Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
15 Electroforesis PDF
15 Electroforesis PDF
RESUMEN
La electroforesis consiste en la separacin de partculas aprovechando su
traslado mediante la aplicacin de campos elctricos. La capacidad de
movimiento de las diferentes molculas depende de la intensidad del campo
aplicado, su carga y su peso molecular. Existen diferentes tipos, que se
engloban en dos: libre o de frente mvil y de zona. El objetivo ser clarificar
los conceptos con ella relacionados, la metodologa y prctica de la
electroforesis en papel, as como su relevancia en el estudio de las protenas
sricas.
1. INTRODUCCIN Y OBJETIVOS
qE = fv
Aplicando las leyes de Stokes para una molcula esfrica de radio r que se
mueva a travs de un medio de viscosidad n, se cumple:
f= 6 nr
qE= 6nrv
V=v/E=q/f= q/6 nr
Este desplazamiento puede seguirse con diversos sistemas pticos que ponen
de manifiesto las sustancias segn se van separando. Para impedir la mezcla por
conveccin de las protenas que emigran se necesita un sofisticado aparato y a su
vez se precisa el empleo de muestras muy grandes. Esta es la razn por la que la
electroforesis de frente mvil ha sido sustituida por la electroforesis de zona.
Electroforesis en papel
La muestra se aplica sobre una tira de papel de filtro humedecido con una
2
disolucin tampn, bien en el centro o en cualquiera de los extremos del papel,
dependiendo de las sustancias a separar y del pH del tampn. Los extremos de la
tira se sumergen en dos recipientes separados que contienen la disolucin tampn
y en los que se hallan colocados los electrodos.
Electroforesis en gel
3
Un gel es un estado intermedio entre el slido y el lquido. Este tipo de
electroforesis se halla entre los mtodos ms resolutivos y convenientes
empleados en la separacin de macromolculas. Los geles de uso ms
generalizado son: poliacrilamida y agarosa. stos poseen poros de diferentes
dimensiones moleculares que delimitan la velocidad de traslado y molculas
trasladadas durante el proceso electrofortico. De esta forma, la separacin no se
produce slo por las diferentes cargas de las molculas, sino tambin por las
diferencias de tamao. Los geles estn formados por un reticulado de polmeros
(constituyendo una red enmaraada) y el lquido intersticial en el que se encuentra
inmerso esta red.
4
2.1. Equipamiento
Sistema de electroforesis.
Fotodensitmetro.
2.2. Material
Pipetas de 15 ml.
Micropipetas o pipetas de pistn de 251000 l.
Puntas desechables.
Vasos de precipitado.
Tiras de papel especial (Whatman 1, 3, etc.) de filtro o de acetato de
celulosa, impregnadas en la solucin amortiguadora correspondiente.
2.3. Reactivos
Agua destilada.
Soluciones amortiguadoras.
Colorantes.
Decolorantes.
3. PROTOCOLO A REALIZAR
5
3.1.9. Se valora por fotodensitometra. Consiste en hacer pasar la tira por un haz
de luz que es absorbida segn la cantidad de protena coloreada.
4. RESULTADOS ESPERADOS
Las fracciones proteicas del suero que se separan por electroforesis en acetato
de celulosa son la albmina y las globulinas 1, 2, y . En condiciones
normales, los porcentajes de cada fraccin que se obtiene con el anlisis
densitomtrico de las tiras, son los siguientes:
PROTENAS SRICAS %
Albmina 53-67
Globulinas 1 2,5-5
Globulinas 2 7-13
Globulinas 9-14
Globulinas 10-21
5. DISCUSIN Y COMENTARIOS
6. BIBLIOGRAFA RECOMENDADA
6
Acetato/veronal, pH 8,6
1 litro
Veronal sdico 10 g
Acetato sdico 6,5 g
HCl 0,1 M 64,5 ml
Agua destilada Hasta 1 litro
Negro Amido
1 litro
Metanol 450 ml
cido actico 100 ml
Negro amido 6,0 g
Agua destilada 450 ml
Azul de bromofenol
100 ml
Metanol 100 ml
Bicloruro de Hg A saturacin
Azul de bromofenol 100 mg
Azocarmin B
100 ml
Azocarmin B 10 g
Metanol (50%) 90 ml
cido actico 10 ml