Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Práctica N°15 “Reacciones enzimáticas de Óxido-Reducción. Parte.2. Obtención de
Succinica Deshidrogenasa (SDH) y Citocromo C Oxidasa”
González Olvera Karla Sofia, Serrato Conde Ruben Omar
Grupo: 3IM2
INTRODUCCIÓN
La succinato deshidrogenasa cataliza la
deshidrogenación estereoespecífica de
succinato en fumarato. Esta enzima es inhibida
fuertemente por malato, un análogo estructural
del succinato y un ejemplo de un inhibidor
competitivo. La deshidrogenación del
succinato produce 𝐹𝐴𝐷𝐻2, que debe
reoxidarse antes que la succinato
deshidrogenasa pueda emprender otro ciclo
catalítico. La reoxidación de 𝐹𝐴𝐷𝐻2, se
produce cuando sus electrones pasan a la
cadena transportadora de electrones
mitocondrial.
La enzima citocromo c oxidasa o complejo IV
es el eslabón final de la cadena transportadora
− oxidorreductasa (enzima) dependiente
de 𝑒 , esta se encuentra en la membrana
interna mitocondrial. Recibe los electrones del
citocromo c y transporta los electrones con
ayuda de los 𝑐𝑖𝑡 𝑎1 𝑦 𝑐𝑖𝑡 𝑎3 hasta llegar al
oxígeno (aceptor electrónico final), el cual se
reduce formando agua.. El núcleo del
complejo IV se compone de sus tres
subunidades mayores y más hidrófobas,
I,II,III, que están codificadas por el DNA
mitocondrial (las subunidades remanentes
están codificadas en el núcleo y deben
transportarse hacia el interior de las
mitocondrias).
OBJETIVOS
● Conocer el uso y funcionamiento de la
succinato deshidrogenasa en una
reacción redox.
● Conocer el uso y funcionamiento del
Citocromo C oxidasa en una reacción
redox
● Determinar cualitativamente la
actividad de las enzimas:
Deshidrogenasa succínica y citocromo
c oxidasa, las cuales participan en
reacciones redox en el metabolismo
celular
● Discutir la importancia de los
cofactores y el efecto de inhibidroes.
RESULTADOS (Anexo)
DISCUSIONES
Succinato deshidrogenasa
● Succinato de Na 0.1 M: Este reactivo
será el sustrato de la reacción.
● SDH-FAD: Será el grupo prostético
(cofactor), ya que el SDH es una
del FAD.
● Azul de metileno: Indicador de la
reacción redox
● Aceite: Ayuda a evitar la reoxidación
del azul de metileno con el oxígeno
del ambiente (tapón).
● Malonato de Na al 0.01 M: Inhibidor
competitivo de la reacción de la
succinato deshidrogenasa y bloquea la
transformación del succinato a
fumarato.
Tubo 01
Al minuto cero no se observa cambio alguno
en el tubo de reacción. A los dos minutos
podemos observar una ligera decoloración en
el tubo de reacción. En el minuto cinco se
observa una decoloración casi total. El
resultado que se obtuvo era el que se esperaba,
ya que el sistema estaba completo, por ende se
sabía que el tubo tendría una decoloración, lo
que nos indica que se sí se llevó a cabo la
reacción, en donde el FAD, pasa de
𝐹𝐴𝐷 → 𝐹𝐴𝐷𝐻2(hay una transferencia de
electrones del succinato al azul de metileno).
Tubo 02 (Testigo negativo)
Ya que el tubo no posee un sistema completo
porque le falta la enzima y el grupo prostético
(SDH-FAD),se esperaba que no hubiera
reacción, ya que no habría una transferencia de
electrones del succinato al azul de metileno
porque no hay enzima. Así fue. no se observó
reacción en ninguno de los distinto tiempos,
por lo que el tubo permanecío de color azul,
color proporcionado por el indicador azul de
metileno.
Tubo 03
El sistema en este tubo también está
incompleto porque falta el sustrato que es el
succinato de Na al 0.1 M, por lo que se espera
una reacción parcial ya que al sí contener la
enzima que es nuestra muestra, está puede
llegar a tener al succinato pero de manera
endógena, por lo que la reacción si se llevaría
acabo pero está sería poco notoria por la poca
cantidad de sustrato contenido en la muestra,
por ello se dice que el tubo presenta una
reacción parcial. La poca decoloración del
tubo se observa hasta los 5 min de reacción.
Tubo 04
Tenemos un sistema completo, mas aparte la
presencia de un inhibidor como lo es el
Malonato de Na al 0.01 M, por ende en esté
tubo no se lleva a cabo la reacción, ya que el
Malonato al ser un inhibidor competitivo y
estar presente en gran cantidad en
comparación con el Succinato de Na al 0.1 M
en este tubo, provoca que la reacción no se
lleve a cabo. Dado a que el inhibidor logra
ocupar la gran mayoría de los sitios activos de
la enzima empidiendo que el sustrato se una a
la misma para que la reacción ocurra, nuestro
tubo no lográ tener un cambio de color en
ninguno de los distintos tiempos de reacción,
permanenciendo con el color adquirido por el
indicador azul de metileno.
Tubo 05
Tenemos un sistema completo, mas aparte la
presencia de un inhibidor competitivo como lo
es el Malonato de Na al 0.01 M, por ende en
esté tubo no se lleva a cabo la reacción, sin
embargo en este tubo se tiene la misma
proporción de sustrato que de inhibidor, pero
este al ser competitivo no deja que el sustrato
pueda llevar a cabo la reacción por lo que el
tubo permanece de color azul en los distintos
tiempos de reacción.
Tubo 06
Tenemos un sistema completo, mas aparte la
presencia de un inhibidor competitivo como lo
es el Malonato de Na al 0.01 M, pero esté se
encuentra en menor proporción en
comparación con el sustrato, por lo que la
reacción si se lleva a cabo, observándose en un
cambio de coloración del tubo en el minuto 5
de reacción.
Tubo 07
Tenemos un sistema completo, mas aparte la
presencia de un inhibidor competitivo como lo
es el Malonato de Na al 0.01 M, pero esté se
encuentra en mucho menor proporción en
comparación con el sustrato, por lo que la
reacción si se lleva a cabo,esto sucede porque
el inhibidor al encontrarse en baja
concentración no puede encontrar sitios
activos libres a los cuales unirse dado que el
sustrato ocupa la mayor parte de los mismos y
esto se puede observar en un cambio de
coloración del tubo hasta el minuto 5 de la
reacción.
Citocromo C oxidasa
● KCN al 0.5%: Este compuesto tiene al
ion cianuro el cual es el inhibidor del
citocromo 𝑎3, esto ocasiona que los
demás citocromos se inhiban al
interrumpirse el flujo de electrones.
● P-fenilendiamina al 1%: Es un
reactivo que tiene el propósito de
ceder electrones al citocromo c, y este
transfiere los electrones al cit a, cit a1
y por último al cit a3, para después
reaccionar con el Oxígeno y formar
agua. También nos sirve para la
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Succinica Deshidrogenasa (SDH) y Citocromo C Oxidasa”
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reacción de identificación ya que al Tubo 04: Solo se adiciona la preparación

ceder los electrones al cit c, esta se
oxida a P-Fenilendiimina, la cual
reacciona con el α-naftol para obtener
el color azul (azul de indofenol).
● α-naftol al 0.15%: Reactivo que nos
sirve para identificar que la reacción
del citocromo c con la
P-Fenilendiamina si se llevó a cabo, el
α-naftol al reaccionar con la
P-Fenilendiimina originan un
compuesto denominado azul de
indofenol, el cual es de color azul
intenso.
● SDH−CIT: Es la preparación que
contiene al complejo citocromo c
oxidasa
Tubo 01: No contiene el KCN ni el α-naftol,
como no está este último, no se puede formar
el azul de indofenol, pero el citocromo c si va
a oxidar la diamina a diimina, y a medida que
aumenta la concentración de la
P-fenilendiimina el color se vuelve más
oscuro, esto ocurre por que se originan
polímeros de P-fenilendiimina que pueden
presentar diferentes colores, por eso se observa
que pasa de un color rojo a un color negro.
Tubo 02: : En este tubo solo se adiciono la
P-fenilendiamina, entonces como no está
presente el citocromo c, se lleva a cabo una
oxidación no enzimática , que es más lenta,
esta oxidación se lleva a cabo gracias al
oxígeno que está en el aire, se produce un
color morado, no se puede producir el azul de
indofenol porque no hay presencia de ɑ-naftol.
Tubo 03: Se inhibe la reacción enzimática con
el cianuro, se inhibe el cit 𝑎3 pero esto
ocasiona que los demás citocromos detengan
su actividad también, esto impide la formación
de la diimina y por eso se observa el color café
claro. No contiene el α-naftol, pero no afecta
ya que no se forma la diimina.
mitocondrial, por eso solo se observa el color
de la preparación: anaranjado claro.
Tubo 05: En este tubo se tiene el sistema de
reacción completo, el cit c acepta los
electrones de la P-fenilendiamina, se forma la
P-fenilendiimina, esta reacciona con el
α-naftol, por lo que si se forma el azul de
indofenol y se observa el color azul oscuro.
Tubo 06: En este caso no se adicionaron los
citocromos, pero si el α-naftol y la
P-fenilendiamina, entonces la reacción para
formar el azul de indofenol es mucho más
lenta, ya que es una reacción no enzimática (la
P-fenilendiamina se oxida con el 𝑂2 que está
en el aire). No contiene el KCN pero esto no
afecta en nada al no estar presente el complejo,
se observa un color gris.
Tubo 07: Se tiene el sistema completo de
reacción junto con el inhibidor, la reacción del
cit c no se lleva a cabo, inhibe la formación del
azul de indofenol y el color observado es café.
Tubo 08:Este tubo es el control no contiene al
citocromo, por lo que el cianuro no tiene a
quien inhibir, se presenta de nuevo el caso del
tubo 6, ocurre una reacción no enzimática, la
P-fenilendiamina, se oxida con el 𝑂2 del aire,
pero esta reacción es muy lenta, por lo tanto,
no se nota tanto la presencia del azul de
indofenol, se observa un color gris.
CONCLUSIONES
● El 𝐹𝐴𝐷𝐻2 reduce al azul de metileno
causando una decoloración por parte
del mismo
● La SDH es más abundante en células
cardiacas.
● El malonato de sodio es un inhibidor
competitivo en la reacción enzimática
de la succinato deshidrogenasa
● El efecto del inhibidor es
indirectamente proporcional a la
concentración de sustrato.
 ● El KCN es un inhibidor usado para la
reacción de Citocromo C Oxidasa
● La P-Fenilendiimina reacciona con el
α-naftol para obtener el color azul
indofenol indicador de la reacción del
Citocromo C.
● El citocromo c oxidasa, es un
complejo enzimático perteneciente al
grupo de las oxidoreductasas.
REFERENCIAS
● Voet. Donald. Fundamentos de
bioquímica: La vida a nivel molecular.
𝑎
2 Ed. Médica Panamericana. Buenos
aires. pp 530, 564. Tomado de:
Fundamentos De Bioquimica/
Fundamental of Biochemistry -
Donald Voet, Judith G. Voet, Charlotte
W. Pratt - Google Libros. Consultado
(18/11/2021)
● Los complejos multienzimáticos que
componen la cadena respiratoria. (s.
f.). bibliotecavirtual.unl.edu.ar.
Recuperado 13 de noviembre de 2021,
de
https://bibliotecavirtual.unl.edu.ar:844
3/bitstream/handle/11185/109/parte2.p
df?sequence=2&isAllowed=y
 Anexo RESULTADOS
Obtención de la Succinato Deshidrogenasa

Tabla 1. Contenido de cada tubo

Tubo 01 02 03 04 05 06 07

Succinato de Na ✅ ✅ ❌ ✅ ✅ ✅ ✅
(0.1 M) ml

SDH-FAD ✅ ❌ ✅ ✅ ✅ ✅ ✅
Azul de metileno
(0.002 M) ml
✅ ✅ ✅ ✅ ✅ ✅ ✅
𝑀𝑎𝑙𝑜𝑛𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑁𝑎 (0.01 𝑀)
𝑆𝑢𝑐𝑐𝑖𝑛𝑎𝑡𝑜 𝑑𝑒 𝑁𝑎 (0.01 𝑀)
❌ ❌ ❌ 2 1 0.5 0.25
1 1 1 1

Aceite ml ✅ ✅ ✅ ✅ ✅ ✅
Obtención de Citocromo C Oxidasa

Tabla 2. Contenido de cada tubo

Tubo 01 02 03 04 05 06 07 08

KCN 0.05% ml ❌ ❌ ✅ ❌ ❌ ❌ ✅ ✅
α − 𝑛𝑎𝑓𝑡𝑜𝑙 0. 15%
ml
❌ ❌ ❌ ❌ ✅ ✅ ✅ ✅
Citocromos ml ✅ ❌ ✅ ✅ ✅ ❌ ✅ ❌
p-Fenilendiamina ✅ ✅ ✅ ❌ ✅ ✅ ✅ ✅