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Determinacion de Riboflavina Por Fluorometria
Determinacion de Riboflavina Por Fluorometria
5QV1, Seccin 3
Prctica: Determinacin de Riboflavina por fluorometria
Fundamento:
La espectrometra de fluorescencia (tambin llamada fluorometra o
espectrofluorimetra) es un tipo de espectroscopia electromagntica que analiza la
fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz
ultravioleta, que excita los electrones de las molculas de ciertos compuestos y
provoca que emitan luz de una menor energa, generalmente luz visible (aunque
no necesariamente). Una tcnica complementaria es la espectrometra de
absorcin.
Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluormetros o fluormetros.
Su fundamento es la fluorescencia que es la emisin de radiacin por electrones
excitados. En el fenmeno de fluorescencia, una molcula absorbe radiacin
electromagntica y debido a ello los electrones pasan de un estado basal a otra
fase de excitacin.
Objetivos:
Determinar el efecto del pH sobre el disolvente
Elegir el mejor disolvente para la riboflavina
Resultados:
0 5 4.98 5 4.98
1 5.91 5.08 5.65 4.99
2 6.74 4.96 6.27 5
3 7.53 5.26 6.88 5.01
4 8.27 5.44 7.4 5.02
5 8.83 5.13 8.01 5.04
10 11.86 5.74 10.16 5.05
50 17.52 6.63 14.09 5.1
pH 5.5 1 4 13
Curva Tipo de los diferentes disolventes
10
9 y = 0.772x + 5.1167
R = 0.9947
Intensidad de Emisin
8
y = 0.5974x + 5.0414
R = 0.999
7
6 y = 0.0609x + 4.9895
R = 0.3902
5
y = 0.0114x + 4.9781
R = 0.9796
4
0 1 2 3 4 5 6
Concentracin (ppm)
Figura 1. Curva tipo de emisin de riboflavina donde se incluyen los 4 diferentes disolventes contra la
concentracin de 0 a 5 ppm.
18
16
Intensidad de Emisin
14
12
10
4
0 10 20 30 40 50 60
concentracin (ppm)
Figura 2. Curva tipo de emisin de riboflavina donde se incluyen los 4 diferentes disolventes contra la
concentracin de 0 a 50 ppm.
Discusin
La fluorescencia es un proceso de emisin en el cual las molculas son excitadas por la
absorcin de radiacin electromagntica. Las especies excitadas se relajan al estado
fundamental, liberando su exceso de energa en forma de fotones.
En la figura 1 se observa la intensidad de emisin de la riboflavina con diferentes
disolventes. La riboflavina posee un grupo aromtico, por lo que la estructura de la
molcula se ver afectada con el pH, siendo el pH alcalino el que afecta ms a la
estructura y lo podemos observar en la figura 1, donde el valor de la pendiente para recta
para NaOH es la ms baja, esto nos indica que es menos exacto. El agua presenta el
valor ms alto de m, nos indica que es el mejor disolvente y que es ms exacto.
En la figura 2 se graficaron todas las concentraciones de riboflavina (0-50 ppm). A
concentraciones altas la energa emitida es absorbida por otras molecular por eso se
observa ese comportamiento en la diferentes rectas.
Conclusiones:
El pH cido y fuerte no es buen disolvente para la riboflavina
El mejor disolvente es el agua
Preguntas:
1. Por qu se deben conocer las longitudes de onda de mxima exitacin y
de mxima emisin?
Debido a la diferente configuracin electrnica de los fluorocromos cada
uno presenta un espectro de excitacin y de emisin caracterstico y nico.
Los fabricantes dan el pico de mxima excitacin y el pico de mxima
emisin o bien los espectros de excitacin y emisin.