Manual de Procedimientos de Laboratorio Clinico Veterinario 2 PDF

Facultad de Bioanlisis, Veracruz Manual de Procedimientos de Laboratorio
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO CLINICO VETERINARIO
INDICE
I. La Historia Clnica y su uso en el Diagnstico Clnico Veterinario.
II. Mtodos de sujecin y obtencin de muestras para diagnostico de

laboratorio en animales domsticos.
III. El mtodo de flotacin para la identificacin de huevecillos de

Nematodos en cnidos y felinos.
IV. El mtodo de sedimentacin para la identificacin de huevecillos

de Trematodos en heces.
V. El mtodo de Harada Mori para cultivo larvario de Ancylostoma y

Uncinaria en perros y gatos.
VI. Identificacin de larvas de nematodos pulmonares por el mtodo

de Baerman
VII. Tcnicas Hematolgicas en medicina veterinaria.
VIII. Diagnstico de Mastitis mediante las pruebas de Hotis y del Azul

de Bromotimol
IX. Elaboracin de autovacuna en la teraputica de la Papilomatosis

bucal canina.
X. Tincin de esporos de Bacillus anthracis
XI. Prueba de intradermo-reaccin para deteccin de Fasciola y

Tuberculosis
XII. Determinacin de copto antgenos
XIII. Reacciones de aglutinacin pruebas serolgicas y lcteas para la

determinacin de Brucelosis.
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METODOS DE SUJECION Y OBTENCION DE

MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE
LABORATORIO EN ANIMALES DOMESTICOS.
1. INTRODUCCION
Los veterinarios tienen la necesidad de consultar laboratorios para
resolver determinados problemas de diagnstico. Sin embargo, este
esfuerzo puede verse mermado por una seleccin, preparacin, manejo y
envo inadecuado de las muestras. Esta situacin puede ser evitada
mediante el seguimiento cuidadoso de algunos principios generales:
La muestra seleccionada deber ser representativa del padecimiento.

Suele ser preferible el envo de varios especimenes del mismo lugar.
Las muestras debern ser perfectamente identificadas.
Deber incluirse la Historia Clnica del individuo.
Para cada caso se elegir el tipo de recoleccin, manejo, conservacin y
envo ms adecuado, a la especie y tipo de padecimiento presentado.
Cuidar en lo posible, el manejo estril de la muestra y en una cantidad
adecuada.
En caso de envo Postal, especificar en la envoltura el tipo de muestra,
forma de manejo y verificar que se lleve a cabo en el menor tiempo
posible.
En esta prctica se llevarn a cabo las tcnicas de Puncin venosa en

distintas especies domsticas, as como la toma de Muestra de orina y
Recoleccin de heces.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIN

TECNICA DE PUNCION VENOSA
En la prctica veterinaria los exmenes hematolgicos se realizan

ms satisfactoriamente con la sangre venosa. La puncin venosa, se realiza
con aguja y jeringa de distintas medidas segn el caso, ejecutndola sobre
cualquiera de las venas superficiales del individuo: Por ejemplo en el
caballo, la vaca y la oveja se emplea la vena yugular; Las venas safena y
radial, pueden sugerirse para el perro y gato; El cerdo es sangrado
normalmente en la vena cava anterior y en algunas razas en la auricular; Los
animales de laboratorio como el cobayo, ratn, rata y conejo son
desangrados fcilmente en el corazn, vena caudal o auricular.
Laboratorio Clnico Veterinario

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos
NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD
Alcohol 70 1L
Benzal 1L
Xilol 50 ml
Vaselina pura 100% 500 gr
Xilocaina 10% 100ml
Ketamina 50% 100 ml
3.2 Equipos de Laboratorio

1. Microscopio
3.3 Materiales de laboratorio

NUM. CANTIDAD DESCRIPCION
7 Guantes desechables
7 Jeringas desechables de 3 ml
4 Agujas desechables del No 21
3 Jeringas de insulina
1 Sonda de alimentacin infantil
1 Cinta adhesiva opaca, tela adhesiva de 2-3 cm.
5 m. Cordn de algodn de 0.5 cm de dimetro
1 Tijeras
5 Gradillas
5 Tubos de ensaye 13 x 100
10 Porta objetos de vidrio
10 Cubreobjetos de vidrio
1 lanceta o bistur
3 Hojas de bistur
1 paquete Algodn
5 Ligas
10 abate lenguas
10 Cucharillas rectales o tubos de vidrio
10 frascos de vidrio
3.4 Material biolgico
1 Perro macho de talla mediana o grande
2 Conejo adulto
3 Gallina o pollo grande

4 Gato adulto
5 Rata blanca o ratn.
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO
4.1 TECNICAS DE SANGRADO EN ANIMALES DE LABORATORIO.
PUNCIN INTRACARDIACA. Se coloca al individuo en posicin dorsal,

se palpa entre la 2a y 3a costilla del lado izquierdo, se coloca la aguja
entre las citadas costillas, se presiona ligeramente sobre la zona y se jala
l embolo de la jeringa para obtener la muestra (Es necesario cuidar la
introduccin de aire para evitar producir embolia gaseosa).
PUNCIN EN LA VENA MARGINAL DE OREJA. Se coloca una torunda
dentro del conducto auditivo del conejo, se limpia con alcohol y se
recorta el pelo de la oreja con una tijera. Se pasa un algodn con xilol
para irritar la zona, con una lanceta o bistur se podr obtener la muestra.
PUNCIN DE VENAS CAUDALES.
RESERCION DE COLA Y DEDOS.
SANGRADO EXHAUSTIVO Y DECAPITACION.
4.2 TECNICAS DE SANGRADO EN PERRO Y GATO.
El sangrado en perro y gato se lleva a cabo principalmente en las

venas safena y radial. Lo ms importante para una correcta obtencin de
muestra ser la adecuada sujecin del individuo. Posteriormente se deber
ocluir la vena por presin digital o torniquete. La piel sobre la vena es mvil,
por lo cual se deber inmovilizar con los dedos de la mano que sujeta el
miembro. La aguja deber insertarse con el bisel hacia arriba (No 21 para
perros y 22 al 25 para gatos). Se deber evitar interrumpir la circulacin por
tiempos prolongados para evitar hemoconcentracin. La cantidad a obtener
ser de 5 a 10 ml. evitando colapsar la vena. Al final se retirar la aguja y se
vaciar cuidadosamente en un tubo previamente preparado.
4.3 TOMA DE MUESTRA DE ORINA.
El anlisis de orina es uno de los procedimientos de laboratorio ms

comunes aplicados a la practica veterinaria, es de gran ayuda para el
diagnstico diferencial tanto de padecimientos generalizados como del
aparato genitourinario.

Para su recoleccin es necesario emplear recipientes limpios,

preferentemente estriles. La muestra se recoger durante la miccin o por
sondeo, siendo este ltimo ms adecuado por estar libre de detritus uretral o
vaginal. Es difcil cateterizar a un perro ms de una o dos veces al da
puesto que la reaccin tisular al traumatismo, causa un estrechamiento del
lumen uretral a travs del os penis.
4.4 RECOLECCION DE MUESTRA DE HECES.
Es indispensable la aplicacin de medidas higinicas estrictas como

medida de proteccin en la toma de muestras de heces, as como seguir las
indicaciones especificas para cada tipo de animal, utilizando recipientes
limpios o estriles para la recoleccin de la muestra.
En las especies de talla grande es ms prctico e higinico obtener

muestras directamente del recto del animal, con un guante de plstico. Una
vez obtenida una muestra adecuada, el guante es reversado hacia adentro,
sirviendo de esta forma como recipiente de recoleccin, una vez colectado
se sella, se identifica y se enva refrigerada al laboratorio. En los animales
pequeos, las muestras fecales son obtenidas por medio del termmetro o
una varilla de vidrio, aunque esta pequea cantidad ser apenas suficiente
para un examen directo.
En caso de no ser posible la recoleccin directa se proceder a tomar

la muestra directamente del recto, se cuidara que la defecacin ocurra sobre
un piso previamente lavado. En este caso la muestra se recoger con
guante plstico, esptula de madera, tomando solo la capa superior que no
entr en contacto con el suelo.
5. PROCESAMIENTO DE RESULTADOS
RESULTADOS Y OBSERVACIONES

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFA
De la Puente G. Jos. Manual de Exterior y manejo y Tcnicas de sujecin

de los animales domsticos. UNAM. Mxico.
Oteiza Fernndez, Jos. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios.

Mxico.
El Manual Merck de Veterinaria. Merck & CO. INC. USA.

EL METODO DE FLOTACION PARA LA

IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DE
NEMATODOS EN CANIDEOS Y FELINOS.
1. INTRODUCCION
La parasitologa estudia los seres que viven momentnea y/o

permanentemente, sobre o dentro de otros organismos vivientes, obteniendo
de los mismos su subsistencia. Las enfermedades parasitarias son la
interrelacin entre el agente etiolgico (parsito), el hospedero y el medio
ambiente, en donde al romperse la relacin de equilibrio se produce
sintomatologa y se origina la enfermedad.
Existen algunos parmetros que nos sirven para destacar la

importancia que guardan en Medicina Veterinaria, por ejemplo: la incidencia
en animales domsticos, la mortalidad por parasitosis, las erogaciones
econmicas producidas a los productores, as como la repercusin social y
econmica.
Todo ello nos lleva a considerar la importancia de conocer no solo a

las enfermedades parasitarias, sus agentes etiolgicos, patologa,
sintomatologa, y la forma de combatirla, sin lograr su control mediante el
diagnstico e identificacin que permita el control de las infestaciones
subsecuentes.
La presente prctica consiste en la determinacin de parsitos

mediante tcnicas de frotis directo y flotacin. Consiste en dispersar una
suspensin de material fecal en solucin de mayor densidad que los
huevecillos de parsitos, la diferencia en la gravedad especfica hace que
los huevos se eleven a la superficie. Cuando los huevos permanecen
demasiado tiempo en la solucin de concentracin, pueden deformarse.
Esta tcnica es recomendada para la identificacin de quistes de

protozoarios y huevos de helmintos, ya que son capaces de flotar en pesos
especficos de 1,000 a 1,200. Los huevecillos de tremtodos son mucho
ms pesados, por tanto solo flotarn en lquidos con pesos especficos
superiores a los 1,300.

3.1 Reactivos (soluciones de enriquecimiento)

Solucin saturada de sal 1.190 a 20C 5L
Solucin saturada de azcar 1. 120 a 15C 5 L
Solucin cloruro de zinc 1.890 a 20C 5 L
3.2 Equipo de Laboratorio

1. Microscopio
2. Centrfuga (opcional)

5 Vasos de precipitado 100 ml
10 Tubos de ensaye
10 Portaobjetos
10 Cubreobjetos
5 Gradillas
5 Pinzas
5 Coladeras de malla fina de plstico 6 a 7 cm
dimetro
10 Abatelenguas o varillas de vidrio
10 Gasas
5 Lazos de alambre
5 Esptulas
3.4 Material Biolgico

1. heces de perro
2. heces de gato
3. heces de aves
4. heces de cerdo
5. heces de bovino u ovino
4.1 FROTIS DIRECTO

Se emulsifica una pequea cantidad de heces en agua y se aplica una

pequea capa sobre el portaobjetos. Se coloca el cubreobjetos y se
examina el frotis en el objetivo de menor aumento, investigando la presencia
de huevos, quistes y larvas. Este mtodo es valioso cuando se sospecha de
la presencia de larvas de nemtodos o protozoarios mviles.
4.2 MTODO DE FLOTACION
En un vaso de precipitado de 100 ml se mezclan 2 g de heces con

algo de solucin de enriquecimiento utilizando para ello una esptula. Luego
se agregan 90 ml de solucin de enriquecimiento agitando vigorosamente
para obtener una mezcla bien homognea. Si las heces contienen muchas
partculas grandes se cuela la mezcla en colador fino. Se debe recordar que
algunos huevos quedan en el residuo detenido por la malla del colador. Lugo
se deja reposar la mezcla por unos minutos hasta que las burbujas de aire
hayan salido y dejar flotar cuidadosamente un cubreobjetos sobre la
superficie del lquido. Los huevos de parsitos flotarn hacia la superficie y
se adherirn al cubreobjeto. Despus de media hora el cubreobjeto es
cuidadosamente tomado con una pinza y colocado sobre el portaobjetos. La
preparacin es observada al microscopio.
La flotacin de los huevos en la solucin de enriquecimiento se puede

acelerar por medio de la centrifugacin. El tubo para centrfuga debe ser lo
suficientemente ancho que permita colocar el cubreobjetos sobre la
superficie del lquido. La suspensin se centrifuga con el cubreobjeto sobre
la superficie del lquido. Si ello no es posible, la capa superficial del lquido
puede ser sacada con un lazo de alambre y luego colocada sobre el
portaobjetos.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFA
THIENPONT, D; ROCHETTE, F; VANPARIJS, O.F.J. Diagnstico de las

Helmintiasis por medio del examen coprolgico. Janssen Research
Foundation. Beerse Belgica. 1979.
QUIROZ, R. H. Parasitologa y Enfermedades parasitarias de los animales

domsticos. Ed Limusa. Mxico.
LAPAGE, G. Parasitologa Animal. Logia. Ed. Continental. Mxico.

EL METODO DE SEDIMENTACION PARA LA

IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DE
TREMATODOS EN HECES.
1. INTRODUCCION
La Fasciolasis, Distomatosis heptica, Palomilla o Mariposa del
hgado, es una enfermedad que afecta comnmente a las ovejas, as como
a las cabras, bovinos, cerdos, equinos, eventualmente al hombre y a
algunos animales silvestres, presentando una amplia distribucin mundial.
Es una enfermedad parasitaria debida a la presencia y accin del

Tremtodo Fasciola heptica . Presenta un proceso inflamatorio crnico
del hgado y conductos biliares, causando trastornos digestivos y
nutricionales
Los huevecillos de tremtodo son fcilmente identificables en frotis

directo o por la tcnica de sedimentacin, debido a la presencia de un
oprculo polar, el cual puede ser destruido en soluciones hipertnicas, por lo
cual no se recomiendan las tcnicas de flotacin.
3.1 Reactivos
Solucin Salina Fisiolgica 1L
ter 1L
cido actico 5% 100 ml
Azul de metileno 1% 100 ml
3.2 Equipo de Laboratorio

3. Centrfuga
4. Microscopio


10 Vasos de precipitado 100 ml

20 Tubos para centrfuga (cnicos)
20 Portaobjetos
20 Cubreobjetos
10 Gradillas
10 Pipetas Pasteur
10 Coladeras de malla fina de plstico
10 palillos finos de madera
10 Gasas
10 Goteros de cristal
10 Esptulas

heces de ovino
heces de bovino
4.1 METODO DE SEDIMENTACION SIMPLE
Como se mencion anteriormente, esta tcnica se utiliza nicamente

cuando se sospecha la presencia de huevecillos de tremtodo u otra clase
de huevecillos operculados.
1. Se coloca una suspensin de heces en agua (puede utilizarse solucin

salina) en un tubo de ensaye cnico, colada a travs de una malla fina.
2. Se deja el tubo en reposo por un mnimo de 15 minutos o a centrifugacin
a baja velocidad.
3. Se extrae el sedimento mediante una pipeta Pasteur o gotero.
4. Se examina al microscopio en un portaobjetos.
4.2 METODO DE TELEMAN.
1. En 5 ml. de solucin de cido actico al 5% se suspende 1 gr. de heces

agitndolo.
2. Se deja reposar por un minuto y se coloca dentro de un tubo de
centrifugacin.
3. Se le agrega igual cantidad de ter y se agita vigorosamente.
4. Se centrifuga durante un minuto a 1500 RPM.

5. El sedimento que se forma contiene los huevecillos de tremtodo, y

presenta encima una capa de cido actico y una capa de ter, con una
capa de restos de heces entre ambas.
6. Con un palillo fino y largo se afloja el sobrenadante de las paredes del
tubo y se decanta, debiendo quedar solo el sedimento.
7. Se agregan unas gotas de agua al sedimento y se mezcla vigorosamente
8. Se toman unas gotas de esta suspensin y se colocan sobre el
portaobjetos, examinndolo bajo el pequeo aumento.
Con este mtodo es posible evaluar la intensidad de la infestacin.
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFA



EL METODO DE HARADA MORI PARA CULTIVO

LARVARIO DE ANCYLOSTOMA Y UNCINARIA EN
PERROS Y GATOS.
1. INTRODUCCION
La Anquilostomiasis o Uncinariasis es la Infestacin causada por la
presencia ya accin de larvas y adultos de varias especies de Ancylostoma
y Uncinaria en intestino delgado y otros tejidos en perros y gatos,
Clnicamente se caracteriza por anemia ferropnica, adelgazamiento,
diarrea sanguinolenta y en algunos casos edema en patas. Es comn en
cachorros posterior al destete, pudindose observar tambin en perros
confinados.
El cuadro clnico por tanto es caracterstico en zonas con problemas

enzooticos. Su diagnostico se debe apoyar con la observacin de huevos en
heces, en relacin con u cuadro anmico (hematocrito).
Para el diagnostico de larvas se recomienda el mtodo de Harada

Mori, ya que las larvas son muy sensibles a la sequedad.
3. 1 Reactivos
Agua destilada 1L

1. Estufa de cultivo
2. Lupa
3. Microscopio

50 cm Papel filtro. (13 x 120 mm)

10 tubos de centrfuga cnico de 15 ml

10 Tapones para los tubos de centrfuga de 15 ml
10 Pipetas

1. heces de Perro parasitado o sospechosos
4. TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS
El cultivo de larvas en heces de perro o gato infectado, se lleva a cabo

por el Mtodo de Harada Mori dentro de un tubo de ensaye .
1. Se toma una delgada capa de heces de 1 a 2 mm, y se extiende sobre el

papel filtro, colocndola en el tercio medio.
2. Se agregan 3 ml de agua destilada en el tubo de ensaya.
3. Se coloca el papel filtro con la muestra dentro del tubo, de tal modo, que
el extremo inferior haga contacto con el agua (un cm aproximadamente)
sin que haga contacto el agua con las heces.
4. En el extremo superior del tubo se coloca un tapn de algodn,
sosteniendo el otro extremo del papel.
5. Este cultivo se lleva de 7 a 10 das en la estufa a temperatura promedio
de 24 a 28 C.
6. Cada da se deber verificar que el agua contacte con la superficie de
papel, en caso necesario se agregar ms agua destilada.
7. Las heces se mantendrn hmedas gracias al papel filtro y tan pronto
como las larvas se hallen libres, emigrarn hacia el agua.
8. Las larvas son sacadas con una pipeta y examinadas al microscopio con
el menor aumento.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA



IDENTIFICACIN DE LARVAS DE NEMATODOS

PULMONARES POR EL METODO DE BAERMAN
1. INTRODUCCION
Los huevos de nemtodos y larvas en heces de bovinos, son casi los
mismos que se encuentran en pequeos rumiantes domsticos y salvajes,
en medicina veterinaria, el aparato de Baerman ha sido de gran ayuda para
la identificacin de parsitos pulmonares de la familia Protostrongylidae
principalmente.
Cuando se usan heces recin extradas siempre que se

encuentren larvas, estas sern identificadas como nemtodos pulmonares,
puesto que solo estas son vivparas. Si por ejemplo se utilizan heces de ms
tiempo de recolectadas, las larvas de Strongyloides, Trichostrongyldeos y
otros nemtodos pueden ser encontradas, tras la eclosin de los
huevecillos, lo que obviamente interferir en el diagnstico.
Cualquier infeccin por pequea que sea, puede ser detectada por
medio de este aparato y puede ser utilizado cuantitativamente, siempre que
se pese con exactitud la cantidad de heces a utilizar.
El aparato de Baerman consiste en un embudo de vidrio sostenido por

un soporte y en su parte inferior tiene colocado un tubo de goma de 10 cm
de largo que termina en una pequea pipeta (gotero). El tubo de goma es
cerrado por un clip. La boca del embudo es cubierta con una malla coladora
de gasa o alambre cuya abertura sea de 0.6 a 0.7 mm, la que se empuja un
poco en la mitad de manera que se sumerja principalmente en el embudo,
sta se cubre por debajo con doble capa de gasas.
3.1 Reactivos
Agua destilada 2L

1. Microscopio
2. Centrfuga (opcional)
3.3 Material de laboratorio

10 Embudos de vidrio
10 Soporte universal con pinza
5m Tubo de goma
10 goteros
10 Clips
20 Gasas
10 Mallas coladoras de alambre con abertura de 0.6
a 0.7 mm
20 Portaobjetos
20 Cubre objetos
3.4 material Biolgico

1. Heces de bovino u ovino sospechoso a parsitos pulmonares
Colocar sobre las gasas 20 g de heces frescas. Llenar el embudo con

agua tibia (max. 30C) en la cual deben sumergirse completamente las
heces. Si las heces son muy lquidas se deben usar varias capas de gasas.
Colocar todo el aparato a temperatura ambiente durante 24 hrs. las larvas
saldrn de las heces ya remojadas y pasando a travs del colador, irn a
depositarse en el cuello del embudo concentrndose en el fondo. Cuando el
clip es abierto se deben recolectar las primeras 3 a 4 gotas (no ms) en un
portaobjetos de vidrio y sin cubreobjetos debern ser examinadas al
microscopio bajo el aumento menor. Las larvas de nemtodos se vern
mover activamente. Tambin se podr recolectar dentro de un tubo para
centrfuga de 5 a 10 ml, procediendo al centrifugado, tras la decantacin del
sobrenadante, larvas obtenidas debern estar en el sedimento del tubo.
5. PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFA



TECNICAS HEMATOLOGICAS EN
MEDICINA VETERINARIA.
1. INTRODUCCION
En la prctica veterinaria los exmenes hematolgicos se realizan

mas satisfactoriamente con la sangre venosa prefirindose como se indic
en la primera prctica : la vena yugular para caballos, bovinos, ovejas y
cabras; el corazn en conejos, cobayos y ratones, y la vena cava para el
cerdo.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACION
Las tcnicas empleadas en medicina veterinaria son similares a las

utilizadas en hematologa humana, sin embargo existen algunas
consideraciones que sern necesarias indicar.
En primer lugar los eritrocitos de perro son especialmente

susceptibles a la hemlisis, por lo cual se deber evitar el exceso de presin
negativa sobre la jeringa, as como la formacin de espuma que la favorezca
(utilizar jeringas de 5 a 10 c.c. con mbolo bien ajustado).
Es importante recordar que para las determinaciones de hemoglobina

y la cuenta globular, se requiere un anticoagulante y refrigeracin (solucin
al 10% con 4 partes de oxalato de potasio y 6 de oxalato de amonio,
colocando 0.15 c.c. en tubos de 5 c.c. para perro y gato o 0.3 para tubo de
10 c.c. en especies mayores. Tambin podrn utilizarse de 2 a 4 mg de
cristales de oxalato de sodio y citrato de sodio en solucin evaporando a
sequedad en tubo de ensaye inclinado).
3.1 Reactivos
Cianometa
Standard para cianometa

1. Microcentrfuga
2. Microscopio
3. Espectofotmetro
4. Disco lector

10 Tubos de vacutainer con EDTA
10 Tubos de ensaye de 13 x 100
50 Portaobjetos
10 Capilares
5 Lmparas de alcohol
5 Pipetas de sahli
5 Boquillas
5 Gradillas
3.4. Material biolgico

1. Muestras de sangre de diferentes especies animales
a. Bovino
b. Ovino
c. Perro
d. Gato
e. Pollo
Una vez recibida la muestra se mezcla por inversin, se preparan 4 frotis de

sangre y se dejan secar, y se llenan dos pipetas: una para determinacin de
hemoglobina y otra para conteo de leucocitos. Se proceder a la verificacin
de la cuenta leucocitaria, a la tincin de frotis para el estudio microscpico y
la cuenta diferencial (frmula blanca) y la determinacin de hemoglobina.
4.1 PREPARACION DEL FROTIS DE SANGRE.
1. Este procedimiento requiere sangre fresca.

2. Para extender la preparacin sern necesarias varias lminas limpias,
sobre las cuales se colocar una gota de sangre en el extremo de la
lmina.
3. Con otra lmina se procede a extender la sangre, deslizndola mediante
un movimiento rpido, al poner en contacto el borde de la lmina con la
gota, en un ngulo agudo.

4. Secar mediante calor o aire, evitando la fragmentacin y crenacin de los

eritrocitos.
5. La laminilla deber ser identificada y teida con los procedimientos
usuales (Wright).
6. Una vez seca, se observar al microscopio tanto los eritrocitos como los
ncleos de los leucocitos.
4.2 DETERMINACION DE HEMOGLOBINA
Existen dos tipos de procedimientos para la determinacin de hemoglobina,

ambos son colorimtricos, el directo es el mtodo de Tallqvist en donde el
color de la sangre total expuesto en un papel secante se compara con un
patrn, este es utilizado en campo, y dentro de los mtodos indirectos se
utilizan el hemaglobinmetro de Shali o el de Handen - Hausser, en el cual
la hemoglobina es convertida primero en hematina cida y entonces se
compara con un patrn (escala graduada).
4.3 CUENTA DE LEUCOCITOS
Para esta prueba se requiere sangre venosa oxalatada, extrada en las 24

horas previas al examen.
1. La muestra de sangre se vierte sobre un frasco pequeo con cido

clorhdrico 1-10 normal, mezclndola cuidadosamente por inversin
repetida.
2. Se procede al llenado de la pipeta de glbulos blancos hasta 0.5 3.
3. La punta de la pipeta deber introducirse en el frasco que contiene
diluyente y se aspira cuidadosamente, mezclando el contenido mediante
movimientos de rotacin, hasta la marca 11.
4. Una vez lleno deber ser agitado manual o elctricamente hasta asegurar
la homogeneizacin de la mezcla.
5. El siguiente paso consiste en el llenado de la cmara contadora, la cual
deber estar limpia y libre de grasa.
6. Se procede a colocar el cubreobjetos sobre la cmara.
7. Nuevamente se agita la pipeta, y se desechan dos o tres gotas del capilar
graduado de la pipeta.
8. Posteriormente, se procede al llenado por capilaridad, de la cmara sobre
las dos hendiduras que separa al borde del cubreobjetos con la misma.
9. Una vez llena, se procede a la observacin al microscopio para el conteo
de los leucocitos existentes en cuatro de los cuadros grandes del campo,
la suma de su contenido, se multiplica por 50 para dar el total.

10. Cada cuadro grande posee 16 cuadros secundarios y presenta un rea

de 1 milmetro cuadrado y su profundidad es de 0.1 mm (cuatro dcimas
de milmetro cubico a una dilucin de 1 a 20).
4.4 CUENTA DE ERITROCITOS.
Para el llenado de la pipeta se sigue una tcnica semejante a la anterior,

sustituyendo el liquido de dilucin (Hayem), se llena hasta la marca 101 y
se procede al llenado de la cmara contadora.
1. la cuanta de los eritrocitos se lleva a cabo en el rea central finamente

graduada de la cmara.
2. Se cuentan los cuadros secundarios de las esquinas y el cuadro central
(cinco en total).
3. Para el clculo de la cifra total, la suma de los eritrocitos de los 5 cuadros
es multiplicada por 10,000 y da la cifra total.
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA
BENJAMN M. M. Manual de Patologa Clnica Veterinaria. 4 Edicin. Ed.

Limusa. Mxico. 1990
COLES, E. H. Diagnstico y Patologa Veterinaria. 5 Edicin. Ed.

Interamericana. Mxico. 1998
El Manual Merck de Veterinaria. Merck &CO. Centrum Espaa 1988

DIAGNOSTICO DE MASTITIS MEDIANTE LAS

PRUEBAS DE HOTIS
Y DEL AZUL DE BROMOTIMOL
1. INTRODUCCION
La mastitis es una enfermedad aguda o crnica de tipo bacteriano que

afecta la glndula mamaria de diversas especies animales siendo de
importancia econmica significativa en el caso del ganado bovino, el agente
causal puede ser variado entre los que tenemos a los Staphylococcus spp.,
Corynebacterium pyogenes, E. coli, Pseudomonas spp.
Para el diagnstico de la mastitis se han aconsejado un sinnmero de

procedimientos clasificndose de la siguiente manera:
1. Examen fsico del animal (palpacin e inspeccin).

2. Examen fsico de la leche.
3. Examen qumico de la leche (con indicadores como el azul de
bromotimol).
4. Examen microscpico de la leche investigando la presencia de leucocitos
y bacterias (directo o en muestra incubada).
5. Pruebas presuncionales de cultivo encaminadas a identificar al
microorganismo, as como la prueba de Hotis.
6. Procedimientos especficos de cultivo para el aislamiento e identificacin
del germen.
El xito en el resultado de la prueba depender en gran medida de un

estricto procedimiento de recoleccin que evite la contaminacin de la
muestra.
Estas precauciones no sern tan estrictas en caso de que las pruebas

sean de carcter fsico y qumico.

3.1 Reactivos
Solucin clorada 200 ppm 10 L
Alcohol 70% 5L
Azul de bromotimol 1L
Prpura de bromocresol 1 - 300 1L
Tincin de Gram

2. Microscopio

20 Lienzos de tela estril (magitel)
5 Paletas para prueba de mastitis
20 Frascos de vidrio estriles
30 Tubos de ensaye 13 x 100
30 Tubos de ensaye 20 cc con tapn de rosca
10 Pipetas pasteur
20 Portaobjetos
1. Vacas en etapa de lactacin
2. Muestras de leche directa de la ordea
4.1 PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRA
1. Limpieza de la ubre.
2. Lavado con solucin clorada (200 ppm).
3. Secar con lienzo limpio.
4. Secar y esterilizar el pezn con alcohol al 70%.
5. Despuntar para la prueba de pao negro, en su caso.
6. Ordear directamente sobre el recipiente evitando el contacto con el
pezn.
7. Las muestras de cada cuarto deber ser tomadas por separado,
identificando el cuarto a que corresponden.
8. lavar y desinfectar las manos del ordeador antes y entre la toma de cada
cuarto.

4.2 PRUEBA DE AZUL DE BROMOTIMOL.
1. Extraer con cuidado 5cc de leche de cada cuarto y colocar en los tubos
dispuestos.
2. Agregar 0.5 a 1.0 cc de solucin de azul de bromotimol en cada tubo.
3. Proceder a la lectura apoyado con iluminacin natural preferentemente.
Reaccin amarillo verdoso equivale a un pH normal.
Reaccin verde a verde oscuro o azul, presencia de exudado inflamatorio.
4. Vaciar las soluciones de las pruebas despus de cada examen, y lavar
con agua neutra.
Esta prueba no es exacta al comienzo ni en la fecha cercana al final de la

lactancia. Los papeles indicadores pueden suplir a la solucin con menor
exactitud en los resultados.
4.3 PRUEBA DE HOTIS
1. Preparar cada tubo agregando 1cc de solucin estril de prpura de

bromocresol al 1-300.
2. Marcar los tubos a 16 cc.
3. extraer suficiente leche mediante la tcnica estril, para llenar el tubo
hasta la marca.
4. Tapar y mezclar el contenido por inversin.
5. Incubar por espacio de 24 Hrs a 37 C y observar los cambios fsicos que
experimente.
6. Interpretacin de la prueba : esta prueba esta destinada a revelar la
presencia de Streptococcus agalactiae.
Cuando el color vire a amarillo, revela la presencia de grmenes que
fermentan la lactosa debido a la baja del pH de la solucin.
Reaccin negativa. cuando no hay cambios o adquiere una coloracin
griscea con o sin sedimento.
Reaccin positiva. el color de la solucin varia del gris al amarillo
brillante se presentan los flculos amarillentos, observandose desde
unos cuantos en el fondo y los lados del tubo hasta un sedimento denso.
La prueba de Hotis puede ser asociada al examen microscpico directo,

para lo cual se proceder a incubar los tubos de ensaye invertidos, para
que, en caso de muestras positivas, el sedimento adherido al tapn sea
observado al microscopio preparando los frotis necesario

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA

Limusa. Mxico. 1990


ELABORACION DE AUTOVACUNA EN LA
TERAPEUTICA DE LA
PAPILOMATOSIS BUCAL CANINA.
1. INTRODUCCION
La papilomatosis en una enfermedad viral (Papovavirus) en perros

jvenes, que se manifiesta con tumefacciones epiteliales benignas (verrugas
blanquecinas y rugosas) en hocico, boca, lengua, paladar y garganta.
Pudiendo causar muchas molestias y ser altamente contagioso. La prctica
seala que los perros se recuperan de manera espontnea despus de 6 o 7
meses adquiriendo inmunidad permanente, sin embargo se recomienda la
aplicacin de autovacuna para estimular la velocidad de la respuesta.
La presente prctica tiene como objeto provocar la respuesta inmune

en un canideo con papilomatosis bucal, utilizando como antgeno el virus de
las lesiones neoplsicas, para obtener anticuerpos especficos contra el
mismo.
Los antgenos son sustancias que al ser introducidas en el organismo,

inducen una respuesta inmune detectable y que puede reaccionar los
mecanismos efectores humorales o celulares de la respuesta. Cualquier
sustancia o clula que es reconocida como extraa por el sistema inmune
puede ser un antgeno (bacterias, virus, glbulos rojos, clulas de
transplante, etc.)
Dentro de las caractersticas qumicas que debe poseer un antgeno

estn:
1. Composicin qumica. Preferentemente protenas, o bien polisacridos,
lpidos complejos, o cidos nucleicos.
2. Carcter extrao. Alejados filogenticamente del sistema inmune
receptor.
3. Peso molecular. Superior a 10,000.
4. Rigidez estructural. La complejidad estructural eleva la inmunogenicidad.
Para una adecuada respuesta inmune se requiere alto grado de pureza e

integridad para facilitar la reaccin. Los antgenos pueden ser moleculares

o celulares, y al encontrarse intracelularmente debern ser liberados para

provocar una mejor estimulacin. Los mtodos empleados para la ruptura de
tejidos o clulas pueden ser: congelacin y descongelacin simultnea,
maceracin en mortero, licuadora, sonicacin, prensas, Bombas y cro
impactacin entre otras.
3. LISTA DE REQUERIMINETOS
3.1 Reactivos
Solucin salina fisiolgica 5L
Formaldehdo 1% 1L
Penicilina sdica 800 UI 1 fco
Anestesal 1 fco
Estreptomicina 1 fco
3.2 Equipos de laboratorio

1. Balanza.
2. Centrfuga

3 Mortero estril
3 pistilo estril
3 Tijeras
3 Pinzas de diseccin
3 Caja de petri
3 Embudo de cristal
3 Soporte universal
3 Gradillas
10 Gasa estril
3 Pipetas de 1ml
3 Pipetas de 10 ml
6 Tubos de centrfuga
9 Jeringas de 3 ml
3 Jeringas de 5 ml
3 Jeringas de insulina
1 Kg Arena estril
Tubos de ensaye estriles de 13 x 100 con tapn

1. Papilomas bovinos
2. Papilomas bucales caninos
1. Para la obtencin de la muestra se proceder a tranquilizar al animal (con

Anestesal), se pinza la base del papiloma (pednculo) y se corta con
bistur, (colocando la muestra en una caja de petri estril, conservndola
con solucin salina fisiolgica en refrigeracin) se procede a cauterizar la
base de la lesin. Dependiendo del tamao de la lesin se debern tomar
5 o 6 gramos de muestra.
2. Una vez obtenida la muestra, se trocear con tijeras lo mas pequeo
posible colocndola sobre una caja de petri para poder pesarla,
obteniendo 4 gr .
3. Se colocan sobre el mortero y se procede a macerar con el pistilo, hasta
obtener la destruccin celular, en caso necesario utilizar arena estril
(muestras muy grandes y duras)
4. Agregar solucin salina fisiolgica hasta lograr una suspensin al 20%
(4ml se SSF por cada gramo de tejido).
5. Filtrar el macerado con gasa estril y centrifugar a 2,000 rpm durante 10 a
15 min.
6. Titular el sobrenadante, por cada ml agregar 500 U.I. de penicilina y 500m
g de estreptomicina como conservador
7. Como inactivador del virus se utilizar Formaldehido al 1%.
8. Incubar a 37 C durante 24 hrs.
9. Refrigerar hasta su uso.
10. Aplicar 5 ml subcutneos en tres aplicaciones cada 8 das.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA

Limusa. Mxico. 1990

CARTER, G. R. Bacteriologa y Microbiologa Veterinaria. Ed. M.M.M.

Mxico. 1990

TINCION DE ESPOROS DE Bacillus anthracis
1. INTRODUCCION
La formacin del esporo es un mecanismo especializado para la

supervivencia bacteriana en circunstancias difciles. Su funcin es encerrar
un genoma o paquete gentico, en un vehculo aislante que le permita la
germinacin subsiguiente en un medio adecuado. Los esporos, que son
clulas en el sentido estricto de la palabra, se encuentran en un estado de
criptobiosis o vida latente, sin actividad metablica y muestran un aumento
marcado en la resistencia a diversos agentes qumicos o fsicos como por
ejemplo la desecacin, congelacin y resistencia al calor y a las radiaciones.
El efecto que las condiciones ambientales tienen sobre la formacin

del esporo vara de un tipo de bacteria a otra. Ejemplo; el bacilo de la Fiebre
carbonosa (Bacillus anthracis), solamente forma esporos en condiciones de
aerobiosis y estas no pueden encontrarse en impresiones de rganos como
el bazo de animales muertos de Antrax, en donde la insuficiencia de
aerobiosis del tejido impide la formacin del esporo.
3.1 Reactivos
Cepa vacunal de Bacillus 1 fco
anthracis.
Verde de malaquita 1 fco
Solucin acuosa de safranina 1 fco

1. Microscopio


5 Portaobjetos
5 Lpiz graso
5 Asa bacteriolgica
5 Platina
1 Jeringa desechable de 3 ml
1. Con ayuda de una jeringa, depositar una gota de Cepa vacunal en el

centro de un portaobjetos y fijar.
2. Aplicar verde de malaquita y calentar hasta la emisin de vapores,
durante 1 minuto.
3. Lavar con agua corriente.
4. Contrastar con solucin acuosa de Safranina, durante 15 segundos.
5. Lavar, secar y observar al microscopio.
Resultados a observar: Los esporos se tien en verde claro y las

formas vegetativas en rojo.

CONCLUSIONES
6. BIBLIOGRAFIA

Limusa. Mxico. 1990


Mxico. 1990
MERCHAT, I. A. y PARCKER, R. A. Bacteriologa y Virologa Veterinaria. Ed.

Acribia. Mxico.

PRUEBA DE INTRADERMO-REACCION PARA

DETECCIN DE FASCIOLA Y TUBERCULOSIS
1. INTRODUCCION
La prctica se basa en la posibilidad de diagnosticar en condiciones

de campo a algunas enfermedades crnicas de los animales, mediante la
inoculacin de antgenos conocidos y demostrando una respuesta inmune
previa, denominada Hipersensibilidad.
Siendo la tuberculosis bovina una zoonosis muy importante en el

campo de la Salud Pblica, adems de la campaa nacional de control y
erradicacin de este problema, es para nosotros conocer perfectamente la
tcnica de deteccin, as como saber dictar las polticas a seguir en el
momento de encontrar uno o ms animales afectados (reactores), evitando
as mayores problemas debido a su alta transmisibilidad.
La observacin de la reaccin de la tuberculina, es una

hipersensibilidad de tipo IV (Gell-Coombs), debido a que en ella participan
linfocitos T y macrfagos, esto es, se precisa que haya una infeccin
primaria de tuberculosis que pudiera ser clnica o subclnica y que se
hubiese implementado una respuesta inmune y que ahora estaremos en
posibilidad de demostrarlo y que estas clulas al momento del contacto con
la tuberculina liberen unas substancias denominadas genricamente como
"linfocinas" y otras substancias como las amino-vaso activas; Esto dar por
resultado que en el sitio de la inoculacin o de contacto se forme un proceso
inflamatorio con infiltracin de linfocitos, monocitos y polimorfonucleres
"neutrfilos", as como las aminas vaso activas e interleucinas que
promueven la salida de lquidos del torrente sanguneo, provocando el
edema.
Aunque generalmente existe un elevado grado de resistencia del

hospedador, en numerosas ocasiones se han registrado casos de inmuno
supresin en enfermedades crnicas, lo que hace que el microorganismo
prolifere de manera relativamente incontrolada en los tejidos del individuo y
al mismo tiempo se podra observar una reactividad negativa a la prueba de
la tuberculina; tambin se han registrado casos de resistencia familiar baja a

la tuberculina, lo cual indica que existe una gran capacidad para producir
diversos grados de inmunidad celular a un organismo infectante
determinado, esto es bajo control gentico en los antgenos del complejo
mayor de histocompatibilidad (MHC).
Aparte de la tuberculosis existen otras enfermedades que pueden ser

diagnosticadas mediante el mismo tipo de prueba, obviamente cada una
requiere de su antgeno especfico, estas son, como: lepra (lepromina),
brucelosis (brucelina), paratuberculosis (johnnina), muermo equino
(malena), histoplasmosis (histoplasminina), coccidioidomicosis
(coccidioidina), hidatidosis (lquido del quiste hidatdico, prueba de Cazzoni),
linfogranuloma venreo (macerado de neoplasias, prueba de Frei), y con
algunos virus inactivados (rinotraquetis infecciosa bovina, Aujezsky, rabia,
etc.).
En la prueba diagnstica de la tuberculosis hay dos tipos de antgenos

segn la bacteria de donde se originen: aviar o mamfero (bovino), estas
substancias se conocen como Derivado Proteico Purificado de la
tuberculina. Debindose aplicar por va intradrmica 1/10 de mililitro (0.1 ml
100 ml), en el pliegue caudal o en la tabla del cuello del bovino,
registrndose las lecturas a las 72 horas; los resultados deben anotarse
como: REACTORES O NO REACTORES (positivos o negativos,
respectivamente). Es necesario conocer la Norma Oficial Mexicana para el
control y erradicacin de la tuberculosis bovina.
Tambin como pruebas intradrmicas podemos manejar algunos

diagnsticos de parasitosis, pero estas reacciones no las podemos ubicar
como hipersensibilidad tipo IV, sino como del tipo III puesto que en ellas
participan complejos inmunes (Ag-Ab-C'), y su reactividad puede ser
observada en unos cuantos minutos, permaneciendo hasta 6 u 8 horas.
Un problema parasitario comn en nuestra zona y diagnosticable por

este mtodo es la fasciolasis; para ello necesitaremos un extracto proteico
de Fasciola heptica en una concentracin final de 0.03%. Esta prueba se
considera muy til cuando se trata de determinar el estado de salud de un
hato muy grande y que para el cual en el laboratorio de parasitologa no
habra suficiente tiempo ni lugar; se pueden elaborar antgenos parasitarios
de Strongylus sp., Metastrongylus sp., scaris sp., Stephanurus sp.,
Cisticercus sp., Aunque en muchos de ellos existir el problema de
reacciones cruzadas, principalmente entre las familias afines.

3.1 Reactivos
Tuberculina PPD Aviar y 1 fco
mamfero
Solucin Salina Fisiolgica 5L
Mtodo de Biuret o Kendall

1. Bscula
2. Centrfuga
3. Espectrofotmetro

20 Jeringas de tuberculina c/agujas cal. 25-27
5 Jeringas de 5 ml con aguja del 21
5 Vernier (pie de Rey, nonio, cutmetro)
6 Mortero estril
6 Vasos de precipitado de 500 ml
6 Pistilo estril
6 Cajas de petri
15 Gasas
6 Embudo de cristal
12 Tubos para centrfuga

1. Fasciolas vivas
2. Bovinos
4.1 ELABORACION DE ANTIGENO PARA DIAGNSTICO DE FASCIOLA
Para la elaboracin de un antgeno para el diagnstico de una

parasitosis, los parsitos frescos son lavados repetidas veces en SSF, hasta
que se liberen de toda la materia orgnica que les rodea, se secan y taran,

luego son macerados y se suspende la papilla al 10% son SSF, centrifugar y

titular la protena del sobrenadante (SN) son un mtodo apropiado ( Biuret
y/o Kjelldal), ajustar a 0.3 % de protena. Para conservarlo se congela a -20
C, liofiliza o refrigera a 4-6C.
4.2 METODOLOGA DE LA PRUEBA DE INTRADERMOREACCION
Se realiza antisepsia en el pliegue caudal del bovino sospechoso

(base de la cola) y se aplica INTRADERMICAMENTE 0.1 ml de la
tuberculina (PPD). Ser positivo (reactor) cualquier manifestacin
inflamatoria que se observe en las prximas 72 horas. Si un animal resulta
reactor se le deber realizar una prueba doble comparativa en la tabla del
cuello, en donde se le rasurar y medir el grosor de la piel previo a la
aplicacin y se le aplicarn sendas dosis de PPD aviar y mamfero, (siendo
el PPD aviar en la parte anterior del sitio afeitado), leyndose a las 72
horas. Para realizar la interpretacin final se deber restar la medida de los
pliegues cutneos de las 72 horas a la medida inicial de ellos.
5.1 REGISTRO DE RESULTADOS
Prueba caudal
Bovino No. Sexo Edad Raza RESULTADO Observaciones
Prueba doble comparativa

Bovino No. Sexo Edad Raza Lectura RESULTADO
Inicial final
Mam Av Mam Av

Parasitosis
Bovino No. Sexo Edad Raza RESULTADO Observaciones
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA

Limusa. Mxico. 1990


Mxico. 1990
MERCHAT, I. A. y PARCKER, R. A. Bacteriologa y Virologa Veterinaria. Ed.

Acribia. Mxico.

DETERMINACION DE COPTOANTIGENOS
1. INTRODUCCION
El objetivo de la prctica es determinar mediante reacciones de

precipitacin la identidad de productos crnicos en los cuales se haya
podido sospechar algn fraude.
En el rea de la chacinera es frecuente encontrar que los embutidos

no correspondan sus contenidos a lo especificado en la etiqueta, o que en la
carnicera nos entreguen una carne de una especie animal diferente a la
solicitada.
Los copto anticuerpos se emplean para la identificacin de estos

productos, para ello se pueden preparar los antisueros como lo realizado en
la prctica 1, y obtener antisueros especficos y muy potentes que sean
capaces de dar resultados positivos an en diluciones a 1: 10,000.
3.1 Reactivos
Solucin salina fisiolgica 5 L
Merthiolate 1:100 000 1 fco
Azida sdica 0.02 % 1 Fco
Melox 1 Fco
Cloroformo 1 fco
Ketamina 50% 1 fco
Xilacina 5% 1 fco

1. Bscula
2. Centrfuga


6 Morteros estriles
6 Pistilos estriles
6 Tijeras
25 Gasas estriles
12 Tubos para centrfuga
6 Pipetas pasteur de 1 ml
6 250 gr. carne de
20 Jeringas de 3ml
6 Jeringas de 5 ml
1. Muestras crnicas:250 gr. carne de bovino

2. 250 gr. carne de pollo
3. 250 gr. carne de caballo
4. 250 gr. carne de cerdo
5. 250 gr. de Embutido (salchicha, jamn, etc)
6. 6 Conejos adultos
Se pesan unos cuantos gramos de la muestra crnica y se maceran en el

mortero, luego se diluyen hasta quedar en una concentracin del 20% con
SSF; enseguida se filtran por gasa y se centrifuga a 2000 rpm por diez
minutos.
Posteriormente el sobrenadante se debe enfrentar a los diferentes

antisueros para as poder identificar al producto. Para hacerlo se colocar un
ml del antgeno en el fondo de un tubo de ensayo y el suero de conejo
diluido (10, 100, 1000, 10000, 100000 veces) se resbalar suavemente por la
pared del tubo con una pipeta, intentando formar dos fases y una interfase
(no deben mezclarse), en dicha interfase se deber formar un anillo de
precipitacin en unos minutos a horas. Tambin puede hacerse utilizando
gel.
ANTISUERO MUESTRA NMERO

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
EQUINO______________________________________________________

CERDO ______________________________________________________
PERRO ______________________________________________________
BOVINO______________________________________________________
______________________________________________________
MUESTRA
1. _________________ 2. _________________ 3._________________
4. _________________ 5. _________________ 6._________________
7. _________________ 8. _________________ 9._________________
10. ________________ 11. _________________ 12.________________
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA
CARPENTER, P.H. Inmunologa y Serologa. Prensa Mdica. Mxico
HERNANDEZ-BELTRAN, A. y LOPEZ-YNEZ, B. Reacciones

serolgicas en la inspeccin de carnes y embutidos. 1977. Tesis
recepcional. FMVZ-UV.
NORMA OFICIAL MEXICANA. NOM-023-ZOO-1995 identificacin de

especie animal en msculo de bovinos, ovinos, equinos, porcinos y aves,
por la prueba de inmuno difusin en gel. Diario Oficial de la Federacin el
14 de septiembre de 1995. edicin a cargo de la "Comisin Nacional de
Sanidad Agropecuaria". Mxico, DF.

REACCIONES DE AGLUTINACIN PRUEBAS

SEROLOGICAS Y LACTEAS PARA LA
DETERMINACION DE BRUCELOSIS.
1. INTRODUCCION
Las pruebas de aglutinacin son la base del conocimiento sero

epidemiolgico de las campaas de control y erradicacin de diversos
problemas sanitarios de los animales, como: brucelosis y salmonelosis
aviar.
Las reacciones de aglutinacin, al igual que las de precipitacin,

tienen como componentes: antgeno, anticuerpo y electrolitos; pero en la
aglutinacin el antgeno es forme, esto quiere decir que son clulas o
partculas de stas.
El fenmeno de aglutinacin se lleva a cabo en dos etapas, siendo la

primera la formacin de complejos inmunes, o sea la unin de antgenos y
anticuerpos, conformando lo que se conoce como complejos primarios, esta
parte es inmediata, especfica e invisible; luego pasa a conformar los
denominados complejos secundarios, o sean las uniones de los complejos
primarios entre s, esta fase es mediata, especfica y visible.
La brucelosis es una zoonosis que incapacita al humano y causa

mermas econmicas considerables en la ganadera nacional mediante
abortos, esterilidad, decomisos y muerte. Existe cierta dificultad para
diferenciarla clnicamente de otras afecciones del aparato reproductor de los
bovinos como son: vibriosis (campylobacteriosis), tricomoniasis,
desnutricin, disfunciones hormonales, etc. Esto ha originado la creacin de
diversos mtodos de laboratorio para diagnosticarla en los animales
sospechosos. Estos mtodos utilizan suero sanguneo, leche, lquido
seminal, desde el punto de vista sero epidemiolgico, adems de que
dichas pruebas difieren en sensibilidad y especificidad. Desde el punto de
vista bacteriolgico se intentar el aislamiento a partir del moco vaginal,
cotiledones, contenido gstrico del producto abortado, etc.

Las pruebas sero epidemiolgicas son:

Especie
1.- Huddleson (placa) Bovino, cerdo y hombre
2.- Lenta en tubo (SAT) Bovino
3.- Tarjeta (Ag tamponado y con rosa de bengala)Bovino y hombre
4.- Anillo en leche (Bang). Bovino
5.- Fijacin del complemento. Bovino
6.- 2--Mercapto-etanol * Bovino
7.- Rivanol * Bovino
8.- Inactivacin por calor (56 C por 30 minutos) Bovino, cerdo
9.- Coombs. Bovino, cerdo
* Estas dos pruebas son capaces de detectar anticuerpos no vacunales

(IgG), destruyendo o precipitando a los anticuerpos de origen vacunal (IgM).
Para funciones de campaa para el control y erradicin de la brucelosis se
estn empleando las pruebas de tarjeta, rivanol y fijacin del complemento,
como rutina y para el control permanente de los hatos lecheros libres de la
enfermedad se est empleando la prueba de anillo en leche (Bang); as
como el aislamiento bacteriolgico para la confirmacin de los casos.
3.1 Reactivos
Antgeno Brucella abortus pH 3.65 1 fco
aba-test-tarjeta coloreado
con rosa de bengala
Antgeno Brucella abortus 1% 1 fco
aba-test-rivanol
Antgeno Brucella abortus 1 fco
aba-test-leche
1. Caja de iluminacin o Negatoscopio
3.3 Materiales de Laboratorio

15 Agujas para puncin calibre 18 o 20
15 Tubos vacutainers
1 Marcador

5 Placas de vidrio con cuadrcula 2.5 x 2.5 cm

5 Gradilla
1 caja Palillos de dientes
5 Pipetas de Bang .02 ml
5 Pipetas serolgicas de 0.2 mL
5 Pipetas automticas graduables
1 Caja aislante con refrigerantes
5 frascos de vidrio con tapa
1 Lmpara de alcohol

1. Bovinos hembras sin vacunaciones contra Brucella
2. Leche de vaca de reciente ordeo
Para la obtencin de la sangre se deber hacer una puncin en la

vena caudal colectndose esta en el tubo al vaco (vacutainer), rotularlo
(identificacin definitiva del animal) y dejarlo en posicin HORIZONTAL
hasta que alcance la perfecta coagulacin, posteriormente colocarlo en
forma vertical en la gradilla, as cuando el cogulo se retraiga soltar mayor
cantidad de suero. es importante que la coleccin de las muestras se hagan
con DIFERENTE aguja (siempre estril).
La muestra de leche puede ser individual o colectiva, esta se utilizar

para la prueba de Bang, aunque es preferible como muestra de hato pues es
capaz de detectar a una vaca reactor entre la leche de 60 animales.
4.1 PRUEBA DEL ANTIGENO TAMPONADO (tarjeta).- (Pietz 1968). La

prueba es cualitativa, se utilizan 30 L (microlitros, 0.03 ml) de suero
sanguneo y la misma cantidad del Abatest-tarjeta, coloreado con rosa de
bengala y un pH de 3.65. Se colocan los reactivos sobre una placa de vidrio
, de plstico o cartn satinado y mezclar con palillos de dientes, rotar la
mezcla y esperar hasta 4 cuatro minutos a la aparicin de la reaccin.
Debido al pH bajo, las IgM muchas veces no establecen perfectamente la
aglutinacin, mientras que en presencia de IgG, esta s se realiza mejor.
4.2 PRUEBA DE ANILLO EN LECHE (prueba de Bang).- (Fleishaver 1937).

Esta prueba detecta aglutininas en la leche, se utiliza para inspeccionar
hatos que han sido declarados libres de la infeccin. Se debe homogeneizar

la leche (perol, tanque de enfriamiento, bote, etc.), se toman unos mililitros y

se lleva al laboratorio en donde se deber refrigerar de 12-72 horas. Luego
calentar al ambiente por 30-60 minutos los reactivos (antgeno y muestras),
colocar en tubos de ensaye un ml de la muestra y agregarle 30 L de
antgeno, mezclarlo e incubar en estufa de laboratorio a 37 C durante 30-60
minutos, la lectura se har segn el cuadro anexo en resultados:
4.3 RIVANOL.- (Anderson, 1964). El rivanol (lactato 2-etoxi-6,9 diamino-

acridina) es un colorante derivado de la acridina y tiene la particularidad de
precipitar a protenas del suero de los bovinos. Mediante el uso de
cantidades iguales de suero y una solucin de rivanol al 1%, queda un
precipitado y un sobrenadante despus de 30 minutos de incubacin y
centrifugacin a 2000 rpm por 10 minutos en este sobrenadante se detectan
exclusivamente las IgG. Adems debe emplearse un antgeno
especialmente elaborado para esta prueba con un pH de 5.8-6.2, pues debe
compensarse el efecto de la dilucin de los anticuerpos.
Se requiere una placa de vidrio cuadriculada, pipetas de Bang o de
0.02 ml, en donde se colocarn formando una columna, diversas cantidades
de la muestra (0.08, 0.04, 0.02, 0.01 y 0.005 ml que significarn ttulos de
1.25, 1:50, 1:100, 1.200 y 1.400 respectivamente), luego se les aadirn 30
L de antgeno a cada cuadro y se agitarn con un palillo de dientes, desde
la mayor hasta la menor dilucin del suero sanguneo, aglutinacin igual o
mayor que el ttulo de 1:50 se considera positivo.
Para la elaboracin de cada uno de los reactivos se utiliza la misma

semilla de B. abortus cepa 1119-3 que Cepanzoo proporciona al laboratorio
productor. estas bacterias se cultivan en cubas de fermentacin en PBS,
peptona y dextrosa, adicionado un perfecto aireado para obtener un
adecuado incremento celular; manteniendo el control de calidad en cuanto
se refiere a la:
Disociacin: mantenimiento de la cepa en su fase lisa
Pureza: contener solamente B. abortus
Esterilidad: que no haya contaminacin con hongos, virus y otras
bacterias.
Las diferencias entre los reactivos adems de la coloracin, estriba en

la concentracin celular bacteriana:
Placa 10-12%
Tubo 4.5%
Leche 4.0%
Tarjeta 8.0%

Rivanol 4.0%
RELACIONES ANTIGENICAS ENTRE BRUCELAS

BACTERIA SUERO MONOESPECIFICO AGLUTINACION
Br. abortus anti-abortus si
Br. abortus anti-melitensis no
Br. melitensis anti-melitensis si
Br. melitensis anti- abortus no
Br. suis anti-abortus si
Br. suis anti.suis si
Br. suis anti-melitensis no
Tambin se detectado reactividad cruzada entre bacterias del gnero

Brucella y Pasteurella, Campylobacter y Yersinia.
CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFIA
AGUIRRE, M. R. A. Brucelosis bovina, diagnstico comparativo por medio

de las pruebas serolgicas de fijacin de superficie, aglutinacin en placa y
en tubo. Tesis recepcional. FMVZ-UV. 1969.
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TIZARD. Inmunologa Veterinaria. 1998

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO CLINICO VETERINARIO
Elaborado por:
MVZ Elsa Ariadna Villanueva Jimnez

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