Karla Andrea Ordaz Rodríguez

Contestar las siguientes preguntas

1.- Principios y características de electroforesis:

Principio: Está basado en las velocidades diferenciales de migración de

especies con carga en un campo eléctrico de corriente directa aplicada.
Características:
• Fue desarrollada por el científico sueco Arne Tiselius en la década de 1930
para el estudio de proteínas en suero
• Tiene la capacidad de separar: aniones y cationes inorgánicos,
aminoácidos, catecolaminas, fármacos, vitaminas, carbohidratos, proteínas,
ácidos nucleicos, nucleótidos, polinucleótidos y muchas otras especies.
• Puede separar con facilidad macromoléculas con carga que son de interés
para los bioquímicos.
• Ha sido el método elemental para para separar proteínas: enzimas,
hormonas y anticuerpos, y ácidos nucleicos: ADN y ARN.

2.- ¿Cuál es el principio de separación para la electroforesis, electroforesis capilar

y isoelectroenfoque?

• Electroforesis: Está basado en las velocidades diferenciales de migración

de especies con carga en un campo eléctrico de corriente directa aplicada.
• Electroforesis capilar: Se basa en la diferente velocidad de
desplazamiento que tienen las distintas proteínas en el seno de un medio
líquido, contenido en un tubo capilar, al someterlas a la acción de un campo
eléctrico.
• Isolectroenfoque: Se trata de una variante de electroforesis en la que el
gel (poliacrilamida) posee un gradiente de pH fijado en su estructura.

3.- Usos principales de electroforesis: Separar proteínas, ácidos nucleicos,

aniones y cationes inorgánicos, carbohidratos, entre otras especies.
Karla Andrea Ordaz Rodríguez

4.- Diferencias entre electroforesis, SDS-PAGE e isoelectroenfoque

Electroforesis Isolectroenfoque SDS-PAGE

La electroforesis es un
método de separación de
moléculas biológicas que
se basa en la migración
de éstas según su carga
en un campo eléctrico.
Luego se desarrolló la
electroforesis
bidimensional, que es
una combinación
secuencial de:
el enfoque isoeléctrico y
la electroforesis en gel de
poliacrilamida con SDS
El Isoelectroenfoque es un
tipo de electroforesis que se
emplea para separar
moléculas cargadas.
Fundamento: Una proteína
tiene grupos cargados de
ambas polaridades, por lo
que presenta un punto
isoeléctrico (pI) que
corresponde al valor de pH
al cuál la molécula posee
carga neta (z) igual a cero
(zwitterion), y por lo tanto es
inmóvil en un campo
eléctrico. En un zwitterion
simple, pI= (pK1+ pK2)/2
(Fig. A); mientras que para
un aminoácido de cadena
lateral ácido-base, pI es el
promedio de los pK entre la
especie con carga+1 y -1
La electroforesis de
proteínas en un gel de
poliacrilamida con SDS
(SDS-PAGE) separa a las
macromoléculas en el
orden de sus masas
moleculares por los efectos
de filtración por geles. Este
tipo de electroforesis es una
variante de la electroforesis
en gel de poliacrilamida
(PAGE) donde los geles se
forman por polimerización
de la acrilamida y la N,N’-
metilen bisacrilamida
inducida por radicales libres
en un buffer

5.- ¿Cuál es el efecto del pH sobre la separación de aminoácidos por

electroforesis? ¿Por qué? Se ha determinado que una disolución amortiguadora
50 mM pH 8 fluye a través de un capilar de 50 cm hacia el cátodo a
aproximadamente 5 cm/min cuando se aplica un potencialde 25 kV.10

A valores de pH mayores que 3, la pared interna del capilar de sílice tiene carga
negativa debido a la ionización de los grupos silanol de la superficie (Si—OH). Los
cationes de la disolución amortiguadora se aglomeran en una capa eléctrica doble
Karla Andrea Ordaz Rodríguez

adyacente a la superficie negativa del capilar de sílice. Los cationes en la capa

externa difusa de la capa doble son atraídos hacia el cátodo, o electrodo negativo
y, puesto que están disueltos, arrastran consigo al disolvente.

6.- ¿Qué es el flujo electrosmótico, por qué ocurre?

El flujo electroosmótico ocurre porque las paredes del tubo capilar transportan una
carga. La superficie de un capilar de sílice contiene un gran número de grupos
silanol (—SiOH).

7.- Una electroforesis en gel SDS se efectuó con las siguientes proteínas

Proteína Peso molecular (kDa) Posición del gel en cm

Ovoalbúmina 45 1.50

Quimotripsinógeno 25.7 3.70

Tripsina 20.0 4.90

Mioglobina 17.7 5.50

Lizosima 14.5 6.30

Citocromo c 12.4 7.0

Se encontró que una proteína desconocida migra 2.9 cm en el mismo gel ¿Cuál es el peso
molecular de la proteína desconocida?

Recordemos que la distancia de migración esta en proporción con el logaritmo del peso
molecular