Escuela Militar de Ingeniera Mariscal Sucre. Unidad Acadmica La Paz.

Departamento de Ingeniera Ambiental. Carrera de Ingeniera Ambiental. Vol. 1, No. 1

Ctedra de Microbiologa Ambiental. Trabajos de Investigacin. Marzo. - Junio. 2012.
Derechos Reservados 2012
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DETERMINACION DE LA MICROBIOTA INTESTINAL DE LA LOMBRIZ EISENIA SPP CON

CAPACIDAD DEGRADATIVA DE SUSTRATO ORGANICO *

DETEREMINATION OF THE INTESTINAL MICROBIOTA OF THE EARTHWORM EISINIA SPP

CAPACITY WITH ORGANIC SUBSTRATE DEGRADATIVE

Zorrilla V. 1, Bascope G. 1, , Cala L. 1, , *Rojas E. 1, , Rolhaiser G. 1,

1
Estudiante regular de la Escuela Militar De Ingeniera, campus alto Irpav i
Direccin de contacto: Av . Mecapaca # 6739 ev ely n-anahi-1809@hotmail.com

RESUMEN

En la zona sur del departamento de La Paz - Bolivia ubicado en el distrito de Alto Irpavi-Koani, carece de recursos
naturales pero si es un medio de generacin de residuos solidos por parte de los estudiantes de la Escuela Militar de
Ingeniera y la poblacin en general, como producto de la actividad humana y comercial entre otros. Se ha tomado 8
lombrices de estas 2 adultos y 6 juveniles procedentes de las composteras del invernadero del instituto de
investigaciones de ciencia y tecnologa cuya alimentacin esta basada en estircol de oveja (Ovines aries). Las lombrices
despus de un lavado para su desinfeccin externa se las peso y procedi a la molienda en un mortero hasta obtener una
papilla, de esta se tomo 0.5 gr y se disolvi en 10 ml de agua destilada estril. De este licor se tomo 1 cm3 y se sembr en
placa, posteriormente se incubaron las muestras a 35*C por 24 h hacindose la lectura e identificacin posterior, las
bacterias encontradas fueron Citrobacter spp y Klebsiella, por lo tanto nuestro trabajo llega a identificar este tipo de
microrganismos que son componentes fundamentales del tubo digestivo de la lombriz roja californiana.
Palabras clave: Eisenia spp, microbiota intestinal, materia orgnica medios de cultiv o, Citrobacter spp.

ABSTRACT

In the southern department of La Paz - Bolivia located in the district of high-Koani Irpavi, no natural resources but is a
means of solid w aste generation by the students of the Military School of Engineering and the population general, as a
result of human activity and trade among others. It has taken 8 w orms of these 2 adults and 6 juveniles from the
composting of greenhouse research institute of science and technology w hose diet is based on sheep manure (Ovines
aries). Earthw orms after washing for external disinfection and proceeded to the w eight grinding in a mortar until obtaining
a slurry, this w as taken and 0.5 g w as dissolved in 10 ml of sterile distilled w ater. This liquor is 1 cm3 volume and seeded
on a plate, then incubated the samples at 35 * C for 24 h reading and making later identification, bacteria w ere Citrobacter
spp and Klebsiella found so our w ork comes to identify such microorganisms that are essential components of the
digestive tract of the Californian red w orm.

Keywords: Eisenia spp, intestinal microbiota, organic matter, culture media, Citrobacter spp.

Introduccin
La lombriz de tierra es un organismo, habitante
natural del suelo que contribuye en el proceso de
descomposicin de la materia orgnica.
Todas las operaciones relacionadas con la cra y
manejo de lombrices, se le llama lombricultura, que
tambin se conoce como vermicultura y
vermicompost al material resultante de la des-
composicin por este anlido.
La tcnica de lombricultura mejor (1930-1936), en
los ngeles, Estados Unidos, por el Dr. Tomas
Barret quien logr domesticar lombrices; despus
de observarlos por 10 aos de estudio public el
libro Harnessing the earth worm (utilizacin de la
lombriz) (Ferruzi, 1987; Hernndez, 1991)
El cultivo de las lombrices naci y se desarroll en
Norteamrica, al comenzar a criarlas en un
composteras. Hugn Carter, (1947), 25 aos
despus, tena la capacidad de suministrar a las
tiendas de caza y pesca 15 millones de lombrices al
ao; de esta forma, la lombricultura se fue
difundiendo en Europa, Asia y Amrica. Righi,
1979, la estudi en Argentina y Brasil; en 1984-
1989, Colombia mencionaba el uso de las
lombrices de tierra y en 1991, introdujo el hbrido
Eisenia foetida conocida como lombriz roja
californiana (Lastra, 1995).
Las lombrices constituyen un recurso potencial de
gran inters en la sostenibilidad de la agricultura, ya
que participan activamente en la regulacin de las
propiedades fsicas del suelo, la dinmica de la
materia orgnica del entorno y el crecimiento de las
plantas (Lavalle et al., 1999), junto a otros
organismos macro descomponedores forman parte
de la fauna del suelo. Esto se debe a su capacidad
de descomponer la materia orgnica, reciclar
nutrientes y la formacin de suelo (Raty y Huhta,
2004), actividad que puede ser afectada en

1
Rojas Candia Evelyn et al.
_____________________________________________________________________________________________________________________________ ________________________
presencia de elementos txicos en el suelo
(Spurgeon et al., 1994).
Existen varias especies de lombrices utilizadas con
tal fin, entre ellas Allopora caliginosa (lombriz de
campo, que es til para la agricultura pero se
reproduce escasamente), Ocasium lacteum
(lombriz parda, que se desarrolla en suelos
arenosos y hmedos), Dendrobaena alpina (lombriz
del lodo, la cual vive asociada a Eisenia foetida),
Lombricus terrestris (lombriz de tierra, que cava
galeras muy profundas, prefiere regiones fras y se
reproduce poco), Lumbricus rubellus (lombriz de los
residuos orgnicos, vive tanto en la superficie como
en el interior del suelo) y Eisenia foetida (lombriz
del estircol o roja californiana, de gran actividad
reproductiva) (Compagnoni 1984).
La lombriz roja (Eisenia spp.) forma parte de las
herramientas biotecnolgicas actuales para el
reciclaje de desechos orgnicos, obtenindose
como beneficio el vermicompost (abono orgnico) y
carne, fuente ptima para la alimentacin animal
(Ferruzzi, 1987). Este anlido caracterizado por ser
hermafrodita puede llegar a producir grandes
cantidades de lombrices por ao, el abono producto
de sus deyecciones contiene una gran riqueza
bacteriana (21012 bacterias g-1), desarrollando su
ciclo biolgico en pequeos espacios
(50103 cm3 de sustrato), se adapta a un amplio
rango de condiciones edafoclimticas (Flores y
Alvira, 1988).
La lombriz roja (Eisenia ssp.) se desarrolla a
temperatura de 30C (Edwards y Bater, 1992;
Reinecke et al 1992); y en diversos restos
agrcolas, que permite utilizarla en condiciones
climticas clidas, para el reciclaje de estircoles y
restos de cosecha para la produccin de humus de
lombriz y protena animal con la subsiguiente
disminucin de la contaminacin.
Los elementos del estircol (nitrgeno y fsforo), su
materia orgnica y otros pueden contribuir a la
contaminacin del agua y suelo que pueden ser
peligrosas para la salud del humano, animales y
plantas (Andriulo et al., 2003).
Los microrganismos que participan en la fijacin del
nitrgeno son bacterias Gram negativas de vida
libre en el suelo, de gneros como Azotobacter,
Klebsiella o genero Rhizobium que se encuentran
en las races. Y Las bacterias que participan
habitualmente en el ciclo del fosforo pertenecen
habitualmente, entre otros, a los gneros
Pseudomonas, Aeromonas, Escherichia, Bacillus,
etc. Fueron identificadas trece especies de
bacterias: Aeromonas hydrophila/caviae, A.
salmonicida ssp salmonicida, Burk holderia cepacia,
Ochrobactrum anthropi, Photobacterium damselae,
Pseudomonas aeruginosa, P. fluorescens, P.
putida, P. luteola, Psychrobacter phenylpyruvicus,
Shewanella putrefaciens, Sphingomonas
2
Microbiota intestinal de la Eisenia spp
paucimobilis y Vibrio parahaemolyticus. (Vega, H
2011).
Dada la poblacin y diversidad de microorganismos
en los suelos agrcolas, no sera una sorpresa que
los microorganismos ejecuten una variedad de
funciones, algunas de extrema importancia para la
salud del suelo y las plantas. Estas actividades son
extremadamente importantes para el normal
funcionamiento de las plantas. Sin embargo, los
microorganismos pueden ser afectados de manera
drstica por los ambientes qumicos, fsicos y
biolgicos; por factores como el pH, la fertilidad, la
disponibilidad y el contenido de materia orgnica, el
contenido de residuos, la temperatura, la porosidad
del suelo, la variedad de cultivos, etc.
El vermicompost, es un proceso de bio-oxidacin y
estabilizacin de la materia orgnica, mediado por
la accin metablica combinada de lombrices y
microorganismos, es el resultado de la
biotransformacin de materia orgnica (de origen
animal y vegetal) a travs del tubo digestivo de la
lombriz, obteniendo un fertilizante orgnico por
excelencia la cual se utiliza como abono natural, y
enmienda orgnica. Este producto es conocido con
muchos nombres comerciales, como: casting,
humus de lombriz, lombricomposta, lombrihumus,
lombricompuesto y otros, dependiendo de la casa
que lo produzca y lugar. (Torres 1996)
El objetivo del presente estudio es determinar la
microbiota intestinal de la lombriz roja (Eisenia spp)
que contribuye en la dependencia degradativa o
vermicompostaje de sustrato orgnico.
Materiales y mtodos
Localizacin del lugar de estudio. La
investigacin se realiz en el Campus universitario
de la Escuela Militar de Ingeniera, ubicado en el
distrito de Alto-Irpavi del departamento de La Paz-
Bolivia, situada a una altura de 1 840 msnm, a 16
2030 de latitud sur y 67 5030.
La zona presenta una precipitacin de 1.538 mm,
una temperatura promedio anual de 19 C, una
mxima de 22 C, siendo la mnima promedio de
13 C, con una humedad relativa de 15%.
Las condiciones del vivero de donde fueron
extradas las lombrices, esta sometido a
temperaturas de 25 C con una humedad del 65%.
Sustrato de suelo tratado con tierra negra, turba y
estircol de oveja (Ovines aries)
Material biolgico. Se utilizaron 8 lombrices
californianas (Eisenia spp.), 6 juveniles y 2 adultas,
que fueron proporcionadas de las composteras del
vivero del instituto de investigaciones de la Escuela
Militar de Ingeniera.
Rojas Candia Evelyn et al. Microbiota intestinal de la Eisenia spp
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Los especmenes en estudio fueron lavados con Tabla No. 2 Lectura de colonias en agar nutritivo en
agua destilada y desinfectado con alcohol al 90%. la siembra primaria, mayo 2012
Procediendo a la molienda hasta obtener una
papilla homognea colora chocolatada, Se tomo de No
No SUPERFICIE ASPECTO OLOR COLOR BORDE TAMAO
esta papilla homognea una muestra de 0,5 gr UFC

disuelto en 10 mL de agua destilada estril, se ha

Hmeda Aromtico Liso
1 6 Umbilicada Blanco Mediano
homogenizado en un tubo de ensayo durante 5 butirosa dulzn
Blanco
irregular

minutos. De este lcor homogenizado se tomo 1 cm 3 2 2 Plana Hmedo

Aromtico
dulzn
amarillo
lechoso
irregular Pequeo

y con asa bacteriolgica punta redonda se sembr

en medios de cultivo agar sangre y agar nutritivo, 3 3 Convexa Polvorienta Blanco
Liso
irregular
Mediano

incubndose a 35 C por el lapso de 24 h con fines

de hacer la evaluacin primaria o anlisis inicial de
4 2 Convexa Amarillo Liso
los microorganismos presentes.

Aislamiento de bacterias. El mtodo utilizado en 5 620 Cncava Blanco

Liso
irregular
nuestro trabajo, para la obtencin de cultivo puro,
fue siembra en estras en placas de Petri. Fuente; propia de los autores en el laboratorio de microbiologa de la
Escuela Militar de Ingeniera
Mediante un asa bacteriolgica de punta redonda
previamente esterilizada en la llama de un mechero
y enfriada en el agar, se deposita en un medio
slido, una pequea cantidad de la muestra y se Figura 1. Muestra el tipo de colonias frente a los
resultados obtenidos. Se observa las colonias en el
distribuye extendindola sobre ella. De este modo,
medio de cultivo agar nutritivo.
las bacterias se van distribuyendo sobre la
superficie del agar y separndose unas de otras.
Los microorganismos se adhieren a la superficie del
medio y se multiplican formando colonias. Cada
una de estas colonias se ha originado a partir de la
multiplicacin de una sola clula. Al trasladar una
de estas colonias aislada a una nueva placa
(repique), se obtendr un cultivo puro en el que
todas las colonias presentarn las mismas
caractersticas.

Identificacin de colonias. La identificacin se

realizo mediante pruebas bioqumicas y agares
determinados, como son el nutritivo y el sangre. En
las colonias tpicas se bas en los criterios y la
Fuente: G. Bascope, 2012
tincin de Gram (Trigoso et al 1992).
Posteriormente se procedi a identificar las
bacterias usando los medios TSI, caldo Urea y
Citrato Simmons. Figura 2. Muestra el tipo de colonias frente a los
Finalmente el anlisis de los resultados se bas resultados obtenidos. Se observa las colonias en el
segn Jawetz et al., (2008). medio de cultivo agar sangre.

Resultados

Tabla No.1 Peso (g) y tamao (cm) de las lombrices

en estudio, mayo 2012

LOMBRICES
LOMBRICES JUVENILES
ADULTAS

1 2 3 4 5 1 2 3

0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.2 0.1 0.2 0.2
PESO 3 2 6 2 4 3 0 7 3 0

TAMAO 5 5.3 6.2 4.5 5 5.2 7.6 6.5 8 7.4

Fuente: G. Bascope, 2012
Fuente; propia de los autores en el laboratorio de microbiologa de la
Escuela Militar de Ingeniera

3
Rojas Candia Evelyn et al. Microbiota intestinal de la Eisenia spp
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Tincin de Gram presentes en el tracto digestivo de la lombriz
Se han observado bacilos Gram negativos Eisenia spp.
agrupados en campo cubierto. Segn Mitchel, 1980, investigo el papel de la
Eisenia sp, en la descomposicin del lodo residual y
Tabla No. 3 Pruebas bioqumicas agar nutritivo se obtuvo como resultado un humus con bacterias
aerobias y anaerobias (Aerobiosmesofilos
MOTILIDAD GAS C OLUMNA ESTRIA H2S UREA celuloliticos, Aerobios termfilos celuloliticos,
TSI - - + + + + Anaerobios mesofilos celuloliticos, Anaerobios
termfilos celuloliticos, Mesofilos proteolticos,
CS - + - - - Termofilos proteolticos, Mesofilos amonificantes,
Termofilos amonificantes, Mesofilos nitrificantes,
Fuente; propia de los autores en el laboratorio de microbiologa de la Mesofilos desnitrificantes, Termofilos
Escuela Militar de Ingeniera
desnitrificantes, Mesofilo sulfato reductores y
Mesofilos sulfoxidantes) abundantes, y las bacterias
Bacteria identificada: Citrobacter spp entricas (Escherichia coli, Salmonella, Yersinia
Shigella, Proteus y Klebsiella), no hubo dominantes
Tabla No. 4 Pruebas bioqumicas agar sangre
por lo que hubo un proceso de descontaminacin
MOTILIDAD GAS C OLUMNA ESTRIA H2S UREA
fecal por parte de la lombriz.
Segn Hendrix et al., 1990, las bacterias fijadoras
TSI - - + + + +
de nitrgeno de vida libre son microorganismos
CS - - + - + + capaces de reducir el nitrgeno atmosfrico (N2)
incorporndolo al ambiente del suelo. Dentro de
Fuente; propia de los autores en el laboratorio de microbiologa de la
Escuela Militar de Ingeniera
este grupo se encuentran las bacterias de los
gneros Azotobacter, Bacillus, Clostridium,
Bacteria identificada: Klebsiella Citrobacter, Klebsiella, etc.

Figura 3. Representa la observacin al microscopio
en 40x con objetivo de 100x.
Fuente: E. Rojas, 2012
Discusin
El presente trabajo pretende aportar a la
descripcin de microrganismos presentes en el tubo
digestivo de la Eisenia spp, en nuestro medio no
existe informacin al respecto sin embargo en
anlisis preliminares se encontr Citrobacter spp y
Klebsiella.
Que segn (Jawetz et al 2008) establece que los
criterios de evaluacin en sus pruebas bioqumicas
indican que este es el microrganismo presente en
los artculos preliminares.
Otro autor (Bashan et al 2004) (Young et al 2001)
han reportado Citrobacter sp y adems otro grupo
de bacteria Klebsiella como microrganismos tpicos
4
Conclusin
Se determino la microbiota intestinal de la lombriz
Eisenia spp, encontrando la presencia de 2 gneros
que son Citrobacter spp y Klebsiella, tpicos
agentes microbianos en procesos como la
nitrificacin del suelo y de acuerdo a nuestros
resultados se confirman con el de otros autores, las
pruebas realizadas para este anlisis son bsicas
como la tincin de Gram, TSI y Citrato Simmons. La
microbiota intestinal de la lombriz Eisenia spp
muestra diversidad de acuerdo a la alimentacin de
la misma.
La importancia de la diversidad microbiana est an
lejos de la comprensin del papel de los
microorganismos en el tracto digestivo de las
lombrices de tierra y en el suelo en el
funcionamiento de los ecosistemas, particularmente
en aquellos que no han crecido por laboratorio y
para aquellos cuyas metablicas capacidades son
totalmente desconocidos. Ellos son la clave en los
procesos importantes del suelo, tales como la
desnitrificacin, nitrificacin, fijacin de nitrgeno, la
oxidacin del metano, la produccin de la hormona
del crecimiento, solubilizadores de fosforo y el
control de los patgenos microbianos.
Recomendaciones y sugerencias
Dada la importancia de este trabajo en la
determinacin de la microbiota intestinal de la
lombriz Eisenia spp., encontrando Citrobacter spp y
Rojas Candia Evelyn et al.
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Klebsiella se aprecia como un aporte al campo
ambiental, ms especficamente a la disminucin
de la contaminacin debido a la acumulacin de
desechos orgnicos.
La sugerencia es realizar estudios en el campo
microbiolgico ligado al ambiental con mayor
puntualidad, a fin de saber la diversidad en tracto
digestivo de la lombriz Eisenia spp, dada la
simbiosis que resulta de hongo, bacteria y lombriz,
siendo posible la degradacin materia orgnica.
Tambin es importante buscar alternativas en su
desarrollo para generar un sistema de
vermicompostaje o lombricultura en los predios de
la Escuela Militar de Ingeniera.
Agradecimientos
Al Dr. Manuel Loza Murgua, por ser una direccin
en el presente estudio, y fomentar la investigacin
en tan importante rea de trabajo. A la Lic. Lorena
Rey encargada del laboratorio. A mis compaeras
de grupo por el aporte que cada una puso para
realizar este trabajo y a la Escuela Militar de
Ingeniera por facilitarnos de instalaciones, equipo y
material para llevar a cabo la investigacin.
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Tesis de Licenciatura. Universidad Catlica
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5
Rojas Candia Evelyn et al. Microbiota intestinal de la Eisenia spp
_____________________________________________________________________________________________________________________________ ________________________

Anexos

Material biolgico

Fuente: G. Bascpe, 2012

Fuente: G. Bascope, 2012

Fuente: G. Bascope, 2012

Fuente: G. Bascope, 2012

Fuente: G. Bascope, 2012

Fuente: G. Bacope, 2012

Entregado el 19 de junio de 2012

Fuente: G. Bascope, 2012

Fuente: G.Bascope, 2012