La apoptosis en el cncer: desde la patognesis al tratamiento

Abstracto La apoptosis es un ordenado y orquestado proceso celular que se produce en condiciones fisiolgicas y patolgicas. Tambin es uno de los temas ms estudiados entre bilogos celulares. La comprensin de los mecanismos subyacentes de la apoptosis es importante, ya que desempea un papel fundamental en la patognesis de muchas enfermedades. En algunos, el problema se debe a un exceso de la apoptosis, tales como en el caso de enfermedades degenerativas mientras que en otros, demasiado poco la apoptosis es el culpable. El cncer es uno de los escenarios donde se producen demasiado poco la apoptosis, lo que resulta en clulas malignas que no morirn. El mecanismo de la apoptosis es compleja e implica muchas vas. Los defectos pueden ocurrir en cualquier punto a lo largo de estas vas, lo que lleva a la transformacin maligna de las clulas afectadas, metstasis tumoral y la resistencia a los frmacos contra el cncer. A pesar de ser la causa del problema, la apoptosis desempea un papel importante en el tratamiento de cncer, ya que es un objetivo popular de muchas estrategias de tratamiento. La abundancia de la literatura sugiere que la orientacin de la apoptosis en el cncer es factible. Sin embargo, muchas cuestiones preocupantes surgen con el uso de nuevos frmacos o estrategias de tratamiento que estn diseados para potenciar la apoptosis y pruebas crticas se deben pasar antes de que puedan ser utilizados con seguridad en sujetos humanos. 1. Introduccin La muerte celular, en particular la apoptosis, es probablemente uno de los temas ms ampliamente estudiados entre bilogos celulares. La comprensin de la apoptosis en las condiciones de la enfermedad es muy importante ya que no slo da una visin en la patognesis de una enfermedad, pero tambin puede deja pistas sobre cmo la enfermedad puede ser tratada. En el cncer, hay una prdida del equilibrio entre la divisin celular y la muerte celular y las clulas que debera haber muerto no recibir las seales para hacerlo. El problema puede surgir en cualquier paso en el camino de la apoptosis. Un ejemplo es la regulacin a la baja de p53, un gen supresor de tumores, lo que se traduce en disminucin de la apoptosis y el crecimiento tumoral mejorada y el desarrollo y la inactivacin de p53, independientemente del mecanismo, se ha relacionado con muchos cnceres humanos. Sin embargo, al ser un arma de doble filo, la apoptosis puede ser la causa del problema y la solucin, ya que muchos de ellos han incursionado en la bsqueda de nuevos frmacos dirigidos a diversos aspectos de la apoptosis. Por lo tanto, la apoptosis juega un papel importante en el tratamiento tanto de la carcinognesis y cncer. Este artculo proporciona una revisin completa de la apoptosis, sus mecanismos, cmo los defectos a lo largo de la va de apoptosis contribuyen a la carcinognesis y la forma en la apoptosis puede ser utilizado como un vehculo de tratamiento especfico en el cncer. 2. Apoptosis El trmino "apoptosis" se deriva de las palabras griegas "a" y "s" significado "de dejar a" y se refiere a la cada de las hojas de los rboles en otoo. Se utiliza, en contraste con la necrosis, para describir la situacin en la que una clula persigue activamente un curso hacia la muerte al recibir ciertos estmulos. Desde que la apoptosis fue descrito por Kerr et al en la dcada de 1970, sigue siendo uno de los procesos ms investigados en la investigacin biolgica. Al ser un proceso altamente selectivo, la apoptosis es importante en tanto en condiciones fisiolgicas y patolgicas. Estas condiciones se resumen en la Tabla 1. 2.1 Los cambios morfolgicos de la apoptosis Las alteraciones morfolgicas de la muerte celular apopttica que se refieren tanto el ncleo y el citoplasma son notablemente similares en todos los tipos de clulas y especies. Por lo general se necesitan varias horas desde el inicio de la muerte celular a la fragmentacin celular final. Sin embargo, el tiempo empleado depende del tipo de clula, el estmulo y la va apopttica. Caractersticas morfolgicas de la apoptosis en el ncleo son condensacin de la cromatina y fragmentacin nuclear, que van acompaados de redondeo de la clula, la reduccin en el volumen celular (picnosis) y la retraccin de pseudopodes. Condensacin de la cromatina comienza en la periferia de la membrana nuclear, la formacin de una media luna o estructura similar a un anillo. La cromatina se condensa ms hasta que se rompe en el interior de una clula con una membrana intacta, una caracterstica descrita como cariorrexis. La membrana plasmtica est intacta durante todo el proceso total. En la etapa posterior de la apoptosis de algunas de las caractersticas morfolgicas incluyen formacin de ampollas en la membrana, la modificacin ultrastrutural de los orgnulos citoplasmticos y una prdida de integridad de la membrana. Por lo general, las clulas fagocticas engullen clulas apoptticas antes de que aparezcan los cuerpos apoptticos. Esta es la razn por la que la apoptosis se descubri muy tarde en la historia de la biologa celular en 1972 y cuerpos

apoptticos se ven in vitro en condiciones especiales. Si los restos de clulas apoptticas no son fagocitadas, como en el caso de un entorno de cultivo celular artificial, que sern sometidos a la degradacin que se asemeja a la necrosis y la condicin se denomina necrosis secundaria. 2.2 Los cambios bioqumicos en la apoptosis En trminos generales, tres tipos principales de cambios bioqumicos se pueden observar en la apoptosis: 1) la activacin de las caspasas, 2) ADN y la protena de degradacin y 3) cambios en la membrana y el reconocimiento por las clulas fagocticas. A principios de la apoptosis, no hay expresin de fosfatidilserina (PS) en las capas externas de la membrana de la clula, que ha sido "un tirn hacia fuera" de las capas internas.Esto permite el reconocimiento temprano de las clulas muertas por los macrfagos, lo que resulta en la fagocitosis sin la liberacin de componentes celulares proinflamatorias. Esto es seguido por una ruptura caracterstica de ADN en trozos grandes 50 a 300 kilobases. Ms tarde, no es la escisin de ADN internucleosomal en oligonucleosomas en mltiplos de 180 a 200 pares de bases por endonucleasas. Aunque esta caracterstica es caracterstica de la apoptosis, no es especfica como la escalera de ADN tpica en la electroforesis en gel de agarosa se puede ver en las clulas necrticas tambin. Otra caracterstica especfica de la apoptosis es la activacin de un grupo de enzimas que pertenecen a la familia de cistena proteasa llamado caspasas. La "c" de la "caspasa" se refiere a una proteasa cistena, mientras que el "aspase" se refiere a la propiedad nica de la enzima para escindir despus de residuos de cido asprtico. Activado caspasas escinden muchas protenas celulares vitales y romper el andamiaje nuclear y el citoesqueleto. Ellos tambin activan ADNasa, que degradan an ms el ADN nuclear. A pesar de los cambios bioqumicos explican en parte algunos de los cambios morfolgicos en la apoptosis, es importante sealar que los anlisis bioqumicos de la fragmentacin del ADN o de activacin de la caspasa no deben ser utilizados para definir la apoptosis, como la apoptosis puede ocurrir sin la fragmentacin del ADN oligonucleosomal y puede ser caspasa- independiente. Aunque muchos ensayos bioqumicos y experimentos se han utilizado en la deteccin de la apoptosis, el Comit de Nomenclatura de la muerte celular (CNCD) ha propuesto que la clasificacin de las modalidades de muerte celular se debe confiar exclusivamente en criterios morfolgicos, porque no hay equivalencia clara entre los cambios ultraestructurales y las caractersticas bioqumicas de muerte celular. 2.3 Mecanismos de la apoptosis La comprensin de los mecanismos de la apoptosis es crucial y ayuda en la comprensin de la patognesis de las condiciones como resultado de la apoptosis desordenada. Esto, a su vez, puede ayudar en el desarrollo de frmacos que se dirigen a ciertos genes o vas apoptticas. Las caspasas son central para el mecanismo de la apoptosis ya que ambos son los iniciadores y ejecutores. Hay tres vas por las que las caspasas pueden ser activados. Las dos vas de iniciacin comnmente descritas son las vas intrnseca (o mitocondrial) y extrnseca (o receptor de muerte) de la apoptosis (Figura 1). Ambas vas pueden dar lugar a una va comn o la fase de ejecucin de la apoptosis. Una tercera va de iniciacin menos conocida es la va retculo endoplsmico intrnseco. 2.3.1 La muerte del receptor va extrnseca La muerte del receptor va extrnseca, como su nombre implica, comienza cuando ligandos de muerte se unen a un receptor de muerte. Aunque se han descrito varios receptores de muerte, los mejores receptores de muerte conocidos es el receptor de TNF tipo 1 (TNFR1) y una protena relacionada llamada Fas (CD95) y sus ligandos se denominan TNF y el ligando de Fas (FasL), respectivamente. Estos receptores de muerte tienen un dominio de muerte intracelular que recluta protenas adaptadoras tales como TNF dominio de muerte asociada al receptor (TRADD) y el dominio de muerte asociado a Fas (FADD), as como proteasas de cistena, como la caspasa 8. La unin del ligando de muerte a los resultados de los receptores de muerte en la formacin de un sitio de unin para una protena adaptadora y todo el complejo de la protena ligando-receptor-adaptador es conocido como el complejo de sealizacin inductor de muerte (DISC) [22]. DISCO luego inicia el ensamblaje y la activacin de pro-caspasa 8. La forma activada de la enzima, la caspasa 8 es una caspasa iniciadora, que inicia la apoptosis mediante la escisin de otras aguas abajo o caspasas ejecutoras. 2.3.2 La va intrnseca mitocondrial Como su nombre implica, la va intrnseca se inicia dentro de la clula. Estmulos internos como el dao irreparable gentica, la hipoxia, muy altas concentraciones de Ca2 + citoslico y el estrs oxidativo severo son algunos factores desencadenantes de la iniciacin de la va intrnseca mitocondrial. Independientemente de los estmulos, esta va es el resultado del aumento de la permeabilidad mitocondrial y la liberacin de molculas pro-

apoptticas tales como citocromo-c en el citoplasma. Esta va est regulada de cerca por un grupo de protenas que pertenecen a la familia de Bcl-2, el nombre del gen BCL2 originalmente observada en el punto de ruptura cromosmica de la translocacin del cromosoma 18 a 14 en folicular no Hodgkin. Hay dos grupos principales de las protenas Bcl-2, es decir, las protenas pro-apoptticas (por ejemplo, Bax, Bak, Bad, Bcl-Xs, Bid, Bik, Bim y Hrk) y las protenas anti-apoptticas (por ejemplo, Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-W, Bfl-1 y MCL-1). Mientras que las protenas anti-apoptticas regulan la apoptosis al bloquear la liberacin mitocondrial de citocromo-c, las protenas pro-apoptticas actan mediante la promocin de dicha liberacin. No es la cantidad absoluta sino ms bien el equilibrio entre los pro-y anti-apoptticos protenas que determina si se inicia la apoptosis. Otros factores apoptticos que se liberan desde el espacio intermembrana mitocondrial en el citoplasma incluyen el factor inductor de apoptosis (AIF), segundo activador derivado de mitocondrias de caspasa (SMAC), protena de unin directa IAP con bajo pI (DIABLO) y Omi / protena requisito de alta temperatura Un (HtrA2). Liberacin citoplasmtica del citocromo c activa la caspasa 3 a travs de la formacin de un complejo conocido como apoptosoma que se compone de citocromo c, Apaf-1 y la caspasa 9. Por otro lado, Smac / DIABLO o Omi/HtrA2 promueve la activacin de caspasa mediante la unin a protenas inhibidoras de la apoptosis (IAP), que posteriormente conduce a la interrupcin en la interaccin de los PAI con la caspasa-3 o -9 [28,29]. 2.3.3 La va comn La fase de ejecucin de la apoptosis involucra la activacin de una serie de caspasas. La caspasa aguas arriba de la va intrnseca es la caspasa 9 mientras que la de la va extrnseca es la caspasa 8. Las vas intrnseca y extrnseca convergen para caspasa 3. La caspasa 3 a continuacin, escinde el inhibidor de la desoxirribonucleasa activada por caspasa, que es responsable de la apoptosis nuclear. Adems, las caspasas aguas abajo inducen la escisin de las protenas quinasas, protenas del citoesqueleto, protenas de reparacin del ADN y subunidades inhibidoras de la familia endonucleasas. Ellos tambin tienen un efecto en el citoesqueleto, ciclo celular y las vas de sealizacin, que en conjunto contribuyen a los cambios morfolgicos tpicos de la apoptosis. 2.3.4 La va retculo endoplsmico intrnseca Esta va retculo endoplsmico intrnseca (ER) es una tercera va, y es menos conocido. Se cree que la caspasa-12 dependiente y mitocondrias-independiente. Cuando el ER se lesiona por estreses celulares tales como los radicales libres, la hipoxia o el hambre de glucosa, no hay desdoblamiento de las protenas y la reduccin de la sntesis de protenas en la clula, y un adaptador de protenas conocida como TNF receptor del factor asociado 2 (TRAF2) se disocia de la procaspasa-12, lo que resulta en la activacin de este ltimo. 3. La apoptosis y la carcinognesis El cncer puede ser considerada como el resultado de una sucesin de cambios genticos durante el cual se transforma una clula normal en un uno maligno, mientras que la evasin de la muerte celular es uno de los cambios esenciales en una clula que causan esta transformacin maligna. Ya en la dcada de 1970, Kerr et al apoptosis haba vinculado a la eliminacin de clulas potencialmente malignas, hiperplasia y la progresin tumoral. Por lo tanto, la reduccin de la apoptosis o su resistencia juega un papel vital en la carcinognesis. Hay muchas maneras de una clula maligna se puede adquirir en la reduccin de la apoptosis o la resistencia a la apoptosis. En general, los mecanismos por los que se produce la evasin de la apoptosis pueden ser ampliamente dividendo en: 1) perturbado el equilibrio de las protenas pro-apoptticos y anti-apoptticos, 2) reduccin de la funcin y la caspasa 3) alteracin de la sealizacin del receptor de muerte. La Figura 2 resume los mecanismos que contribuyen a la evasin de la apoptosis y la carcinognesis. 3.1 Interrumpir saldo de las protenas pro-apoptticas y antiapoptticas Muchas protenas se han informado a ejercer la actividad pro-o antiapopttica en la clula. No es la cantidad absoluta, sino ms bien la relacin de estos pro-y anti-apoptticos protenas que desempea un papel importante en la regulacin de la muerte celular. Adems, ms de o-bajo-la expresin de ciertos genes (por lo tanto, las protenas reguladoras resultantes) se han encontrado para contribuir a la carcinognesis mediante la reduccin de la apoptosis en las clulas cancerosas. 3.1.1 La familia Bcl-2 de protenas La familia Bcl-2 de protenas se compone de protenas pro-apoptticas y anti-apoptticos que juegan un papel fundamental en la regulacin de la apoptosis, en especial a travs de la va intrnseca, ya que residen aguas arriba de dao celular irreversible y actan principalmente a nivel de las mitocondrias. Bcl-2 fue la primera

protena de esta familia en ser identificado hace ms de 20 aos y que est codificada por el gen BCL2, que deriva su nombre de linfoma de clulas B 2, el segundo miembro de una gama de protenas que se encuentran en B humana linfomas de clulas con la t (14; 18) translocacin cromosmica. Todos los miembros de la Bcl-2 se encuentran en la membrana mitocondrial externa. Son reguladores que son responsables de la permeabilidad de la membrana, ya sea en la forma de un canal de iones o por medio de la creacin de poros. En base de su funcin y la Bcl-2 homologa (BH) los dominios de Bcl-2 miembros de la familia se dividen en tres grupos. El primer grupo son las protenas anti-apoptticas que contienen todos los cuatro dominios BH y protegen la clula de los estmulos apoptticos. Algunos ejemplos son Bcl-2, Bcl-XL, de Mcl-1, Bcl-w, A1/Bfl-1, y Bcl-B/Bcl2L10. El segundo grupo se compone de los BH-3 slo las protenas, llamada as porque en comparacin con los otros miembros, que estn restringidas al dominio BH3. Ejemplos de este grupo son Bid, Bim, Puma, Noxa, Bad, Bmf, Hrk y Bik. En tiempos de tensiones celulares, tales como dao del ADN, la privacin del factor de crecimiento y estrs del retculo endoplsmico, las BH3-slo las protenas, que son iniciadores de la apoptosis, se activan. Por lo tanto, son pro-apopttica. Los miembros del tercer grupo contienen todos los cuatro dominios BH y tambin son pro-apopttica. Algunos ejemplos incluyen Bax, Bak y Bok / DMT. Cuando se produce una alteracin en el equilibrio de los miembros anti-apoptticos y pro-apoptticos de la familia Bcl-2, el resultado es la apoptosis mal regulada en las clulas afectadas. Esto puede ser debido a una sobreexpresin de una o ms protenas antiapoptticas o una disminucin en la expresin de una o ms protenas pro-apoptticas o una combinacin de ambos.Por ejemplo, Raffo et al demostraron que la sobreexpresin de Bcl-2 clulas de cncer de prstata protegidas de la apoptosis, mientras que Fulda et al informaron de Bcl-2 sobreexpresin dado lugar a la inhibicin de la apoptosis inducida por TRAIL en clulas de carcinoma del neuroblastoma, glioblastoma y de mama. La sobreexpresin de Bcl-xL tambin ha sido reportado para conferir un fenotipo de resistencia a mltiples frmacos en clulas tumorales y evitar que sufran apoptosis. En los cnceres colorrectales con inestabilidad de microsatlites, por otra parte, las mutaciones en el gen bax son muy comunes. Miquel et al demostraron que la alteracin resultante de la apoptosis bax (G) 8 mutaciones de desplazamiento del marco podra contribuir a la resistencia de las clulas del cncer colorrectal a los tratamientos contra el cncer. En el caso de la leucemia linfoctica crnica (CLL), las clulas malignas tienen una henotype anti-apopttica con altos niveles de los niveles de anti-apoptticas Bcl-2 y bajo de protenas pro-apoptticas tales como Bax in vivo. Leucemognesis en la LLC se debe a la reduccin de la apoptosis en lugar de aumento de la proliferacin in vivo. Pepper et al informaron de que los linfocitos B de CLL mostraron una mayor relacin de Bcl-2/Bax en pacientes con CLL y que cuando estas clulas se cultivaron in vitro, druginduced la apoptosis en las clulas de LLC-B estaba inversamente relacionada con proporciones Bcl-2/Bax. 3.1.2 p53 La protena p53, tambin llamada protena de tumor 53 (o TP 53), es una de las mejores protenas supresoras tumorales conocidas codificadas por el gen supresor de tumores TP53 situado en el brazo corto del cromosoma 17 (17p13.1). Lleva el nombre de sus pesos moleculares, es decir, 53 kDa. Se identific por primera vez en 1979 como una protena relacionada con la transformacin y una protena celular acumulado en los ncleos de las clulas cancerosas unen fuertemente a la virus de simio 40 (SV40) el antgeno T grande. Inicialmente, se encontr que era dbilmente-oncognica. Ms tarde se descubri que la propiedad oncognico fue debido a una mutacin de p53, o lo que ms tarde fue llamado un "ganancia de funcin oncognica". Desde su descubrimiento, muchos estudios han examinado su funcin y su papel en el cncer. Es no slo est implicada en la induccin de la apoptosis, sino que tambin es un jugador clave en la regulacin del ciclo celular, el desarrollo, la diferenciacin, la amplificacin de genes, recombinacin de ADN, la segregacin cromosmica y la senescencia celular y se llama el "guardin del genoma". Los defectos en el gen supresor de tumores p53 se han asociado a ms de 50% de los cnceres humanos. Recientemente, Avery-Kieida et al informaron de que algunos genes diana de p53 que participan en la apoptosis y la regulacin del ciclo celular se expresan de forma aberrante en las clulas de melanoma, lo que lleva a una actividad anormal de p53 y contribuir a la proliferacin de estas clulas. En un modelo de ratn con una supresin N-terminal mutante de p53 (122p53) que corresponde a 133p53, Slatter et al demostraron que estos ratones haban disminucin de la supervivencia, un espectro diferente y ms agresivo del tumor, una marcada ventaja proliferativa en las clulas, la reduccin de la apoptosis y un profundo fenotipo proinflamatorio. Adems, se ha encontrado que cuando se silencia el mutante p53, tal regulacin a la baja de la expresin de p53 mutante dio como resultado el crecimiento de colonias celulares reducida en las clulas cancerosas humanas, que se encuentran para ser debido a la induccin de la apoptosis.

3.1.3 inhibidor de protenas de apoptosis (IAP) El inhibidor de la apoptosis de las protenas son un grupo de protenas estructuralmente y funcionalmente similares que regulan la apoptosis, la citocinesis y la transduccin de seales. Se caracterizan por la presencia de un dominio de la protena de repeticin IAP de baculovirus (BIR). Hasta la fecha ocho IAP han sido identificados, a saber, NAIP (BIRC1), c-IAP1 (BIRC2), c-IAP2 (BIRC3), IAP ligada al cromosoma X (XIAP, BIRC4), survivina (BIRC5), Apollon (BRUCE, BIRC6) , el Livin / MLIAP (BIRC7) y IAP-como la protena 2 (BIRC8). IAP son inhibidores endgenos de las caspasas y pueden inhibir la actividad de la caspasa mediante la unin de sus dominios BIR conservadas a los sitios activos de caspasas, mediante la promocin de la degradacin de las caspasas activas o por mantenimiento de las caspasas lejos de sus sustratos. La expresin de IAP desregulada ha sido reportado en muchos tipos de cncer. Por ejemplo, Lopes et al demostraron la expresin anormal de la familia IAP en las clulas de cncer de pncreas y que esta expresin anormal tambin fue responsable de la resistencia a la quimioterapia. Entre las IAP probados, el estudio concluy que la resistencia a frmacos correlacionada ms significativamente con la expresin de la CIAP-2 en las clulas pancreticas. Por otro lado, el Livin se demostr ser altamente expresado en el melanoma y el linfoma mientras que Apollon, se encontr que se upregulated en los gliomas y era responsable de la resistencia a cisplatino y camptotecina. Otra IAP, la survivina, se ha informado de que se sobreexpresa en varios tipos de cncer. Small et al. observaron que los ratones transgnicos que sobreexpresan survivina en clulas hematopoyticas estaban en un mayor riesgo de neoplasias hematolgicas y que las clulas hematopoyticas por ingeniera gentica para sobreexpresan survivina fueron menos susceptibles a la apoptosis. La survivina, junto con XIAP, tambin se encontr que se sobreexpresa en carcinomas de pulmn de clulas no pequeas (NSCLC) y el estudio concluy que la sobreexpresin de survivina en la mayora de NSCLC, junto con la expresin abundante o upregulated de XIAP sugiri que estos tumores estaban dotados de resistencia contra una variedad de condiciones que inducen apoptosis. 3.2 Reduccin de la actividad capsase Las caspasas se pueden clasificar en dos grupos: 1) las relacionadas con la caspasa 1 (por ejemplo, caspasa-1, -4, -5, -13, y -14) y estn implicados principalmente en el procesamiento de citoquinas durante los procesos inflamatorios y 2) los que juegan un papel central en la apoptosis (por ejemplo, caspasas -2, -3, -6, -7, -8, -9 y 10). El segundo grupo se clasifican en 1) caspasas iniciadoras (por ejemplo, la caspasa-2, -8, -9 y -10), que son los principales responsables de la iniciacin de la va apopttica y 2) caspasas efectoras (caspasa-3, -6 y -7) que son responsables en la escisin real de los componentes celulares durante la apoptosis. Como se mencion en la seccin 2.2, las caspasas siguen siendo uno de los jugadores importantes en la iniciacin y ejecucin de la apoptosis. Por tanto, es razonable pensar que los bajos niveles de caspasas o deterioro de la funcin de caspasas pueden llevar a una disminucin en la apoptosis y la carcinognesis. En un estudio, se descubri que la regulacin negativa de la caspasa-9 para ser un evento frecuente en los pacientes con cncer y se correlaciona con mal pronstico clnico fase II colorrectal. En otro estudio, Devarajan et al observaron que los niveles de caspasas-3 ARNm en muestras disponibles comercialmente de ARN totales de mama, de ovario, y tumuors cervicales fueron indetectables (de mama y cervical) o disminuido sustancialmente (ovario) y que la sensibilidad de la caspasa-3 deficientes en clulas de cncer de mama (MCF-7) a someterse a la apoptosis en respuesta a medicamento contra el cncer u otros estmulos de la apoptosis se podra mejorar mediante la restauracin de la caspasa-3 de expresin, lo que sugiere que la prdida de las caspasas-3 de expresin y la funcin podra contribuir a la clula de cncer de mama la supervivencia.En algunos casos, ms de una caspasa puede ser regulados a la baja, lo que contribuye al crecimiento de clulas tumorales y el desarrollo. En un estudio de la expresin diferencial de cDNA array, Fong et al observaron una codownregulation de tanto capase-8 y -10 y postula que puede contribuir a la patognesis de coriocarcinoma. 3.3 Deterioro de la muerte del receptor de sealizacin Receptores de muerte y ligandos de los receptores de muerte son actores clave en la va extrnseca de apoptosis. Aparte de TNFR1 (tambin conocido como DR 1) y Fas (tambin conocido como DR2, CD95 o APO-1) mencionado en la Seccin 2.3, ejemplos de receptores de muerte incluyen DR3 (o APO-3), DR4 [o inductor de la apoptosis relacionado con TNF receptor de ligando 1 (TRAIL-1) o APO-2], DR5 (o TRAIL-2), DR 6, ectodisplasina Un receptor (EDAR) y receptor del factor de crecimiento del nervio (NGFR). Estos receptores poseen un dominio de muerte y cuando son activados por una seal de muerte, un nmero de molculas son atrados por el dominio de muerte, lo que resulta en la activacin de una cascada de sealizacin. Sin embargo, ligandos de muerte tambin se pueden unir a receptores de muerte seuelo que no poseen un dominio de muerte

y de que estas no para formar complejos de sealizacin e iniciar la cascada de sealizacin varias anomalas en la muerte de las vas de sealizacin que pueden conducir a la evasin de la va extrnseca de la apoptosis tener sido identificado. Tales alteraciones incluyen regulacin a la baja del receptor o deterioro de la funcin del receptor, independientemente del mecanismo o tipo de defectos, as como un nivel reducido en las seales de muerte, todos los cuales contribuyen a problemas de sealizacin y por lo tanto una reduccin de la apoptosis. Por ejemplo, regulacin a la baja de la expresin de superficie de receptor se ha indicado en algunos estudios como un mecanismo de resistencia a los frmacos adquirida. Se encontr una reduccin de expresin de CD95 a desempear un papel en el tratamiento resistente a la leucemia o clulas de neuroblastoma. Reduccin de expresin en la membrana de los receptores de muerte y la expresin anormal de los receptores seuelo Tambin se ha informado a desempear un papel en la evasin de la muerte vas de sealizacin en diversos tipos de cncer. En un estudio llevado a cabo para examinar si los cambios en ligando de muerte y la expresin del receptor de muerte durante las diferentes etapas de la carcinognesis cervical estaban relacionados con un desequilibrio entre la proliferacin y la apoptosis, Reesink-Peters et al concluyeron que la prdida de Fas y la desregulacin de FasL, DR4 , DR5, y factor de necrosis tumoral relacionada con el ligando inductor de apoptosis (TRAIL), en la neoplasia intraepitelial cervical (NIC)-secuencia de cncer de cuello de tero podra ser responsable de la carcinognesis cervical. 4. Orientacin de la apoptosis en el tratamiento del cncer Como una espada de doble filo, cada defecto o anomala a lo largo de las vas de apoptosis tambin pueden ser una interesante objetivo del tratamiento del cncer. Los medicamentos o las estrategias de tratamiento que pueden restaurar las vas de sealizacin apopttica hacia la normalidad tienen el potencial para eliminar las clulas cancerosas que dependen de estos defectos para mantenerse con vida. Muchos descubrimientos recientes e importantes han abierto nuevas puertas a posibles nuevas clases de medicamentos contra el cncer. Esta seccin hace hincapi en las nuevas opciones de tratamiento dirigidas a algunos de los defectos apoptticos mencionados en la Seccin 3. Un resumen de estos frmacos y estrategias de tratamiento se da en la Tabla 2. 4.1 Orientacin de la familia Bcl-2 de protenas Algunas posibles estrategias de tratamiento utilizadas en la orientacin de la familia Bcl-2 de protenas incluyen el uso de agentes teraputicos para inhibir la familia Bcl-2 de protenas anti-apoptticas o el silenciamiento de las protenas anti-apoptticas upregulated o genes implicados. 4.1.1Agents que se dirigen a la familia Bcl-2 de protenas Un buen ejemplo de estos agentes es el sodio oblimersen de drogas, que es una de Bcl-2 antisence oblimer, el primer agente de direccin Bcl-2 para entrar en ensayo clnico. El frmaco se ha informado que muestran efectos chemosensitising en tratamiento combinado con medicamentos contra el cncer convencionales en pacientes con leucemia mieloide crnica y una mejora en la supervivencia de estos pacientes. Otros ejemplos incluidos en esta categora son los inhibidores de molculas pequeas de la familia Bcl-2 de protenas. Estos se pueden dividir en: 1) las molculas que afectan al gen o protena de expresin y 2) aquellos que actan en las protenas mismas.Ejemplos para el primer grupo se incluyen butirato sdico, depsipetide, fenretinida y flavipirodol mientras que el segundo grupo incluye gosipol, ABT-737, ABT-263, GX15-070 y HA14-1 (revisado por Kang y Reynolds, 2009). Algunas de estas pequeas molculas pertenecen a otra clase de frmacos conocidos como mimticos de BH3, llamada as porque imitan la unin de los BH3-slo las protenas de la ranura hidrfobo de las protenas anti-apoptticas de la familia Bcl-2. Un ejemplo clsico de un mimtico BH3 es ABT-737, que inhibe protenas anti-apoptticas tales como Bcl-2, Bcl-xL y Bcl-W. Se muestra para citotoxicidad en el linfoma, la lnea de clulas pequeas de carcinoma de pulmn de clulas y clulas primarias derivadas del paciente y caus la regresin de tumores establecidos en modelos de animales con un alto porcentaje de cura. Otros mimticos BH3 tales como ATF4, ATF3 y NOXA se han reportado para unirse e inhibir MCL-1. 4.1.2 Silenciar las protenas / genes anti-apoptticos En lugar de utilizar frmacos o agentes teraputicos para inhibir los miembros de la anti-apoptticos de la familia Bcl-2, algunos estudios han demostrado que por silenciamiento de genes que codifican para la familia Bcl2 de protenas anti-apoptticas, un aumento en la apoptosis se podra lograr. Por ejemplo, se ha demostrado el uso de Bcl-2 siRNA para inhibir especficamente la expresin del gen diana in vitro e in vivo con efectos antiproliferativos y pro-apoptticos observados en clulas de carcinoma de pncreas. Por otro lado, Wu et al

demostraron que el silenciamiento por Bmi-1 en clulas de cncer de mama MCF, la expresin de pAkt y Bcl-2 se downregulated, haciendo que estas clulas ms sensibles a la doxorrubicina como se evidencia por un aumento de clulas apoptticas in vitro e in vivo. 4.2 Orientacin de p53 Muchas de las estrategias basadas en p53 se han investigado para el tratamiento del cncer. Generalmente, stos se pueden clasificar en tres amplias categoras: 1) la terapia gnica, 2) la terapia de drogas y 3) la inmunoterapia. Terapia de gen p53 basado 4.2.1 El primer informe de la terapia gnica p53 en 1996 investig el uso de un gen p53 de tipo salvaje que contiene vector retroviral se inyecta en las clulas tumorales de carcinoma de pulmn de clulas no pequeas derivados de los pacientes y se demostr que el uso de la terapia gnica de p53 basada puede ser factible . A medida que el uso del gen p53 por s sola no era suficiente para eliminar todas las clulas tumorales, estudios posteriores han investigado el uso de la terapia gnica de p53 al mismo tiempo con otras estrategias contra el cncer. Por ejemplo, la introduccin de gen p53 de tipo salvaje se ha demostrado que sensibilizar a las clulas tumorales de cabeza y cuello, cnceres colorrectales y de prstata y de glioma a la radiacin ionizante. Aunque algunos estudios lograron llegar hasta la fase III de ensayos clnicos, sin la aprobacin final de la FDA ha concedido hasta ahora. Otra estrategia interesante basada en los genes p53 fue el uso de virus de ingeniera para eliminar las clulas deficientes en p53. Un ejemplo de ello es el uso de un adenovirus oncoltico ingeniera gentica, ONYX-015, en el que el gen E1B 55 kDa ha sido suprimido, dando el virus de la capacidad de replicar selectivamente en y lisar las clulas tumorales deficientes en p53. Terapia con medicamentos 4.2.2 p53 basado Varios frmacos han sido investigados para p53 de destino a travs de diferentes mecanismos. Una clase de frmacos son molculas pequeas que pueden restaurar p53 mutado a sus funciones de tipo salvaje. Por ejemplo, Phikan083, una molcula pequea y el derivado de carbazol, se ha demostrado que se unen a y restaurar la p53 mutante. Otra molcula pequea, CP-31398, se ha encontrado para intercalarse con el ADN y alterar y desestabilizar el complejo ADN-p53 dominio del ncleo, lo que resulta en la restauracin de los mutantes de p53 inestables. Otros frmacos que se han utilizado para p53 objetivo incluyen los nutlins, MI-219 y los tenovins.Nutlins son anlogos de cis-imidazolina, que inhiben la interaccin MSM2-p53, p53 y estabilizar inducir selectivamente la senescencia en clulas cancerosas mientras que MI-219 se inform para interrumpir la interaccin MDM2-p53, lo que resulta en la inhibicin de la proliferacin celular, la apoptosis selectiva en el tumor las clulas y la inhibicin completa del crecimiento del tumor. Los tenovins, por otro lado, son activadores de p53 pequeas molculas, que han sido mostrados para disminuir el crecimiento del tumor in vivo. 4.2.3 p53 inmunoterapia basada Varios ensayos clnicos se han llevado a cabo utilizando vacunas de p53. En un ensayo clnico por Kuball et al, seis pacientes con cncer en estadio avanzado se les dio la vacuna que contiene una replicacin defectuosa vector adenoviral recombinante con p53 de tipo salvaje humana. Cuando un seguimiento a los 3 meses despus de la inmunizacin, cuatro de los seis pacientes tenan enfermedad estable. Sin embargo, slo un paciente tena enfermedad estable de 7 meses en adelante. Aparte de las vacunas a base de virus, las vacunas basadas en clulas dendrticas-Tambin se han intentado en los ensayos clnicos. Svane et al prob el uso del pptido p53 pulsado las clulas dendrticas en un ensayo clnico de fase I y report una respuesta clnica en dos de cada seis pacientes y las respuestas de clulas T especficas de p53 en tres de seis pacientes. Otras vacunas que han sido utilizadas, incluyendo las vacunas basadas en pptidos peptidebased corto y largo (revisado por Vermeij R et al., 2011). 4.3 Orientacin de las IAP 4.3.1 Orientacin de XIAP En el diseo de nuevos frmacos para el cncer, las IAP son dianas moleculares atractivas. Hasta el momento, XIAP ha sido informado de que el inhibidor ms potente de la apoptosis entre todos los IAP. Es efectivamente inhibe el intrnseco como as como las vas extrnsecas de la apoptosis y lo hace mediante la unin y la inhibicin de la caspasa-9 aguas arriba y aguas abajo del caspasas-3 y -7. Algunos terapia nueva orientacin XIAP incluyen estrategias antisentido y molculas de ARN corto de interferencia (siRNA). Utilizando el enfoque antisentido,

se ha informado de la inhibicin de XIAP para dar lugar a un mejor control del tumor in vivo por la radioterapia en. Cuando se usa junto con medicamentos contra el cncer XIAP oligonucletidos antisentido han demostrado que exhiben actividad quimioteraputica mayor en las clulas de cncer de pulmn in vitro e in vivo. Por otro lado, Ohnishi et al informaron de que la orientacin ARNsi de XIAP aumento de la sensibilidad de radiacin de clulas humanas de cncer independientes de la condicin de TP53 mientras Yamaguchi et al informaron de que la orientacin XIAP o survivina por las clulas de hepatoma sensibilizar siRNAs a receptor y la muerte celular inducida por el agente quimioteraputico la muerte. 4.3.2 Orientacin Survivin Muchos estudios han investigado diferentes enfoques dirigidos Survivin la intervencin del cncer. Un ejemplo es el uso de oligonucletidos antisentido. Grossman et al fue de los primeros en demostrar el uso del enfoque antisentido en clulas de melanoma humano. Se demostr que la transfeccin de survivina antisentido en clulas de melanoma maligno LOX YUSAC-2 y dio lugar a la apoptosis espontnea en estas clulas. El enfoque antisentido se ha aplicado tambin en carcinoma de cabeza y cuello de clulas escamosas y informado de inducir la apoptosis y sensibilizar a estas clulas a la quimioterapia y en clulas de carcinoma medular de tiroides, y se encontr que inhiben el crecimiento y la proliferacin de estas clulas. Otro enfoque en la orientacin de survivina es el uso de siRNAs, que se ha demostrado que regular a la baja la survivina y disminuir radioresistance en las clulas de cncer de pncreas, para inhibir la proliferacin e inducir la apoptosis en SPCA1 y SH77 clulas de adenocarcinoma de pulmn humano, para suprimir la expresin de survivina, inhibir la proliferacin celular y potenciar la apoptosis en clulas de cncer de ovario SKOV3/DDP, as como para mejorar la radiosensibilidad de las clulas no pequeas de cncer de pulmn de clulas humanas. Adems, los antagonistas de molculas pequeas de survivina tales como inhibidores de la quinasa dependiente de ciclina y los inhibidores de Hsp90 y la terapia gnica Tambin se han intentado en la orientacin de la survivina en la terapia del cncer (revisado por Pennati et al., 2007). 4.3.3 Otros antagonistas de IAP Otros antagonistas de IAP incluyen pequeas molculas peptdicos y no peptdicos, que actan como inhibidores de la IAP. Dos mimticos Smac cyclopeptidic, 2 y 3, que se encontraron de obligar a XIAP y la CIAP-1/2 y restaurar la actividad de caspasa-9 y 3/-7 inhibidas por XIAP se encontraban entre los muchos ejemplos. Por otra parte, SM-164, se inform de un inhibidor de IAP no peptdico para mejorar fuertemente la actividad TRAIL por concurrentemente orientacin XIAP y cIAP1. 4.4 caspasas Orientacin Terapia con medicamentos 4.4.1 caspasa-basado Varios frmacos han sido diseados para activar caspasas sintticamente. Por ejemplo, apoptina es un inductor de la caspasa- agente que se deriv inicialmente a partir de virus de la anemia del pollo y tena la capacidad de inducir selectivamente la apoptosis en las clulas malignas pero no es normal. Otra clase de frmacos que son activadores de caspasas son las pequeas molculas activadores de caspasas. Estos son pptidos que contienen el motivo de arginina-glicina-aspartato. Ellos son pro-apoptticos y tienen la capacidad de inducir la activacin automtica de la procaspasa 3 directamente. Ellos tambin se han demostrado para bajar el umbral de activacin de la caspasa o activar la caspasa, que contribuye a un aumento de la sensibilidad a los frmacos de las clulas cancerosas. Terapia de gen de la Caspasa-basado 4.4.2 Adems de la terapia de drogas caspasa-basado, la terapia gnica basada en la caspasa-se ha intentado en varios estudios. Por ejemplo, la terapia de gen de la caspasa-3 humana se utiliz, adems del tratamiento etopsido en un modelo de tumor en el hgado AH130 y se encontr para inducir la apoptosis extensa y reducir el volumen del tumor, mientras que la transferencia de genes de constitutivamente activa caspse-3 en clulas de hepatoma humano Huh7 induce selectivamente la apoptosis en estas clulas. Tambin, un adenovirus recombinante que lleva immunocaspase 3 se ha demostrado que ejercen efectos anti-cncer en el carcinoma hepatocelular in vitro e in vivo. 4.5 Las molculas dirigidas a la apoptosis en los ensayos clnicos Recientemente, muchas nuevas molculas que la apoptosis objetivo entrar en diversas etapas de ensayos clnicos. Una bsqueda en http:// www.clinicaltrials.gov (un registro y base de datos de resultados de los ensayos

clnicos con apoyo federal y privado realizados en los Estados Unidos y en todo el mundo) devuelve muchos resultados. Estas molculas diana diferentes protenas implicadas en la apoptosis. Muchos son los antagonistas de IAP y molculas que se dirigen a la familia Bcl-2 de protenas. La Tabla 3 resume los ensayos clnicos en curso o recientemente concluido que involucran molculas que la apoptosis de destino. 5. Conclusiones La abundancia de la literatura sugiere que los defectos a lo largo de las vas de apoptosis desempean un papel crucial en la carcinognesis y que muchas nuevas estrategias de tratamiento dirigidas a la apoptosis son viables y se pueden usar en el tratamiento de diversos tipos de cncer. Algunos de estos descubrimientos son preclnico, mientras que otros ya han entrado en ensayos clnicos. Muchos de estos nuevos agentes o estrategias de tratamiento tambin se han incorporado en la terapia de combinacin que implica medicamentos contra el cncer convencionales en varios ensayos clnicos, que pueden ayudar a mejorar las modalidades de tratamiento disponibles en la actualidad. Sin embargo, algunas de las preguntas desconcertantes e inquietantes, como si estas estrategias de tratamiento inducen resistencia en los tumores y si van a hacer que las clulas normales a morir en nmeros masivos an siguen sin respuesta. Esta es una verdadera preocupacin si las lecciones eran que aprender de los medicamentos contra el cncer convencionales, que arrasan con ambas clulas normales y clulas tumorales y causan efectos secundarios brutales y resistencia tumoral. Por otra parte, sera de beneficio clnico, si estas molculas que la apoptosis de destino estn actuando especficamente en una sola va o de la protena. Sin embargo, la mayor parte de las molculas que entran en ensayos clnicos actan en varios objetivos y estos incluyen muchos inhibidores de la Bclfamily de protenas y algunos inhibidores de la pan-IAP. Por lo tanto, se necesitan pruebas basadas en seguimientos a largo plazo en los pacientes que reciben estos nuevos tratamientos contra el cncer y la investigacin en curso deberan centrarse en aquellas estrategias que pueden inducir selectivamente la apoptosis en las clulas malignas y no los normales.

Figura 1 Las vas intrnseca y extrnseca de apoptosis.

Figura 2 mecanismos que contribuyen a la evasin de la apoptosis y la carcinognesis.