depende de la magnitud o tamao de los segmentos de cromtidas
intercambiados entre los cromosomas homlogos de la profase de la meiosis I (Figura 8.3).
84
un gameto haploide normal, dan lugar a tetrasomas o pentasomas, por tratarse del resul-
tado de una fecundacin de dos gametos que hayan sufrido, el fenmeno de no disyun-
cin para el mismo par cromosmico. La no disyuncin tambin puede ocurrir afectando
a ms de un par cromosmico como se demuestra en los casos reportados de trisoma 21
y trisomia XXY simultneamente.
C IG O T O N O R M A L N O D IS Y U N C I N E S T A D IO D E C U A T R O
E N L A P R IM E R A BLASTO M ERAS: DO S
M IT O S IS M O N O S O M IC A S Y D O S
P O S T C IG O T IC A T R IS O M IC A S
N O D IS Y U N C I N E N E S T A D IO D E
C IG O T O Y P R IM E R A M IT O S IS N O R M A L E S CUATRO BLASTOM ERAS: DO S CELU LAS
D IS O M IC A S , U N A M O N O S O M IC A Y U N A
T R IS O M IC A
85
Cuando la no disyuncin ocurre en la primera divisin mittica se obtienen dos lneas
celulares una mosmica y otro trismica. Sin embargo, las clulas con monosomas de
cromosomas autosmicos no son viables por lo que, en estos casos desaparece la lnea celular
monosmica quedando finalmente solamente la lnea celular trismica, pero cuando la no
disyuncin involucra al cromosoma X entonces quedan dos lneas celulares 45,X / 47,XXX.
Cuando la no disyuncin ocurre en la tercera divisin mittica y estn involucrados
cromosomas autosmicos, quedarn dos lneas celulares por ejemplo 46, XX / 47, XX,
+21 ya que las clulas con monosoma 21 no son viables.
Si el cromosoma involucrado es el X entonces se pueden observar tres lneas celula-
res 45, X / 46, XX / 47, XXX.
La anafase retardada
86
Las aberraciones cromosmicas estructurales se clasifican en:
Deleciones, prdida de un segmento del cromosoma. Las deleciones pueden ser
terminales, intersticiales, de acuerdo con el nmero de puntos de rupturas, uno en el caso
de las terminales y dos en las intersticiales, perdindose el segmento roto. Tambin las
deleciones producen cromosomas en anillo, cuando se presentan doble delecin terminal
y el ADN se repara perdindose los extremos rotos. Este tipo de defecto genera en el
cariotipo, una monosoma parcial de los brazos cortos o largos del cromosoma involucrado
del cual puede perderse todo el telmero, solamente un pequeo fragmento de ste o
puede perderse un segmento subtelomrico mayor (Figura 8.5).
C ro m o sm a en an illo
In tersticial
T erm in al
Figura 8.5 Tipos de deleciones
La fecundaci n de un gameto
Duplicaci n
que contenga el cromosoma
con el segmento duplicado,
genera trisom a parcial de de
ese segmento
Figura 8.6 Mecanismo de produccin de duplicaciones y fotografia de duplicacin de brazos cortos del
cromosma 9.
87
Isocromosomas, anormalidades en la separacin de las cromtides hermanas.
Es un defecto que ocurre durante la separacin de cromtides hermanas en la meiosis II,
generando cromosomas anormales que contienen doble la informacin de los brazos
involucrados. Este defecto se ha observado en el cromosoma X. La mujer que porta este
tipo de defecto puede presentar trisoma parcial de este brazo y monosoma parcial del
brazo corto, cuando el isocromosoma es de brazos largos (Figura 8.7).
Figura 8.7 Esquema de formacin de isocromosoma y fotografa de isocromosoma de brazos largos del
cromosoma X.
88
Figura 8.8 Translocacin recproca entre brazos cortos del cromosoma 1 y brazos cortos del cromosoma 11.
P R O B A B ILID A D E S D E S E P A R A C I N D E L O S C R O M O S O M A S D E L A T E T R A D A E N LA
F O R M A C I N D E LO S G A M E T O S ..
C E L U L A G E R M IN A L D E L T E T R A D A E N L A P R O F A S E D E LA
P O R T A D O R B A LA N C E A D O M E IO S IS I
A B C
Fgura 8.9 Seis posibilidades de separacin de los cromosomas involucrados en la translocacin, de ellos,
por cada meiosis solo se obtendrn cuatro gametos y las alternativas al ser fecundados por gametos
normales, sern: A (50% cariotipo normal y 50% portador balanceado de la translocacin igual que el
progenitor; B: 50% trisoma parcial 13q y monosoma parcial 4q y 50% trisoma parcial 4q y monosoma
parcial 13q; C: 50% trisoma casi completa del 4 y monosoma casi completa del 13 y 50% trisoma casi
completa del 13 y monosoma casi completa del cromosoma 4.
89
Figura 8. 10 A, B y C son los gametos probables, la fecundacin por gametos normales de los gametos
obtenidos en A, origina individuos con cariotipos normales o portadores de translocacin balanceada, en B
generan trisomas por translocacin del cromosoma 21, y monosomias del cromosoma 21, en C se
generaran trisomas 14 y las monosomas 21 y 14. Las trisomas 14, y las monosomas 14 y 21 son
anormalidades de nmero no viables, por lo que de seis posibles tipos de gametos solo tres son viables: el
portador balanceado, el normal y trisoma 21 por translocacin. Esto significa que un portador balanceado
de translocacin 14; 21, tiene un tercio de probabilidad de tener un hijo sndrome Down.
90
Las inversiones pericntricas al configurar la sinapsis entre cromosomas homlogos y
ocurrir entrecruzamiento entre sus cromtidas incluidas en el bucle de inversin, generan
cromosomas recombinantes que se caracterizan por duplicaciones y deleciones de seg-
mentos cromosmicos con lo que se forman cuatro posibles gametos: normal, portador de la
inversin, y gametos con los cromosomas recombinantes anormales que al ser fecundados
pueden originar cigotos trismicos o monosmicos para estos fragmentos (Figura 8.11).
Centr mero
Puntos de ruptura
De igual forma ocurre para las inversiones paracntricas. Pero en estos casos los
cromosomas recombinantes sern acntricos o dicntricos y los gametos resultantes ge-
neralmente al ser fecundados no llegan a ser viables de manera que los individuos porta-
dores de esta inversin tienen historia de infecundidad o abortos mas que de hijos
malformados mltiples.
Podemos entonces resumir que los tres primeros tipos de aberraciones cromosmicas
estructurales, se caracterizan por ser no balanceadas, mientras que las dos ltimos gene-
ralmente se presentan como balanceadas.
El trmino balanceado significa desde el punto de vista gentico, que a pesar de la
existencia del defecto genmico, el individuo se comporta fenotpicamente sano, sus de-
fectos fenotpicos generalmente se expresan en la etapa reproductiva, presentndose en
ellos fallas que van, desde infertilidad y abortos espontneos hasta malformados mlti-
ples y muerte neonatal.
Ahora bien, cuando la anormalidad del cariotipo es no balanceada, las manifestacio-
nes fenotpicas dependen, como ya nos hemos referido, del tipo de anormalidad
cromosmica, magnitud del defecto de la mutacin y de los genes afectados en el
cromosoma involucrado. Por ejemplo, cuando se trata de cromosomas autosmicos la
manifestacin clnica ms frecuente y notable es el retraso mental, pero adems pueden
existir discapacidades visuales, auditivas o motoras. Cuando participan los cromosomas
sexuales el fenotipo se correlaciona con el nmero de cromosomas X o Y involucrados y
con la magnitud del defecto estructural como se tratar ms adelante.
91
Cules son las aberraciones cromosmicas no balanceadas?
Todas las aberraciones cromosmicas de nmero y las aberraciones cromosmicas
estructurales siguientes: deleciones, duplicaciones e isocromosomas. Es decir toda abe-
rraciones cromosmicas que afecte al genoma por exceso o por defecto del complemen-
to cromosmico caracterstico del genoma Humano.
Las translocaciones
Las translocaciones, siguiendo el pensamiento lgico anterior, son el producto del in-
tercambio entre dos cromosomas y sern aberraciones cromosmicas balanceadas siem-
pre y cuando no se haya perdido ningn segmento de ADN en el proceso de ruptura y
reparacin entre los cromosomas involucrados.
Los cromosomas que intercambian segmentos y que estn incluidos en el concepto
de translocacin, no son homlogos, es decir son de pares diferentes.
92
La repercusin de estos defectos est en el anlisis de la segregacin de los
cromosomas afectados en la meiosis. ( Ver figuras 8.8 y 8.9).
Aunque el trmino de translocacin no recproca no es adecuado, existe un tipo de
defecto entre cromosomas no homlogos en el cual se producen tres puntos de ruptura,
dos en uno de ellos y uno solo en el otro, de modo tal que al ocurrir la reparacin, el
segmento intersticial generado por los dos puntos de ruptura, se repara o inserta en el
cromosoma donde ocurri una sola ruptura. Al final de la reparacin, en el cromosoma
de los dos puntos de ruptura, ahora falta un segmento que se encuentra insertado en el
cromosoma donde ocurri uno solo. A este defecto cromosmico se le conoce como
insercin y se acerca a la definicin de translocacin no recproca. En resumen, un
cromosoma pierde un segmento sin recibir nada del cromosoma no homlogo en el que
este segmento se insert. Este es tambin un tipo de rearreglo, entre cromosomas no
homlogos, de tipo balanceado, si en el proceso de ruptura y reparacin no se ha perdido
ningn fragmento de ADN.
Gametognesis en translocaciones
Cuando esto ocurre los cromosomas homlogos no afectados, y los afectados involu-
crados en la translocacin unen sus segmentos homlogos formando una ttrada en la
profase/metafase de la meiosis I. (Ver figuras 8.8 y 8.9).
Durante la anafase I al separarse la ttrada puede dar lugar a una segregacin deno-
minada alterna en la cual los dos cromosomas no homlogos normales migran hacia un
polo celular formando un gameto normal, mientras que los dos cromosomas no homlogos
con segmentos translocados lo hacen hacia el otro polo celular formando un gameto
portador de translocacin balanceado. En este caso, la translocacin balanceada puede
trasmitirse de generacin en generacin.
Existen otras alternativas entre las que se encuentran las denominadas adyacente 1 y
adyacente 2 que siempre originan gametos con genoma haploide no balanceado, debido a
la presencia de uno de los cromosomas involucrados en la translocacin, dando lugar a
duplicaciones o deleciones del cromosoma afectado, y cuando se produce la fecundacin
con un gameto no afectado, el genoma del cigoto resultante presentara trisomas o
monosomas parciales. Cuando esto ocurre, se le denomina al cromosoma translocado,
segregado al gameto en cuestin, derivativo (der), materno (mat) o paterno (pat), segn
sea la procedencia parental del cromosoma translocado.
Este esquema es comn para las translocaciones balanceadas ya sean recprocas o
por fusin centromrica. En estos casos siempre hay probabilidad de segregacin alterna
93
y por tanto estos individuos pueden tener hijos sanos con cariotipos normales o portado-
res balanceadas como su progenitor as como hijos con AC no balanceadas, o historia de
infertilidad, abortos espontneos, hijos con malformaciones mltiples que pueden fallecer
precozmente cuando el desbalance es tal que no es viable, o vivir presentando los defec-
tos fenotpicos a los que haremos referencia ms adelante.
Lo hasta aqu expuesto explica por qu, en algunas familias hay ms de una persona
afectada con igual defecto del cariotipo y antecedentes de infertilidad, de abortos espon-
tneos del primer trimestre del embarazo, muertes fetales, muertes neonatales, como
parte de la amplia variabilidad de expresin de los mltiples desbalances cromosmicos
que podran ocurrir en el cariotipo humano.
El intercambio de material cromosmico, puede ocurrir tambin entre cromosomas
homlogos como resultado de un entrecruzamiento desigual o por fusin centromrica entre
una pareja de homlogos acrocntricos, de ah que algunos autores se refieran en el primer
caso a translocaciones heterlogas y en el segundo a translocaciones homlogas. Las deno-
minadas translocaciones Robertsonianas o por fusin centromrica entre cromosomas
acrocntricos homlogos, ocurren muchas veces debido a inestabilidades centromricas y
realmente suelen tratarse de isocromosomas 13/13; 14/14; 21/21 solo por citar los reportados
en la literatura. Cuando esto ocurre la informacin gentica de ambos cromosomas es prc-
ticamente igual y procede de un solo progenitor por lo que se pueden interpretar como disomas
uniparentales, ms que verdaderas translocaciones. Tericamente un portador de un rearreglo
entre cromosomas homlogos por los mecanismos mencionados, suelen presentar algunas
manifestaciones fenotpicas y severas anormalidades de segregacin al producir gametos. En
general son fenmenos citogenticos poco frecuentes.
94
podido caracterizar bien, en las aberraciones cromosmicas ms frecuentes, como en el
sndrome Down, sin embargo, aun en las aberraciones cromosmicas que involucran a
los cromosomas autosmicos, y que se observan con menor frecuencia, se ha podido
hacer un anlisis de sus manifestaciones fenotpicas que a su vez, ha permitido caracte-
rizar aspectos que les son comunes y cuyo conocimiento puede alertar sobre la sospecha
de esta etiologa gentica.
El conocimiento de los elementos clnicos comunes, constituye un instrumento valioso
para cualquier Mdico Especialista y sobre todo para el Mdico General Integral en su
tarea de interconsulta con el especialista en Gentica Clnica.
95
El estudio y anlisis de estos defectos entran en el campo de la dismorfologa, nombre
que recibe la especializacin mdica de la observacin y significado de estos defectos en
el curso del desarrollo embrionario.
Como efecto del desbalance genmico por aberraciones cromosmicas no balancea-
das, pueden observarse desde malformaciones extremadamente severas, hasta simples
evidencias del desarrollo desproporcionado de una parte fetal y que por si mismo no
llegan a ser evaluados como una verdadera malformacin sino como un pequeo detalle
fuera de lo comn y al que se le suele denominar signo dismrfico. (Ver Captulo 17). Las
aberraciones cromosomicas ms comunes se caracterizan por un conjunto de signos
dismrficos persistentes que, por la frecuencia con que aparecen permiten sospechar el
diagnstico clnico con la simple observacin del individuo. Tal es el caso del individuo
sndrome Down en el que hay evidencia de correlacin entre el examen fsico y el
cromosoma 21 involucrado.
Un conjunto dismrfico (patrn de signos dismrficos) est formado por una serie de
hechos (signos dismrficos) que en ocasiones se consideran variantes normales de forma o
de tamao y no existe una delimitacin entre un signo dismrfico y lo "normal". Al contrario
de la malformacin, el signo dismrfico no afecta adversamente la funcin de un rgano
pero si tiene un efecto esttico, sin embargo es difcil en ocasiones, separar un hecho
dismrfico de una malformacin, por ejemplo, una vula bfida podra ser evaluado como un
signo dismrfico, mientras que la hendidura del paladar blando como una malformacin.
Un elemento dismrfico puede aparecer en cualquier parte del cuerpo pero las reas
ms afectadas son: cara, genitales y extremidades distales (manos y pies).
Algunos ejemplos en cara incluye: tamao, forma y posicin poco comn de las ore-
jas, fisuras palpebrales, distancia inter-ocular anormalmente grande (hipertelorismo) o
pequea (hipotelorismo), pliegue que cubre el canto interno o ngulo interno del ojo
(epicanto), desviaciones hacia arriba (mongololoide) o hacia abajo (antimongoloide) de
las fisuras palpebrales, tamao y forma de la nariz (nariz pequea, ventanas nasales en
anteversin, raiz nasal deprimida), mandbula pequea (micrognatia), grande (macrognatia)
retraida (retrognatia), prominente (macrognatia) configuracin del paladar muy alto (oji-
val). Perfil facial aplanado, cncavo o convexo. Todos estos posibles signos dismrficos
reflejan un crecimiento desproporcionado de una parte fetal durante la embriognesis.
En cada caso pueden existir variaciones de ellas durante el crecimiento postnatal y con
frecuencia el adulto afectado no muestra el dismorfismo que tuvo de nio.
La edad ideal para la evaluacin de un patrn dismrfico es entre la 3ra. y 4ta.
semanas posteriores al nacimiento y antes de los dos aos de edad, ya que en este
perodo las deformidades por presiones internas y del parto, prcticamente han desapare-
cido, y el dismorfismo no ha disminuido en severidad.
En extremidades distales constituyen hechos dismrficos: la presencia aberrante de
los pliegues de flexin palmar, la clinodactilia del 5to. dedo, la forma de la mano, las
caractersticas de las uas, la separacin entre 1er. y 2do. dedos de los pies, la presencia
96
de surco profundo entre ellos, la prominencia del taln, pliegues, almohadillas; es decir
caractersticas que no llegan a constituir una malformacin severa, por ej. falta de falan-
ges, ausencias de uas, polidactilia, sindactilia pequeas (unin de dedos) y otras malfor-
maciones frecuentes de extremidades.
En los genitales, un pene pequeo, bolsas escrotales hipoplsicas, testculos pequeos
o muy grandes, hipoplasia de labios mayores o menores, todas aquellas variantes que por
si no constituyan una malformacin.
En una aberracin cromosmica son menos frecuentes las malformaciones congni-
tas aisladas y no tienen el mismo valor clnico que cuando se encuentran asociadas a un
conjunto de tres o ms signos dismrficos, por otra parte una combinacin de varias
malformaciones pueden ser la expresin ms caractersticas de una aberracin
cromosmica, que la presencia de una malformacin aislada.
Por ejemplo, un paladar hendido aislado no tiene el mismo valor para el diagnstico de
una trisoma 14q proximal que cuando est asociado con hipotelorismo, nariz prominente,
labios finos y boca caracterstica.
Las combinaciones de varias malformaciones son importantes para sospechar abe-
rraciones cromosmicas especficas, por ejemplo: En la trisoma 18 adems de un
dismorfismo craneofacial con orejas faunescas, microrretrognatia, occipucio prominente,
pies en mecedora (taln prominente) y marcado retraso del crecimiento, pueden estar
presentes las siguientes malformaciones: fstula traqueoesofgica, aplasia radial,
cardiopatas y malrotacin intestinal.
A continuacin relacionamos las malformaciones congnitas que asociadas a un pa-
trn dismrfico, se observan con frecuencia en el fenotipo de aberraciones cromosmicas
autosmicas.
97
Otras malformaciones son poco comunes en aberraciones cromosmicas, entre ellas:
. Anencefalia.
. Gastroquisis.
. Extrofia de vejiga o cloaca.
. Siringomelia.
. Peromelia, amelia, facomelia, ectrodactilia.
. Atresia del yeyuno o leo..
. Situs inverso total.
. Artrogriposis congnita.
. Defectos perineales o cubitales.
Como regla general los pacientes con severo retraso mental y del crecimiento intrauterino,
presentan con mayor frecuencia malformaciones ms severas y mueren ms precozmente
que pacientes con la misma aberracin con mejor peso y tamao al nacimiento.
Anormalidades esquelticas que suelen presentarse en los individuos con aberracio-
nes cromosmicas.
Generalmente las anormalidades del esqueleto son disostosis o sea anormalidades
anatmicas selectivas a uno o varios huesos y no son tan especficas. Estas anormalida-
des incluyen forma y nmero anormal de vrtebras y costillas, forma anormal de la pelvis,
epfisis cnica pseudo-epfisis, retraso en la maduracin sea y otras anormalidades me-
nores en metacarpianos, metatarsianos y falanges.
98
. El defecto cromosmico per se (desbalance cromosmico)
. Los factores genticos familiares, herencia multifactorial de la inteligencia como se
ver en el captulo 16.
. Las influencias adversas intrauterinas y perinatales.
. Las consecuencias de malformaciones cerebrales, sordera, ceguera, incapacidad
motora y otros.
Por ejemplo la mayora de los pacientes con mosaicos para la trisoma 8 son ligera o
moderadamente retrasados, una minora son inteligentes o severamente retrasados y en
estos casos se ha observado asociacin con agenesia del cuerpo calloso.
En sentido general el coeficiente de inteligencia (CI) vara alrededor de 50, algunos
son profundamente retrasados cuando presentan malformaciones del sistema nervioso
central como la holoprosencefalia, otros como el sndrome 4p-, presentan siempre severo
retraso mental y epilepsia difcil de tratar.
El desarrollo del lenguaje generalmente est afectado. La coordinacin motora no
est tan daada, las funciones intelectuales que requieren concentracin y memoria, son
pobres y la adaptacin social con frecuencia es buena.
En ocasiones no son anormalidades en el desarrollo anatmico de las estructuras
cerebrales la causa del retraso mental sino la sobredosis de productos proteicos de uno
o de varios genes especfico o la deficiencia de otros las que detrminan un neurodesarrollo
caracterstico.
La conducta presenta rasgos distintivos para algunas aberraciones cromosmicas,
que pueden potenciarse debido a factores ambientales familiares y sociales.
Algunos pacientes con aberraciones menos conocidas pueden ser ansiosos,
hiperactivos, autoagresivos o tener conducta autstica.
En sentido general cuando no hay malformaciones especficas que determinen fun-
cionamiento severo del sistema nervioso central (SNC), suelen responder muy bien al
estmulo psicopedaggico temprano, desarrollar lenguaje y habilidades tcnicas impor-
tantes en su integracin familiar y social.
El mejor ejemplo de esto es el sndrome Down, en quienes se observa un panorama
completamente diferente en los ltimos aos.
99
Crecimiento: el retraso del crecimiento no es una caracterstica constante. Aunque s
especfica en la monosoma X, no lo es en las aberraciones estructurales del X, ni en
aberraciones que contiene el cromosoma Y, en las cuales hay un incremento en la talla,
como ocurre en los sndromes 47,XXY y 47,XYY.
En el sndrome 45,X se aprecia una pequea longitud en el recin nacido que se
mantiene en la nia y la adolescente, y que es inferior a los 150-153 cm, siendo el creci-
miento muy lento.
Los dismorfismos no son especfico para sndromes como XXX, XXY o el XYY, sin
embargo un patrn de signos dismrficos es muy caracterstico para la monosoma X y
polisomas X tales como la tetra X, pentasoma X y el sndrome tetra XY.
El patrn dismrfico del sndrome de Turner (45,X) se caracteriza por: cara triangu-
lar, las hendiduras parpebrales son oblicuas hacia abajo, que pueden ser pequeas y
observarse epicanto. Las comisuras labiales se dirigen hacia abajo, el paladar es muy
alto y estrecho (ojival) y los dientes suelen estar mal implantados.
El mentn es pequeo y hacia atrs (retrognatia). Las orejas pueden tener la im-
plantacin baja. El cuello es corto y ancho con pterigium colli (pliegue membranoso que
se extiende de la regin mastoidea a la acromial), el cabello en la nuca es de implanta-
cin baja y en tridente. El trax es ancho con separacin exagerada de las mamilas
(teletelia).
Las manos son cortas con acortamiento del cuarto metacarpiano, con anormalidades
de las articulaciones de codos y rodillas. Uas hiperconvexas, estrechas e hipoplsicas.
Presentan mltiples malformaciones cardiovasculares y renales. Adems se carac-
terizan por pobre desarrollo o ausencia de ovarios, tero infantil y por lo que son
infrtiles.
Por su parte el sndrome XXY o sndrome Klinefelter, no presenta notables elemen-
tos dismrficos al nacimiento y los defectos congnitos suelen relacionarse con anomalas
genitales como hipospadia o falta de descenso de los testculos a las bolsas escrotales. Son
altos para su edad y en la pubertad no desarrollan los caracteres sexuales secundarios debido
a la disgenesia gonadal que presentan nico punto en comn entre la monosoma X y la
trisoma XXY. En ambos sndromes adems no es un hecho comn el retraso mental y cuando
existe algn defecto cognitivo se relaciona con retardo del aprendizaje y anormalidades
neuropsicolgicas probablemente secundarias a las dificultades en su manejo mdico.
En cambio cuando el nmero de cromosomas X aumenta, se incrementa el retraso
mental que suele ser profundo en las poliploidias del X como en los sndromes tetra XY y
en las pentasomias del X.
La Tabla 8.1 resume caractersticas comunes de un grupo de aberraciones cromo-
smicas autosmicas y sexuales.
100
Tabla 8.1
Aberraciones cromosmicas Defectos anatmicos Crecimiento y desarrollo Defectos
neurolgicos
DEFECTOS COMUNES A LAS AC DE CROMOSOMAS AUTOSMICOS
Fenotipos comn a las AC Son frecuentes: defectos Defecto de crecimiento Epilepsia, retraso
no balanceadas de cromoso- congnitos mayores, prenatal (crecimiento del desarrollo del
mas autosmicos. malformaciones menores intrauterino retardado). lenguaje, defectos
o signos dismrficos Baja talla proporcionada visuales, auditivos,
de comienzo postnatal. autismo, retraso
mental.
47, XX XY, +21.46, XY Cardiopata congnitas Nacen algo pequeos, Retraso mental de
XX,-14, t (D;21)46,XX en casi el 50%, patrn pero en general, la baja severo a moderado,
XY, -21, t (21;G) de signos dismrficos talla se hace ms evidente coeficiente de
crneofaciales, despus del nacimiento. inteligencia (CI) de
microcefalia. Tienen tendencia a la obesidad. 25 a 50, hipotona
Retraso de la maduracin sea. muscular a veces
severa.
47, XX XY, +13.46, Desarrollo incompleto Bajo peso y baja talla Convulsiones, puede
XX XY / 47,XX XY, +13 del cerebro anterior de comienzo prenatal. haber hipertona
Trisomas parciales con (holoprosencefalia); o hipotona debido
frecuencia por fusin defectos del desarrollo a la severidad y
centromrica con acroctricos de nervios olfatorios y variaciones de
del grupo D, incluyendo al ptico, microcefalia, malformaciones del
propio 13, y del grupo G. microftalma, labio y SCN. Mueren
paladar hendidos, alrededor de los tres
polidactilia de manos y das de nacidos,
pies, cardiopata congnita, el 80% no sobrepasan
patrn dismrfico con el mes, con muy
hemangiomas capilares. mala calidad de vida.
47, XY o XX, +18 46, XX Cardiopatas congnitas, Nacen bajo peso, inferior Severa deficiencia
XY / 47,XX XY, + 18. defectos de vas biliares, a 2340 g, al nacimiento mental, despus del
Cariotipos con trisomas hipoplasia del timo, tienen severa hipoplasia periodo neonatal son
parciales del cromosoma 18. defectos renales, aplasia postnatal y de tejido hipertnicos, dificultad
radial, microcefalia, patrn celular subcutneo. en su alimentacin por
de signos dismrficos, Los que logran sobrevivir defectos de succin,
entre los defectos ms mantienen su crecimiento los que sobreviven no
frecuentes. y desarrollo inferior a logran caminar
lo normal. ni hablar.
46, XX XY, del(5p)46, Cardiopata congnita, Peso al nacer bajo Severa hipotona,
XX XY, 5p- patrn dismrfico al inferior a 2500 g. llanto especial como
Monosomas parciales de 5p. nacer dado por cara Crecimiento el "maullido de un
redonda, epicanto, postnatal lento. gato", (sndrome del
hipertelorismo. maullido del gato").
Retraso mental severo.
101
CARACTERSTICAS ESPECFICAS DE AC NO BALANCEADAS DE CROMOSOMAS X y Y
45, X, y de sus variantes. Cardiopata congnita Baja talla de comienzo No presentan retraso
45,X/46, XY; 46,XX/ 45,X; el defecto ms frecuente prenatal, con diversidad mental, su CI es de 90
46, Xi(Xq Xp).Deleciones es la presencia de vlvula de anomalas seas. o superior.
parciales del X en brazos p q. artica bicspide, Pueden tener linfedema Aproximadamente
coartacin de la aorta. congnito. Tienen trax el 50% tiene defectos
Riones en herradura. ancho ( en escudo). de audicin.
Patrn de signos
dismrficos. Disgenesia
gonadal y por tanto
infertilidad.
47,XXY; 46,XY/47,XXY Se observan pocos Nacen de buen peso Su CI tiene una media
y sus variantes 48,XXYY, defectos congnitos, a veces son mayores de 85 a 90, por lo
48,XXXY ocasionalmente de 50 cm al nacimiento. que no presentan
criptorquidia, pene En el desarrollo retraso mental,
pequeo, hipospadia. postnatal son nios aunque pueden
Presentan como en la altos de extremidades tener historia de
45,X; disgenesia largas. problemas de
gonadal por lo que conducta,
tambin son infrtiles. dificultades para la
lectura y trastornos
del control muscular
fino.
RESUMEN
102
cromosmas en cualquiera de las dos divisiones meiticas o tambin pueden aparecer
cuando se produce una anafase retardada.
Las aberraciones cromosmicas estructurales pueden ser balanceadas (inversiones
y translocaciones) o no balanceadas (deleciones, duplicaciones, isocromosomas)
La expresin fenotpica de las aberraciones cromosmicas, es un fenmeno que siempre
est presente. En el caso de las aberraciones cromosmicas balanceadas, a nivel de
produccin de gametos y que pueden aparecer en la historia familiar de padres de nios
con diversas discapacidades o en parejas que no pueden tener el hijo deseado, como
antecedentes de infertilidad, subfertilidad, abortos espontneos, muertes fetales, muertes
neonatales o sea historia de fallas reproductivas.
En el caso de aberraciones cromosmicas no balanceadas de cromosomas autosmicos
son comunes la presencia de ms de tres signos dismrficos, malformaciones congnitas,
retraso del crecimiento y desarrollo y retraso mental de gran espectro de gradaciones. La
presencia de retraso mental es el defecto ms constante. Las aberraciones cromosmicas
que involucran a los cromosomas X o Y, no tienen caractersticas fenotpicas comunes.
Su fenotipo debe ser evaluado individualmente. Los sndromes ms frecuentes como la
monosoma X (sndrome Turner) y la trisoma XXY (sndrome Klinefelter) tienen como
caracterstica comn la disgenesia gonadal (gnadas no funcionales o ausentes). El re-
traso mental severo solo es comn cuando se incrementa el nmero de cromosomas X
(poliploidias del X).
103
TRASMISIN DE
SIMPLES MUTACIONES
104
Solamente una pequea porcin de genes del cromosoma Y son homlogos con el
cromosoma X. Estas porciones homlogas estn localizadas en el extremo termi-
nal de los brazos cortos de ambos cromosomas, esta homologa les permiten man-
tenerse unidos durante la meiosis (Figura 9.1).
REGIN
PSEUDOATOSMICA
Figura 9.1. Esquema del cromosma Y. TDF = factor determinante testicular. SRY = regin determinante
del sexo en el cromosoma. AZF = factor azoospermia.
X IS T / X IC
Figura 9.2. Esquema del cromosoma X. XIST = inactivaciiin especfica de transcriptos del X. XIC =
Centro de inactivacin del X
105
La determinacin del sexo depende de la fecundacin de un espermatozoide
portador de un cromosoma X o de un cromosoma Y. En otras palabras el vulo
siempre contiene un cromosoma X y sus diferencias genticas dependern del
origen materno o paterno de los alelos contenidos en ellos, sin embargo los
espermatozoides tienen la probabilidad de contener en un 50% o el cromosoma X
o el cromosoma Y (Figura 9.3 y 9.4).
GENOTIPO XX GENOTIPO XY
GAMETOS GAMETOS
X X
Y
XX XY
CIGOTOS
106
HERENCIAS MENDELIANAS EN EL HUMANO
107
Figura 9. 5. Simbologa internacional para la confeccin del rbol genealgico.
108
F a m iliar d e 3 er gra d o
F a m iliar d e 1 er g rad o
109
I
1 2
II A fectados A
1 2 3
Figura 9.7. Arbol genealgico correspondiente a un defecto gentico, cuya mutacin se expresa con
criterios de herencia autosmica dominante.
110
MATRIMONIO DE LA I-1 / I-2 DE LA FIGURA 9.6
GENOTIPOS Aa x aa
Progenitor no afectado
Progenitor Gametos a a
Afectado A Aa Aa
a aa aa
Afectados Aa
= D efecto C
I 1 2
II
1 2 3 4 5 6
III
1 2 3 4
IV
1 2 3 4
Figura 9.8. Arbol genealgico que ejemplifica el patrn herencia ligada al cromosoma X
111
En este caso el gen mutado "C" se encuentra localizado en el cromosoma X y como los
cromosomas X y Y estn involucrados en la determinacin del sexo, los individuos con el
genotipo afectado deben ser analizados atendiendo a su sexo cromosmico, es decir, XX la
mujer y XY el hombre. Como el gen mutado C est localizado en el cromosoma X las
mujeres podrn tener tres genotipos: XC/XC, XC/Xc y Xc/Xc siendo este ltimo homocigtico
recesivo, el nico que expresar el fenotipo normal para el carcter en estudio. En el hom-
bre solamente son posibles dos genotipos: XC/Y y Xc/Y, en su carcter de hemicigtico.
El hombre sano de este ejemplo tendr un genotipo Xc/Y. Asumimos que el genotipo de I-1
es hemicigtico XC/Y y el de la I-2, es homocigtica recesiva no afectada Xc/Xc. Los gametos
de I-1 (espermatozoides) sern de dos tipos atendiendo a la presencia de los cromosomas sexua-
les: XC y Y. Obsrvese que con el cromosoma X se transmite el gen mutado C.
Los gametos de I-2 sern todos Xc. Esta pareja tendr una probabilidad de tener
descendientes afectados dependiendo del sexo, en tanto que todas sus hijas padecern
fenotpicamente la enfermedad y genotpicamente sern heterocigticas, los hijos de este
hombre afectado (I-1) siempre sern genotpica y fenotpicamente no afectados.
La mujer afectada II-3 al ser heterocigtica transmitir sus cromosomas X tanto a sus
hijos varones como hembras con una probabilidad del 50 % de transmitir junto con ste la
mutacin "C". Esta es una herencia dominante ligada al cromosoma X.
GENOTIPOS XC /Y X Xc /Xc
Madre no afectada
Afectados XC/Xc
GENOTIPOS Xc /Y X XC//Xc
Madre afectada
112
RESUMEN DE LAS HERENCIAS DOMINANTES
113
1 2 3 4
I
A fectad o s b
II
1 2 3 4
III
1 2 3
La pareja II-2, II-3 ser genotpicamente heterocigtica (Bb) mientras sus hijos sern
genotpicamente homocigticos recesivos (bb), en este caso cuando se requiere la exis-
tencia de los dos genes mutados para que se exprese el defecto, la herencia es autosmica
recesiva.
La pareja de heterocigticos tendr una probabilidad del 25 % de tener otro hijo enfer-
mo independientemente de cual sea su sexo. En el siguiente esquema se ilustra esta
situacin.
GENOTIPOS Bb X Bb
Progenitor no afectado
Afectado bb
114
independiente de su sexo, afectados. Las enfermedades genticas con este tipo de he-
rencia, tienen generalmente alta frecuencia de matrimonios entre consanguneos ya que
es mucho ms probable que dos individuos sean portadores para la misma mutacin
recesiva cuando tienen relacin filial.
La ocurrencia de matrimonios entre consanguneos, es a su vez un ndice de la fre-
cuencia del gen recesivo en una poblacin, si es muy alta la frecuencia de consanguinidad
la mutacin es baja, y a la inversa, si la frecuencia de matrimonios entre consanguneos
para la enfermedad en cuestin es muy baja significa que la mutacin es comn en la
poblacin en estudio.
Se han reportado 1730 mutaciones, con expresin fenotpica recesiva, de genes loca-
lizados en cualquiera de los 22 pares de cromosomas autosmicos. Gran cantidad de
defectos enzimticos que producen errores congnitos del metabolismo, tienen este tipo
de herencia.
Un ejemplo con este tipo de herencia se observa en la anemia a hemates falciforme,
la enfermedad gentica mendeliana ms frecuente en Cuba.
I 1 2
II
1 2 3 4 5 6
III
1 2 3 4
Defecto "d"
IV
1 2 3 4
Figura 9.10. Arbol genealgico que ejemplifica una herencia recesiva ligada al cromosoma X.
115
Aqu se destaca que regularmente, son los hombres los afectados y que stos se
relacionan unos con otros a travs de mujeres heterocigticas.
Se han reportado al menos 495 mutaciones de genes localizados en el cromosoma X. Un
ejemplo de defecto gentico con este tipo de herencia se observa en las hemofilias A y B.
GENOTIPOS Xd /Y X XD /XD
Madre no afectada
GENOTIPOS XD /Y X XD//Xd
Las herencias recesivas se caracterizan porque los padres de los individuos afec-
tados son fenotpicamente sanos.
Los padres de los individuos afectados por herencias autosmicas recesivas son
heterocigticos obligados, y tiene un 25 % de probabilidad de tener hijos afectados
por la misma enfermedad cada vez que tengan nueva descendencia.
Los individuos afectados por herencias autosmicas recesivas, lo son indepen-
dientes del sexo, pudiendo existir hombres y mujeres afectados en una misma
generacin.
116
En las herencias autosmicas recesivas se observa con gran frecuencia matrimo-
nios entre consanguneos.
En las herencias autosmicas recesivas tiene gran importancia la deteccin de
portadores (heterocigticos) asintomticos, con objetivos preventivos.
En las herencias recesivas ligadas al cromosoma X, la condicin de hemicigticos
en los varones, determina la expresin del gen recesivo aun en una simple dosis,
por lo que los varones expresan la enfermedad mientras que las mujeres al ser
heterocigticas, son portadoras asintomticas.
En los rboles genealgicos de familias afectadas por herencias recesivas ligadas
al cromosoma X, los varones que padecen la enfermedad se encuentran
emparentados a travs de mujeres portadoras.
En las herencias recesivas ligadas al cromosoma X, las mujeres portadoras tienen
un 50 % de probabilidad de tener sus hijos varones afectados, mientras sus hijas
tienen un 50 % de ser portadoras sintomticas.
Una mutacin puede estar influida por el sexo, esto se debe al efecto del metabolismo
endocrino que diferencia al hombre y a la mujer. Por ejemplo la calvicie se debe al efecto
de un gen que se expresa como autosmico dominante, sin embargo en una familia con la
117
segregacin de este gen solo los hombres padecen de calvicie y las mujeres tendrn su
cabello ms escaso despus de la menopausia. Otro ejemplo puede ser la deficiencia de
la enzima 21 hidroxilasa que interviene en el metabolismo de los glucocorticoides. Cuan-
do esta enzima est ausente la sntesis de glucocorticoides se desplaza hacia la forma-
cin de testosterona y esta hormona est comprometida en la embriognesis de los genitales
externos del varn, por lo que su presencia anormal en el desarrollo de un feto femenino
produce la virilizacin de los genitales femeninos, mientras que en el caso de un feto
varn, solo incrementa el desarrollo de los masculinos. Una anormalidad de este tipo,
permitir sospechar un diagnostico clnico ms rpidamente en una nia, basado en el
examen de los genitales del recin nacido, que en un nio.
Las herencias limitadas al sexo, como su nombre indica, pueden estar comprometidas
mutaciones de genes con loci en cromosomas autosmicos cuya expresin solamente
tiene lugar en rganos del aparato reproductor masculino o femenino. Un ejemplo es el
defecto congnito septum vaginal transverso, de herencia autosmica recesiva, o la defi-
ciencia de 5 a reductasa que convierte a la testosterona en dihidrotestosterona y que
acta en la diferenciacin de los genitales externos masculinos, por lo que su ausencia
simula genitales femeninos cuando el nio nace.
118
Efecto pleitrpico de un gen o mutacin especfica
Heterogeneidad gentica
Atencin especial merece este trmino que se aplica tanto a mutaciones en genes
localizados en diferentes cromosomas que producen expresin similar en el fenotipo (he-
terogeneidad no allica) como a mutaciones que afectan a diferentes sitios del mismo gen
(heterogeneidad allica). Esta categora complica extraordinariamente el estudio etiolgico
de variantes del desarrollo de origen gentico y constituye una amplia y fundamental
fuente de diversidad gentica del desarrollo.
Se ha observado que en las clulas somticas del sexo femenino (46,XX), solo uno de
los dos cromosomas X es activo. El otro permanece inactivo y aparece en clulas en
interfase como un cuerpo denso fuertemente coloreado en la periferia del ncleo que
recibe el nombre de cuerpo de Barr. La inactivacin del cromosoma X tiene lugar en el
estado de mrula, alrededor del tercer da despus de la fertilizacin y se completa, en la
masa de clulas internas que darn origen al embrin, al final de la primera semana de
desarrollo embrionario. La seleccin del cromosoma X que se inactivar, es un fenmeno
generalmente aleatorio teniendo en cuenta que al ocurrir la fecundacin cada cromosoma
X tiene origen materno y paterno, en unas clulas se inactivar el X materno (Xm) y en
otras el X paterno (Xp). Una vez que se inactiva uno de los dos cromosomas X las
clulas descendientes mantendrn el mismo cromosoma X inactivo originndose un clon
celular (Xm) o (Xp) activos. Es decir al inicio de la inactivacin, sta es al azar, pero
una vez ocurrida se mantiene el mismo cromosoma X que se inactiv en la primera clula
del clon. Este fenmeno descrito por primera vez por Mary Lyon, en 1961, por lo que se
le conoce como hiptesis de Lyon.
La inactivacin (desactivacin) del cromosoma X est determinada por el gen XIST
(Figura 9.2). Este gen esta involucrado en la transcripcin especfica de inactivacin que
funciona por un mecanismo de metilacin preferencial, esto significa que si no hay ningu-
119
na alteracin de estructura en los dos cromosomas X del genoma femenino, la inactivacin
debe ocurrir de forma aleatoria pero si existiera alguna alteracin con gran compromiso
en la funcin de uno de los dos cromosomas X habra una activacin no completamente
aleatoria. El locus del gen XIST se encuentra localizado en Xq13.3.
La inactivacin del X determina consecuencias genticas y clnicas:
Cuando tiene lugar una mutacin de novo que se expresa como dominante, o sea en
un genotipo heterocigtico, ocurre que padres que no presentan el efecto de la mutacin
pueden tener un hijo o hija afectados. La ausencia de antecedentes familiares, una vez
que se excluyen fenmenos como la penetrancia reducida del gen y variaciones mnimas
de la expresividad dificulta llegar al planteamiento de una mutacin de novo cuando en la
literatura el defecto o enfermedad no ha sido reportada con anterioridad, con un tipo
especfico de herencia.
120
Figura 9.11. Herencia de genes que causan letalidad en el varn. En estos casos no aparecen valores
afectados y la frecuencia de abortos espontneos sugiere prdida de productos masculinos.
RESUMEN
121
INTERFERENCIAS BIOLGICAS
DE LA TRANSMISIN
DE SIMPLES MUTACIONES 10
Araceli Lantigua Cruz
MUTACIONES DINMICAS
Este trmino se aplica a genes que presentan en alguna regin de su estructura tripletes
de bases repetidos en un nmero de veces tal, que define el alelo o gen denominado
normal. La mutacin consiste en el incremento del nmero de veces que se repite el
triplete y su expresin est en correspondencia con este incremento. Se trata de un gen
que crece y su crecimiento tiene un lmite a partir del cual su expresin puede ser nula y
causar un defecto del desarrollo.
El sndrome a partir del cual se introduce esta nueva categora gentica recibe el
nombre de Sndrome Frgil X, es la segunda causa gentica y primera causa hereditaria
de retraso mental.
Al gen detectado a partir de este sndrome, se le ha denominado FRM1. La mutacin
del gen FMR1, que da origen a este sndrome consiste en el incremento de repeticiones
del triplete CGG del extremo 5' de su primer exn, cuyo alelo normal tiene un promedio
de 30 repeticiones.
122
Este incremento se produce por etapas. De ah el trmino de "gen que crece". El
primer crecimiento o premutacin oscila entre 43 y hasta 200 repeticiones sin que tenga
un efecto fenotpico muy especfico. A partir de las 200 repeticiones se produce la muta-
cin completa y se expresa el sndrome.
El riesgo de transformarse en una mutacin completa depende del nmero de repeti-
ciones de la premutacin, de modo tal que cuando el portador de la premutacin en una
familia afectada, tiene un rango de menos de 90 repeticiones, la probabilidad de amplificarse
hacia una mutacin completa de un rango de repeticiones mayor de 200, es menor que
cuando la premutacin tiene un rango de ms de 90 repeticiones.
El gen FMR1 se encuentra en la regin q27.3 del cromosoma X y por lo tanto, se
hereda ligado al X con caractersticas especiales pues el incremento del nmero de tripletes
se produce durante las gametognesis y los hombres aparentemente normales pueden
ser hemicigticos para la premutacin y transmitir el gen a todas sus hijas, quienes a su
vez pueden darle nietos varones afectados por retraso mental sin existir antecedentes
familiares del defecto.
Este tipo de mutacin explica el fenmeno gentico de anticipacin o de observacin
de la aparicin ms temprana de sntomas en las nuevas generaciones, independientes
del sexo del individuo que trasmiti la mutacin.
La anticipacin es un fenmeno usual en enfermedades genticas progresivas del
sistema nervioso central y su presencia es un elemento clnico que obliga a la bsqueda
molecular de mutaciones debidas a un incremento de secuencia de bases repetidas.
Desde el punto de vista molecular se describen dos grupos de sndromes debidos a
mutaciones dinmicas:
1. Expansiones inestables por repeticiones muy largas, fuera de secuencias codificantes.
Enfermedad Locus Gen Alelo N Premutacin Mutacin Triplete Defecto
molecular
123
2. Expansiones CAG de repeticiones ms cortas dentro de secuencias codificantes.
124
IMPRONTA GENMICA
125
cin cromosmica sea heredada por va paterna o materna se expresarn los sndromes
Prader Willi o Angelman respectivamente, cuyos fenotipos son bien diferentes entre s.
Otros ejemplos se relacionan con el incremento en la severidad de la expresin
fenotpica de la mutacin, como se ha planteado en la Distrofia Miotnica, para explicar
la forma neonatal que se observa en hijos de madres afectadas y que a su vez, han
heredado la mutacin por va materna.
No es difcil comprender ahora, que podran existir mutaciones de simples genes que
se transmiten de acuerdo con las leyes de Mendel pero que al modificarse su expresin
en dependencia del origen materno o paterno de la mutacin y teniendo como nica
evidencia el examen clnico de la expresin de la mutacin, sea extremadamente difcil
encontrar los criterios que nos permitan seguir la segregacin de la mutacin en cuestin
para identificar una herencia mendeliana de las estudiadas previamente.
DISOMAS UNIPARENTALES
126
dismicos con los dos cromosomas procedentes uno de cada progenitor o cigotos con los
dos cromosomas de un solo padre o disomias uniparentales.
Cada da aparecen nuevas evidencias de disomias uniparentales de los 23 pares de
cromosomas humanos, al menos ya se ha demostrado la presencia de disomias
uniparentales para 15 de ellos.
Los sndromes Angelman (happy puppet), Beckwith-Wiedemann (EMG) y Prader-
Willi son los ejemplos ms estudiados.
MOSAICISMOS GERMINALES
HERENCIA MITOCONDRIAL
Existen otras mutaciones de simples genes que se diferencian de las anteriores por-
que el gen afectado o mutado est en el ADN mitocondrial.
Las mitocondrias tienen reproduccin intracelular independiente (por fisin) y aunque
se encuentran afectados tanto hembras como varones, los hombres afectados no trans-
127
miten la enfermedad pues el espermatozoide no contribuye con mitocondrias en la fecun-
dacin.
Las mitocondrias slo se transmiten a travs del vulo cuyo citoplasma es mucho ms
grande (Figura 10.1).
I 1 2
II
1 2 3 4 5
III
1 2 3 4
Es difcil hacer un anlisis predictivo de la probabilidad que una mujer afectada tenga
hijos sanos o enfermos pues esto depende del nmero de mitocondrias normales y
anormales de cada vulo.
El ADN mitocondrial (ADNmt) se encuentra empaquetado en un cromosoma circu-
lar que tine 16 kb de longitud. Cada mitocondria tiene varias copias de este cromosoma y
cientos por clulas. El ADNmt ha sido completamente secuenciado y se conoce que
codifica para dos tipos de ARN ribosomal, para 22 ARN de transferencia y para 13
polipeptidos que son subunidades de enzimas que participan en la cadena respiratoria ya
que las otras unidades de estas enzimas son codificadas por el ADN nuclear.
Las mitocondrias son distribuidas al azar en las divisiones celulares. Generalmente el
ADNmt es idntico en la mayora de las personas y a este hecho se le denomina
homeoplasmia, sin embargo cuando aparece una mutacin en este ADN se producen
dos tipos de ADNmt, el no mutado y el mutado recibiendo el nombre de heteroplasmia.
La homeoplasma puede estar presente para el ADNmt no afectado y para el ADNmt
mutado, en estos casos todos sus hijos tienen riesgo de padecer la enfermedad. Cuando
se trata de heteroplasmia existe la probabilidad de que al distribuirse las mitocondrias al
vulo este reciba todas las mitocondrias con el ADN mutado o todas las mitocondrias con
el ADN no mutado, por lo cual el individuo puede estar o no afectado. Tambin el vulo
128
puede recibir ambos ADN y presentar heteroplasmia. En resumen una mujer afectada
por una mutacin mitocondrial puede tener hijos no afectados.
Hay heterogenidad en la mutaciones del ADNmt reportadas. Esto unido al porcentaje
de mitocondrias con el ADNmt mutado explica la gran expresividad de las enfermedades
con este tipo de herencia.
Se han reportado 60 mutaciones mitocondriales. Un ejemplo de este tipo de mutacin
se observa en "la Anemia Inducida por Cloranfenicol", la Atrofia Optica de Leber, el
sndrome Diabetes-Sordera, la sordera inducida por aminoglucsidos, la encefalopata
MELAS, la epilepsia mioclnica MERRF, la cardiomiopata hipertrfica con miopata.
Herencia dignica
Prdida de heterocigocidad
129
la neurofibromatosis 1 (NF1). Los neurofibromas que caracterizan a esta enfermedad
gentica, son el efecto de prdida de heterocigocidad del gen que expresa la protena
neurofibromina que tiene tambin funcin de regulacin del ciclo celular resultando ser
un gen supresor tumoral.
RESUMEN
130
MUTACIONES MONOGNICAS
QUE AFECTAN A DIFERENTES
CLASES DE PROTENAS
Araceli Lantigua Cruz y Rolando Hernndez Fernndez
11
Existe un nmero enorme de protenas conocidas y faltan aun muchas por cono-
cer, sin embargo, a los bioqumicos el nmero actual de protenas conocidas les ha
permitido identificarlas por su estructura y funcin en al menos siete clases dife-
rentes, cada una de ellas a su vez participan en diferentes funciones celulares y
vas metablicas. En la mayora, si no en todos los casos, sus funciones se han
conocido debido a anormalidades de stas relacionadas con la expresin de enfer-
medades monognicas especficas.
En este captulo trataremos aspectos que proporcionen instrumentos generales
que permitan al lector comprender y elaborar hiptesis sobre lo que podra espe-
rarse en la patognesis de enfermedades genticas, una vez que se identifique la
relacin entre el efecto pleitrpico de la mutacin y el rol de la protena afectada
en el organismo. De igual forma, este conocimiento permitir comprender las fron-
teras entre la clnica y las bases moleculares actuales de estos defectos y las posi-
bilidades de utilizar esta informacin metablica en la proyeccin de nuevos tra-
tamientos que miniminicen los efectos indeseables de estas condiciones genticas.
Generales y permanentes
Locales y permanentes
Locales y temporales
131
generales y comunes de la mayora de las clulas del organismo; operan en funciones
bsicas como generar energa o transportar nutrientes.
Las protenas incluidas en las clases locales y permanentes y locales y temporales
son reconocidas como protenas especiales, que se expresan en tejidos especficos. Se-
rn locales y permanentes cuando su patrn de expresin est limitado a algunos tejidos
de forma permanente y diferencian las funciones del tejido, y locales y temporales
cuando se expresan en algunos tejidos, pero solamente en respuestas a estmulos espe-
cficos y temporales. Los genes especializados que codifican para estas protenas estn
en todo el genoma de todas las clulas, pero solamente se expresan en momentos y
lugares especficos durante la vida.
Dentro de estas clases de protenas y sus genes atendiendo a su expresin, hay otras
clases atendiendo a sus funciones especificas:
Protenas enzimticas.
Protenas de transporte y almacenamiento.
Protenas estructurales de clulas y de rganos.
Protenas involucradas en la homeostasis.
Protenas que se expresan durante el desarrollo.
Protenas involucradas en la proliferacin y diferenciacin celular.
Protenas que actan en el metabolismo intercelular y la comunicacin entre las
clulas.
132
enzimtica especfica puede ser un mecanismo patogentico que explique la expresin y
efecto pleiotrpico de la mutacin en estudio.
A los defectos enzimticos se les denomina errores innatos o congnitos del metabo-
lismo y estos incluyen a:
Amino cidos ( Son muchos los defectos metablicos de los aminocidos entre los
ms frecuentes la fenilcetonuria, la homocistinuria)
Carbohidratos. (Defectos de la enzima galactosa 1 fosfato uridiltransferasa que
produce la galactosemia)
Acidos orgnicos. (Defectos de la enzima metilmalonil CoA mutasa que produce
la aciduria metilmalnica)
Acidos grasos. (Deficiencia de acil CoA deshidrogenasa de cadena media)
Lpidos complejos (Deficiencia de la hexosaminidasa A que produce la enferme-
dad Tay Sachs)
Purinas. (Deficiencia de la adenosina desaminidasa causa de la inmunodeficiencia
severa combinada)
Porfirias. (Deficiencia de la porfobilingeno deaminidasa que produce la porfiria
intermitente aguda)
Cada uno de estos grupos de sustratos presenta varios defectos enzimticos conoci-
dos, pero no es el objetivo de este Captulo su estudio individual, sin embargo, desarrolla-
remos a modo de ejemplo el defecto de la enzima fenilalanina hidroxilasa que origina un
defecto metablico, consistente en el exceso del amino cido fenilalanina o hiperfe-
nilalaninemia cuya forma ms frecuente o clsica se conoce como fenilcetonuria o
PKU.
La fenilalanina incorporada al organismo por la dieta, se transforma en tirosina por la
accin de enzima fenilalanina hidroxilasa y este bloqueo enzimtico hace que la concen-
tracin de fenilalanina en sangre sea mucho mayor que lo normal. Este exceso del amino
cido se elimina en la orina como cido fenilpirvico (fenilcetonuria) dando a la orina un
olor peculiar y desagradable, pero tambin su exceso en sangre afecta el funcionamiento
del sistema nervioso central (SNC), manifestndose por convulsiones, conductas anor-
males y retraso mental severo. Por su parte la tirosina se encuentra en deficiencia en el
organismo y a partir de ella se forman pigmentos intermediarios y necesarios para la
formacin de melanina por lo que estos individuos afectados tambin se caracterizan por
su piel despigmentada y lesiones en la piel.
Podemos generalizar el efecto pleiotrpico de este defecto gentico por las siguientes
manifestaciones fenotpicas: Anormalidades funcionales del sistema nervioso central, (con-
133
vulsiones, trastornos de conducta, retraso mental), piel muy blanca con lesiones y orinas
con olor peculiar debido a la excrecin de cido fenilpirvico en ella.
La fenilcetonuria (PKU) fue descubierta por Flling en el ao 1934. Este descubri-
miento fue la base del tratamiento actual de la enfermedad, una dieta libre de fenilalanina
y su control neuropsicopeditrico estricto es suficiente para variar el efecto pleiotrpico
del gen, al menos en su espectro ms grave que es el funcionamiento del SNC. Este
defecto metablico tiene una frecuencia en algunas poblaciones de 1/2900 y al obtenerse
la experiencia de que los resultados en la mejora de las manifestaciones clnicas a nivel
del SNC, eran ms eficaces en la medida en que el tratamiento se instalaba ms tempra-
no, se proyectarn los pesquisajes o screening neonatales con el propsito de ofrecer un
tratamiento lo ms temprano posible.
Sin embargo, por razones incomprensibles haba un grupo de nios que a pesar de
tener los criterios diagnsticos clnicos y bioqumicos de niveles altos de fenilalanina en
sangre no respondan al tratamiento diettico y otros con diagnstico neonatal de
fenilalaninemia no desarrollaban estas manifestaciones aun sin tratamiento.
134
nas se requieren para la sntesis de la tetrahidrobiopterina, se encuentran en 10q22, 4p15.31
y 11q22.3. Este es un ejemplo de heterogeneidad gentica no allica, o que tambin se
conoce como heterogeneidad de locus y que se resume como diferentes loci involucrados
en un fenotipo similar.
Un grupo de estos defectos enzimticos corresponde a enzimas que se encuentran
localizadas en organelos celulares, como los lisosomas, peroxisomas y mitocondrias y
que responden a los trminos de enfermedad lisosomal, peroxisomal o mitocondrial.
Los errores congnitos de enzimas lisosomales impiden la degradacin de grandes
molculas de ganglisidos, mucopolisacridos o mucolpidos. En sentido general, estos
defectos no se identifican en el recin nacido, sino que debido a la imposibilidad de degra-
dar a estas macromolculas, se produce un almacenamiento de las mismas afectando
primero a las clulas y despus a los tejidos y rganos, por lo que las personas que
padecen de ellas van sufriendo de un deterioro progresivo que inexorablemente las lleva
a la muerte en edades tempranas de la vida.
Los defectos enzimticos casi siempre son de expresin recesiva, o sea, se requiere
de una doble dosis del gen afectado, pues la presencia del gen no mutado en una simple
dosis es suficiente para la produccin de las cantidades necesarias de estas protenas,
para lograr un metabolismo adecuado, por lo que las personas con genotipos heterocigticos
para estos tipos de mutaciones, son clnicamente asintomticos.
Los defectos enzimticos que producen altas concentraciones de pequeas molculas
afectan, de manera general, a tejidos incluso no involucrados en estos defectos metablicos,
debido a la difusin de estas sustancias en el organismo, sin embargo, los defectos
metablicos que involucran a grandes molculas daan generalmente a los tejidos espe-
cficos involucrados, ejemplos de estas consecuencias son la fenilcetonuria y las
mucopolisacaridosis respectivamente.
Una persona afectada puede tener una prdida de funciones en ms de una enzima si
la enzima:
135
PROTENAS DE TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO
136
de las grandes arterias como la aorta, tambin estn involucradas en el tejido seo y son
las fibras que forman la znula o ligamento que sostiene al cristalino en su lugar.
Un defecto estructural del gen de la fibrilina tiene un efecto pleiotrpico que explica
las caractersticas fenotpicas de este sndrome, dadas por alta talla y mltiples defectos
seos, producto de crecimiento exagerado prepuberal y debilidad de capsulas articulares,
dilatacin importante de la raz de la aorta y aneurismas articos fusiformes o disecantes
y defectos visuales debidos a la subluxacin de los cristalinos.
Dentro del grupo de mutaciones de genes de protenas estructurales celulares se
encuentran los defectos de la distrofina . El gen que codifica para esta protena es extre-
madamente grande su locus se encuentra en Xp21.2 y 2300 kb el 1.5 % del ADN de este
cromosoma.
El 60 % de sus mutaciones se corresponden con deleciones de diferentes tamaos
que incluyen desde la prdida de un exn hasta de todo el gen.
La heterogeniedad allica ms importante se relaciona con el tipo y localizacin de las
mutaciones y las alteraciones estructurales de la distrofina. Se describe, adems de la
distrofia muscula Duchenne, la distrofia muscular Becker y su fenotipo difiere funda-
mentalmente por su severidad clnica y tejido muscular afectado.
Las mujeres heterocigticas para estos tipos de distrofias musculares, generalmente
no padecen de la enfermedad, sin embargo en ocasiones, por defectos en la inactivacin
aletoria de los cromosomas X hay mujeres heterocigticas que expresan importantes
sntomas de la enfermedad.
Se describen en esta clase las protenas con funcin de proteccin inmune, como las
involucradas con el sistema de complemento, entre las que se encuentran la deficiencia
del complemento C3 y que se expresa por infecciones bacterianas recurrentes; las pro-
tenas que intervienen en la coagulacin como el factor VIII, cuya deficiencia se expresa
como la hemofilia A; las protenas inhibidoras de proteasas como la alfa 1antitripsina que
cuando presenta mutaciones deficientes se expresa por enfermedad pulmonar obstructiva
y defectos de funcin heptica.
137
res de molculas sealizadoras, como los defectos del gen de la polaridad de segmentos
denominado sonic hedghog que se expresa como holoprosencefalia dentro de las pri-
meras y mutaciones del gen del receptor del factor de crecimiento fibroblastico 3 (FGFR3)
que se expresa como acondroplasia en la segunda y protenas ribosomales como el de-
fecto de S19 que expresa la anemia congnita Diamond-Blacfan.
Los genes que codifican para estos tipos de protenas ejercen control positivo y nega-
tivo en la regulacin de las divisiones celulares. Han sido detectadas en investigaciones
sobre el cncer, son de dos tipos fundamentales los oncogenes y las protenas supresoras
tumorales Las primeras son el resultados de mutaciones en genes denominados
protoncogenes y las segundas son codificadas por genes denominados supresores
tumorales. La neoplasia endocrina mltiple o MEN 2 es un ejemplo conocido que ilustra
defecto del tipo protenas receptoras tirosina quinasa (oncogen Ret) y el retinoblastoma
tumor ocular maligno de la infancia expresado por mutaciones que afectan la funcin de
una protena del tipo supresora tumoral.
Estas son protenas con funciones muy especiales, en esta clase estn incluidas pro-
tenas del tipo de canales que comunican clulas -clulas como las conexinas, mutaciones
de la conexina 26 son responsables de un tipo de sordera no sindrmica.
Protenas receptoras de metabolitos con funciones intercelular como los recepto-
res de lipoprotenas de baja densidad las mutaciones de los genes que codifican para
estos tipos de protenas producen la hipercolesterolemia familiar .
Protenas receptoras de luz como la rodopsina, mutaciones de los genes de la rodopsina
producen un tipo de retinosis pigmentaria del tipo autosmico dominante. Mutaciones de
los genes de la hormona de crecimiento expresan una forma de baja talla extrema o
enanismo. Se encuentran tambin en esta clase, las protenas de receptoras de hormo-
nas que cuando presentan mutaciones en sus genes pueden dar lugar a defectos de
insensibilidad a andrgenos, como el sndrome de feminizacin testicular y por ltimo los
138
defectos de protenas transductoras de seales que dan lugar a sndromes como el
pseudohipoparatiroidismo.
La interaccin del genoma con el ambiente es fcilmente comprensible cuando un
individuo se pone en contacto con drogas especficas. Es en estos casos que las clases de
proteinas especficas atendiendo a su expresin se declaran como locales y temporales.
A este aspecto de la gentica bioqumica se le denomina farmacogentica. Dos ejemplos
pueden ilustrar los defectos de esta clase de protenas:
La hipertermia maligna y de deficiencia de G6PD (glucosa 6 fosfato deshidro-
genasa): La hipertermia maligna tiene una herencia autosmica dominante, pero sola-
mente se expresa de manera dramtica como respuesta a la inhalacin de anestsicos
como el halotane y de relajantes musculares, como la succinilcolina provocando una
hipertermia muy severa contraccin muscular e hipercatabolismo. Es una importante
causa de muerte en la anestesia. La anormalidad fisiolgica consiste en una elevacin de
calcio en el sarcoplasma de la clula muscular. La mayora de los casos estn asociados
con una mutacin en el gen denominado RYR1 que codifica para una protena del canal
de liberacin de calcio.
La glucosa 6 fosfato deshidrogenasa es una enzima cuyo gen se encuentra ligado al
cromosoma X. Los hombres hemicigticos para variantes deficientes del alelo normal,
se ponen a riesgo de padecer de una anemia severa tras la ingestin de drogas, como la
primaquina utilizada contra la malaria o cuando comen judias blancas, de ah que a este
defecto se le denomine tambin como favismo. Las diferencias entre la anemia que se
produce frente a la droga antimalrica y el favismo se deben a que en el favismo la
mutacin es ms severa. Las manifestaciones clnicas son la anemia hemoltica e ctero.
Respuesta al metabolismo del alcohol: El alcohol se degrada en el hgado por la
enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) a acetalaldehido y posteriormente este metabolito
secundario es degradado por la acetalaldehido deshidrogenasa (ALDH). Existen dos
variantes de ALDH: 1. que se encuentra en el citoplasma celular, y 2. que acta en las
mitocondrias. En los asiticos se tolera muy mal el alcohol debido a que en esta poblacin
la ALDH 2 esta ausente con alta frecuencia, por lo que se piensa que esta es la causa de
que en estas poblaciones se encuentre la menor incidencia de alcoholismo y de enferme-
dad heptica secundaria al consumo excesivo de alcohol.
139
RESUMEN
140
MTODOS Y APLICACIONES
DEL ADN RECOMBINANTE
Se nombra clonacin a todos aquellos procedimientos que tienen como objetivo obte-
ner mltiples copias idnticas (o casi idnticas) de molculas, clulas, etc. Estos procedi-
mientos son indispensables cuando se necesita tener un nmero grande de molculas o
clulas para estudios posteriores. As, la clonacin del ADN se refiere a los procedimien-
tos encaminados a obtener numerosas copias idnticas (o casi idnticas) de un fragmento
especfico de ADN. En general, estos procedimientos son de dos tipos: Los realizados in
vivo y los que se hacen in vitro. La clonacin in vivo es aquella que se realiza en
organismos vivos (casi siempre microorganismos) para la reproduccin del ADN. Por su
parte la clonacin in vitro emplea componentes celulares aislados para realizar este
propsito. El procedimiento por excelencia que parea la clonacin in vitro es la reaccin
en cadena de la polimerasa o PCR (del ingls Polymerase Chain Reaction). A continua-
cin se describen los fundamentos de estos dos procedimientos.
141
Clonacin in vivo
Para la clonacin in vivo, el ADN que se desea clonar se transfiere a una clula con
la ayuda de un vector. El vector es otra molcula de ADN que tiene la propiedad de poder
replicarse de forma autnoma. Cuando se usa solamente con este propsito recibe el
nombre de vector de clonacin. Para la formacin del vector de clonacin adems de las
molculas de ADN se requiere del uso de enzimas de restriccin y de ADN ligasas.
142
Vector
Figura. 12.1. Tipos de corte de las enzimas de restriccin. Observe que la secuencia de bases de ambas
hebras del ADN son idnticas en relacin al eje de corte, por ello se dice que las secuencias son
palindrmicas.
143
Tabla 12.1 Enzimas de restriccin
Los plsmidos son molculas de ADN circulares que se replican de forma indepen-
diente al ADN cromosmico en bacterias y levaduras. Son portadores de genes no
cromosmicos entre ellos aquellos que confieren resistencia a antibiticos, caracterstica
muy aprovechada para identificarlos. Los plsmidos pueden incorporar fragmentos de
ADN hasta de 10 kb de longitud.
Los bacterifagos son virus compuestos por un ADN de doble hebra relativamente
largo, cubierto por protenas. Infectan las bacterias al inyectar su ADN y dejando fuera
de la bacteria sus protenas. Aprovecha el aparato metablico de la bacteria para la
replicacin de su ADN. Los bacterifagos admiten ADN extrao hasta de 50 kb de
longitud.
Los cromosoma artificiales de levadura o YAC constan de todos los elementos nece-
sarios para su replicacin, como son, las secuencias de replicacin autnoma, los
centrmeros y los telmeros. En ellos se han logrado insertar molculas de ADN de
varios centenares de kb.
144
Transformacin del organismo huesped y obtencin del ADN especfico
Figura. 12.2. Si se expone el ADN de inters y el vector a la misma enzimas de restriccin que generen
extremos monofobrilares pueden unirse una a otra a sus secuencias complementarias mediante la accin de
enzimas ligasas lo que crea una molcula de ADN recombinante, es decir, de dos orgenes distintos: el
vector y la secuencia de inters, que puede ser humana.
145
Para poder seleccionar las clulas que han incorporado el vector, ste habitualmen-
te se construye en ADN que contienen genes de resistencia a determinados antibiticos.
Por ejemplo, puede construirse el vector con un plsmido que porta los genes que
confieren resistencia a la tetraciclina y a la ampicilina. Se selecciona la enzima de
restriccin que corte el ADN precisamente en el interior de uno de estos genes (diga-
mos el de la tetraciclina). Si se toma como hospedera una bacteria sensible a ambos
antibiticos se lograr la tranformacin deseada pues aquellas que incorporen el plsmido
se transforman en resistentes a la ampicilina. Si las bacterias se hacen crecer en un
medio al cual se ha aadido la ampicilina, solamente podrn crecer adecuadamente las
clulas que incorporaron el plsmido. Las bacterias que incorporaron el plsmido don-
de no se produjo la recombinacin, sern resistentes a ambos antibiticos. Para identi-
ficarlos se hace una rplica de la placa de cultivo. Colocando un material absorvente
(puede ser papel de filtro) sobre la placa para que algunas bacterias se adhieran a l y
despus cuidadosamente, se colocan sobre otra placa de cultivo que contiene la
tetraciclina. Las colonias que aparecen en la placa original y que no aparecen en la
replica son las sensibles a la tetraciclina y por lo tanto las que incorporaron el vector.
Estas colonias se siembran de nuevo en un medio enriquecido para lograr su rpido
crecimiento.
Las colonias de bacterias que poseen una secuencia especfica pueden ser selec-
cionadas tambin al transferir su ADN a filtros de nitrocelulosa, y desnaturalizarlos
para obtener ADN de una sola hebra, que se pueden hibridar con oligonucletidos
marcados radioactivamente (sondas moleculares) y as detectar las colonias que
contienen la secuencia especfica y cultivarlas aparte. Las sondas moleculares son
molculas de ADN de una sola hebra que se obtienen por sntesis artificial a partir
de sus nucletidos componentes. Las sondas se utilizan para localizar una secuencia
especfica de ADN. Al desnaturalizarse el ADN sus dos hebras se separan, si se
aade una sonda cuya secuencia sea complementaria a un sector de ese ADN, la
sonda se unir al mismo por complementariedad de bases. Como la sonda est mar-
cada con istopos radiactivos o reactivos fluorescentes, se puede localizar con rela-
tiva facilidad.
Los mtodos de anlisis molecular difieren de acuerdo con el tipo de molcula al cual
se aplican, ADN, ARN o protenas. Entre ellos se encuentran:
146
- Para el anlisis del ADN se aplican fundamentalmente:
. Mtodo de Southern (Southern blotting).
. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
. Los estudios de ligamiento.
. La secuenciacin.
- Para el estudio de ARNm:
. Northen blotting.
- Para el estudio de las protenas:
. Western blotting.
Son ejemplo de pruebas moleculares indirectas las realizadas por ligamiento usando los
polimorfismos de ADN como marcadores moleculares.
Ampliemos ms en los fundamentos de estas tcnicas.
En 1985 Saiki Mullis y sus colaboradores describieron una tcnica conocida como
PCR, que consiste en la amplificacin in vitro de secuencias especficas de ADN. Me-
diante este procedimiento se pueden generar grandes cantidades de un fragmento de
ADN, a partir de una cantidad mnima del mismo. Por lo tanto el PCR es una forma de
clonacin in vitro de un segmento de ADN.
Se basa en la propiedad que tiene las dos cadenas de ADN de disociarse y reasociarse
por calentamiento y enfriamiento. Consiste en la prctica en ciclos que constan de las
siguientes etapas (Figura 12.3):
147
Figura 12.3. Reaccin de la cadena de la polimerasa. Observe que de acuerdo con el nmero de ciclos
efectuados el nmero de copias de ADN aumenta en progresin geomtrica.
148
El nmero de ciclos de un PCR depende de la cantidad de ADN del que se parte y las
cantidades finales, pero no debe ser mayor de 50. Con slo 20 a 30 ciclos del proceso
descrito, se pueden obtener varios millones de copias de la secuencia de inters, flanqueada
por los cebadores utilizados en la amplificacin.
Si bien la reaccin de PCR se puede realizar manualmente, en los ltimos aos se ha
generalizado el uso de termocicladores programados, mediante los cuales se logra la
automatizacin de este proceso en menos de 3 horas.
Los productos que se obtienen del PCR pueden separase mediante electroforesis en
gel de agarosa o poliacrilamida. La seleccin de uno u otro depende del tamao de los
segmentos a separar, los que se visualizan generalmente con bromuro de etidio o tincin
con plata.
Una vez obtenida la secuencia de ADN amplificada por PCR, se debe proceder a la
identificacin de mutaciones o variantes polimrficas puntuales por medio de anlisis con
enzimas de restriccin. En este caso, la presencia de la mutacin en el ADN problema se
visualizar por la prdida o ganancia de un fragmento de restriccin, segn si la mutacin
destruya o cree una diana para la enzima utilizada. Tambin pueden utilizarse cebadores
especficos para cada alelo, no requiriendo estas tcnicas el uso de enzimas de restric-
cin
Una de las principales desventajas del PCR es la posibilidad de contaminacin, lo cual
debe tener presente quien desarrolle esta tcnica.
Tiene una utilidad extraordinaria para el diagnstico preciso de los trastornos heredita-
rios cuyos defectos moleculares hayan sido definidos. Tambin se ha aplicado en la de-
teccin de patgenos infecciosos y la identificacin de heterogeneidad gentica asociada
a enfermedades.
Con la reaccin en cadena de la polimerasa, se pueden realizar estudios con escaso
material gentico, como pueden ser gotas de sangre seca, pelos, semen, etc., as como
muestras de archivo, como bloques de tejidos en parafina y fijados en formol, lo que
permite importantes trabajos retrospectivos y una amplia aplicacin en tcnicas forenses.
Este mtodo fue descrito por Edward Southern en 1975, de ah su nombre. Se basa en
la transferencia por capilaridad de fragmentos de ADN digeridos con enzimas de restric-
149
cin, separados por electroforesis en gel de agarosa. La corrida electrofortica permite
separar los mltiples fragmentos obtenidos de acuerdo con su peso molecular. Los ms
ligeros migran o se separan ms del origen donde se aplic la muestra, mientras que los
ms pesados quedan ms cercanos al origen. Luego se procede a la separacin de la
doble hlice mediante la desnaturalizacin alcalina. Estas cadenas simples de ADN se
transfieren por capilaridad, tal como ocurre con la tinta en un papel secante (de ah la
palabra blotting o mancha), a un soporte slido que puede ser un filtro de nylon o de
nitrocelulosa. Posteriormente, el filtro se hibrida con una sonda marcada radioactivamente,
especfica del fragmento de ADN que queremos analizar y, despus de lavar para elimi-
nar el exceso de sonda que no ha hibridado con los fragmentos de inters, se exponen a
una placa fotogrfica en un cassette con pantalla amplificadora y se someten a 70oC
centgrados durante 48 a 72 horas, lo que permite visualizar los fragmentos de inters al
revelar la placa (Figura 12.4).
Luego del Southern Blotting se describieron las tcnicas para el estudio molecular del
ARN y de las protenas. Como analoga en su denominacin con la primera (Southern en
Figura. 12.4. Esquema que representa el procedimiento de transferencia de ADN (Southern blotting). Los
detalles se explican en el texto.
150
Ingls significa en el sur) se prefiri denominarlas Northen blotting y Western blotting
(que en ingls significan en el norte y en el oeste, respectivamente).
El Northen blotting es el estudio de ARNm mediante electroforesis en geles de agarosa
desnaturalizantes. La transferencia del ARN a un filtro de nylon se realiza del mismo
modo que en el mtodo de Southern, aunque en este caso no es necesario realizar el
tratamiento de desnaturalizacin con hidrxido sdico, pues el ARN es un cido nucleico
de hebra simple. El ARN transferido al filtro de nylon se hibrida del mismo modo que el
ADN. Este mtodo, denominado Northern blotting, permite confirmar la presencia de un
ARN determinado en un tejido, conocer el tamao del transcripto y apreciar el nivel de
expresin de un gen, a la vez que observar fragmentos de ARN inmaduros. En ciertas
ocasiones es posible observar la presencia de varios ARNm para un mismo gen, los cuales
pueden aparecer debido al uso de lugares de empalme alternativo, a la existencia de lugares
de poliadenilacin distintos, al empleo de varios promotores o a otros mecanismos.
Por medio del Western blotting se puede obtener informacin sobre el tamao de la
molcula protenica, as como de la cantidad de la protena sintetizada. Ello se logra
mediante el aislamiento de la protena extrada de las clulas, separada, segn la masa
molecular, mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y luego transferida a una
membrana que se incuba con anticuerpos que reconocen especficamente la protena de
inters la cual puede ser el producto de un gen mutado. La reaccin antgeno anticuerpo
puede ser detectada por un segundo anticuerpo dirigido contra el primero y que presenta
una marca que permite localizarlo, con el empleo de mtodos histoqumicos, fluorescentes
o por radiaciones. Un ejemplo de uso de esta tcnica es su aplicacin para detectar la
distrofina en los pacientes con distrofias musculares ligadas al X.
Existen varios procedimientos para el estudio indirecto del gen mutado. Todos ellos se
basan en la asociacin (ligamiento) entre secuencias del ADN que no siempre pertene-
cen al gen buscado y ste. La lgica del pensamiento es la siguiente, si el gen mutado est
generalmente acompaado de una secuencia determinada fuera de l, la presencia de
esta secuencia es un indicador indirecto de la presencia del gen mutado. El uso de estos
procedimientos sern estudiados en el captulo 13. Aqu solamente haremos una breve
referencia a uno de ellos.
151
ADN de diferente longitud que pueden ser separados por electroforesis en un soporte
adecuado (agarosa, poliacrilamida, etc.).
Una mutacin puede tener como resultado que se borre uno de los sitios de restriccin
para esa enzima, o por el contrario que aparezca un nuevo sitio de restriccin. En ambos
casos aparecen nuevos fragmentos de longitud diferente que pueden ser detectados por
comparacin con los resultados habituales.
Si un alelo especfico est asociado (ligado) con uno de esos fragmentos, entonces se
puede inferir la presencia del alelo al identificar ese fragmento. Por lo tanto se trata de un
mtodo indirecto pues lo que se identifica directamente no es el alelo buscado sino el
fragmento que habitualmente est asociado con l (Figura 12.5).
Figura 12.5. Familia donde II-1 est afectado con fibrosis qustica. El gen para la fibrosis qustica segrega
junto con el alelo 2 del RFLP. Como II-1 es homocigtico para el alelo 2 tambin lo ser para el gen de la
fibrosis qustica y por lo tanto ser enfermo.
SECUENCIACIN DE ADN
152
didesoxinucletido la polimerizacin se interrumpe, pues como este nucletido carece del
OH de la posicin 3 no puede unirse con el siguiente.
En los mtodos clsicos, no automatizados, para la deteccin se utilizan cuatro mezclas
de reaccin y en cada una de ellas se coloca un desoxirribonucletido marcado
radiactivamente. Con este procedimiento se obtiene un grupo de cadenas de distintos tama-
os, cada una de las cuales finaliza en el didesoxinucletido marcado aadido a la mezcla.
Los fragmentos obtenidos se separan segn su tamao por electroforesis en gel de
poliacrilamida capaz de separar segmentos que difieran en un solo nucletido y se visualizan
mediante autorradiografa. La lectura de los tamaos de los fragmentos obtenidos con cada
didesoxirribonucletido se corresponde con la secuencia complementaria del ADN molde.
En la actualidad existen equipos (secuenciadores o autoanalizadores de ADN) que
realizan la lectura de los geles de forma automtica. En un refinamiento de la tcnica se
emplean marcadores fluorescentes de cuatro fluorescencias distintas, obteniendo la se-
cuencia de forma mucho ms rpida, a la vez que analiza simultneamente varias se-
cuencias. El perfeccionamiento de la tcnica de secuenciacin automtica del ADN est
permitiendo un avance considerable en el estudio del genoma humano.
RESUMEN
1. Las herramientas que se utilizan en Gentica molecular incluyen, entre otras, las enzimas
de restriccin y ligasas, las sondas, los vectores y los hospederos.
2. Para obtener copias suficientes de ADN puede utilizarse las tcnicas de clonacin in
vitro o in vivo (Reaccin en cadena de la Polimerasa).
3. La clonacin in vivo incluye la produccin de fragmentos de ADN con el uso de
endonucleasas de restriccin, la incorporacin de ste a un vector adecuado (plsmido,
fago o YAC), la introduccin de dicho vector en un hospedero y la posterior seleccin
de clones que contengan una secuencia especfica.
4. Mediante mtodos de estudio molecular se pueden estudiar ADN, protenas y ARN.
Los estudios de ADN pueden ser directos (PCR, Southern blotting y la secuenciacin)
o indirectos (RFLP). Los mtodos para estudiar ARN y protenas se denominan:
Northern blotting y Western blotting, respectivamente.
153
LIGAMIENTO
Y RECOMBINACIN
154
que la persona sentada en la 1ra. butaca y la sentada en la butaca 20ma., que estn tan
alejadas que no pueden comunicarse entre s).
Por tanto en un mismo cromosoma se ubican muchos de genes y entre ellos existirn
diferentes formas de segregacin a los gametos que depender de la distancia fsica
entre ellos.
Cuando entre dos genes ubicados en un mismo cromosoma existe una distancia que
no permite que ocurra el entrecruzamiento de forma libre o al azar se dice que estos
genes estn ligados. (Figura 13.1 )
A
B
Figura. 13.1. Se muestra un cromosoma con 4 genes que por sus distancias entre ellos segregan de forma
diferente durante la meiosis
155
Ilustremos las relaciones entre estos genes diferentes ubicados en un mismo cromosoma
mediante cruces de hbridos. Los genes representados anteriormente A, B, C y D regu-
lan los siguientes caracteres:
Si hacemos un cruce prueba o retrocruce (ver Captulo 5) entre plantas con semillas
lisas y tallo alto (AADD) con plantas de semillas rugosas y tallo enano (aadd), los resul-
tados que debemos esperar de acuerdo con las Leyes de Mendel, sera una descendencia
con el 25% de cada uno de los cuatro fenotipos posibles, esto es, semillas lisas y tallo alto,
semillas rugosas y tallo enano, semillas lisas y tallo enano, y semillas rugosas y tallo alto.
Sin embargo, si los genes que determinan estos caracteres se encuentran en el mismo
cromosoma deban segregar juntos hacia el mismo gameto y los descendientes solo mos-
traran los fenotipos parentales. Estos resultados se pueden explicar si suponemos que
estos dos genes se encuentran muy separados en el cromosoma y por el entrecruzamien-
to que se produce durante la meiosis I; hayan pasado de un cromosoma a su homlogo
en el intercambio entre sus cromtidas.
A los fenotipos que aparecen en los descendientes y que no se corresponden con los
paternos se les denomina fenotipos recombinantes, pues son el resultado de la
recombinacin gentica entre las cromtidas de los cromosomas homlogos.
En este cruce la distancia entre los genes A-D es tan grande que el entrecruzamiento
ocurre al azar y aparecen 4 tipos de descendientes (Figura 13.2), 2 no recombinantes,
pues la combinacin de genes en los gametos se produjo sin que ocurriera entrecruza-
miento y 2 recombinantes, pues los gametos recibieron una combinacin de genes nueva
debido al entrecruzamiento entre las cromtidas homlogas (Figura 13.2).
En este cruce se cumple la Ley de Segregacin independiente pues aparecen 4 tipos
de hijos, 2 no recombinantes (fenotpicamente iguales a los padres) y 2 recombinantes
(con combinaciones fenotpicas nuevas diferentes a los padres)
Una situacin diferente se presenta cuando los genes estn ubicados muy cerca uno de
otro en el mismo cromosoma. Como la distancia entre ellos es muy corta la posibilidad de
un fenmeno de entrecruzamiento entre ellos es muy baja y esos genes segregarn juntos
en los gametos. En este caso, los descendientes exhibirn en proporcin igual (50%) los
fenotipos parentales (Figura 13.3). En estos casos se dice que entre esos genes existe un
ligamiento completo.
156
Figura 13.2. Cruce entre dos organismos cuyos caracteres estn determinados por genes muy separados en
el mismo cromosoma. La distancia entre los genes permite un entrecruzamiento muy frecuente, de manera
que origina gametos recombinantes en la misma proporcin que los no recombinantes. Los descendientes
mostrarn fenotipos parentales y recombinantes en la misma proporcin, 25% de cada uno.
157
Figura 13.3. Cruce entre dos organismos cuyos caracteres estn determinados por genes ubicados muy
cercanos en el mismo cromosoma. La distancia entre los genes es tan corta que no es posible el fenmeno
de entrecruzamiento y los genes segregan juntos hacia los gametos. Los descendientes reproducen los
fenotipos paternos en un 50% de cada uno. No hay fenotipos recombinantes.
Una tercera posibilidad es que los genes estn a una distancia intermedia, ni tan aleja-
dos como en el primer caso, ni tan cercanos como en el segundo. Esta distancia media
hace que el evento de entrecruzamiento entre los dos genes sea menos frecuente y por
158
tanto los fenotipos recombinantes que se obtienen en la descendencia sea menor al 25%
observado en el primer caso (Fig. 13.4). En ese caso se dice que entre los genes existe un
ligamiento incompleto.
Figura 13.4. Cruce entre organismos con caracteres cuyos genes estn medianamente separados en el
mismo cromosoma. Aunque parezca igual al primer cruce, la diferencia estriba en que el evento de
entrecruzamiento es menos frecuente y por tanto los gametos que portan los genes recombinados estn en
menor proporcin y por lo tanto originan un menor nmero de descendientes.
159
En el caso del ligamiento Incompleto en la progenie aparecen 4 tipos de hijos, 2 no
recombinantes, que aparecen siempre en mayor proporcin numrica (pudiera ser el
80%) y 2 recombinantes, que aparecen siempre en menor cantidad numrica (sera el
20%).
Cuando los genes situados en un cromosoma estn ligados se puede calcular la distancia
aproximada entre los genes mediante lo que se llama frecuencia de recombinacion (FR)
50 hijos recombinantes
FR = = 0,5 o 50%
100 hijos totales
En el segundo cruce:
0 hijos recombinantes
FR = = 0
100 hijos totales
En el tercer cruce:
20 hijos recombinantes
FR= = 0,2 o 20%
100 hijos totales
160
No obstante, la FR no ofrece un valor real de la distancia entre los genes, porque en el
caso del ligamiento completo, como no aparecen hijos recombinantes la FR=0, pero entre
2 genes no puede existir una distancia de cero, ya que dos cosas no pueden ocupar el
mismo espacio fsico. Cuando entre los genes se cumplen la Ley de Segregacin Inde-
pendiente la FR es de 50%, pues la mitad de los hijos son recombinantes, pero todos los
genes que se ubican en un cromosoma no pueden tener una distancia de 50 unidades de
recombinacin, ya que existirn genes ms alejados.
Esto nos indica que la distancia que brinda la FR es una medida terica de aproxima-
cin y no un valor real de longitud, pero s nos define si entre los genes de los loci estudia-
dos existe ligamiento completo o incompleto.
En resumen la FR nos permite llegar a las siguiente conlcusiones:
Otro aspecto que hay que tener en cuenta cuando se estudian genes ligados es la
ubicacin de estos en los cromosomas homlogos, lo que se designa con el nombre de
fase.
Retomemos el ejemplo del tercer cruce prueba. En este caso uno de los padres es
doble heterocigtico. Pudiera entonces haber dos situaciones en relacin con la ubicacin
de los genes; bien que los dos genes que determinan los caracteres dominantes estn en
el mismo cromosoma, bien que se encuentren en cromosomas homlogos. En el primer
caso ambos genes fueron heredados del mismo progenitor y en el segundo fueron here-
dados de progenitores diferentes.
Cuando los dos genes que determinan los caracteres que se estn estudiando (en este
caso los dominantes) se encuentran en el mismo cromosoma se dice que estn en acopla-
miento o en cis. Cuando estn en cromosomas homlogos se dice que estn en repulsin
o trans.
Para diferenciar estas dos situaciones se debe realizar un retrocruce. Si en los resul-
tados de ste se observa que los individuos no recombinantes reproducen los fenotipos
paternos, entonces los genes bajo estudio se encontraban en acoplamiento (Fig. 13.5).
Si por el contrario son los descendientes recombinantes los que reproducen los fenotipos
paternos, los genes bajo estudio estn en repulsin (Fig. 13.6).
161
Figura 13.5. Genes en acoplamiento. Cuando los genes bajo estudio estn en acoplamiento los
descendientes no recombinantes (cromosomas como rectngulos azul plido) reproducen los fenotipos
paternos.
162
Figura 13.6. Genes en repulsin. Cuando los genes bajo estudio estn en repulsin los descendientes
recombinantes (cromosomas con rectngulo azul plido) reproducen los fenotipos paternos.
163
LOCALIZACIN DE GENES LIGADOS
Existe un tipo de estudio que permite establecer la posicin relativa de varios genes
en un cromosoma, este mtodo se llama test de tres puntos.
En el ejemplo siguiente se demuestra cmo calcular la posicin de varios genes dife-
rentes ubicados en el cromosoma X de la mosca Drosophila melanogaster.
Existen 3 genes diferentes ubicados en el cromosoma X de esta especie de mosca
que son:
Nota: El signo + se utiliza en caracteres de animales y plantas para representar al alelo normal o no mutado
y se llama silvestre, este alelo domina sobre los alelos mutados.
Si cruzamos una hembra (XX) con fenotipo silvestre pero heterocigtica para los tres
genes mutados con un macho (XY) que presenta el fenotipo mutado por ser hemizigtico
para los 3 genes mutados podemos observar la descendencia de machos de este cruce
que sern los que expresaran en su fenotipo la combinacin de genes producidos por
entrecruzamiento o no entre los cromosomas X de la madre, as:
sc v eq / + + + sc v eq
164
Descendencia de machos (genotipos hemicigticos)
Los fenotipos 1 y 2 son no recombinantes, pues cada uno de ellos expresa los carac-
teres que aparecen en cada uno de los cromosomas X de la madre sin entrecruzamiento.
En total se obtuvieron (8 576 + 8 808) 17 384 no recombinantes.
Los fenotipos 3 y 4 son el resultado de recombinanciones entre sc y v, lo que dio lugar
a dos combinaciones diferentes a la de los padres en (681 + 716) 1 397 descendientes.
Tambin 5 y 6 son recombinantes entre los genes v y eq, produciendo (1 002 + 997) 1
999 hijos con combinaciones nuevas diferentes a la de los padres.
Por su parte los grupos 7 y 8 se producen por doble entrecruzamiento entre sc-v-eq,
tambin son recombinantes pues presentan otras combinaciones gnicas nuevas diferen-
tes de las observadas en los padres, en un total de (4 + 1) 5 descendientes.
Con estas cifras podemos dibujar el mapa de ligamiento entre estos 3 genes
165
Distancia entre
sc-v = FR sc-vI + FR DR
6,72 + 0,02
sc _______________ v __________________ eq
6,74 9,74
Unidades de Unidades
Recombinacin Recombinacin
sc eq
16,38
Coincidencia = 3,22 %
166
Esto significa que se observ el 3,22% de los dobles entrecruzamientos esperados o
sea, los esperados y los observados coincidieron slo en el 3,22%, por tanto el 96,78% de
los dobles entrecruzamientos fueron interferidos.
Se debe esperar que ocurran el 100 % de los dobles entrecruzamientos, como sola-
mente se observ el 3,22 % de lo esperado la interferencia fue del 96,78 %.
Localizacin fsica: Usa una variedad de mtodos para definir la ubicacin de genes
en un cromosoma especifico. Con estos mtodos se puede construir mapas de posicin
de genes que reflejen la distancia fsica entre los genes ubicados en un cromosoma.
167
Localizacin gentica: Se basa en el uso de tcnicas genticas que construyen
mapas presentando la posicin de genes y otras secuencias del genoma. Estas tcnicas
incluyen estudios mediante rboles genealgicos y con herramientas de Biologa Molecular
168
Figura 13.7. Se representa la formacin de hbridos somticos usados para el mapeo fsico de genes. Se
muestra el uso del virus sendai para producir clulas con dos dotaciones cromosmicas de diferentes
especies o de dos individuos de una especie
169
Estudios con hbridos de clulas somticas en los cuales los cromosomas humanos
pueden presentar aberraciones en su estructura, que permiten ubicar a genes a partir de
su producto de expresin. No slo en un cromosoma especfico sino en zonas especficas
del cromosoma como en el brazo corto, en el brazo largo e incluso en bandas especficas
de un cromosoma.
Tambin se estn estudiando hbridos de clulas somticas que son mantenidas en
cultivo, que pertenecen a un paciente que presenta hasta tres enfermedades genticas
diferentes y as pueden ubicarse estos genes en un cromosoma especfico y en zonas
especficas del cromosoma.
La construccin de mapas fsicos que usan hbridos de clulas somticas son mtodos
indirectos que requieren la seleccin de clulas humanas con diferentes caractersticas
como aberraciones cromosmicas, pacientes con 2 o ms enfermedades genticas y
marcadores bioqumicos que puedan ser detectados por lo que resultan estudios comple-
jos. En la actualidad con el desarrollo de las tcnicas de Biologa Molecular se han desa-
rrollado mtodos mas sensibles y con mayor resolucin para construir mapas fsicos de
los cromosomas en el hombre.
Mapas de restriccin: Este ubica la posicin relativa de una secuencia de ADN
mediante el uso de endonucleasas de restriccin
Hibridacin in situ fluorescente (FISH): Mediante esta tcnica se localizan marca-
dores en un segmento de ADN, con una sonda, la cual es construida artificialmente en el
laboratorio con una secuencia nucleotidica conocida que sirve para hibridar con el seg-
mento de ADN complementario a su secuencia en el cromosoma (Captulo 7).
Mapas por restriccin: Este mapeo utiliza marcadores genticos que pueden ser
localizados por la posicin de sitios polimrficos (muy variables en cuanto a su secuencia
nucleotdica ) que son cortados por enzimas de restriccin especficas.
La forma mas sencilla de construir un mapa de restriccin es comparar el tamao de
los fragmentos que se producen cuando se corta un fragmento de ADN con dos diferen-
tes enzimas de restriccin. Un ejemplo es presentado en la Figura 13.8.
Analizando la figura 13.9 primero el ADN se digiere por la enzima EcoR1 y los frag-
mentos que aparecen se miden mediante electroforesis en gel de agarosa. Luego la
molcula es digerida con la enzima BamH1 y los fragmentos resultantes se miden de
igual forma. Los resultados de estas mediciones nos demuestran un nmero de fragmen-
tos de restriccin producidos por cada enzima. Esto origina un polimorfismo de longitud
de los fragmentos de restriccin, que son secuencias que se caracterizan por tener sitios
especficos de reconocimiento para las endonucleasas de restriccin (enzimas de natura-
leza bacteriana las cuales cortan el ADN en secuencias especficas, cada enzima tiene
una secuencia de corte y se denominan segn la bacteria o microorganismo de las cuales
se obtiene.)(Ver Captulo 12)
170
Figura 13.8. Mapeo de restriccin: el objetivo es mapear sitios con las enzimas de restriccin Eco R1 (e) y
Bam H1 (b) en un fragmento lineal de 4,9 kb. Los resultados de la accin de 1 o las 2 enzimas como se
presenta en la parte superior de la figura. Los tamaos de los fragmentos que aparecen despus del corte
por ambas enzimas nos permiten construir un mapa segn se explica en la parte inferior de la figura. No
queda claro la posicin de uno de los tres sitios de restriccin que surgen de la accin de la enzima bam h1.
(Tomado de www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi/ libro t.a.Brown Genomes 2da ed. Captulo 5 eds bios
scientific publishers ltd 2002 )
171
Figura 13.9. Cuando se hace la digestin parcial con la enzima Bam H1 se indica que el mapa II es el
correcto. (Tomado de www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi/ libro t.a. Brown Genomes 2da ed. Captulo 5
eds bios scientific publishers ltd 2002 )
172
Figura 13.10. Hibridizacin in situ de cromosomas humanos con fragmentos de ADN lineales de secuencia
conocida y marcados con colorantes fluorescentes que permiten detectar la posicin fsica dentro de un
cromosoma de un fragmento o gen conocido. (Tomado de www.ncbi.nlm.nih.gov./ books/ bv.fcgi/ libro
Genomes t.a.Brown eds Bios Scientific Publisher ltd , Oxford, UK 2002 captulo 5 )
173
Figura 13.11. Se muestra otra tcnica de hibridizacin in situ que se coloca agarosa licuada con cromosomas en
un portaobjeto tratado con enzimas de restriccin, la agarosa solidifica y los cromosomas quedan atrapados se le
aade iones magnesio para que la estructura cromosmica se active e hibridize con sondas de ADN conocidas
marcadas con colorantes fluorescentes. (Tomado de www.ncbi.nlm.nih.gov/books/ bv.fcgi/ libro t.a. Brown
Genomes 2da edicin captulo 5 eds. Bios Scientific Publishers, Oxford, Uk 2002 )
174
Mapas genticos
Este nos brinda ms informacin que el mapa fsico pues aunque este ltimo ha desa-
rrollado tcnicas de alta resolucin, el mapa gentico nos brinda una visin ms exacta de
la segregacin de 2 genes (que se encuentran ligados) a travs de las generaciones de
una familia o de un grupo de familias con caractersticas genticas especficas y nos
posibilita localizar ms exactamente un gen causante de una enfermedad heredable, que
sin estos mtodos slo se pueden estudiar por su expresin fenotpica.
El anlisis de ligamiento es un mtodo muy valioso para la gentica Humana y la
Mdica, pues brinda la posibilidad de identificar, localizar y diagnosticar genes causantes
de enfermedades genticas que no han sido detectados por mtodos bioqumicos o
moleculares.
Este estudio para obtener resultados debe partir de una familia que sea informativa
porque en esta se puede detectar la forma de transmisin del gen de inters mdico cuya
expresin fenotpica es difcil de establecer por diferentes razones como:
. Carencia de Penetrancia
. Expresin Fenotpica Tarda
. Signos Clnicos no certeros ( Heterogeneidad clnica y gentica)
175
Figura 13.12. Sitios de restriccin: Se forman por la accin de enzimas de restriccin que reconocer una
zona polimrfica en un fragmento lineal de ADN que est marcado con un asterisco en la figura. La enzima
de restriccin especifica corta la zona polimrfica produciendo 4 fragmentos de ADN, con otra enzima de
restriccin no especfica para cortar el fragmento polimrfico del mismo fragmento de ADN se producen
solo 3 zonas de corte. (Tomado de www.ncbi.nlm.nih.gov/books/bv.fcgi/ libro t.a. Brown Genomes 2da
ed. captulo 5 eds Bios Scientific Publishers Ltd 2002 )
176
Ahora ilustraremos algunos estudios de ligamiento en el hombre.
Consideremos la siguiente familia (Figura 13.13):
LEYENDA
A y a Locus marcadores (Locus 1)
B y b Locus marcadores (Locus 2)
D Neuro fibromatosis tipo I
d Sano
Figura 13.13. Familia que presenta NF1. Relacin de ligamento del locus D (NF1) y los loci 1 y 2.
177
La probabilidad de un diagnstico errneo esta dada por la posibilidad de que un
entrecruzamiento ocurra entre el locus de la NF1 y el locus 1 que es equivalente a la
distancia en unidades de recombinacin entre ambos loci.
Esto se complica ms por la expresividad variable de la enfermedad en que a simple
inspeccin clnica puede aparecer un miembro de esta familia que exprese la enfermedad
de forma tan ligera que escape al estudio clnico y haya heredado el gen afectado, pero
que no sea detectado por estudio clnico.
El estudio de ligamiento requiere de que la familia sea informativa y esto est dado por
la relacin entre el locus que produce la enfermedad a estudiar y el otro locus que se use
como marcador gentico y de la fase en que se encuentren ambos loci, esto significa si
los genes estn en acoplamiento o en repulsin.
Para el estudio de ligamiento en humanos por estudio de familias son ms tiles las
familias grandes que las pequeas, aunque si la familia es muy grande en ocasiones no es
suficientemente informativa, por lo que familias con 3 generaciones se consideran ms
tiles que las que presentan solo 2.
Para examinar como se detecta y mide el ligamiento entre 2 loci gnicos llammosle
A y B en una serie de familias. Valoremos que en los hijos de estas familias por informa-
cin de la segregacin meitica de estos loci se encuentra que aparecen 80 % de hijos no
recombinantes y 20 % de hijos recombinantes estos valores nos indican a priori que la
distancia entre ambos loci es de 20 unidades de recombinacin. El estimado sin embargo
es vlido solamente si el nmero de hijos observados en esta relacin 80:20 es realmente
diferente a la proporcin 50:50 que aparece si no existe ligamiento entre los loci.
Para evaluar esto se debe calcular la probabilidad relativa de obtener los datos obser-
vados cuando los 2 loci estn ligados en alguna fraccin de recombinacin que llamare-
mos (sita) en comparacin con la probabilidad de que estos no estn ligados. Por
ejemplo si de 5 hijos, 4 son no recombinantes y 1 es recombinante la relacin debe ser
considerada significativamente diferente de los valores esperados para segregacin inde-
pendiente entre estos loci. Si uno observa que la proporcin 80:20 se mantiene cuando
estudia docenas de familias para estos loci gnicos esto avala el ligamiento entre estos
loci.
Pero realmente la certeza de esta observacin debe ser calculada matemticamente
para dar una mayor confiabilidad a los valores observados. Es por ello que existe un
indicador que se calcula como relacin de probabilidad en varios valores de que
podemos darles valores de = O (ligamiento) y = 0,5 (no ligamiento) as considerando
estos valores se calcula Z como:
178
MARCADORES GENTICOS
MARCADORES GENTICOS
Los marcadores genticos son rasgos resultado de mutaciones que se expresan como
fenotipos de fcil identificacin, que no cambian ni con la edad ni con el sexo, que presen-
ten un patrn simple de herencia y que son relativamente frecuentes.
Los sistemas de grupos sanguneos han sido considerados marcadores genticos por
excelencia. Ms de 30 sistemas de grupos sanguneos se han empleado a lo largo de
todos estos aos con la finalidad de conocer la relacin de vecindad entre el marcador en
cuestin y una enfermedad gentica u otro marcador conocido.
184
Entre ellos el sistema de grupos sanguneos ABO, descubierto por Landsteiner en
1900 ha tenido la preferencia.
A travs de su estudio se desarrollaron los conceptos de alelos mltiples y de
codominancia entre dos genes.
Actualmente el concepto de alelos mltiples se extiende a la heterogenidad gentica
allica.
El concepto de codominancia se refiere a la relacin que existe entre dos alelos en
cuanto a su expresin, cuando ambos estn formando parte del genotipo, ya que se ex-
presan simultneamente en el fenotipo, tal y como lo hacen cuando estn separados.
Depende en gran medida del nivel de profundidad del estudio del fenotipo.
El fenotipo del sistema de grupos sanguneos ABO se puede determinar por una sim-
ple reaccin antgeno anticuerpo.
Los antgenos ABO se encuentran en la membrana de los hemates y los anticuerpos
en el plasma sanguneo, pero de modo tal que el anticuerpo que se genera por el sistema
inmune, y que en este caso, ocurre de forma natural, no ataca a sus propios antgenos
sino aquellos que el organismo no posee.
Es por eso que, al clasificar los fenotipos ABO con los anticuerpos anti A y anti B, se
identifican segn puede observarse en la figura 14.1.
Figura 14.1. Deteccin de los fenotipos del sistema de grupos sanguneos ABO, genotipos posibles, alelos
y locus.
185
Se reconocen cuatro fenotipos y tres alelos A, B y O . Los alelos A y B tienen relacin
de dominancia completa sobre el alelo O, pero cuando los alelos A y B estn juntos en el
genotipo, su relacin de expresin es de codominancia, por otra parte el grupo sanguneo
O solamente se expresar en los individuos homocigticos para este alelo que se expresa
como un carcter recesivo.
Es importante sealar que el fenotipo A por sus caractersticas inmunolgicas, se
clasifica en dos subgrupos denominados A 1 y A 2 que a su vez tienen dos alelos
denominados A 1 y A 2 y que amplia el nmero de alelos para el locus ABO a cuatro,
el fenotipo a 5 y los genotipos a 8 como se observa en la tabla 14.1.
La presencia de cuatro alelos ampla las posibilidades del sistema ABO como marca-
dor gentico, sin embargo generalmente se utiliza la informacin relativa a los alelos A, B
y O, para anlisis poblacionales y para la explicacin de la va de sntesis de estos antgenos.
186
Una delecin simple de una base nitrogenada, da lugar a la presencia del alelo O del
sistema de grupos sanguneos ABO:
Figura 14.2.
Obsrvese que las personas que tengan el genotipo hh no producen antgeno H y por
tanto aunque tenga en su fenotipo cualquiera de la combinaciones genotpicas que con-
tengan a los alelos A y B estos no logran expresarse, pero si la pareja de esa persona
187
tiene un fenotipo HH sus hijos pueden entonces expresar a los alelos A o B segn sea su
genotipo.
Observe adems, que las personas con el genotipo hh no presentan los antgenos A, B o
H pero si no se usa el anticuerpo anti H pueden quedar mal clasificados como fenotipo O.
Sistema Rh
Desde el punto de vista gentico el locus Rh, es bastante complejo y su anlisis escapa
a los objetivos de este captulo, sin embargo hay un anticuerpo anti Rh que es capaz de
detectar solamente la presencia o ausencia del antgeno de la membrana del hemate, y no
las variaciones bioqumicas del antgeno. Por lo tanto a los efectos de nuestro ejemplo, para
el locus Rh solo tendremos dos alelos definidos por las letras D y d. El alelo D, dominante
sobre el alelo d. En la figura 14.3 se resume la herencia de este sistema
Figura 14.3. Deteccin de los fenotipos Rh, genotipos posibles, alelos y locus.
La reaccin antgeno anticuerpo del sistema Rh, nos ha permitido identificar dos
subgrupos poblacionales: los individuos que presentan el antgeno Rh y que se clasifican
como Rh +, y aquellos que no presentan el antgeno y que se clasifican como Rh -.
A diferencia del sistema ABH los anticuerpos Rh solamente se producen cuando el
individuo con genotipo dd y Rh- se pone en contacto con sangre que presenta el antgeno
Rh o sea fenotipo Rh positivo.
Sistema MN
Este es un sistema de grupos sanguneos de herencia muy sencilla con dos alelos y
tres fenotipos.
188
El fenotipo MN se presenta porque los alelos M y N son codominantes o sea para su
deteccin se utilizan los anticuerpos M y N.
Una generalizacin de las caractersticas genticas del sistema de grupos sanguneos
MN se aprecia en la figura 14.4.
189
Este sistema tiene la peculiaridad de formar un haplotipo, la figura 14.5 esquematiza
las caractersticas de ste.
C lase II C lase I
C lase III
D P D Q D R B C A
Figura 14.5. Esquema de ubicacin de las clases I, II y III del sistema MHC. Los nmeros indicacdos con
las flechas se refieren al nmero de elelos de estos loci, al ser detectados por estudios moleculares del
ADN.
190
Polimorfismos de longitud de fragmentos de restriccin del ADN (RFLP)
Despus de la aplicacin del Southern blot, se descubri que todas las personas no
tenan los mismos sitios de corte utilizando la misma enzima de restriccin y que las
secuencias de cambio se deban a la herencia de mutaciones por creacin de un nuevo
sitio o por la desaparicin del ya existente. Teniendo en cuenta los cientos de enzimas de
restriccin que pueden utilizarse, se puede comprender la gran cantidad de secuencias de
ADN que pueden obtenerse. Basado en la posibilidad que este anlisis del ADN brinda,
nombrado Longitud de Fragmentos de Restriccin (RFL) de ADN, pero adems sus
frecuencias llegan a ser verdaderos polimorfismos por lo que se ha aadido la P, nom-
brndose RFLP. En la actualidad esta condicin y el hecho de conocer su posicin genmica
los declara como los mejores marcadores genticos. Tienen un patrn simple de heren-
cia codominante.
Existen otros marcadores genticos del ADN que fueron nombrados al abordar los
estudios de ligamiento pero realmente rebasan los objetivos de este captulo.
Los RFLP se nombran de la siguiente forma, por ejemplo, D3S14, la D significa DNA
(siglas en ingls), el nmero que sigue indica el cromosoma, en este caso es cromosoma3,
la letra S se refiere al estudio de una simple cadena de ADN y el ltimo nmero indentifica
el locus, en este ejemplo el 14.
La figura 14.6 esquematiza un estudio molecular de RFLP en una familia. Los alelos
de este locus se identifican por su peso ya que la Eco R1 encuentra diferentes sitios de
corte del ADN de los miembros de la familia en correspondencia con la herencia de ellos
a partir de los padres.
Figura 14.6. Corrida electrofortica de los fragmentos de acuerdo con su peso molecular (Southern blot).
Anlisis de la segregacin de tres de los 8 alelos para el locus RFLP: D14S1. Este locus tiene para esta
familia, los alelos 1, 2 y 3.
191
RESUMEN
Los marcadores genticos tienen que cumplir requisitos que permita denominarlos
como tal. Los sistemas de grupos sanguneos y el sistema de histocompatibilidad mayor
(MHC) tienen estas caractersticas.
La va de sntesis de los antgenos ABH son una verdadera demostracin que ilustra
la accin de los genes en la expresin de un carcter. Mediante las transferasas que son
protenas determinadas por genes se producen los antgenos que son glicoesfingolpidos.
Tambin esta va es una demostracin de interaccin entre los genes permitiendo com-
prender mejor conceptos como la penetrancia reducuda de un gen.
Los marcadores de excelencia en el momento actual son los obtenidos a nivel de
ADN por enzimas de restriccin como los RFLP por su carcter polimrfico y su loca-
lizacin cromosmica.
192
LOS GENES EN LAS
POBLACIONES HUMANAS
193
LA GENTICA POBLACIONAL
Para conocer las frecuencias de los alelos de un locus especfico, as como las fre-
cuencias de los genotipos que estos generan, es necesario realizar estudios que permitan
llegar a este anlisis. El primer paso es conocer la frecuencia con la que estos alelos se
194
expresan, a travs de la identificacin del fenotipo en cuestin, el tipo de herencia y la
relacin de expresin que existe entre estos alelos.
Frecuencia fenotpica
Determinar el nmero de individuos que expresan una cualidad del fenotipo en estu-
dio, en relacin con el total de individuos de la poblacin problema, recibe el nombre de
frecuencia fenotpica. Este dato se expresa, generalmente en porcentaje.
Frecuencia genotpica
A su vez, las veces en que aparecen cada uno de los genotipos generados por las com-
binaciones, dos a dos de los alelos involucrados en el locus en estudio, en relacin con
el total de genotipos (que ser igual al total de individuos contemplados en el estudio),
recibe la denominacin de frecuencia genotpica. Los resultados de este anlisis, se dan
tanto en porcentaje como en proporcin.
Frecuencia gnica
p +q=1
Y tambin que las veces con las que sus combinaciones, dos a dos (por ser organis-
mos diploides) o frecuencias genotpicas, se presenten en la poblacin en estudio, terica-
mente, sern igual al desarrollo de un binomio cuadrado perfecto:
(p + q)2 = p2 + 2pq + q2
195
mutacin que produce una enfermedad gentica, y el conocimiento tanto de la incidencia
fenotpica del defecto como de la frecuencia gnica del alelo mutado, as como de la
frecuencia genotpica 2pq, proporcionar datos de gran importancia y que, tanto las
autoridades de Salud, como los mdicos de asistencia y muy en especial los Genetistas
Clnicos, deben tener presente para el manejo preventivo del defecto.
Otro de los enfoques es de inters gentico, antropolgico, biolgico y tambin mdico
legal. Este tipo de enfoque est relacionado con los datos que proporcionan, las frecuen-
cias de alelos producidos por mutaciones que no generan en su expresin, consecuen-
cias mdicas, sino ms bien, variaciones genticas representadas por las cualidades al-
ternativas de los caracteres en estudio, y que, contribuyen a la diferenciacin fenotpica
de los individuos. Los marcadores genticos estudiados en el Captulo 14 son ejemplos de
ellos.
Para los clculos de las frecuencias fenotpicas, genotpicas y gnicas entre alelos con
relacin de dominancia completa hemos seleccionado como marcador gentico, al siste-
ma de grupo sanguneo Rh.
Protocolo de estudio:
Poblacin hipottica: Ciego de Avila..
Muestra: 600 habitantes de la Ciudad.
Marcador gentico: Sistema de grupos sanguneos Rh.
Objetivos: calcular las frecuencias fenotpicas, genotpicas y gncas del sistema de
grupos sanguneos Rh.
196
La hemoclasificacin del sistema Rh, nos ha permitido identificar dos subgrupos
poblacionales bien definidas: los individuos que presentan el antgeno Rh y que se clasifi-
can como Rh +, y aquellos que no presentan el antgeno y que se clasifican como Rh -.
Frecuencia fenotpica para los individuos Rh + de nuestro estudio: 450 / 600 100 = 75.0 %
Frecuencia fenotpica para los individuos Rh - de nuestro estudio: 150 / 600 100 = 25.0 %
197
Entonces, q2 ser igual a la frecuencia fenotpica y genotpica de los individuos Rh -
que representan el 25 %, por lo tanto la frecuencia del alelo d puede ser determinada
hallando la raz cuadrada de la frecuencia fenotpica pero en proporcin o sea dividiendo
entre 100 (0.25)
Para este caso utilizaremos otro grupo sanguneo. Se trata del grupo MN y del locus
con igual denominacin. Los antgenos presentes, son tambin denominados M y N, y
sus correspondientes anticuerpos, anti M y anti N.
Los fenotipos que se identifican por simple hemoclasificacin, en este caso son tres:
M, MN y N.
Un ejemplo de ello utilizando una poblacin de 1419 personas sera:
198
El fenotipo MN se presenta porque los alelos M y N son codominantes, o sea ambos
alelos de un par se expresan en el estado heterocigtico igual que cuando estn en el
estado homocigtico.
La frecuencia fenotpica y genotpica. Cuando los alelos que se estudian son
codominantes coinciden. En este caso seran:
199
En este caso para obtener las frecuencias genotpicas se requiere calcular antes las
frecuencias gnicas de los alelos p, q y r.
El anlisis se inicia por el clculo de la frecuencia gnica de O
Los individuos que tiene los grupos A y O en la poblacin estn representados por las
combinaciones de los alelos p y r en el binomio
O = r = 0. 67 A = p = 0 . 25 B = q = 0. 08
200
Cmo sabemos si una poblacin mantiene sus genes para un locus especfico en equi-
librio Hardy- Weinberg?
Supongamos que por una investigacin previa que data de 20 aos, hemos conocido
que la frecuencia de los alelos para el sistema de grupos sanguneos M, N fue de 0. 53
para el alelo M y de 0. 47 para el alelo N, y deseamos conocer si en esa poblacin se
mantienen las frecuencias gnicas y genotpicas en equilibrio Hardy-Weinberg.
Si determinamos los grupos sanguneos M y N en una poblacin de 2000 sujetos,
utilizando un test estadstico como el chi-cuadrado (X2 )que nos permita establecer si
existen o no diferencias significativas entre lo esperado y lo observado, conocer si real-
mente se mantiene el equilibrio.
201
estos dos alelos segn (p + q) 2 = p2 + 2pq + q2 , sustituyendo en p y q los valores de
frecuencias gnicas estimadas a partir de los fenotipos de los varones.
Un buen ejemplo es la frecuencia de la ceguera para el color (mutacin que se expre-
sa como daltonismo y que individualiza muy bien el carcter en hombres) en una pobla-
cin. Supongamos que cada 1000 hombres, 80 sean daltnicos, la frecuencia gnica de q
ser igual a 80 entre mil, o sea 0.08 y la de q de 0.92. Ya con las frecuencias gnicas se
pueden estimar las frecuencias genotpicas en las mujeres haciendo la sustitucin perti-
nente segn p2 + 2pq + q2.
Matrimonios no al azar
Cuando en una poblacin grande los matrimonios son al azar los alelos pueden combi-
narse por la segregacin de ellos en los gametos con igual probabilidad y esto permite una
contribucin de sus frecuencias en la poblacin de forma aleatoria, sin embargo aun
cuando las poblaciones sean suficientemente grandes, en ocasiones existen fenmenos
sociales de estratificacin segn grupos raciales que interfieren con la seleccin
azarosa de las parejas, por ejemplo la divisin entre negros y blancos. Por otra parte, en
ocasiones la seleccin clasificada de las parejas por su inteligencia, forma y color del
cabello, la estatura, algunas caractersticas conductuales, habilidades para la msica o
para el deporte o buscar pareja con caractersticas de defectos similares como ceguera,
sordera o bajas tallas tambin interfieren en que los matrimonios no sean totalmente al
azar y la distribucin de los alelos en la poblacin tampoco sea aleatoria, lo que no contri-
buye a mantener el equilibrio de Hardy- Weinberg en una poblacin.
La consanguinidad es otro fenmeno que interfiere con la formacin de parejas al azar,
aun cuando se pueda suponer que toda pareja tiene al menos un ancestro comn. La proba-
bilidad de que un nio sea homocigtico para una enfermedad gentica autosmica recesiva
rara, es menor cuanto ms alejada sea la relacin de parentesco entre sus padres. La
consanguinidad es un fenmeno presente en todas las poblaciones humanas. Las leyes de
cada pas prohben los matrimonios entre familiares de primer y segundo grados y algunas
religiones incluyen la prohibicin matrimonios entre familiares de tercer grado.
Hay una tendencia a la disminucin de estos tipos de matrimonios sobre todo en
pases desarrollados y en vas de desarrollo. Los matrimonios consanguneos ms fre-
cuentes se producen entre primos hermanos, doble primos hermanos, medios primos
hermanos.
202
La probabilidad de compartir genes similares es mayor en la medida en que la rela-
cin entre consanguneos sea ms cercana.
Muchas personas homocigticas para mutaciones recesivas raras han heredado
estas mutaciones de sus padres quienes tienen un ancestro comn, sin embargo slo la
consanguinidad cuando es muy alta en una poblacin afecta el equilibrio gentico.
En la investigacin clnico gentica efectuada recientemente en nuestro pas, se ob-
serv que la frecuencia de consanguinidad entre los padres de personas con retraso
mental fue ms alta en las regiones geogrficas extremas de la nacin, donde todava
existen grupos poblacionales ms aislados en los que hay muy pocas variaciones de
apellidos.
Mutaciones
Que se pierdan inmediatamente por ser letales para las personas que las reciben,
bien porque sean incompatibles con la vida o porque nunca puedan transmitirse a
la siguiente generacin.
Que sobrevivan con pocas probabilidades de mantenerse de generacin en gene-
racin.
O que no slo sobrevivan, sino que se transmitan de generacin en generacin,
pudiendo incluso convertirse en un alelo predominante.
203
Factores como morir antes de la pubertad disminuyen la aptitud reproductiva para un
genotipo especfico, a la inversa un tratamiento mdico puede incrementar la aptitud
reproductiva de un genotipo particular. De igual forma el diagnstico prenatal y la termina-
cin selectiva de un embarazo disminuye la aptitud reproductiva de un genotipo particular.
Para estos tipos de mutaciones las fuerzas selectivas son menos efectivas ya que slo
una pequea proporcin de genes estn presentes en el homocigtico recesivo que son
los que se exponen a fuerzas selectivas, pero adems su repercusin sobre el equilibrio
aun mejorando sus posibilidades de aptitud reproductiva, podra ser muy lenta y se nece-
sitaran muchas generaciones para incrementar su frecuencia gnica.
204
La aptitud reproductiva depende de la gravedad de la afeccin. Si la mutacin es muy
severa el varn no se reproduce, tales enfermedades se conocen como letales genticas
ligados al X, y la contribucin de la mutacin se produce por la segregacin de la muta-
cin en los gamelos de la mujer portadora y la tasa de nuevas mutaciones. Sin embargo
cuando la mutacin no afecta la aptitud reproductiva del varn la distribucin de genotipos
se comporta con una relacin de varones afectados a mujeres portadoras de 1:2 . La
posibilidad de mujeres portadoras de mutaciones severas, que padecen la enfermedad
por defectos de lionizacin (la inactivacin no azaroza de un cromosoma X en la mujer),
contribuyen poco con su baja aptitud reproductiva a la inestabilidad del equilibrio gentico
sin embargo, enfermedades como la hemofilia A cuyo tratamiento mejora considerable-
mente la aptitud reproductiva del varn afectado, puede esperarse que eleve la frecuen-
cia del gen mutado y se establezca un nuevo equilibrio gentico para esta mutacin.
Hasta ahora hemos analizado la frecuencia de mutantes raros como un balance entre
la prdida por seleccin y la ganancia por nuevas mutaciones.
Ahora analizaremos el caso de heterocigticos para algunas enfermedades que tie-
nen una ventaja selectiva en comparacin con ambos genotipos homocigticos, el domi-
nante y el recesivo.
Estos tipos de ventajas selectivas para un genotipo heretocigtico cuyo homocigtico
recesivo produce enfermedades genticas muy severas, pueden incrementar la frecuen-
cia de la mutacin especfica en una poblacin. Un ejemplo de ello es la ventaja selectiva
del heterocigtico para la anemia por hemates falciforme (AHF) o "sickle cell anemia"
para la malaria.
En el Africa Occidental hay altas frecuencias de esta anormalidad de la beta hemo-
globina, donde los heterocigticos tiene mayor aptitud reproductiva que los homocigticos.
Los heterocigticos son resistentes a la malaria producida por el protozoo Plasmodium
vivax que a su vez es transmitido por el mosquito Anopheles, este protozoo pasa parte se
su ciclo de vida alojado en el eritrocito de los vertebrados, sin embargo, los eritrocitos de
los heterocigticos para la AHF no permiten que este protozoo culmine su ciclo de vida
exitosamente y las personas parasitadas que tienen esta condicin gentica resisten me-
jor a la malaria que los homocigticos para el alelo A (AA), o que los homocigticos para
el alelo S (SS) por este motivo a travs de generaciones los individuos heterocigticos AS
han incrementado su frecuencia en estas regiones. Este es el resultado de una desviacin
explicable por fuerzas de seleccin sobre un genotipo en particular.
Cuando las fuerzas selectivas operan en ambas direcciones manteniendo o eliminan-
do a un alelo mutado la situacin se describe como un polimorfismo balanceado.
205
Otro fenmeno que pueden repercutir en afectaciones del equilibrio gentico en las
poblaciones es el de las migraciones.
En la historia de las migraciones se produce un fenmeno denominado deriva gentica.
Como ya hemos analizado cuando ocurre una mutacin, su presencia inicial se debe a
una simple copia entre todos los alelos de ese losus en la poblacin en estudio. La
probabilidad de que esta mutacin eleve su frecuencia por generaciones depende como
ya se ha analizado, de su aptitud reproductiva y de las fuerzas de seleccin natural que
operan sobre ella. Si un individuo que presenta esta mutacin migra hacia una regin de
una pequea poblacin, la frecuencia de esa mutacin en esa regin puede, al paso de
varias generaciones ser mayor que la existente en el pas de origen, fenmeno al que se
le denomina deriva gentica ya que, mientras que la poblacin se mantenga pequea,
puede haber una considerable fluctuacin en la frecuencia gnica.
Si ocurriera que uno de los fundadores originales de un nuevo grupo fuera portador de
un alelo relativamente raro, y este queda fijo en el nuevo grupo con una frecuencia
relativamente alta estaremos en presencia de lo que se conoce como efecto fundador.
En la literatura gentica hay mltiples ejemplos de este fenmeno. En Cuba la Ataxia
Espino Cerebelosa tipo 2 (SCA 2) autosmica dominante, que tiene una alta frecuencia
en la provincia de Holgun es el resultado de un efecto fundador debido al asentamiento
de un espaol que portaba esta enfermedad en esta regin de Cuba.
Otro fenmeno dentro de las migraciones es el denominado flujo gentico, que a
diferencia de la deriva gentica involucra a un grupo poblacional que migra hacia otra
poblacin con su propia frecuencia gnica incorporndola gradualmente a la bolsa de
genes de la poblacin donde se instalan. Las frecuencias de los alelos del sistema de
grupos sanguneos ABO muy estudiado en numerosas poblaciones presentan evidencias
de este fenmeno. La transferencia de genes entre grupos raciales es tambin un ejem-
plo de flujo gentico. En Cuba la trata de esclavos por los espaoles desde la regiones
africanas endmicas de malaria y los propios asentamientos de los espaoles en nuestro
pas han originado nuestra propia bolsa gentica en la que por ejemplo la frecuencia
genotpica de heterocigticos AS para la AHF alcanza en la poblacin general valores de
3.08 % y de 6. 2 % en la poblacin negra y mestiza.
RESUMEN
206
prender el origen y la frecuencias genotpicas y gnicas de mutaciones raras una vez que
se hayan realizado estudios epidemiolgicos de sus frecuencias fenotpicas. Conocer las
caractersticas del equilibrio gentico de una poblacin adems ofrece la posibilidad de
analizar las causas de sus desviaciones y de elaborar pronsticos de sus cambios en la
medida en que se introduzcan nuevos tratamientos que mejoren la aptitud reproductiva
de las personas afectadas o que a travs del diagnstico prenatal y el aborto selectivo se
disminuya la aptitud reproductiva de un genotipo especfico. La gentica poblacional hu-
mana adems pone en manos de genetistas dedicados a la epidemiologa instrumentos
que permiten caracterizar las frecuencias gnicas y de esta forma identificar polimorfismos
de marcadores genticos y analizar sus relaciones como posibles genes susceptibles o
incluso candidatos, para enfermedades comunes o caractersticas conductuales o fun-
cionales complejas como se expresan en el Captulo 16.
207
HERENCIA
MULTIFACTORIAL
208
FRECUENCIAS DE GENOTIPOS Y FENOTIPOS PARA RASGOS
DISCONTINUOS
G en otip o G en otip o
Aa X Aa
A a G am etos A a
A Aa aA aa
A
1 2 1
3
N o. aA
Aa
2 2
AA aa
1 1
Figura 16.1. Distribucin en la poblacin de genotipos y fenotipos para dos alelos A y a, con relacin de
dominancia completa.
209
Por otra parte, al analizar cmo se distribuyen en la poblacin las 16 combinaciones
entre gametos que segregan dos caracteres independientes, estos se agrupan en la pobla-
cin de modo tal que las combinaciones doble heterocigticas son los genotipos ms
frecuentes y el resto se distribuyen a ambos lados de la frecuencia mayor, siguiendo una
distribucin estadstica normal, no sucede as con la distribucin de fenotipos, que como
se observa en el grafico de la figura 16.2, las barras son mayores para los fenotipos
dominantes.
Aa Bb X Aa Bb
Gametos AB Ab aB ab
Gametos
9 3
8
2
7
6 1
5
Genotipos
4 AABB AAbb AABb AaBB AaBb Aabb aaBb aaBB aabb
2
1
Figura 16.2. Distribucin en la poblacin de dos loci independientes y con relacion de dominancia
completa entre sus alelos.
210
FRECUENCIAS DE GENOTIPOS Y FENOTIPOS PARA RASGOS
CONTINUOS
Pero si tenemos que para una planta el carcter talla est determinado por tres loci,
cada uno de ellos con dos alelos que presentan interaccin aditiva entre ellos; por ejem-
plo, el locus "X" (alelos X, x), locus "Y" (alelos Y, y), locus "Z" (alelos Z, z) de modo tal
que el genotipo xx yy zz tiene una talla base de 60 pulgadas; mientras que cada alelo en
mayscula adiciona a esta talla base 3 pulgadas, proporcionando al geneotipo XX YY ZZ
una talla 78 pulgadas.
Si como aparece en el esquema de la figura 16.3, se produce un cruce entre dos lneas
puras, para estos genotipos tendremos que la F1 estar formada genotpicamente por un
trihbrido, pero fenotpicamente por un fenotipo que resulta de la interaccin entre los tres
loci para expresar una talla intermedia de 69 pulgadas entre sus dos parentales que
expresan tallas de de 78 y 60 pulgadas respectivamente.
Analicemos entonces la descendencia de un cruce entre dos F1 y como se observa
en la tabla de la figura 16.4, la cantidad de genotipos es tal que proporcionan una distri-
bucin estadstica normal en la descendencia obtenida, donde la talla ms frecuente se
corresponde con 69 pulgadas. No es difcil comprender que cualquiera de estos genotipos
tendr gran predisposicin a cambiar su fenotipo, con la accin de factores ambientales
como el acceso al agua y nutrientes orgnicos y minerales de diferentes tipos y que
pudieran incrementar o disminuir la talla de cualquiera de los genotipos, pero que sin
embargo algunos de ellos podran ser ms vulnerables a estos factores.
XXYYZZ X xxyyzz
78 pulg . 60 pulg .
XYZ Gametos xyz
XxYyZz
F1
69 pulg.
Figura 16.3 Cruzamiento entre lneas puras para tres loci con efecto aditivo en la talla de la planta
211
Figura 16.4. Distribucin de fenotipos y genotipos para tres loci con dos alelos cada uno, con efecto
aditivo en su expresin.
En este ejemplo, el carcter talla determinado por la accin aditiva de los loci X, Y y Z
es el resultado de la accin de los alelos correspondientes a estos loci y que forman
poligenes cuya segregacin determina una herencia polignica. A este tipo de herencia
tambin se le conoce como herencia cuantitativa, porque estudia la expresin de rasgos
que se miden y que tienen una expresin continua.
212
HERENCIA MULTIFACTORIAL
Las mutaciones que ocurren en alguno de los genes involucrados en un rasgo espec-
fico, dan lugar a genotipos ms predispuestos a modificaciones condicionadas por situa-
ciones ambientales de ah que tambin se conozca a este fenmeno como herencia
multifactorial.
100%
50%
A aB B cc
A ab b C C
A aB b C C A aB b C c A ab b C c
A aB B C c A A bbC c aaB b C c
A A B bC c A A B b cc A aB b cc
25% A A bbC C aaB B C c aab b C C
A A B B cc aab B C C A ab b cc
AABBCc aaB B C C aaB B cc A ab b cc
A A B bC C aaB b cc
A aB B C C aab b C c
AABBCC aab b cc
Figura 16.5. Distribucin del coeficiente de inteligencia y de los genotipos posibles. Observe que en los
extremos de la curva estn los muy inteligentes con coeficientes de 120 y 130 y los menos inteligentes con
coeficientes entre 80 y 70.
213
. Un segundo grupo est representado por defectos congnitos con un umbral rela-
cionado con un genotipo subyacente. Aqu a la predisposicin gentica, se le suma,
una accin ambiental desfavorable que precipita el nacimiento de un nio con
alguna de las malformaciones genticas con este tipo de herencia como: los defec-
tos de cierre del tubo neural, el labio leporino y paladar hendido, los defectos con-
gnitos del corazn etc.
. Un tercer grupo de defectos con este tipo de herencia, se encuentra formado por
las denominadas enfermedades comunes del adulto, como son: la hipertensin
arterial, las enfermedades coronarias, la diabetes mellitus, el asma bronquial, las
depresiones o enfermedades bipolares, la esquizofrenia, el cncer.
HEREDABILIDAD
Con el objetivo de separar los roles relativos a los genes y al ambiente, se ha desarro-
llado el concepto de heredabilidad y al propio tiempo se han diseado mtodos matem-
ticos para su estimacin.
El trmino heredabilidad se refiere en sentido general, a conocer si el papel gentico
en determinado fenotipo, es mayor o menor, se expresa como h2. A diferencia del anlisis
que podemos realizar a partir del fenotipo expresado por una simple mutacin, por la
segregacin de sus alelos en una familia, en el caso de la herencia multifactorial el com-
ponente gentico ha de investigarse por la expresin del defecto en poblaciones especfi-
cas, y cada poblacin tendr su propia heredabilidad, es por esta razn que se trabaja con
desviacin estndar y varianzas.
El fenotipo (F) de un rasgo multifactorial est dado por la suma de tres valores:
214
Entonces:
F= G+B+E
Y la heredabilidad :
h2= G / G+B+E = G / V
215
MODELO DE PREDISPOSICIN GENTICA
100
%
50
%
Incidencia familiar
25%
Incidencia
poblacional.
Figura 16.6. Modelo de carga gentica y de umbral. Observe que los individuos emparentados con los
individuos afectados comparten genotipos similares.
216
Si la incidencia poblacional y familiar son parecidas, la agregacin familiar es de baja
frecuencia y entonces la heredabilidad ser baja, y el papel preponderante lo tiene el
ambiente. Si ocurre lo contrario, significa que debe haber un componente gentico im-
portante y se puede suponer que el genotipo determinado por poligenes tiene mayor
similitud con el genotipo del afectado, en sus familiares de primer grado, es decir hay una
elevada predisposicin gentica a factores ambientales especficos.
El estudio de la heredabilidad en gemelos es el mtodo preferible para conocer con
mayor precisin la participacin gentica del carcter en estudio. Se basa como ya se ha
referido, en determinar el grado de concordancia entre gemelos monocigticos y dicigticos.
La concordancia entre gemelos monocigticos, ha de ser alta si la participacin gentica
es alta y baja si la participacin en la ocurrencia del defecto, es predominantemente
ambiental.
217
personas con estos defectos en consecuencia, tendrn mayor probabilidad de tener otros
hijos afectados mientras ms severo es el defecto en estudio como se expone en el
captulo 18.
218
Casi todos tienen un significativo componente familiar, sugiriendo que la distribucin
de estas enfermedades no es al azar y que hay individuos con diferentes niveles de riesgo
para su padecimiento.
No hay una definicin apropiada ni aceptada para esta denominacin. El trmino
comn se refiere a frecuencia y arbitrariamente se tiene en cuenta valores de un afecta-
do por 1000 individuos de la poblacin.
En algunos pases enfermedades determinadas por defectos genticos de la hemoglo-
bina podran ser catalogadas como tal.
Ejemplos de enfermedades comunes son:
. Las cardiovasculares.
. El cncer.
. El embolismo.
. Enfermedades obstructivas crnicas.
. El asma bronquial el enfisema pulmonar.
. La diabetes.
. Las enfermedades bipolares.
. Las demencias.
SUSCEPTIBILDAD GENTICA
. Dieta.
. Actividad que realice.
. Exposicin al ambiente.
. En algn grado, a variaciones biolgicas azarosas, como ocurre en el sistema in-
mune.
219
. Y tambin por factores ambientales que pueden operar durante el desarrollo.
220
enfisema pulmonar en individuos deficientes para alelos deficientes para la alfa 1 antitripsina
como ya se ha expuesto.
La susceptibilidad para la mayora de las enfermedades comunes es mucho ms com-
pleja, porque involucra a un nmero mayor de genes.
Aunque los genotipos polignicos, involucrados para un carcter determinado, sean
deficientes en alguno de sus genes, crearan respuestas en correspondencia con su
susceptibilidad diferencial y las enfermedades comunes suelen ser muy heterogneas.
Puede concluirse que diferentes mecanismos, llevan al mismo final clnico.
Por otra parte no todo individuo susceptible desarrolla la enfermedad , lo que hasta
cierto punto demuestra y alienta sobre la eficiencia esperada de medidas preventivas
especficas.
Al propio tiempo existen fenocopias causadas por agentes ambientales especficos,
sin que se encuentren involucrados defectos genticos subyacentes.
Por lo hasta aqu expresado, se puede esperar que en una poblacin existan indivi-
duos tanto con una susceptibilidad gentica aumentada como con una reduccin de la
susceptibilidad gentica.
Tambin podra esperarse resistencia gentica, pero esta es ms difcil de identificar-
se ya que no es posible por simple observacin, encontrar diferencias genotpicas entre
los individuos resistentes a una enfermedad especfica y un individuo susceptible no en-
fermo.
Los ejemplos ms conocidos de resistencia son los heterocigticos para la anemia a
hemates falciformes, las talasemias alfa y beta y para la deficiencia de G6PD en rela-
cin con la malaria.
. La agregacin familiar.
. Variacin de la frecuencia de la enfermedad en varios grupos tnicos.
221
Pero esto aun no prueba el componente gentico de una enfermedad comn.
La agregacin familiar, puede resultar frecuente en miembros de una familia, por
probabilidad, cuando la frecuencia de la enfermedad es alta en una poblacin con sus
caractersticas socioculturales especficas.
La frecuencia de una historia familiar positiva es una pregunta insegura.
Una historia familiar positiva muchas veces es ambigua. Cuntos afectados?, Qu
porcentaje representa? Adems el grado de parentesco no se incluye.
A esto se agrega el sesgo que constituye el hecho de que el afectado conoce su
enfermedad pero no identifica sntomas en los familiares, que reporta como supuesta-
mente sanos.
La agregacin familiar en parientes de primer grado del individuo afectado puede
compararse con un grupo control o con la incidencia poblacional.
Por ejemplo, los familiares de primer grado de individuos diabticos insulinodependientes
tienen una frecuencia del 5 al 10 % muy elevada al compararla con la frecuencia poblacional
de 1 en 500.
Los patrones de migracin de grupos tnicos pueden sugerir que existe un factor
gentico involucrado.
Por ejemplo la frecuencia de diabetes insulino no dependiente en judos yemenitas es
del 5 al 10 % en una generacin y disminuye en las generaciones que migran a Israel.
Por qu solamente una fraccin de la poblacin, manifiesta la enfermedad?.
Tambin las diferencias clnicas de la enfermedad, entre grupos tnicos son importan-
tes, porque sugiere heterogeneidad gentica mientras que las diferencias en frecuencias
y en la clnica sugieren participacin gentica, ambiental o ambas.
El conocimiento del componente gentico de una enfermedad comn se apoya en:
222
cia entre MZ en relacin con DZ indica factor gentico, igual tasa de concordan-
cia indica mayor efecto ambiental. Algunas veces es difcil distinguir herencia o
ambiente entre MZ ya que su idntico genotipo los hace seleccionar idnticos
ambientes, un ejemplo de ello se relaciona con enfermedades como la cardiopata
isqumica, la lcera pptica, enfermedad celiaca, diabetes, esquizofrenia. En estas
enfermedades, la tasa de concordancia es ms alta en gemelos MZ que en DZ.
Raramente la tasa de concordancia entre MZ es del 100% y esto evidencia com-
ponente ambiental de la enfermedad. En estos casos el anlisis de incidencia entre
diversos grupos tnicos sirven para inferir el componente gentico y ambiental.
4. El control entre esposos permite investigar el componente ambiental en el adulto
pero no en la infancia. Es importante la comparacin entre los esposos y los fami-
liares de primer grado de estos.
5. Estudios de adopcin. En este caso el adoptado no comparte el genoma de la
familia pero si el ambiente. Hay que tener en cuenta que las adopciones muchas
veces se realizan por similitud fenotpica no solo entre nios de la familia sino
tambin entre sus padres adoptivos.
6. Genes marcadores. Un estudio de la enfermedad en relacin con genes marcado-
res conocidos como ocurre con los haplotipos de HLA, grupos sanguneos,
polimorfismos de ADN, pueden demostrar: Asociacin en estudios poblacionales
o ligamiento en estudios familiares. En el primer caso la comparacin entre pobla-
cin afectada y poblacin sana, en el segundo caso, se requiere la presencia de dos
o ms individuos afectados en la familia.
223
Lo hasta aqu expuesto justifica que para el anlisis de una herencia multifactorial de
un defecto especfico de los relacionados en este captulo, es necesario tener en cuenta
en el diseo experimental, definiciones acerca de las caractersticas clnicas que han de
tener los individuos afectados, por ejemplo si se quiere estudiar, la heredabilidad de la
hipertensin arterial habr que hacer un exmen clnico que permita identificar solamen-
te a los casos que presenten hipertensin arterial esencial y excluir del estudio a los
individuos que presenten hipertensin arterial secundario a una hipercolesterolemia fami-
liar. Definir el espectro de sntomas que se observan en la enfermedad y cuales de ellos
se tendrn en cuenta para definir si un familiar de primer grado est o no afectado.
224
RESUMEN
225
DEFECTOS CONGNITOS
DE ORIGEN GENTICO
Y AMBIENTAL 17
Araceli Lantigua Cruz
226
TIPOS DE DEFECTOS CONGNITOS
Teniendo en cuenta que las anomalas congnitas pueden tener un factor causal gentico
o ambiental, es preciso utilizar el trmino defecto al referirnos a los mismos mientras no
se tenga conocimiento del factor causal que pudo originarlo.
Los defectos congnitos por su magnitud se distinguen como mayores y menores.
Los primeros, relativos a los defectos que tienen un compromiso funcional importante
para la vida del individuo, tienen consecuencias mdicas, estticas, requieren de aten-
cin temprana, algunas veces de urgencia y por tanto tienen tambin repercusin social.
Tienen una frecuencia del 2 al 3 % de los recin nacidos (Figura 17.1).
Figura 17. 1. A: Defecto congnito mayor. B: Defecto congnito menor. C: Signo dismrfico.
227
DEFECTOS CONGNITOS Y MORFOGNESIS
B
A
C D
c
Figura 17.2 A: Disrupcin. B: Deformidad. C: Malformacin. D: Displasia
228
En ocasiones hay sobrelapamiento entre estos tipos de defectos, que estn en corres-
pondencia con el momento del desarrollo embrionario en el que hacen su aparicin.
Cuando esto ocurre en estadios muy tempranos del desarrollo, es difcil su determinacin
y quedan en la mayora de las veces, enfocados como malformaciones, sobre todo cuan-
do no hay evidencia alguna de deformidades o disrupciones.
229
Eventos moleculares
Los genes involucrados en todos los mecanismos celulares son en su mayora facto-
res de transcripcin, que tienen una funcin especfica en el desarrollo embrionario.
Estos factores de transcripcin, se clasifican, atendiendo a su especificidad sobre
genes o tejidos, como inespecficos (porque actan sobre gran variedad de genes) y
especficos de tejidos, por su accin sobre genes especficos que van a determinar el
destino de un tejido determinado.
Estos factores de transcripcin de genes involucrados en el desarrollo funcionan al
unirse al promotor del gen en cuestin, cambiando la estructura del ADN, que contiene el
gen, de modo tal, que se inicia la transcripcin del mensaje en el ARN m y posteriormen-
te, la protena que ser la estructura molecular que regula la realizacin de un proceso
celular especfico.
Las secuencias de ADN con funciones de promotores se encuentran adyacentes al
ADN con funciones codificantes, o muy cerca de estas regiones, pero las secuencias de
ADN con funciones de potencializadores o amplificadores de los promotores, son seg-
mentos del ADN, que pueden estar fisicamente muy lejos del gen y que como su nombre
lo indica, modifican la accin del promotor como se esquematiza en la Figura 17.3.
REPRESO R
P O T E N C IA L IZ A D O R E S
A C T IV A D O R E S
ADN
P O L IM E R A S A
R E G I N C O D IF IC A N T E
P R O M O TO R
FA C TO R ES D E
T R A N S C R IP C IO N
C O A C T IV A D O R E S
Figura 17.3. Grupos de protenas que se unen para activar, inhibir o potencializar la accin de los genes
involucrados en el desarrollo.
230
Los factores de transcripcin en un papel regulador tambin pueden inhibir la expre-
sin del gen. Estos factores de transcripcin son estructuras proteicas que generalmente
requieren de la accin de otras protenas con funciones de activadores y de coactivadores,
y que son reguladas por la accin de protenas represoras (Figura 17.3). Todas estas
protenas estn codificadas por genes que funcionan durante el desarrollo embrionario.
Como el proceso del desarrollo embrionario requiere de la accin simultnea de mu-
chos genes, se estima que existen genes rectores, regulados por factores de transcripcin
maestros, similares a los directores de una gran orquesta sinfnica, que dirigen a uno o a
grupos de genes de forma simultnea, pero siguiendo un afinado cronograma de activa-
cin y de inactivacin, y al propio tiempo de retroalimentacin, ya que los factores de
transcripciones tambin se encuentran regulados genticamente.
El esquema que representa la figura 17.3, da una idea de lo complicado de este proce-
so molecular y de cmo el plegamiento de la molcula de ADN permite que estructuras
de ADN, con funciones de potencializadores y que se encuentran muy alejadas de una
regin codificante de un gen y de su promotor, se acerquen con la accin conjunta de
protenas especficas, para cada estructura gnica que requiera ser expresada o inhibida
en un momento determinado.
Se describen diferentes estructuras de las protenas que actan como factores de
transcripcin, tres de ellas se mencionan a continuacin.
231
Otro mecanismo de regulacin de la expresin gnica, est relacionado con la con-
densacin que experimenta la molcula de ADN al formar la cromatina y enrollarse de
forma ms compacta, con las protenas histonas, propias del empaquetamiento del ADN.
La condensacin del ADN o hetereocromatina, en la que la compactacin de los
genes no permite la funcin de grupos de genes adyacentes, y la eucromatina, en la que
la molcula de ADN est ms desenrrollada y permite la funcin de genes especficos
con sus potencializadores y promotores.
Estos mecanismos moleculares mantienen un lenguaje gentico, que se traduce en
los cambios de diferenciacin, movimientos celulares y comunicaciones celulares. Una
vez que una clula se diferencia, mantiene en las clones que derivan de ella, el mismo
esquema de expresin de los genes que tuvo lugar en la primera clula, es decir hay un
registro de pasos que queda como una "memoria celular".
Eventos celulares
Crecimiento
El crecimiento del embrin es un aspecto que comienza con las primeras divisiones
celulares an no diferenciada.
Se supone que el cuerpo humano adulto, est compuesto por unos diez billones (10)
de clulas.
El incremento numrico se relaciona con el ndice de divisiones mitticas y el control
de la velocidad con que este fenmeno se produce est tambin regulado, de forma
similar a como lo hacen los factores de transcripcin de genes, pero en este caso son
protenas especficas que regulan el ciclo celular incluyendo por supuesto la mitosis. Dentro
de este grupo proteico se encuentran dos tipos fundamentales de protenas:
232
Las ciclinas.
Las protenas quinasas dependientes de ciclinas. (Protenas del ciclo de divisin
celular Cdk).
233
La migracin celular entonces no ocurre sin rumbo, sino regulada genticamente. La
fibronectina es una protena extracelular que se conoce que marca su camino y el colgeno
parece ser una protena extracelular que marca hasta donde debe migrar la clula.
Las clulas que migran cambian su estructura citoplsmatica en su lado frontal, donde
aparecen invaginacionaes anchas y aplanadas como lminas, que reciben el nombre de
lamelipodios, en la formacin de estas curiosas estructuras estn involucradas proteinas
del citoesqueleto. De cada una de estas estructuras pronto aparecen otras en forma de
pas como finos pseudpodos, denominados micropas que en su interior poseen fila-
mentos de actina agrupados en manojos; estas micropas se adhieren a las zonas marca-
das por la fibronectina y se contraen avanzando de este modo hasta sitios especficos, por
reconocimiento de las molculas de protenas, hasta su destino. Le siguen en propiedad,
la adhesividad, determinada por glicoprotenas denominadas molculas de adhesin celu-
lar o CAM (clulas de adhesin molecular). Estas protenas desaparecen en cuanto las
clulas comienzan a migrar y reaparecen al llegar a su punto de destino, donde se ensam-
blan con otras clulas para formar el tejido determinado .
Otro fenmeno ocurre con las conexiones entre las clulas nerviosas y de stas con
las clulas musculares. Las neuronas ms que migrar hacen crecer sus axones, perma-
neciendo en su sitio los cuerpos celulares. Para ello, en el extremo distal de los axones
que tomarn contacto, entre ellos o con la fibra muscular, se desarrolla una estructura a
la que se le denomina cono de crecimiento, muy parecida a los laminopodios de la clula
migratoria, pero en lugar de micropas son prolongaciones ms largas denominadas
filipodios.
234
Induccin embrionaria
La notocorda induce al ectodermo para formar el tejido nervioso, este origina la ves-
cula ptica que a su vez induce al ectodermo supradyacente para que se desarrollo de el
cristalino, que junto con la propia vescula ptica, induce al mesodermo circundante a
que se forme la coroides y la esclertica. Una regin inducida pasa a ser inductora.
El fenmeno de induccin comienza al formarse el embrin trilaminar, cuando se
establecen relaciones de vecindad entre los tejidos.
Las hormonas tambin ejercen induccin entre tejidos distantes, la formacin de los
genitales externos son un ejemplo de ello.
Como hemos visto son muchos los genes que estn involucrados en el desarrollo
corporal y que tienen su accin durante la etapa de morfognesis. El control gentico del
desarrollo de cada parte corporal, se conoce por los experimentos realizados en la Drosfila
melanogaster y en vertebrados, aves y mamferos como el ratn. La presencia en el
humano, de las protenas que regulan cada parte corporal de las encontradas en estas
especies, son evidencias de la existencia de homologa en el control gentico de su
235
embriognesis, por lo que se han incorporado los mismos nombres asignados a los genes
de las especies donde fueron descritos por primera vez, a los genes humanos comprome-
tidos en el desarrollo.
La complejidad de los nombres y de la accin de cada gen o grupos de genes, hace
difcil la comprensin de este tema para el estudiante.
Con el objetivo de organizar metodolgicamente su estudio, se les incluye una versin
resumida del estado actual del tema.
Genes de segmentacin
1
No confundir con los genes de la polaridad de origen materno y que tienen la accin de definir las regiones
cfalo-caudal, ventrolaterales izquierdoa y derecha y dorso ventral, en etapas muy tempranas del
desarrollo del cigoto.
236
Sus nombres se deben a los estudios realizados por sus mutaciones en la Drosofila y
se ha incorporado su denominacin, a los vertebrados incluyendo al hombre, en la medi-
da en que se ha comprobado su homologa con ellos.
Genes hometicos
Otros tipos de genes con secuencias de ADN conservadas son: cajas pareadas (paired
box. PAX). Tienen 130 aa conservados en sus protenas, se conocen.
como PAX (PAX 3 y PAX 6). Mutaciones de estos genes en el humano producen el
sndrome Waardenburg y el defecto ocular aniridia (falta de iris).
237
Genes con caja HMG (Grupo de Alta Movilidad o Higth Movility Group)
Estos genes tienen una secuencia conservada de 79 aa, que se conoce con el nombre
HMG. A este grupo de genes corresponden los genes SOX cuyas protenas son reguladoras
de la transcripcin y se expresan durante la embriognesis. En el humano se ha detecta-
do una mutacin del SOX9 que se encuentra localizado en el cromosoma 17, que causa
una enfermedad gentica sea denominada displasia campomlica (defectos seos y de
genitales).
El gen SOX9 se expresa en la cadena de genes que estn relacionados con la dife-
renciacin de la gnada primitiva. En embriones cromosmicamente XY, activan la trans-
cripcin del gen SRY que funciona diferenciando la gnada primitiva en testculo.
Genes T
Estos genes comparten una secuencia homologa denominada caja T o T-box. Se les
denomina TBX y estn relacionados con la formacin del mesodermo y la diferenciacin
de la notocorda.
Algunos estn en el mismo cromosoma muy cerca unos de otros formando grupos
(clusters). Uno de estos grupos se encuentra en el cromosoma humano nmero 12, (genes
TBX3 y TBX5).
Mutaciones del gen TBX5 causan el sndrome Holt-Oram (que se caracteriza por
defectos de formacin de las extremidades superiores y cardiopata congnita, conocido
tambin como sndrome corazn manos).
238
Genes de transduccin de seales
Estos genes producen protenas que se encuentran en el exterior de las clulas y que
son del tipo de los factores de crecimiento. Funcionan como transductores de seales
hacia al interior de las clulas, regulando el crecimiento y la diferenciacin celular.
Las mutaciones de estos genes, adems de producir alteraciones del desarrollo pue-
den dar lugar a distintos tipos de cnceres.
El protooncogen RET situado en 10q11.2, produce una protena del tipo de las tirosinas
quinasas. Sus mutaciones que lo transforman en oncogen, producen cncer del tiroides,
otras mutaciones mantienen la estructura de protooncogen pero afectan el desarrollo
embrionario como es el caso de la enfermedad Hirschprung (fracaso de la migracin de
las clulas que darn origen a las clulas ganglionares de la mucosa y plexo mesentrico
del intestino grueso. (El nio afectado presenta distensin abdominal y obstruccin intes-
tinal).
Los receptores de factores de crecimiento fibroblstico (FGFR), son genes que pro-
ducen protenas que se caracterizan por presentar un segmento extracelular que se rela-
ciona con los factores de crecimiento fibroblstico especficos, un segmento intramembrana
citoplasmtica y un segmento intracitoplasmatico. Los cambios conformacionales de esta
protena, activan a otras protenas intracelulares, que a su vez pueden transmitir la seal
hasta el ADN nuclear determinando con esto una respuesta de funcin celular. Los
genes FGFR que se describen en el humano son FGFR1, FGFR2 y FGFR3. Mutaciones
del gen FGFR3 dan lugar a sndromes seos dentro de los que se encuentra la baja talla
denominada Acondroplasia.
239
homologa de estas familias cuyas mutaciones se expresan en malformaciones aisladas o
en sndromes con alteraciones congnitas mltiples.
Los resultados experimentales de la participacin de muchos de estos genes en el
desarrollo de la extremidades de animales, como las aves y el ratn, han permitido la
comprensin de la jerarqua de sus funciones, extrapolando los modelos de mecanismos
moleculares al desarrollo embrionario del humano y en particular al desarrollo de las
extremidades.
240
Embriloga descriptiva de las extremidades
241
Origen embrionario de los tejidos y estructuras componentes
de las extremidades
Qu es un patrn de formacin?
La organizacin espacial de la diferenciacin de clulas y de tejidos que tienen lugar
en el proceso de la morfognesis de los rganos y finalmente del cuerpo como un todo.
Patrn de formacin de las extremidades:
En los brotes de las extremidades, una clula puede "conocer" su posicin con respec-
to a tres ejes (Figura 17.4):
CRANEAL D O R SA L
D IS T A L
P R O X IM A L
VENTRAL
CAUDAL
Figura 17.4. Esquema del patrn de formacin de las extremidades con sus tres ejes.
242
La condensacin mesodrmica nuclear, adquiere capacidad de formacin de extremi-
dades, en respuesta a seales mediadas por el factor de crecimiento de insulina I (IGF-I)
y por la insulina.
Este fenmeno molecular determina la aparicin de una organizacin celular de in-
duccin en la regin apical del ectodermo, que cubre al brote y que recibe el nombre de
cresta ectodrmica apical (AER). Por otra parte, se forman los factores de crecimiento
fibroblstico (FGFs), en especial el FGF-8, sintetizado en estas propias clulas en va de
diferenciacin y que definen subgrupos celulares, que se hacen competentes para formar
una regin denominada zona de actividad de polarizacin (ZPA) de las extremidades
superiores e inferiores respectivamente, cuya funcin es la de definir la orientacin cfa-
lo caudal.
A su vez AER produce nuevos FGFs tales como los FGF1, FGF2, FGF 4 y FGF 8, que
tienen dos funciones : mantener el crecimiento y establecer el eje prximo-distal.
Las funciones de cada uno de los FGFs y de sus receptores, est comenzando a
comprenderse.
Otros productos proteicos involucrados son los genes HOX (9 al 13) del grupo D.
El HOX D 13, tiene su accin en manos y dedos (metacarpos y falanges), pero a su
vez los metacapianos y la falanges solo se forman normalmente si, adems, estn presen-
tes las protenas de los genes HOX D12 , 11, 10 y 9. En la formacin de la fila distal de los
huesos del carpo atuan los productos proteicos de los genes HOX 9 al 12, el cbito, el radio
y la fila proximal del carpo se forman bajo la accin de los productos proteicos de los genes
HOX D 11, 10 y 9, el hmero por las protenas de los genes HOX D 10 y 9 y finalmente la
escpula se forma por la accin de la protena expresada por el gen HOX D 9.
Experimentos relacionados con la formacin del eje crneo-caudal o cfalo-caudal
han evidenciado que ste se determina por la accin de morfgenos, entre los que se
encuentra el cido retinico (vitamina A). Estos morfgenos difunden para formar un
gradiente que determinar la posicin de cada dgito. Una alta concentracin de morfgeno,
inducira la formacin del quinto dedo y la disminucin gradual de concentracin, los
dedos cuarto, tercero, segundo y primero, es decir una direccin de gradientes de mayor
a menor en el sentido caudal-ceflico.
El desarrollo seo comienza en el da 33 por un mesnquima precursor, a partir del
cual comienza a ocurrir la condrificacin, unos das ms tarde (el da 40 del desarrollo)
ya comienza la osteognesis propiamente dicha.
243
ETIOLOGA AMBIENTAL DE DEFECTOS CONGENITOS
244
. los defectos de morfognesis,
. las deficiencias del crecimiento prenatal,
. las alteraciones funcionales del SNC
. e incluso la muerte fetal,
se refieren como indicadores generales de teratogenicidad.
- Biolgicos.
- Qumicos.
- Fsicos.
245
. Virus y dentro de este grupo los ms frecuentes son el virus de la rubola, el
citomegalovisus, poliovirus, herpes simples, varicela zoster, SIDA, entre otros mu-
chos.
Los efectos de estos agentes son muy similares: microcefalia calcificaciones ce-
rebrales, convulsiones, dficit auditivo y visual (diversos grados de afectacin ocu-
lar), prematuridad, crecimiento intrauterino retardado.
. Bacterias, en este grupo la sfilis, micoplasma, listeriosis, etc.
. Parsitos, Aunque se conocen varios parsitos que cruzan la barrera placentaria
solamente se conoce que infecte al feto el toxoplasma, que produce sntomas simi-
lares a los que ocasionan los agentes virales, en especial coriorretinitis.
Qumicos. Los agentes qumicos son un grupo importante de sustancias con efecto
teratognico pero para su anlisis pueden agruparse en tres clases:
246
del tubo neural. Los baos de sauna, los trabajos en los que la mujer embarazada tenga que
exponerse a altas temperaturas muchas horas al da, o incluso eventos febriles (temperatu-
ras superiores a 1.5 grados por encima de la temperatura habitual) son factores de riesgo.
Los teratgenos caracterizados como tales, cuando actan en el primer trimestre de
la gestacin, ocasionan defectos mltiples especficos que permiten ser reconocidos por
su expresin desde el punto de vista mdico como sndromes tales como fetal por
rubola, por alcoholismo, por efectos del calor etc.
Como este es un aspecto que explica el alto grado de expresividad variable de los
defectos ocasionados por teratgenos, que es difcil de comprender, exponemos un ejemplo
que ilustra el mismo y adems integra los conocimientos anteriores con el tema en cuestin.
Las sorderas en el humano son una condicin que tienen en su etiologa factores
genticos y ambientales. Para su estudio se clasifican en sorderas sindrmicas, para
referirse a los sndromes conocidos que cursan con ese defecto auditivo y no sindrmicas,
para referirse a los tipos que no presentan otros defectos anatmicos o funcionales aso-
ciados. Los factores genticos en estas ltimas pueden deberse a la expresin de sim-
ples mutaciones y estas a su vez, afectar tanto al genoma nuclear como al mitocondrial.
Existe un tipo de sordera en la que se ha encontrado una mutacin en el genoma mitocondrial
de tipo homoplsmico ( A1555G). Las personas que solamente tienen esta mutacin no
presentan sordera, pero si una predisposicin a padecer otoxicidad por la accin de
aminoglicsidos. Una mujer embarazada que presente esta mutacin la va a trasmitir a su
descendencia la mutacin al 100% de sus hijos, con sus mitocondrias, como corresponde
a este tipo de herencia y por supuesto, tanto ella como su feto sern susceptibles a la
accin ototxica de antibiticos con estas caractersticas.
247
Otro ejemplo lo constituyen defectos metablicos maternos, como la fenilcetonuria. Se
manifiesta en madres que fueron tratadas en su infancia con dietas carentes de fenilalanina
y que ya de adultas dejaron el tratamiento. Como ellas siempre presentan niveles plasmticos
muy altos de fenialanina, estas concentraciones tan altas pasan al producto y actan como
teratgenos. El efecto es un desarrollo anormal del SNC, evidenciado por microcefalia y
retraso mental.
La etiologa de los defectos congnitos de las extremidades como para cualquier otro
tipo de defecto congnito, puede ser gentica o ambiental (teratgenos). Los defectos
genticos a su vez, pueden ser monognicos, cromosmicos o multifactoriales, mientras
los ambientales pueden ser por el efecto teratognico de medicamentos (como la talido-
mida), drogas, fsicos como el calor y biolgicos por inflamacin de clulas o tejidos en
fase de diferenciacin.
Tambin, hay que tener en cuenta defectos congnitos uterinos maternos que impidan el
movimiento fetal y esto determine compromiso sanguneo, que afecte el desarrollo de los
vasos sanguneos transitorios para la formacin de una parte de la extremidad, o como
elemento disruptivo por disminucin del flujo sanguneo, comprometiendo el riego sanguneo
de una parte de la extremidad atrapada mecnicamente por el defecto uterino en cuestin.
Se ha propuesto una clasificacin atendiendo al tipo de defecto:
248
. Anormalidades de la apoptosis celular.
. Defectos focales (por disrrupcin).
. Anormalidades generales del esqueleto por displasias, como ocurren en la
osteognesis imperfecta y otros trastornos genticos que afectan el desarrollo seo
incluyendo errores congnitos del metabolismo de tipo lisosomal.
249
Los agentes disruptivos incluyen estrs mecnico severo y se agrupan en:
Bandas amniticas.
Infecciones virales intrauterinas.
Isquemia de cualquier causa.
RESUMEN
250
PREVENCIN DE LAS
ENFERMEDADES GENTICAS
Y ASESORAMIENTO GENTICO
Iris A. Rojas Betancourt
18
Las enfermedades genticas son casi siempre serias, incurables y muy pocas
tienen un tratamiento satisfactorio. As, en la situacin actual, los medios ms efec-
tivos de prevencin siguen siendo el Asesoramiento Gentico, con el Diagnstico
Prenatal, cuando es posible, a travs de los servicios de salud.
En este captulo vamos a abordar la vinculacin de la Gentica con estos servicios,
es decir, la aplicacin de los conceptos, tcnicas y mtodos de trabajo de esta ciencia,
al cuidado de la salud humana, a travs de los servicios de Gentica Mdica.
SERVICIOS DE GENTICA
Los especialistas que atienden los Servicios de Gentica Mdica, son genetistas clni-
cos que estn altamente comprometidos con el diagnstico, pronstico, tratamiento y
prevencin de enfermedades genticas y defectos congnitos y quienes en armonioso
trabajo con asesores genticos disean las estrategias preventivas individuales o genera-
les que sean pertinentes. Las caractersticas y objetivos que se ofrecen a continuacin
explican la atencin multidisciplinaria necesaria y coordinadas armnicamente a fin de
obtener los resultados que pueden esperarse.
Los servicios de Gentica, atendiendo al origen de la solicitud, pueden ser de dos tipos:
Objetivos
Atender los problemas mdicos, psicolgicos y sociales que presentan los pacien-
tes y sus familiares.
251
Facilitar su acceso a otros servicios.
Ayudarlos a vivir de la mejor manera posible.
Maximizar la probabilidad de que tengan descendencia no afectada (respetando su
autonoma reproductiva).
Prevenir la aparicin de la enfermedad en personas sanas con predisposicin
gentica.
252
Programas de prevencin con base poblacional
Programas preventivos
253
Como estas estrategias no son muy eficaces, sobre todo en el caso de las enfermeda-
des hereditarias, otra forma de prevencin primaria es la prevencin primaria basada
en opciones reproductivas post-concepcionales, es decir, evitar el nacimiento del nio
afectado.
sta implica el conocimiento del riesgo por parte de la pareja y la eleccin informada
de la opcin preventiva que mejor se adapte a sus valores personales y expectativas con
respecto a su futuro hijo.
El primer paso es la deteccin sistemtica de factores de riesgo en las parejas que se
puede lograr mediante:
254
Pesquisajes genticos
De recin nacidos.
Prenatales.
De adultos: Presintomticos.
De portadores.
Los principios que deben cumplir los pesquisajes en recin nacidos son:
Ejemplos:
Fenilcetonuria.
Galactosemia.
Hipotiroidismo congnito.
255
Los pesquisaje de portadores tienen como principios:
ASESORAMIENTO GENTICO
256
As surge el primer modelo de Asesoramiento Gentico que es el MODELO
EUGENSICO (primera mitad del Siglo XX).
Eugenesia es el trmino sugerido por Galton en l885 para nombrar a una corriente
dentro de las Ciencias Sociales que abogaba por el logro de mejores cualidades fsicas y
mentales en futuras generaciones. Eugenesia proviene de la palabra griega Eugnico que
significa "Bien Nacido".
Con esta idea, surgieron instituciones en Estados Unidos, Inglaterra y otros pases,
donde los cientficos no slo tomaban datos sobre rasgos humanos, sino que a veces
daban informacin a los familiares de los afectados, casi siempre con la intencin de que
no se reprodujeran. Los datos coleccionados no tuvieron un uso cientfico, sino que fue-
ron manejados por programas polticos y sociales.
El movimiento eugensico llev a horrendos excesos, por ejemplo en Estados Unidos
en 1926, fueron esterilizadas involuntariamente ms de 6, 000 personas, en Alemania se
legaliz la Eutanasia de los "genticamente imperfectos" en 1939, lo que llev a la muerte
a ms de 70, 000 personas. Estos abusos en nombre de la Gentica, fueron la base para
nuevos enfoques que prevalecen hoy en el Asesoramiento Gentico.
Modelo mdico-preventivo
Despus de estos malos comienzos, por al menos una dcada, los genetistas se abstu-
vieron de "aconsejar" a las familias acerca de condiciones potencialmente hereditarias.
A mediados de los aos 40, comienzan a funcionar "Clnicas Hereditarias" en Estados
Unidos e Inglaterra. En los 50, stas se incrementan. A medida que la medicina comienza
a centrarse en la prevencin, se comienza a dar informacin acerca de los riesgos, basa-
da casi enteramente en observaciones empricas, para que las familias pudieran evitar la
recurrencia de un defecto que ya haba aparecido. A pesar de que en esta poca se
hacen disponibles unas pocas pruebas diagnsticas, y se conoce la estructura del ADN,
no era posible la identificacin prospectiva de portadores y la base de los sndromes
cromosmicos era totalmente desconocida, por lo que aunque los objetivos de este Con-
sejo Gentico eran prevenir los trastornos genticos, ste estaba limitado a ofrecer a las
familias, informacin, simpata y el "consejo" de evitar la descendencia, ya que para la
mayora de los genetistas era obvio que las familias "racionales" querran evitar la
recurrencia.
257
Modelo basado en la toma de decisiones (aos 60)
Modelo psicoteraputico
Aunque las familias reciben a travs del Asesoramiento Gentico alguna informacin,
ellos no pueden procesarla o actuar consecuentemente con lo que han aprendido, hasta
que se enfrentan a poderosas reacciones. Por esta razn, explorar las experiencias, res-
puestas emocionales. objetivos, creencias religiosas, cultura, recursos, dinmica familiar
e interpersonal y estilos de enfrentamiento se ha convertido en parte integral del proceso
de Asesoramiento Gentico.
Dado que casi siempre el problema toma al paciente desprevenido, y an cuando
tenga alguna experiencia con el trastorno o conozca sus riesgos, puede surgir ansiedad,
temores y culpa, un asesor hbil tiene que ser capaz de reconocer y manejar estos facto-
res, identificar respuestas normales y patolgicas, prepararlos para nuevos problemas y
emociones que puedan surgir y ayudarlos a buscar recursos para mejorar su ajuste.
258
DEFINICION DE ASESORAMIENTO GENTICO
259
no slo sobre la naturaleza de los riesgos, los tests y las opciones reproductivas,
sino tambin sobre dilemas ticos que pudieran surgir como resultado de ellos.
Van dirigidos a:
1. El individuo afectado:
a) Disminuir el dolor y el sufrimiento por la enfermedad.
b) Ofrecerles tratamiento, si es posible.
c) Informarles del riesgo para su descendencia y otros familiares.
d) Disminuir la ansiedad y la culpa.
e) Ayudarlos a manejar el problema.
2. Los padres:
a) Ayudarlos a tomar decisiones.
b) Brindarles opciones reproductivas.
c) Disminuir la ansiedad y la culpa.
d) Educarlos.
e) Apoyarlos.
3. A la sociedad:
a) Prevenir las enfermedades genticas.
b) Eliminar las enfermedades genticas.
c) Disminuir la incidencia de las enfermedades genticas.
d) Disminuir la carga por ellas.
e) Disminuir la frecuencia de genes deletreos.
f) Aumentar la conciencia de la gente.
g) Influir en la seleccin de parejas.
4. Otros objetivos:
a) Aumentar la autonoma.
b) Ofrecer nuevos avances cientficos.
260
Principales razones por las que se solicita asesoramiento gentico
Se refieren a todos los elementos que conforman este proceso, es decir, sus compo-
nentes bsicos, los aspectos prcticos, los aspectos psicolgicos y los aspectos ticos del
Asesoramiento Gentico.
Diagnstico
Estimacin del riesgo
Comunicacin
Soporte o Basamento
Diagnstico
261
2.La confeccin del rbol Genealgico.
3.El Examen fsico al paciente y familiares.
4.La Confeccin de la Historia Clnica Gentica y revisin de la Historia anterior del
paciente y familiares donde podemos encontrar: Fotos, resultados de estudios,
resultados de necropsias y otros datos que contribuyan al diagnstico.
5.La indicacin de Exmenes complementarios que pueden ser de rutina como: San-
gre, Rx, etc. especiales como: Citogenticos, Bioqumicos, Moleculares, etc.
6.Revisin de la literatura actualizada
7.Consultas con otras especialidades.
1.Heterogeneidad gentica: Fenmeno que explica que ciertos trastornos que super-
ficialmente se recuerdan unos a otros al nivel clnico; son el resultado de defectos
genticos diferentes, o sea causados por mutaciones diferentes del mismo locus
(Heterogeneidad allica) o en diferentes loci (Heterogeneidad de locus), por lo
tanto pueden tener diferente evolucin y an diferente tipo de herencia. Algunos
trastornos pueden tener heterogeneidad tanto clnica como gentica. Ej.: las sorde-
ras, las mucopolisacaridosis, la enfermedad de Alzheimer, las distrofias muscula-
res, las atrofias musculares espinales, la fibrosis qustica.
2.Fenocopias: Condiciones que semejan enfermedades genticas y son causadas por
factores ambientales. Ej.: microcefalia.
3.Ilegitimidad: Tergiversa la historia familiar. No se puede interpretar adecuadamen-
te el rbol genealgico y por ende el patrn de herencia.
4.Los casos espordicos: El tamao relativamente pequeo de las familias actuales,
hace ms frecuente este problema. Muchas situaciones pueden conducir a la pre-
sencia de un caso espordico y todas tienen que ser tomadas en cuenta.
a) Que el trastorno no sea gentico o slo parcialmente gentico.
b) Que sea multifactorial, con bajo riesgo de recurrencia.
c) Que represente una nueva mutacin dominante.
d) Que sea cromosmico.
e) Que sea el primer afectado de una condicin Autosmica Recesiva.
f) Que sea el primer varn afectado de una condicin Recesiva Ligada al X.
5.Otros problemas:
a) Que el individuo afectado haya vivido en una poca remota cuando no existan
investigaciones relevantes para el diagnstico. En estos casos el interrogatorio
puede ser de gran valor, por Ej.: Se sospecha que un individuo de la familia padeci
262
Distrofia muscular y se sabe por el interrogatorio que muri a los 40 aos, debi
ser del tipo Becker y no Duchenne.
b) Que el individuo haya muerto sin realizarse investigaciones esenciales para el diag-
nstico (an estando disponibles), o sin realizarle necropsia, y no se guardaron
muestras de clulas, tejidos, ADN, etc.
c) Que el diagnstico no se haya podido o no se pueda hacer an estando el individuo
vivo. El conocimiento sobre los trastornos genticos es incompleto, pero puede
obtenerse una considerable ayuda contactando a colegas en otras partes del mun-
do y guardando muestras para futuras investigaciones. No obstante, las personas
que practican el Asesoramiento Gentico, tienen que estar conscientes de que hay
situaciones donde no es posible llegar al diagnstico y el Asesoramiento Gentico
no es preciso.
d) Que el diagnstico sea errneo. Esta es una situacin mucho ms peligrosa.
263
Una vez que el diagnstico es seguro y se han obtenido los detalles familiares preci-
sos, el riesgo puede ser estimado y se estar en posicin de intentar responder las pre-
guntas que seguramente han dado lugar a la solicitud de Asesoramiento Gentico, o sea
comunicar a la familia los riesgos de desarrollar o trasmitir la enfermedad a los familiares
especficos, nacidos o no.
En Gentica se casi siempre piensa y trabaja en trminos de probabilidades o propor-
ciones. Las cifras de riesgo en el Asesoramiento Gentico pueden darse en forma de
proporciones o porcentajes segn el criterio del asesor. La siguiente tabla ilustra un inter-
cambio prctico entre los dos enfoques.
Proporciones %
1 en 2 50
1 en 4 25
1 en 10 10
1 en 1000 0.1
Tambin, se pueden usar otros recursos didcticos como esquemas, lminas, bolsas
con bolas, etc. En cualquier mtodo que sea usado puede haber confusiones en la inter-
pretacin, aclararlos, requiere mucha paciencia. Por ejemplo:
264
Clasificacin del riesgo gentico
H E R E N C IA A U T O S O M IC A D O M IN A N T E (A .D .)
I 1 2
II
1 2 3 4
III 7 8
1 2 3 4 5 6 9
IV
1 2 3 4 5 6
265
b) Riesgos Empricos: El estimado se basa en datos observados. Es el riesgo dispo-
nible para la mayora de los trastornos genticos no mendelianos. Esta informacin
es confiable si se ha obtenido por mtodos estadsticos seguros y si el individuo que
se est asesorando proviene de una poblacin comparable a aquella donde fueron
obtenidos los datos. Es el riesgo estimado en la mayora de los trastornos
cromosmicos, multifactoriales o con heterogeneidad causal Tablas 18.1, 18.2 y
18.3)..
Hay que recordar que estas cifras no son universales en su aplicacin como las
mendelianas ya que:
- Los datos recogidos en una poblacin pueden no ser aplicables a otras donde la
incidencia, y quizs la etiologa del trastorno sea diferente.
- La mejora en el conocimiento de los trastornos, en particular la solucin de la
heterogeneidad o la identificacin de factores causales especficos, puede requerir
la revisin radical de los riesgos estimados previamente.
- Los riesgos pueden depender no slo del diagnstico sino de factores individuales
tales como el sexo, la severidad de la enfermedad y el nmero de miembros de la
familia afectados.
Tabla 18.1
Herencia Multifactorial
Ejemplo Incidencia % Riesgo para Riesgo para un
padres normales padre afectado de
de 2do hijo un hijo afectado
afectado(%) (%)
Anencefalia 0.20 5 -
Labio
Leporino/
Paladar 0.10 4 4
Hendido(LL/P
H)
266
Tabla 18.2. Enfermedades Cromosmicas
267
c) Riesgos estimados a partir de evidencias adicionales: Cuando pueden utilizar-
se resultados relevantes de investigaciones, los cuales pueden cambiar drsticamente
los estimados iniciales (mendelianos o empricos).
Ejemplos:
. AFP en Lquido amnitico en embarazo con riesgo para Defectos del Tubo Neural.
Deteccin de portadores y Diagnstico Presintomtico en enfermedades
de comienzo tardo, en un nmero cada vez mayor de trastornos mendelianos,
mediante el anlisis del ligamiento con marcadores de ADN o anlisis directo de
mutaciones.
Los resultados de estas investigaciones slo pueden utilizarse aisladamente, o sea
en casos especficos, no masivamente y no son 100% concluyentes, por lo que
deben usarse en combinacin con otros mtodos, especialmente si son usadas
dentro de un programa de pesquisaje poblacional.
268
Figura 18.2. Modo de aplicacin del teorema de Bayes. Enfermedad de Huntington.
269
El mejor enfoque es la Tabla de Vida. Desafortunadamente para muchas enfermeda-
des no hay suficiente informacin. La tabla (Tabla 18.4) de vida para la Enfermedad de
Huntington se hizo en una poblacin especfica, pero puede ser de uso general.
Tabla 18.4
270
adicionales, la solucin actual es darles un riesgo intermedio de 1 en 8, que es el
Riesgo Compuesto. Esta solucin es temporal e insatisfactoria, los nuevos avan-
ces tecnolgicos estn contribuyendo a resolver este problema que nos plantea la
heterogeneidad gentica.
Comunicacin
271
Soporte o basamento del asesoramiento gentico
Tabla 18.5
272
Deteccin de portadores.
Opciones reproductivas como:
- Contracepcin
- Esterilizacin
- Adopcin
- Donantes de gametos.
- Diagnstico Prenatal.
Objetivos:
Pueden ser Invasivos, cuando implican algun riesgo para la integridad materno - fetal,
siempre menor que el riesgo gentico, lo que justifica su uso; o No invasivos.
Mtodos invasivos
Procesamiento para obtener
1- Amniocentesis Tradicional: Edad gestacional, entre 15 y 17 semanas (Figura 18.3).
Ultrasonido previo.
Insercin transbdominal de aguja calibre 20 en el fondo.
Descartar las primeras gotas.
Extraccin de Lquido Amnitico.
273
Riesgos:
Maternos: .
- Extraccin de sangre.
- Extraccin de orina.
- Sangramiento transitorio (1%).
- Prdida de LA.
- Hemorragia.
- Amniotis (1 x 1000).
- Morbilidad emocional.
- Mortalidad Materna (1 x 20,000 a 1 x 100,000).
Fetales:
274
2- Amniocentesis Precoz:
Edad gestacional, entre12 y 14 semanas.
Tcnica - Igual que la tradicional, se extrae menos Lquido Amnitico.
Riesgo - Prdida fetal (3 - 4 %).
Ventajas - Ms temprano.
Desventajas - Fallo en obtener LA.
Baja concentracin de clulas.
3- Biopsia de Vellosidades Coriales (Transabdominal, transcervical, transvaginal) (Figura 18.4):
Edad gestacional, entre10 y 12 semanas.
Tcnica - US previo.
- Anestesia local.
- Insercin de aguja espinal calibre 19 guiada por US.
- Toma de muestra.
Riesgos - Prdida de embarazo (0,6 - 0,8%)
- CIUR.
- Ruptura de la placenta.
- Parto pretrmino.
- Defectos por reduccin de miembros (1,7%).
275
4- Cordocentesis (Funipuntura o funiculocentesis): Obtencin de sangre fetal por pun-
cin del cordn umbilical (Figura 18.5).
Figura 18.5. Esquema de toma de sangre por puncin del cordn umbilical.
Mtodos no invasivos
Tcnicas diagnsticas
276
Apoyo: Muchas parejas que vienen al Asesoramiento Gentico necesitan una u
otra forma de apoyo. La informacin que se da puede tener consecuencias tan
graves que los individuos requieren apoyo psicolgico y social. Esto lo puede rea-
lizar el mdico que elija la familia o un trabajador social, a veces se necesita ayuda
psicoteraputica especializada. Tambin se puede requerir ayuda mdica especia-
lizada o general, segn el trastorno, o ayuda social (sillas de ruedas), as que el
Apoyo en el Asesoramiento Gentico, es parte integral del manejo de un paciente
y su familia.
Contenido
Tiempo y Seguimiento
Momento
Enfoque
Local
Equipamiento
Personal
Fuentes de Informacin
Efectividad
- CONTENIDO: Debe haber una completa discusin de, al menos, el diagnstico y
pronstico de la enfermedad, los riesgos para el individuo que consulta, y las opcio-
nes y curso de accin disponibles.
- TIEMPO: El tiempo adecuado es esencial, el primer deber del mdico interesado
en los problemas del paciente, es asegurarse de que le dedic el tiempo suficiente
y necesario.
- MOMENTO: El Asesoramiento Gentico en el embarazo es considerablemente
mejor que despus del nacimiento de un nio afectado, sin embargo el momento
ideal es antes del matrimonio o la concepcin. Inmediatamente antes o despus del
nacimiento de un nio enfermo el Asesoramiento Gentico es muy necesario, pero
el proceso de comunicacin se hace difcil por la carga emocional que viven los
padres. Debemos prepararnos para cada situacin.
Diferentes momentos:
277
. Antes de la interrupcin del embarazo o del nacimiento de un nio afectado.
. Despus del nacimiento de un nio afectado.
. Despus de la muerte de un nio afectado.
E n foq u e
D irectiv o N o D irectiv o
In d icar D ar in fo rm aci n
S u g erir A y u d ar
N o in flu ir
278
- LOCAL: Dadas las caractersticas de este proceso de comunicacin, donde se
discuten cuestiones de alta sensibilidad, cualquiera que sea el lugar que se utilice
para realizarlo, debe tener en cuenta varias necesidades:
. ambiente tranquilo.
. libre de disturbios.
. no telfono.
. no entrada y salida de enfermeras u otro personal.
. no muchas personas.
. facilidades para examinar adultos.
- PERSONAL: Debe participar un genetista clnico, pero cada vez ms lo hacen los
mdicos generales. La remisin a otras especialidades se har de acuerdo con la
organizacin de los servicios en cada lugar. Algunos autores piensan que debe
estar siempre presente un mdico por los problemas del diagnstico, pero conside-
rando tambin que el staff de no- mdicos entrenados, representan un gran apoyo
al servicio, por ejemplo los asesores genticos entrenados en gentica y aspectos
psicolgicos y las enfermeras entrenadas en gentica y Asesoramiento Gentico
que complementan el trabajo del genetista clnico; y los trabajadores sociales que
garantizan el apoyo social con visitas a la casa, apoyo especfico, familiarizacin,
seguimiento e informacin adicional.
279
- EFECTIVIDAD DEL ASESORAMIENTO GENTICO: Debe haber un mtodo
que permita medir este aspecto prctico, dicho mtodo debe contemplar el logro
de una comprensin completa por parte del paciente que lo lleve a tomar la deci-
sin ms racional, pero, otras decisiones no deben verse como fallos del Asesora-
miento Gentico, ya que mientras el objetivo del mdico es prevenir la enferme-
dad, el de los pacientes puede ser otro bien diferente.
Debido a que el paciente que acude a los servicios de Gentica, se enfrenta a muchos
estmulos nuevos y complejos en un corto perodo de tiempo, adems, stos tienen que
ver con una esfera de la vida social llena de grandes emociones y carga sentimental, que
es la reproduccin y la familia, debemos tener en cuenta que se generar una situacin de
estrs. Lo ms llamativo de esta situacin es que entre el momento de la comunicacin
del diagnstico o riesgo y la toma de decisiones, la pareja o familia pasa por una secuen-
cia de manifestaciones psicolgicas que se conoce como "Reaccin de Enfrentamiento",
esta reaccin es similar a la que se produce ante cualquier otro tipos de evento estresante
mayor. Consta de cinco fases o etapas:
280
SHOCK Y NEGACIN: ste reduce el impacto del trauma, ya que el paciente
sale de la realidad y no es capaz de asimilar la informacin, sto los prepara para
la aceptacin cognoscitiva de la nueva situacin. Generalmente es un perodo cor-
to de tiempo.
ANSIEDAD: Se incorporan un poco a la realidad e intentan aceptar la nueva
situacin, lo que se manifiesta tratando de conocer e investigan ansiosamente so-
bre el problema.
IRA Y SENTIMIENTOS DE CULPA: Indica cierta aceptacin del problema, pero
dada la incapacidad de manejarlo emocionalmente surge la angustia y la frustra-
cin que se manifiesta hacia afuera con cierto grado de agresividad y hostilidad, y
hacia adentro con culpa.
DEPRESIN: Es la reaccin ante la "prdida". Demuestra mayor grado de acep-
tacin del problema.
HOMEOSTASIS PSICOLGICA: "Se desarrolla el duelo". Se acepta la situacin
y se hacen ajustes para una nueva vida. El tiempo que demora en alcanzarse vara
de un caso a otro.
Es importante conocer la existencia de esta reaccin, reconocer las etapas y los re-
querimientos de los individuos en cada una de ellas, para brindarles el apoyo necesario o
la ayuda especializada.
281
Esta emergencia de la tecnologa gentica, se acompaa de creciente preocupacin
respecto al mal uso de la informacin gentica en la sociedad. En muchas circunstancias
el conocimiento de esta informacin puede ser beneficioso, pero crea una base para la
discriminacin gentica, lo cual puede limitar o anular los beneficios anticipados de la
investigacin, adems de las reales y potencialmente devastadoras consecuencias de la
discriminacin y otros efectos indeseables que, como ha ocurrido ya antes en la historia,
puede traer un nmero de problemas sociales.
Como los problemas ticos, se refieren a dilemas y cuestiones morales, es fcil darse
cuenta de que para muchos de ellos no existen respuestas correctas o incorrectas, gene-
ralmente se manejan en forma de un grupo de principios que resumen el pensamiento
filosfico de personas de la sociedad que son pensadores, estn instruidos y son respeta-
dos, de donde surge un cdigo de trabajo que constituye la base de las directrices profe-
sionales.
En este sentido, algunos estudiosos han promovido la discusin entre los genetistas
del mundo, sobre los principales dilemas ticos en la prctica de la Gentica Mdica y la
provisin de Servicios de Gentica. Estas discusiones han servido de base para el esta-
blecimiento por parte de expertos convocados por la Organizacin Mundial de la Salud
(OMS), de una propuesta de normativas internacionales sobre estos temas; diseadas
para asistir a los que toman decisiones a niveles regionales y nacionales, en la proteccin
a las familias con enfermedades genticas; para reconocer los importantes avances de la
Gentica Mdica en la Salud Pblica; y para desarrollar polticas que aseguren que estas
aplicaciones sean accesibles a todos y aplicadas con el debido respeto a la tica y la
justicia en todo el mundo.
En dichas normativas se establece, que la aplicacin del conocimiento gentico se
tiene que llevar a cabo respetando los PRINCIPIOS GENERALES DE LA TICA
MDICA: la Autonoma, la Beneficencia, la No Maleficencia, la Proporcionalidad y la
Justicia; y se identifican los principales problemas ticos en la prctica de la Gentica
Mdica, como:
282
- Diagnstico Presintomtico y Pruebas de susceptibilidad, incluyendo las Pruebas
Genticas en Menores.
- Pesquisajes poblacionales.
- Temas de investigacin.
- Terapia gnica experimental en humanos.
Numerosos estudios han demostrado que estos postulados, no dan respuestas a todos los
problemas, en todas partes, por lo que el debate contina.
283
ANEMIA DE CLULAS
FALCIFORMES: UN PROGRAMA
DE NIVEL PRIMARIO DE ATENCIN 19
Marcos Martn Ruz
284
- Anemia de Hemates Falciformes.
- Hemoglobinopatas S.
- Sickle Cell Disease (en ingls).
285
colonialistas espaoles hasta el siglo XIX. Tambin estn presentes algunos casos que
llegaron a Cuba a travs de inmigrantes de pases rabes como Lbano y Siria. En las
provincias orientales la prevalencia de heterocigotos con HbAS tienen una prevalencia
entre 5 y 7%. En algunas zonas especficas del pas pueden ser ms altas. Aunque se ha
calculado que de acuerdo con las frecuencias de portadores, podran nacer anualmente
en Cuba aproximadamente 100 nios con la enfermedad, sin embargo, el efecto de con-
centracin de heterocigotos en zonas determinadas y la tendencia a matrimonios intra-
tnicos hace que el nmero de parejas de en que ambos tiene HbAS o HbAC (Hemglobinas
A y C), que tienen alto riesgo (25%), sea ms alto que lo estadsticamente esperado si
todos los matrimonios fueran al azar y la distribucin fuera uniforme en el pas.
El Sistema Cubano de Salud (SNS) tiene establecido un programa para detectar tem-
pranamente las parejas y brindarles la posibilidad de un diagnstico prenatal, de tal forma
que ellas podran tomar decisiones respecto a la continuacin o interrupcin del embarazo
si el diagnstico fetal fuera positivo.
A partir de las decisiones de las parejas de interrumpir el embarazo en unos casos y en
otros por la disminucin del nmero de hijos que en estas condiciones deciden tener, ha
sido menor en las ltimas dos dcadas el nmero de nacimientos de nios afectados.
En este programa, el mdico de la atencin primaria debe indicarle a la gestante un
anlisis para determinar el tipo de hemoglobina que ella posee. Si resulta tener HbAS o
HbAC, u otra combinacin que no sea la hemoglobina normal en forma homocigtica
(HBAA), debe brindarse el mismo estudio al cnyuge. As, es posible detectar las parejas
de alto riesgo. El anlisis debe hacerse lo ms temprano posible para que pueda realizar-
se el diagnstico prenatal en momento apropiado si sta fuera la opcin de la pareja, por
tanto se indica al momento del diagnstico del embarazo. En muchas ocasiones, ya la
gestante, su esposo o ambos conocen su condicin, lo cual es deseable y permite mayor
rapidez. El estudio preconcepcional es posible y deseable, siempre que se decida por las
personas y se indica por los mdicos de la atencin primaria u otros.
Los nios que nazcan con la afeccin por haber decidido sus padres continuar el
embarazo o por cualquier otro motivo, son dispensarizados y reciben una atencin mdico
especializada. El Instituto de Hematologa e Inmunologa y los servicios hematolgicos en
Cuba, han trabajado desde la dcada de los aos 80 en la atencin precoz y est total-
mente demostrado que este diagnstico precoz de la afeccin permite acciones de pre-
vencin secundaria, evitando en lo posible las complicaciones, resultando en una mayor
calidad y esperanza de vida a los mismos.
286
En todo el programa se respeta la autonoma de las personas, que tienen la opcin de
aceptar o rechazar cualquiera de las acciones de salud, como son: la determinacin del
tipo de hemoglobina, el diagnstico prenatal o la interrupcin del embarazo.
La ejecucin de programas de pesquisaje masivo como el que describimos, es reco-
mendable en las enfermedades con patrn de herencia autosmico recesivo, cuando la
prevalencia del gen mutado causante de la enfermedad es alta en la poblacin y existen
tcnicas de laboratorio que permitan detectar a los heterocigotos. Requieren adems de
recursos humanos, tcnicos y organizativos, generalmente aportados por las agencias
gubernamentales. En nuestro pas es garantizado por el sistema nacional de salud.
Los actores de este programa son los ciudadanos que deseen participar, los mdicos
de la atencin primaria, y el resto de los profesionales de la salud que ejecutan las distin-
tas acciones. No obstante queremos resaltar el papel del mdico de la atencin primaria.
El mdico de la atencin primaria asegura a sus pacientes la informacin relacionada
con el programa, la descripcin de la enfermedad y sus complicaciones, el estudio
preconcepcional o en el momento de la gestacin a las embarazadas, la realizacin de los
anlisis correspondientes en el momento ms adecuado, y el seguimiento hasta conocer
el riesgo de una persona o una pareja en particular, as como mantenerle informado del
curso de los estudios de los mismos.
RESUMEN
287
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