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Apoptosis PDF
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FACULTAD DE MEDICINA
UNNE.
APOPTOSIS
AUTORES:
SOSA, RICARDO DANIEL
Profesor, Ctedra de
Oncologa. Facultad de
Medicina. UNNE.
APOPTOSIS
1. Introduccin
La muerte celular, particularmente la apoptosis, probablemente sea uno de los tpicos ms estudiados
entre los bilogos celulares. Entender la apoptosis en condiciones de enfermedad es muy importante, ya que
no slo puede ensear la patognesis de la enfermedad sino tambin da pistas de cmo puede ser tratada la
enfermedad; por ejemplo, en el cncer hay una prdida de balance entre las clulas en divisin y la muerte
celular, y las clulas que deberan morir no reciben las seales para hacerlo. El problema puede surgir en
cualquier etapa en la va de la apoptosis. Un ejemplo es el downregulation del p53, un gen supresor de tumor,
que resulta en menos apoptosis y mayor crecimiento y desarrollo tumoral, y la inactivacin del p53,
independientemente del mecanismo, se lo ha vinculado a muchos cnceres humanos.
2. Apoptosis
El trmino apoptosis deriva del griego y que significa cada y se refiere a la cada de
las hojas de los rboles en otoo. Se lo usa en contraste con necrosis para describir la situacin en el cual
una clula persigue de forma activa un camino hacia la muerte, a partir de recibir ciertos estmulos. Desde que
fue descripta la apoptosis por Kerr et al en 1970, es uno de los procesos ms investigados en la biologa. Al ser
un proceso altamente selectivo, es importante tanto en condiciones fisiolgicas como patolgicas. En
situaciones fisiolgicas tales como la destruccin programada en el desarrollo embrionario para terminar de
formar los tejidos, la involucin fisiolgica tales como el desprendimiento del endometrio o la regresin de la
mama luego de la lactancia, la destruccin normal de las clulas acompaadas por nueva proliferacin como
en el tracto digestivo, la involucin del timo a edad temprana. Y en condiciones patolgicas como la muerte
celular inducida por un quimioterpico en el cncer, la muerte y deplecin progresiva de los CD4 en el SIDA,
algunas formas de muerte celular inducidas por virus como en las hepatitis B o C, la atrofia patolgica de
rganos y tejidos como resultado de retirar un estmulo como la atrofia de la prstata luego de una
orquiectoma, etc.
En resumen, la muerte celular programada hace referencia a situaciones en las cuales las clulas
activan un programa letal que se encuentra codificado en el genoma, que en un momento preciso, selecciona
determinadas clulas para morir. La apoptosis tiene como funcin biolgica principal mantener la homeostasis
en distintas poblaciones celulares. La desregulacin de este proceso puede conducir a estados patolgicos que
involucran a enfermedades con excesiva acumulacin celular (falta apoptosis) o con excesiva prdida celular
(sobra apoptosis).
NECROSIS APOPTOSIS
Rasgos Morfolgicos Rasgos Morfolgicos
Prdida de la integridad de las Formacin de ampollas en las
membranas. membranas sin prdida de la integridad.
Floculacin de la cromatina. Agregacin de la cromatina sobre la
Hinchazn de la clula. membrana nuclear.
Lisis completa, sin formacin de Condensacin citoplasmtica y nuclear.
vesculas. Formacin de vesculas rodeadas de
Desintegracin de las organelas, con membranas.
formacin de ampollas. No hay desintegracin de organelas.
DNA. Otra caracterstica especfica de la apoptosis es la activacin de un grupo de enzimas que pertenecen a
la familia de la cistena-proteasas, denomindas caspasas. La c de caspasa se refiere a la Cisteina-
proteasa, en tanto el aspasa se refiere a la propiedad nica de la enzima de clivar siempre despus de
residuos asprticos. Las caspasas activadas, clivan muchas protenas celulares vitales y rompen el andamiaje
nuclear y el citoesqueleto. Tambin activan a las DNAsas, que adems degradan al DNA nuclear. Aunque los
cambios bioqumicos explican en parte algunos de los cambios morfolgicos de la apoptosis, es importante
notar que el anlisis bioqumico de la fragmentacin del DNA o la activacin de las caspasas no deberan ser
usados para definir a un proceso apopttico, ya que puede ocurrir apoptosis sin fragmentacin
olignonucleosomal del DNA y puede ser caspasa-independiente. El Nomenclature Committee on Cell Death
(NCCD) ha propuesto que la clasificacin de las modalidades de muerte celular se basen exclusivamente en
criterios morfolgicos, ya que no hay una clara equivalencia entre cambios ultraestructurales y bioqumicos
que deriven de la muerte celular.
La va extrnseca del receptor de muerte, como su nombre lo indica, comienza cuando los ligandos de
muerte se unen a un receptor de muerte. Aunque se han descripto varios receptores de muerte, los ms
conocidos receptores de muerte son el receptor de TNF tipo 1 (TNFR1), y una protena relacionada llamada Fas
(CD95) y sus ligandos, TNF y Fas ligando (FasL), respectivamente. Estos receptores de muerte tienen un
dominio de muerte intracelular que recluta a protenas adaptadoras tales como el dominio de muerte
asociado al receptor TNF (TRADD) y al dominio de muerte asociado a Fas (FADD), as como a cistena-proteasas
como las caspasas. La unin de un ligando de muerte a un receptor de muerte, resulta en la formacin de un
sitio de unin para una protena adaptadora y el complejo completo de ligando-receptor-adaptador se conoce
como DISC (complejo de sealizacin que induce muerte). El DISC entonces, inicia el ensamblaje y activacin
de la pro-caspasa 8. La forma activada de la enzima, la caspasa 8, es una caspasa iniciadora, que inicia la
apoptosis clivando otras caspasas ejecutoras o de ro abajo.
Como su nombre lo indica, la va intrnseca se inicia dentro de la clula. Los estmulos internos, tales
como un dao gentico irreparable, la hipoxia, concentraciones extremadamente altas de calcio citoslico y un
stress oxidativo severo, son todos disparadores de la iniciacin de la va mitocondrial intrnseca.
Independientemente del estmulo, esta va es el resultado de una permeabilidad mitocondrial aumentada y de
la liberacin de molculas proapoptticas tales como la citocromo-c hacia el citoplasma. Esta va est
estrechamente regulada por un grupo de protenas que pertenecen a la familia Bcl-2. Hay dos grupos
principales de protenas Bcl-2, especficamente las protenas pro-apoptticas (Bax, Bak, Bad, Bcl-Xs, Bid, Bik,
Bim y Hrk) y las anti-apoptticas (Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-W, Bfl-1 y Mcl-1) En tanto las protenas anti-apoptticas
frenan la apoptosis bloqueando la liberacin mitocondrial de citocromo-c, las protenas pro-apoptticas
actan promovieron la liberacin de citocromo-c desde la mitocondria hacia el citoplasma. No es la cantidad
absoluta, sino el balance entre las protenas pro- y anti-apoptticas lo que determina si se va a iniciar o no la
apoptosis. Otros factores apoptticos que se liberan desde el espacio intermembranoso mitocondrial hacia el
citoplasma incluyen al factor inductor de apoptosis (AIF), al segundo activador de caspasa derivado de
mitocondria (Smarc), a la protena de unin al IAP directo con bajo ph (DIABLO) y la protena A de
requerimiento de alta temperatura /Omi (HtrA2). La liberacin citoplasmtica de citocromo-c activa a la
caspasa 3 por medio de la formacin de complejo conocido como apoptosoma, que est conformado de
citocromo-c, Apaf-1 y caspasa 9. Por otro lado, el Smac/DIABLO o la Omi/HtrA2, promueven la activacin de la
caspasa unindose al inhibidor de las protenas de apoptosis (IAPs) que posteriormente lleva a la disrupcin en
la interaccin de los IAPs con la caspasa 3 o 9.
2.3.3 La va comn
La fase de ejecucin de la apoptosis involucra la activacin de una serie de caspasas. Las caspasas que
est hacia arriba (ro arriba) de la va intrnseca es la caspasa 9, en tanto la de la va intrnseca es la capasa 8.
Las vas intrnseca y extrnseca convergen en la caspasa 3. La caspasa 3, as, cliva al inhibidor de la
desoxiribonucleasa activada por caspasa, que es responsable de la apoptosis nuclear. Adems, las caspasas
que estn rio abajo, inducen el clivaje de las proten-kinasas, protenas del citoesqueleto, protenas de
reparacin del DNA y subunidades inhibitorias de la familia de las endonucleasas. Tienen tambin un efecto
sobre el citoesqueleto, el ciclo celular y las vas de sealizacin, los cuales, todos juntos, contribuyen a los
cambios morfolgicos tpicos de la apoptosis.
El hecho de que los precursores de las caspasas estn expresados constitutivamente en las clulas
vivas, y que la apoptosis pueda inducirse rpidamente en ellas, probaran la alta sofisticacin y eficiencia del
proceso de regulacin de las caspasas. En la actualidad existen varios modelos que explican el modo en que se
regulara la actividad de estas proteasas:
1) Activacin de las caspasas efectoras: una seal pro-apopttica culmina en una caspasa iniciadora que,
posteriormente, activa a las efectoras provocando el desensamblaje celular.
2) Activacin de las caspasas iniciadoras: las caspasas iniciadoras se activaran por unin a cofactores
especficos. As, en el caso de la pro-caspasa 8 se requerira la unin con su cofactor FADD para su activacin.
La pro-caspasa 9, en cambio, se activa al unirse a Apaf-1, pero requiere del citocromo-c y del ATP para
conformar el apoptosoma. Esto indica que la activacin de estas proteasas puede requerir de mltiples
cofactores, habiendo surgido distintos modelos para explicar cmo podra producirse la activacin a travs de
ellos.
3) Los inhibidores como reguladores: las IAPs actuaran bloqueando la apoptosis a travs de la inhibicin de
caspasas efectoras, sin embargo, tambin previenen la activacin de estas enzimas cuando hay
sobreexpresin, sugiriendo que los blancos reales en las clulas son la pro-caspasas efectoras y otras protenas
involucradas en la activacin.
Esta va del retculo endoplsmico intrnseco es una tercera va y la menos conocida. Se cree que
depende de la caspasa 12 y es independiente de la mitocondria. Cuando el RE se injuria por stress celular
como hipoxia, radicales libres o falta prolongada de glucosa, hay un desplegamiento de protenas y una
sntesis reducida de protenas en la clula, y una protena adaptadora conocida como factor 2 asociado al
receptor TNF (TRAF2), se disocia de la pro-caspasa 12, resultando en la activacin de la misma.
Todos los miembros Bcl-2 estn localizados en la membrana mitocondrial externa. Son dmeros
responsables de la permeabilidad de esta membrana, sea en la forma de canal inico o a travs de la creacin
de poros. Segn su funcin y los dominios de homologa Bcl-2 (BH = Bcl-2 Homology), los miembros de esta
familia se dividen en tres grupos. El primer grupo son las protenas anti-apoptticas que contienen los cuatro
dominios BH y protegen a la clula de cualquier estmulo apopttico. Algunos ejemplos son el Bcl-2, Bcl-xL,
Mcl-1, A1/Bfl-1 y Bcl-B/Bcl2L10. El segundo grupo est conformado de protenas slo con dominio BH-3,
llamadas as en comparacin a los otros miembros, y estn restringidas al dominio BH3. Ejemplos de este
grupo incluyen al Bid, Bim, Puma, Noxa, Bad, Bmf, Hrk y Bik. En momentos de mucho stress celular, tal como
dao al DNA, deprivacin de algn factor de crecimiento, se activan las protenas slo-BH3, que son iniciadoras
de la apoptosis. Por lo tanto, son pro-apoptticas. Los miembros del tercer grupo contienen tambin los
cuatro dominios BH y tambin son pro-apoptticas. Algunos ejemplos incluyen al Bax, Bak y Bok/Mtd.
p53
La protena p53, tambin llamada protena tumoral 53 (o TP 53), es uno de las protenas supresoras de
tumores mejor conocidos, codificado por el gen supresor de tumor TP53, localizado en el brazo corto del
cromosoma 17 (17p). Se los denomina por su peso molecular, es decir 53 kDa. Esta protena no solo est
involucrada en la induccin de la apoptosis sino tambin tiene un papel clave en la regulacin del ciclo celular,
diferenciacin, desarrollo, amplificacin gnica, recombinacin del DNA, segregacin cromosmica y
senescencia celular, por lo que es llamada guardian del genoma.