Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Bioseparaciones Tejeda PDF
Bioseparaciones Tejeda PDF
El texto se divide en seis partes. La primera parte constituye una introduccin a los
procesos de bioseparacin. En las siguientes cuatro partes: Recuperacin del Producto,
Concentracin, Puricacin y Acabado; se abordan las principales operaciones de biosepa-
racin siguiendo una secuencia tpica de un bioproceso, tratando con ello de conservar un
enfoque unitario ms que describir procesos particulares. La ltima parte se relaciona con el
Diseo del Bioproceso e integra los aspectos que se revisan en las partes previas.
Aspectos relevantes
Bioseparaciones
Segunda Edicin
ERRNVPHGLFRVRUJ
Datos de catalogacin bibliogrfica
Reservados todos los derechos. Ni la totalidad ni parte de esta publicacin pueden reproducirse, registrarse o transmitirse, por un
sistema de recuperacin de informacin, en ninguna forma ni por ningn medio, sea electrnico, mecnico, fotoqumico, magn-
tico o electroptico, por fotocopia, grabacin o cualquier otro, sin permiso previo por escrito de los coeditores.
El prstamo, alquiler o cualquier otra forma de cesin de uso de este ejemplar requerir tambin la autorizacin de los coeditores
o de sus representantes.
Este libro se public con el apoyo del Programa de Mejoramiento del Profesorado PROMEP/103.5/11/1535
ISBN: 978-607-32-0945-8
ISBN e-book: 978-607-32-0946-5
ISBN e-chapter: 978-607-32-0947-2
ISBN: 978-607-8158-28-7 (UNISON)
ISBN: 978-607-32-0945-8
Contenido
Prefacio XI
I El Proceso de Bioseparacin 1
1 Una Perspectiva de las Bioseparaciones 5
1.1 Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
1.1.1 Productos Biotecnolgicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
1.1.2 Bioprocesos y Bioseparaciones . . . . . . . . . . . . . . . . 6
1.2 Tipos de Bioprocesos y Bioproductos . . . . . . . . . . . . . . . . 7
1.2.1 Propiedades de los Bioproductos . . . . . . . . . . . . . . 8
1.3 Operaciones de Bioseparacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
1.3.1 Esquema RIPP . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
1.3.2 Bioproceso Tpico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
1.3.3 Comportamiento del Bioproceso y Calidad del Producto . 15
1.4 Importancia Econmica de las Bioseparaciones . . . . . . . . . . 20
1.5 Comercializacin del Bioproducto . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
1.5.1 Desarrollo del Bioproceso . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
1.5.2 Diseo Interior . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
1.6 Tendencias en Bioseparaciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
1.7 Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
1.8 Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
1.9 Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.4. Diseo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
2.4.1. Sntesis del Bioproceso . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
2.4.2. Anlisis y Evaluacin del Bioproceso . . . . . . . . . . . . 43
2.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 56
2.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
2.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 62
4. Centrifugacin 111
4.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 111
4.2. Fundamentos de la Centrifugacin . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
4.2.1. Ley de Stokes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
4.2.2. Sedimentacin por Accin de la Gravedad . . . . . . . . . 114
4.2.3. Sedimentacin Centrfuga . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115
4.2.4. Factor G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 119
4.3. Equipo de Centrifugacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 120
4.3.1. Equipos de Sedimentacin Centrfuga . . . . . . . . . . . 120
4.3.2. Equipos de Filtracin Centrfuga . . . . . . . . . . . . . . 126
4.4. Diseo de Equipo de Centrifugacin . . . . . . . . . . . . . . . . 126
4.4.1. Diseo de Centrfugas Tubulares . . . . . . . . . . . . . . 127
4.4.2. Centrfuga de Discos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 135
4.4.3. Escalamiento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 140
4.4.4. Filtracin Centrfuga . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 144
4.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 147
CONTENIDO
7. Adsorcin 275
7.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 275
7.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 276
7.2.1. Tipos de Adsorcin: Interaccin Soluto-Adsorbente . . . . 277
7.2.2. Tipos de Adsorbentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 277
7.2.3. Relaciones de Equilibrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 281
7.2.4. Cintica de la Adsorcin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 286
7.3. Equipos de Adsorcin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 294
7.4. Diseo de Adsorbedores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 295
7.4.1. Adsorbedores Tipo Tanque Agitado por Lotes . . . . . . . 295
7.4.2. Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo . . . . . . . 310
7.4.3. Adsorcin en Lecho Fijo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 318
7.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 349
7.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 350
7.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 356
9. Precipitacin 421
9.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 421
9.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 422
9.2.1. Precipitacin por Disminucin de la Solubilidad . . . . . . 423
9.2.2. Precipitacin de Protenas por Desnaturalizacin Selectiva 437
9.2.3. Precipitacin por Afinidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . 441
9.3. Equipo de Precipitacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 443
9.4. Diseo de Precipitadores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 444
CONTENIDO
10.Ultrafiltracin 461
10.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 461
10.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 462
10.2.1. Procesos con Membranas . . . . . . . . . . . . . . . . . . 462
10.2.2. Flujo Cruzado o Tangencial . . . . . . . . . . . . . . . . . 465
10.2.3. Teora de la Ultrafiltracin . . . . . . . . . . . . . . . . . 466
10.3. Equipos de Ultrafiltracin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 479
10.3.1. Membranas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 480
10.3.2. Mdulos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 481
10.4. Diseo de Equipos de UF . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 485
10.4.1. Objetivo de la UF . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 486
10.4.2. Mecnica de Fluidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 487
10.4.3. Mtodos de Operacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 489
10.4.4. Diseo de la Unidad de UF . . . . . . . . . . . . . . . . . 490
10.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 506
10.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 507
10.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 511
11.Electroforesis 513
11.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 513
11.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 513
11.2.1. Carga y Punto Isoelctrico de las Protenas . . . . . . . . 514
11.2.2. Teora Electrocintica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 515
11.2.3. Fenmenos de Dispersin . . . . . . . . . . . . . . . . . . 523
11.2.4. Medios y Modos de la Electroforesis . . . . . . . . . . . . 528
11.3. Equipos de Electroforesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 532
11.3.1. Equipos de Flujo Libre . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 532
11.3.2. Equipos de Flujo Libre con Recirculacin . . . . . . . . . 534
11.3.3. Equipos Electrocromatogrficos . . . . . . . . . . . . . . . 536
11.4. Diseo de Equipo de Electroforesis . . . . . . . . . . . . . . . . . 537
11.4.1. Teora de Platos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 537
11.4.2. Teora Cintica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 542
11.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 543
11.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 544
11.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 545
CONTENIDO
13.Secado 617
13.1. Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 617
13.2. Fundamentos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 617
13.2.1. Equilibrio y Propiedades Trmicas . . . . . . . . . . . . . 618
13.2.2. Mtodos de Secado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 627
13.2.3. Velocidad de Secado: transferencia de calor y masa . . . . 628
13.2.4. Efectos Colaterales del Secado . . . . . . . . . . . . . . . 628
13.3. Equipos de Secado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 630
13.3.1. Secadores Adiabticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 630
13.3.2. Secadores no Adiabticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . 632
13.4. Diseo de Secadores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 634
13.4.1. Diseo de Secadores Adiabticos: Calor convectivo . . . . 635
13.4.2. Diseo de Secadores no Adiabticos: Calor conductivo . . 651
13.5. Sumario . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 653
13.6. Problemas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 655
13.7. Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 657
El Proceso de Bioseparacin
3
1.1. Introduccin
El cultivo de clulas con el objeto de obtener productos tiles, es una ac-
tividad que ha realizado el hombre prcticamente durante toda su historia.
Recientemente este tipo de bioprocesos se enmarcan dentro de lo que ahora se
conoce como Biotecnologa. sta ha evolucionado a partir de los conocimientos
generados en diversas disciplinas, tanto del rea de las ciencias bsicas como de
las ingenieras. Hoy, la biotecnologa puede ser definida como la aplicacin de
la ciencia y la tecnologa en organismos vivos, as como a sus partes, productos
y modelos, para modificar materiales vivos o no vivos para la produccin de
conocimiento, bienes y servicios (OECD, 2005).
deseado, sino que ste se obtiene en forma activa. El factor VIII de la san-
gre, la eritropoyetina (EPO) estimuladora de la formacin de eritrocitos, el
agente tromboltico activador del plasmingeno tisular (t-PA), los anticuerpos
monoclonales (mAb) para el tratamiento del cncer y las citoquinas como los
interferones y con actividad antiviral, son productos caractersticos de esta
generacin. Debido a su empleo con fines teraputicos, estos productos deben
ser obtenidos con un alto grado de pureza (Datar et al., 1993).
Actualmente, de 151 productos recombinantes aprobados por la FDA y la
EMEA, 59 (39 %) son obtenidos en clulas de mamfero, 45 (29.8 %) en E. coli,
28 (18.5 %) en S. cerevisiae, 17 (11.2 %) en clulas de hibridomas, 1 (0.67 %) en
leche de cabra y 1 (0.67 %) en clulas de insecto (Ferrer-Miralles et al., 2009).
Varios bioprocesos tanto de la segunda como de la tercera generacin pueden
considerarse bien establecidos y muy eficientes. Otros se encuentran en una etapa
de desarrollo que requiere ampliar el conocimiento de los aspectos fundamen-
tales del comportamiento de las operaciones principales, para contribuir a su
optimizacin y facilitar su validacin (Asenjo y Andrews, 2008).
insulina est formada por las cadena peptidicas A y B unidas por puentes disul-
furo. La cadena A consta de 21 residuos de aminocidos y la cadena B de 30.
La demanda mundial de insulina en el 2006 oscil entre 7,000 y 10,000 kg/ao
y se proyecta que alcanzar entre 15,000 y 20,000 kg/ao para el ao 2012. El
mercado mundial de la insulina se estima en $4,000 millones de dlares y las
principales compaas productoras son Novo Nordisk, Eli Lilly y Sanofi Aventis.
(Ainsworth, 2005).
Al menos tres tecnologas han sido desarrolladas para producir insulina
basadas en bioprocesos con clulas recombinantes. El Mtodo de las dos ca-
denas fue desarrollado por la compaia Genetech y escalado por Eli Lilly. En
este mtodo las cadenas A y B de la insulina se producen en E. coli por separado
y posteriormente se fusionan para formar la insulina recombinante. El Mtodo
de la proinsulina intracelular ha sido comercializado por Eli Lilly y se basa en
la produccin en E. coli de las cadenas A y B fusionadas formando un complejo
llamado proinsulina que una vez procesado da lugar a la insulina recombinante.
El Mtodo de la proinsulina extracelular fue desarrollado por Novo Nordisk y
se basa en la produccin en S. cerevisiae de las cadenas A y B fusionadas for-
mando un precursor que es excretado por la clula y posteriormente procesado
para obtener insulina recombinante.
Figura 1.2: Los principales pasos para la produccin de insulina por el "Mtodo
de la proinsulina intracelular"se basan en la obtencin de: 1) E. coli por cosecha,
2) CI por rompimiento celular, 3) preproinsulina por solubilizacin de los CI,
4) proinsulina por rompimiento con CNBr, 5) proinsulina-SSO3 por sulfitolisis
oxidativa y 6) insulina por accin enzimtica.
Bioseparaciones
Las bioseparaciones para la produccin de insulina por el mtodo de la proin-
sulina intracelular, constan de las etapas de recuperacin, concentracin, purifi-
cacin y acabado.
Recuperacin
Reacciones
14 CAPTULO 1. UNA PERSPECTIVA DE LAS BIOSEPARACIONES
Concentracin
Purificacin
Acabado
Rendimiento
Las operaciones de bioseparacin para un proceso deben seleccionarse cuida-
dosamente con el fin de que el costo sea mnimo. Es decir, si el rendimiento por
paso es bajo y se requieren varias pasos, puede tenerse un bioproceso no viable
econmicamente debido a su an ms bajo rendimiento global. El rendimiento
est dado por:
b)
RG % = (0.3)10 100 = 0.000006 100 = 0.0006 %
Pureza
La pureza necesaria y actividad generalmente estn definidos por agencias
reguladoras como la FDA de acuerdo al uso que se le va a dar al producto. En el
caso de productos para uso parental en humanos la pureza requerida es mayor
al 99.5 % generalmente. La pureza est dada por:
cantidad de producto
Pureza = (1.3)
cantidad total
Actividad especfica
Una medida de la pureza de un producto es la actividad especfica que est
dada por:
Solucin:
Figura 1.6: Proceso hipottico de cuatro pasos para la purificacin de una en-
zima.
GMP
Instalaciones
CONCEPTO DESCRIPCIN
Diseo del proceso Anlisis ingenieril: escalabilidad, costos, rendimiento,
facilidad de implementacin, robustez
Lnea celular Descripcin y status del banco de clulas
Materias primas Lista y justificacin
Diagrama de flujo Diagrama y plan de muestreo
Operaciones unitarias Documentacin de corridas y protocolo
Sustancia Pureza, composicin, justificacin y almacenamiento
Producto Formulacin, justificacin y almacenamiento.
Control del proceso Lista de anlisis de control
Control de calidad Especificaciones, criterios de aceptacin y manual
Mtodos analticos Demostracin de la aplicabilidad de los mtodos
Carac. proceso Rangos aceptables probados y parmetros crticos
Pruebas del proceso Datos de varios lotes de laboratorio
1.6. TENDENCIAS EN BIOSEPARACIONES 23
1.7. Sumario
Los procesos de bioseparacin involucran operaciones de recuperacin, con-
centracin, purificacin y acabado de productos provenientes del biorreactor.
Las bioseparaciones comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de
cultivo para obtener un producto biotecnolgico en las condiciones de pureza
y actividad requeridas. La sustentabilidad de los procesos biotecnolgicos de-
pende en gran medida de las operaciones de bioseparacin que involucran, de tal
manera que la correcta seleccin y diseo de estas operaciones tiene un fuerte
impacto en el xito del proceso.
26 CAPTULO 1. UNA PERSPECTIVA DE LAS BIOSEPARACIONES
1.8. Problemas
1.1. Anlisis comparativo de esquemas de bioseparacin. Efectuar
un anlisis comparativo, en relacin a las operaciones de separacin que utilizan,
de los procesos para la produccin de cido ctrico, penicilina e insulina.
pero mucho ms grandes que las protenas. Su peso molecular es de 3,000 kDa
y a un pH = 8.0 su carga externa es muy negativa debido a los grupos fosfatos.
Para la produccin del plsmido se cuenta con los siguientes equipos:
a) Una columna de inercambio catinico.
b) Una columna de intercambio aninico.
c) Una centrfuga para cosechar clulas.
d) Una columna cromatogrfica de SEC que retiene molculas de peso mole-
cular menor a 100 kDa.
e) Un equipo de choque osmtico para romper clulas.
f) Una unidad de ultrafiltracin.
Se pide: Disear un esquema de bioseparacin del plsmido.
1.9. Bibliografa
Ainsworth, S.J. 2005. Biopharmaceuticals. C&EN. 83, 21-29.
Balasundaram B.; Sue Harrison , S.; Bracewell, D.G. 2009. Advances in prod-
uct release strategies and impact on bioprocess design. Trends Biotechnol.
27, 477-485.
Datar, R.; Rosn C.G. 1990. Downstream process economics. En: Separations
Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New
York. 741-793.
Datar, R.V.; Cartwright, T.; Rosn, C.G. 1993. Process economics of animal
cell and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasmino-
gen activator. Bio/Technology. 11, 349-357.
FDA. 2004. Guidance for Industry PAT-A Framework for Innovative Pharma-
ceutical Development, Manufacturing, and Quality Assurance. US Food
and Drug Administration.
Heinzle, E.; Biwer, A.; Cooney, C.L. 2006. Development of Sustainable Bio-
processes: Modeling and Assessment. Wiley-VCH. Weinheim, Germany.
227-228.
Kalk, J.P.; Langlykee, A.F. 1986. Cost estimation for biotechnology projects.
En: Industrial Microbiology and Biotechnology. Demain, A.L.; Solomon,
N. (Eds.). American Society for Microbiology. New York. 363-384.
Knskoski, M.; Kurkinen, M.; von Weymarn, N.; Niemel, P. 2006. Process
analytical technology (PAT) needs and applications in the bioprocess in-
dustry. Review. VTT. Technical Research Centre of Finland.
Park, J.H.; Lee, S.Y.; Kim, T.Y.; Kim, H.U. 2008. Application of systems
biology for bioprocess development. Trends in Biotechnology 26, 404-412.
Rao, G.; Moreira, A.; Brorson, K. 2009. Disposable bioprocessing: The future
has arrived. Biotech. Bioeng. 102, 348-356.
Wang, D.I.C. 1988. Biotechnology: Status and perspectives. AIChE. 84, 1-21.
30 CAPTULO 1. UNA PERSPECTIVA DE LAS BIOSEPARACIONES
Wiendahl, M.; Wierling, P.S.; Nielsen, J.; Christensen, D.F.; Krarup, J.; Sta-
by, A.; Hubbuch, J. 2008. High throughput screening for the design and
optimization of chromatographic processes miniaturization, automation
and parallelization of breakthrough and elution studies. J. Chem. Technol.
Biotechnol. 31, 893903.
Woodley, J.M.; Bisschops, M.; Straathof A. J.J.; Ottens, M. 2008. Future
directions for in-situ product removal. J. Chem. Technol. Biotechnol. 86,
121123.
Captulo 2
2.1. Introduccin
El trabajo que se realiza para seleccionar la secuencia de operaciones (dia-
grama de flujo) de un bioproceso para transformar una serie de materias primas
en productos, se llama sntesis de proceso. El diagrama de flujo generalmente
se obtiene combinando el conocimiento fundamental de cada operacin, plas-
mado en modelos y simulacin, con experimentos a nivel laboratorio, cuidando
de utilizar operaciones escalables y reactivos que puedan ser utilizados comer-
cialmente. Actualmente, es necesario disear los bioprocesos bajo criterios de
sustentabilidad econmica, ecolgica y social, esto estimula el xito del biopro-
cesos en el largo plazo y ayuda a cumplir con las regulaciones establecidas y
futuras.
En este captulo, en la seccin 2.2 se presenta la metodologa general del
diseo de bioprocesos y los principales aspectos tcnicos y normativos a consi-
derar en este tipo de estudios. Los equipos ms utilizados para realizar dichas
operaciones se describen en la seccin 2.3. Las metodologas utilizadas para la
seleccin apropiada de la secuencia de bioseparaciones de un bioproceso y su
evaluacin se establecen en la seccin 2.4.
2.2. Fundamentos
El diseo de un proceso comprende todo el trabajo conceptual que es nece-
sario realizar antes de construir una planta productiva. Para desarrollar un bio-
proceso eficientemente es necesario seleccionar las operaciones ms apropiadas y
combinarlas de manera lgica para obtener el producto bajo las especificaciones
necesarias, en un mnimo de pasos (Nfor et al., 2008). Esta seccin trata de dos
aspectos del diseo de los bioprocesos:
Escala de operacin
Frecuentemente la escala de operacin o volumen de produccin, es el fac-
tor econmico determinante en la seleccin entre bioprocesos de bioseparacin
alternativos. Cualquier proceso de bioseparacin que se escoja, deber ser com-
patible con la escala industrial a la cual se va a disear. Esto es importante
porque varios procesos desarrollados en el laboratorio no tienen su contraparte
industrial. Muchas operaciones de bioseparacin tienen un lmite respecto de la
capacidad mxima que pueden manejar y esto limita la escala de produccin
para la cual esa operacin puede ser considerada. En algunos casos, este lmite
superior se debe a una restriccin impuesta por un fenmeno fsico inherente a
la operacin de separacin, mientras que en otros casos el lmite superior se debe
simplemente a las limitaciones que ofrece la fabricacin de equipo comercial. En
la Tabla 2.1 se pueden observar las capacidades mximas en una sola etapa de
algunas operaciones de separacin.
Procesos unitarios
Un proceso unitario es el conjunto de operaciones que se realizan secuencial-
mente en un equipo. Por ejemplo, la adsorcin se realiza mediante un proceso
unitario que consiste en 4 operaciones: la adsorcin, el lavado, la elucin y la
regeneracin.
L CV Ciclo Lote
Volumen de buffer = 820 2 5 40 = 328 103 L
CV Ciclo Lote ao
b)
mol g kg
Masa de sal = 328 103 L 1.0 132.14 = 43, 342 kg
L mol 103 g
c)
3 2 1.8
Ahorro volumen = 328 10 L = 32.8 103 L
2
d)
mol g kg
Masa de sal = 295.2 103 L 0.9 132.14 3 = 35, 107 kg
L mol 10 g
2.3. Equipo
Parte importante en la seleccin de un proceso biotecnolgico consiste en
determinar el equipo necesario para realizar una determinada operacin. Varios
tipos de equipos pueden ser empleados para una misma operacin y la seleccin
depende en gran medida del tipo de producto que va a obtenerse. A continuacin
se describen los principales equipos que se utilizan en cada una de las etapas de
las bioseparaciones.
2.3.1. Recuperacin
La recuperacin generalmente hace uso de equipos de remocin de insolubles
y de rompimiento celular.
Remocin de insolubles
Con frecuencia se usan sistemas de filtracin al vaco, sistemas de filtracin
por lotes, as como centrfugas tubulares, de discos con descarga intermitente o
de canasta. Los sistemas de microfiltracin son cada vez ms utilizados en estas
operacines,
36 CAPTULO 2. SNTESIS DEL BIOPROCESO
Rompimiento celular
En esta etapa los equipos que ms se manejan son los homogeneizadores y
los molinos de perlas. La lisis alcalina en tanques agitados o sistemas tubulares
ha sido considerada en varios desarrollos.
2.3.2. Concentracin
En la concentracin del producto se emplean extractores que pueden fun-
cionar en forma continua o intermitente, as como tambin lechos empacados
con diversos tipos de adsorbentes. La precipitacin con sales o solventes en tan-
ques agitados tambin es empleada en este nivel. Los sistemas de ultrafiltracin
y dilisis participan cada vez ms en estas etapas.
2.3.3. Purificacin
En esta etapa se utilizan diversos sistemas cromatogrficos que se traducen
en la utilizacin desde equipos muy sencillos como puede ser una simple columna,
hasta equipos muy sofisticados como los utilizados en cromatografa lquida de
alta resolucin. Tambin son utilizados en esta etapa sistemas de electroforesis.
2.3.4. Acabado
En la etapa de acabado, dependiendo de la presentacin con que se va a
lanzar el producto al mercado, pueden utilizarse liofilizadores, secadores y crista-
lizadores.
2.4. Diseo
El diseo de un bioproceso comprende diversas actividades basadas en la ex-
periencia, la teora y el apoyo computacional disponible. Entre estas actividades
podemos destacar las siguientes:
Mtodo heurstico
El mtodo heurstico consiste en la prctica normal de diseo, que se inicia
definiendo un caso base, que representa el juicio cualitativo del ingeniero de
diseo y presupone ser el bioproceso de separacin ms econmico que pueda ser
desarrollado dentro de las restricciones que en tiempo y dinero tiene el proyecto
(Null, 1987).
Una vez que el caso base ha sido seleccionado, el diseador de proceso deter-
minar los costos de operacin y capital con el mayor detalle posible. Cuando
el caso base ha sido evaluado, se hace un juicio sobre el ms prximo proceso
econmicamente competitivo. El proceso alternativo se evala con las mismas
restricciones que el caso base. Si el proceso modificado tiene costos de operacin
y capital ms bajos, entonces ste nos lleva a un nuevo caso base de diseo. Este
nuevo caso base vuelve a probarse hasta encontrar un caso base ptimo.
Evaluacin econmica
El anlisis del bioproceso desde el punto de vista econmico comprende ac-
tividades como: a) el anlisis del mercado y el establecimiento de las especifica-
ciones del producto y b) la evaluacin econmica del bioproceso.
kg
Demanda [Participacin ( %)]
ao
VPrd = (2.1)
kg
Productividad [Rendimiento global ( %)]
L ao
El mercado de los productos biotecnolgicos puede enmarcarse entre dos
casos extremos (Tabla 2.2): a) productos de alto valor, bajo volumen de pro-
duccin y libres de competencia, como el t-PA y b) productos de alto volumen
de produccin, en mercados muy competitivos, como la rBST. En los productos
libres de competencia, es posible que se seleccione el primer proceso exitoso que
se logre en el laboratorio. Sin embargo, si el mercado del producto aumenta y
aparecen nuevos competidores, la economa del proceso cobra especial impor-
tancia (Spalding, 1991).
Tabla 2.2: Influencia de la demanda del mercado en el precio del producto. Datos
de USA.
Figura 2.4: Solucin Ejemplo 2.2. Variacin del volumen de fermentacin con la
productividad y el rendimiento.
I = PX (2.2)
Figura 2.5: Pasos para la estimacin del capital de inversin y los costos de
operacin de un bioproceso.
personal, entre otros. Puede incluirse tambin un estimado del costo de equipo
perifrico necesario, no incluido en el diagrama de flujo. Como el PC es la base
de la estimacin del capital, la precisin del clculo depender en gran medida
de este rubro. Las cotizaciones de los fabricantes y los datos de la literatura son
las principales fuentes de informacin.
Inversin total de capital. A partir del costo total de adquisicin del
equipo, mediante el uso de multiplicadores se estima el monto de la inversin
total de capital (T CI). En la Tabla 2.3 se presentan los rubros que integran la
T CI y algunos valores tpicos de los multiplicadores utilizados.
T CI = DF C + W C + SV C (2.3)
La inversin fija directa est relacionada con los desembolsos para construir
la planta. El capital de trabajo es la inversin adicional necesaria para desa-
48 CAPTULO 2. SNTESIS DEL BIOPROCESO
Dentro de los costos de operacin directos se puede resaltar los costos de las
materias primas que son consumidas directamente en el proceso de produccin
del producto o que son usadas en la recuperacin del mismo, debido a que stas
constituyen la mayor parte de estos costos. Los costos de las materias primas
son ms relevantes en sistemas de produccin basados en procesos biolgicos
que en plantas qumicas convencionales. En los primeros las materias primas
pueden representar del 30 al 80 % del costo de produccin, mientras que en los
convencionales slo representan del 10 al 50 % de ese costo (Kalk y Langlykke,
1986).
50 CAPTULO 2. SNTESIS DEL BIOPROCESO
Flujo de efectivo Una vez que se han estimado los ingresos, la inversin
total de capital y los costos de operacin de un proyecto, es necesario estimar
el flujo de efectivo del proyecto. El flujo de efectivo anual (para cada uno de los
aos del proyecto) se puede calcular de la siguiente manera:
Ingresos
Costo operacin
Utilidad bruta
ISR
Utilidad neta
+ Depreciacin
Flujo de efectivo
Utilidad bruta
Margen bruto = 100 (2.4)
Ingresos
Retorno sobre la inversin (ROI). Se define como el flujo de efectivo
sobre la inversin total de capital. Es una medida de los beneficios del proyecto
y se expresa como:
52 CAPTULO 2. SNTESIS DEL BIOPROCESO
Flujo de efectivo
ROI = 100 (2.5)
Inversin total
Periodo de retorno. Corresponde al periodo de tiempo necesario para que
el flujo de efectivo cubra el monto total de la inversin. Es una medida del
tiempo necesario para recuperar la inversin. Para caso particular que el flujo
de efectivo anual sea igual a travs de los aos, se tiene:
Inversin total
Periodo de retorno = (2.6)
Flujo de efectivo
Ejemplo 2.4. Rentabilidad de un proceso para la produccin de
MAbs.
Se desea producir MAbs y se cuenta con los siguientes datos de mercado y
de produccin:
Concepto Monto
Mercado Precio $200, 000/kg
Dosis 1.0 g/dosis
Demanda 1, 555, 260 dosis/ao
Produccin Conc. fermentador 1.992 g/L
Rendimiento 63.5 %
Ciclo 84 h
Ao 330 das
La demanda anual es:
g dosis kg kg
Demanda = 1.0 1, 555, 260 3 = 1, 555.26
dosis ao 10 g ao
El volumen de fermentacin total (Vt ) se estima en:
kg
1, 555.26 L
Vt = ao = 1.23 106
g kg ao
1.992 0.635
L 1000 g
T CI = $171 , 208
Costo anual de operacin (miles).
kg $200, 000
I = 1, 555.26 = $311, 052
ao kg
b) Flujo de efectivo (miles).
$217, 141
Margen bruto = 100 = 70 %
$311, 052
d) Retorno de la inversin por ecuacin (2.5),
$143, 324
ROI = 100 = 83.7 %
$171 , 208
$171, 208
Periodo de retorno = = 1.2 aos
$143, 324
f) El costo promedio (miles) se obtiene mediante el cociente del costo anual
y la produccin estimada del producto, esto es:
$93, 911
ao $60.39
Costo promedio = =
kg kg
1, 555.2
ao
Evaluacin ambiental
Durante el desarrollo del bioproceso se debe realizar la evaluacin ambiental
que comprende identificar, analizar y manejar tan pronto como sea posible,
los daos potenciales a la salud, la seguridad y el ambiente que se derivan del
mismo, para evitar consecuencias negativas (riesgos, costos y mayores tiempos
de desarrollo). La evaluacin de los efectos ambientales de un bioproceso puede
contribuir significativamente a evitar agravar los problemas ambientales como
el cambio global y el agotamiento de los combustibles fsiles. Existen varios
reportes en la literatura para realizar este tipo de evaluaciones basados en dife-
rentes suposiciones, lmites y metodologas, por lo que sus resultados son difciles
de comparar ( Hermann et al., 2007).
Recientemente, ha sido propuesto un mtodo con una estructura sencilla
que permite realizar una evaluacin ambiental en las primeras etapas de un
bioproceso en desarrollo (Biwer y Heinzle, 2004). El mtodo puede manejar la
incertidumbre en las fases tempranas del desarrollo del bioproceso, incluyendo
los impactos ambientales relevantes y es simple y fcil de aplicar. En el mtodo
se establecen 14 categoras de impacto, donde cada compuesto es clasificado
de acuerdo a la metodologa ABC, en funcin de su relevancia alta, media o
baja dentro de una de las categoras. Por ejemplo, en la categora de Grado
de toxicidad, una sustancia muy txica se asigna como clase A, una sustancia
menos txica a la clase B y una sustancia no txica a la clase C (Zhang et al.,
2008).
Las categoras de impacto se agrupan a su vez en seis grupos: Recursos,
Entradas grises, Riesgo del componente, Organismos, Aire y Agua/Suelo. A
2.4. DISEO 55
Evaluacin social
Los bioprocesos pueden contribuir al desarrollo sustentable, pero esto no
ocurre automticamente. Para evaluar la sustentabilidad social de los biopro-
cesos, recientemente se han desarrollado varios conceptos y una metodologa
novedosa (Geibler et al., 2005). Mediante un enfoque multiperspectivo se han
identificado ocho aspectos que son significativos para realizar esta evaluacin
(Tabla 2.5).
Indicadores
Aspecto Desarrollo tecnolgico Aplicacin de la tecnologa
Salud y seguridad - Grupos de riesgo - Riesgo esperado
- Factores de riesgo - Sustancias txicas
- Pruebas en voluntarios - Mediciones de salud
Calidad de las - Tiempo de trabajo - Tiempo de trabajo esperado
condiciones de trabajo - Participacin de mujeres - Participacin esperada
- Condiciones de trabajo - Medidas para mejorar stas
Empleo - Estabilidad - Estabilidad esperada
- Regiones de creacin - Regiones posibles
- Continuidad - Efecto en el mercado laboral
Educacin y entrenamiento - reas de entrenamiento - Planeacin
- Manejo de recursos - Necesidades
Manejo del conocimiento - Calidad del intercambio - Planeacin
- Sistemas de informacin - Planeacin
Potencial de innovacin - Potencial comercial - Grado proyectado
- Contribucin cientfica - Penetracin de mercado
- Patentes - Nmero y tipos
Aceptacin y beneficio - Participacin de clientes - Aceptacin del producto
social del producto - Uso de Ing. Gentica - Planeacin
- Beneficio social - Contribucin
Dilogo social - Reportes voluntarios - Canales de informacin
- Comunidad local - Comunicacin planeada
- Participacin poltica - Promocin del dilogo
56 CAPTULO 2. SNTESIS DEL BIOPROCESO
Los aspectos que se consideran son: salud y seguridad, calidad de las condi-
ciones de trabajo, empleo, educacin y entrenamiento, manejo del conocimiento,
potencial de innovacin, aceptacin y beneficio social del producto, y dilogo
social. Para cada aspecto se han identificado 8 indicadores (en la Tabla 2.5 slo
aparecen algunos de stos) que cubren dos niveles de evaluacin: a. desarrollo
tecnolgico y b. aplicacin de la tecnologa. Esta distincin se ha hecho debido a
que las condiciones en que se desarrolla un bioproceso pueden ser muy diferentes
a las condiciones de su aplicacin. A cada indicador se le asigna una puntuacin
mxima de 3 puntos, de tal manera que cada nivel de evaluacin puede alcanzar
una puntuacin mxima de 96 puntos (8 aspectos 4 indicadores 3 puntos).
Este mtodo sencillo permite evaluar la sustentabilidad social de un bioproceso
y puede ser adaptado a diferentes contextos.
2.5. Sumario
El diseo de un bioproceso comprende diversas actividades basadas en la
experiencia, la teora y el apoyo computacional disponible. Estas actividades
comprenden la sntesis, el anlisis, la evaluacin y la optimizacin del biopro-
ceso. La sntesis del bioproceso consiste en establecer el diagrama de flujo del
bioproceso, que en la prctica se realiza mediante el mtodo heurstico. Actual-
mente, existen diversos paquetes computacionales para realizar el anlisis y la
evaluacin del bioproceso a partir del diagrama de flujo establecido.
2.6. PROBLEMAS 57
2.6. Problemas
2.1. Rendimiento global. El proceso de obtencin de una enzima consta
de cuatro operaciones de separacin, cada una de ellas presenta un rendimiento
del 80 %. Estimar el rendimiento global del proceso.
2.2. Precio y ROI. Se cuenta con los siguientes datos para producir
insulina recombinante:
(A) Mercado
Produccin 1, 000 kg/ao
(B) Costos anuales Miles
Ao 1 $34, 877.00
Aos 2-10 $31, 525.00
(C) Depreciacin $2, 766.00
(D) Inversin fija directa y de arranque $30, 468.00
(E) Capital de trabajo $2, 742.00
(F) ISR 45 %
Se pide estimar:
a) El precio de venta para obtener un retorno sobre la inversin (ROI) del
40 %.
b) El periodo de retorno.
Resp. a) $54, 000/kg
Se pide:
a) Establecer la secuencia de las bioseparaciones(1-5) y especificar la com-
posicin de corrientes (A-D) del bioproceso y razonar su respuesta.
b) Si la solucin final de protena MX debe estar a un pH =7.4, se requieren
bioseparaciones adicionales?.
Producto DNA
Paso g/cm3 g/g total pg/mg Operacin
1 500 0.36 ND
2 5,000 0.35 ND
3 9,000 0.50 ND
4 9,000 0.50 ND
5 8,000 0.95 2
6 1,000 >0.99 0.1<
7 800 >0.99 0.1<
8 3,000 >0.99 0.1<
2.7. Bibliografa
Asenjo, J.A.; Andrews, B.A. 2008. Challenges and trends in bioseparations.
J. Chem. Technol. Biotechnol. 83, 117120.
Biwer, A.; Heinzle, E. 2004. Environmental assessment in early process devel-
opment. J. Chem. Technol. Biotechnol. 79, 597-609.
Datar, R.; Rosn, C. 1990. Downstream process economics. En: Separation
Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New
York. 741-793.
Farid, S.S. 2007. Process economics of industrial monoclonal antibody manu-
facture. J. Chromatogr. B. 848 , 818.
Geibler, J.; Wisniewski, J.; Trk, V.; Wallbaum, H. 2005. Governing new
technologies towards sustainability: international organisations and social
indicators. Berlin Conference on the Human Dimensions of Global Envi-
ronmental Change. Berlin, Germany.
Hermann, B.G.; Blok, K.; Patel, M.K. 2007. Producing bio-based bulk chem-
icals using industrial biotechnology saves energy and combats climate
change. Environ. Sci. Technol. 41, 7915-7921.
Kalk, J. P.; Langlykee, A. F. 1986. Cost estimation for biotechnology projects.
En: Industrial Microbiology and Biotechnology. Demain, A. L.; Solomon,
N. (Eds.). American Society for Microbiology. New York. 363-384.
Nfor, B.K.; Ahamed, T.; van Dedem, G.W.; van der Wielen, L.A.; van de Sandt,
E.J.; Eppink, M.H.; Ottens, M. 2008. Design strategies for integrated
protein purification processes: challenges, progress and outlook. J. Chem.
Technol. Biotechnol. 83,124132.
Null, H.R. 1987. Selection of a separation process. En: Handbook of Separation
Process Technology. Rousseau, R. W. (Ed.). John Wiley & Sons. New York.
22, 982-995.
Petrides, D.P.; Cooney, C.R.; Evans, L.B. 1989. An introduction to biochemi-
cal process design. En: Chemical Enginnering Problems in Biotechnology.
Shuler, M. L. (Ed.). AIChE. New York. 351-391.
Prokopakis, G.J.; Asenjo, J A. 1990. Synthesis of downstream processes. En:
Separation Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker
Inc. New York. 571-601.
Spalding, B. 1991. Downstream processing: Key to slashing production cost
100 fold. Bio/Technology. 9, 229-240.
Zhang, X.; Li, C.; Fu, C.; Zhang, S. 2008. Environmental impact assessment
of chemical process using the green degree method. Ind. Eng. Chem. Res.
47, 1085-1094.
Parte II
Filtracin
3.1. Introduccin
La filtracin consiste en la separacin de un slido de un fluido por accin
de un medio filtrante y un gradiente de presin. La filtracin puede ser utiliza-
da para recuperar un slido como en una cosecha celular o remover un slido
como en los procesos de eliminacin de virus. En los procesos biotecnolgicos
se utilizan tres tipos de mecanismos de filtracin (Fig. 3.1): a) filtracin con
formacin de torta o filtracin convencional, b) filtracin de lecho profundo y c)
filtracin con membranas.
En la filtracin con formacin de torta los slidos se depositan sobre el medio
filtrante formando una pasta, mientras que en la filtracin de lecho profundo los
slidos se depositan dentro del medio filtrante. La filtracin por membrana se
realiza utilizando membranas especiales de tamao de poro muy pequeo, que
generalmente operan con flujo paralelo a la membrana (cruzado), de tal manera
que no hay un depsito de slidos sobre la membrana sino una concentracin
del caldo.
El objetivo de este captulo es presentar los aspectos fundamentales de la
filtracin convencional y la filtracin de lecho profundo, as como su aplicacin
en la filtracin de caldos biolgicos. La filtracin por membranas se revisa en el
captulo 10.
La seccin 3.2 de este captulo centra la atencin en los fundamentos de la
filtracin. Los principales equipos de filtracin que se utilizan a nivel proceso
se presentan en la seccin 3.3. La seccin 3.4 se dedica a presentar los aspectos
ms relevantes del diseo de filtros convencionales y de lecho profundo.
3.2. Fundamentos
La filtracin forma parte de un conjunto de operaciones llamadas Biosepara-
ciones Slido-Lquido (BSL). Para llevar a cabo un proceso de BSL generalmente
es necesario seleccionar entre una operacin de filtracin y una operacin de sedi-
68 CAPTULO 3. FILTRACIN
disminuir el volumen a manejar, lo que puede reducir los costos del proceso glo-
bal de separacin slido-lquido. La mayor parte de los slidos es obtenida en la
etapa de separacin. Los slidos recuperados pueden requerir un postratamiento
de lavado o secado de acuerdo con los requerimientos del proceso.
En el diseo y seleccin del bioproceso de BSL es necesario considerar varios
factores de orden tcnico que deben conjuntarse para una adecuada decisin. En
la Tabla 3.1 se presentan algunos de estos factores agrupados de acuerdo a los
requerimientos del proceso, las propiedades del caldo y los equipos disponibles.
En general, todos los sistemas mecnicos de BSL estn basados en dos prin-
cipios que dan origen a las operaciones de sedimentacin y filtracin (Svarovsky,
2000). En el proceso de sedimentacin la separacin se basa en una diferencia de
densidad entre la fase slida y la fase lquida. Entre mayor sea esta diferencia la
separacin es ms fcil. Cuando sto no ocurre, la diferencia puede ser aumenta-
70 CAPTULO 3. FILTRACIN
Pretratamiento trmico
El calentamiento de los caldos permite reducir su viscosidad, su volumen y
romper estructuras gelatinosas que dificultan las operaciones posteriores. En el
3.2. FUNDAMENTOS 71
Coagulacin y floculacin
Debido a que los caldos biolgicos sujetos a BSL presentan partculas muy
pequeas (0.5 a 100 m), los pretratamientos para incrementar el tamao de
partcula facilitan su manejo.
Las partculas coloidales (tamao en el rango de una micra) no sedimentan
fcilmente debido a que por accin de sus cargas superficiales forman suspen-
siones muy estables llamadas soles, a diferencia de las suspensiones formadas
por partculas de mayor tamao que sedimentan con relativa facilidad.
Las soles pueden ser alteradas por medio de agentes qumicos. En el proceso
de coagulacin se emplean electrolitos simples que neutralizan las cargas repul-
sivas superficiales de las clulas o partculas, lo cual genera fuerzas de atraccin
del tipo de London Van Der Waals entre ellas, que permiten formar partculas
ms grandes y densas. Los electrolitos ms empleados son derivados de iones
polivalentes positivos como fierro, aluminio y calcio. La coagulacin tambin
puede ser efectuada empleando sustancias que varen el pH del caldo y por lo
tanto la carga superficial de las partculas.
En el proceso de floculacin se utilizan sustancias qumicas sintticas de al-
to peso molecular llamadas polielectrolitos. Existen dos mecanismos bsicos de
floculacin: a) floculacin por formacin de puentes y b) floculacin por neutra-
lizacin (Roush y Lu, 2008). En el primero (Fig. 3.3a), los polielectrolitos pro-
ducen un efecto combinado ya que actan neutralizando las cargas superficiales
de las partculas y provocan su atrapamiento por medio de las redes, aglome-
rndolas y formando una partcula ms grande. En el segundo (Fig. 3.3b), los
polielectrolitos neutralizan las cargas de las partcula pequeas dejando expues-
tas las regiones hidrofbicas, lo que provoca la precipitacin isoelctrica de los
aglomerados.
Los polielectrolitos pueden ser aninicos, catinicos o neutros. La mayora
de los utilizados estn cargados positivamente. Los materiales disponibles co-
mercialmente son derivados de la poliacrilamida, polietilenimina, polisacridos
catinicos, quitosn y la poliamina. Es importante sealar que los pretratamien-
tos qumicos son de uso limitado dado que implican la adicin de sustancias al
caldo que pueden agregar toxicidad o impurezas a ste.
Uso de ayudas-filtro
En las operaciones de filtracin convencional y de lecho profundo se emplean
sustancias slidas llamadas Ayudas-Filtro (AF). Estas sustancias se adicionan
al caldo antes de la filtracin y/o se utilizan como precubierta del filtro. Las
AF actan como adsorbentes de las partculas coloidales mejorando el tamao
de partcula, la incompresibilidad y permeabilidad de los slidos, de tal manera
que se facilite su filtracin.
72 CAPTULO 3. FILTRACIN
Las AF ms utilizadas son las tierras diatomeas y las perlitas (Rees, 1990).
Las tierras diatomeas son restos de esqueletos de pequeas plantas acuticas
prehistricas que se obtienen de depsitos naturales. Las perlitas se obtienen de
vidrios volcnicos que contienen de 2 a 5 % de agua, que permite romperlos por
accin trmica o de presin, formando un polvo con caractersticas apropiadas
como AF.
Con el uso de las AF la filtracin se convierte en una operacin de tres pasos:
kP
= (3.1)
"
donde 1 :
1 dV
= (3.2)
A dt
1 dV P
= (3.3)
A dt R
R = Rt + Rm (3.4)
donde Rt es la resistencia de la torta y Rm es la resistencia del medio filtrante.
Combinando la ecuaciones (3.3) y (3.4) se obtiene:
1 dV P
= (3.5)
A dt (Rt + Rm )
Las ecuaciones (3.3) y (3.5) slo pueden ser aplicadas a soluciones diluidas
en rgimen laminar, cuando el nmero de Reynolds modificado es menor a 5, o:
dp
<5 (3.6)
(1 )
donde dp es el dimetro de partcula o dimetro del poro en la torta, es la
densidad del fluido y es la fraccin de espacio vaco del lecho. En general las
biofiltraciones cumplen con esta condicin.
Cs L
dC a (1 )
= dz (3.8)
C de
Ce o
Cs a (1 ) L
= exp (3.9)
Ce de
donde:
Ce : Concentracin de partculas a la entrada del filtro
Cs : Concentracin de partculas a la salida del filtro
a : Constante de eficiencia del filtro
: Porosidad
L : Profundidad del lecho
de : Dimetro equivalente del medio
Esta expresin permite calcular la fraccin de partculas que permanece
en suspensin a la salida del filtro. Este valor depende de las caractersticas
geomtricas del lecho, incluyendo el tamao y porosidad, as como de la longitud
del lecho. Tambin depende de la naturaleza del flujo, las propiedades fsicas de
las partculas en suspensin, y de las fuerzas de interaccin entre las partculas
y el medio.
La ecuacin (3.7) en su forma ms sencilla fue formulada por T. Iwasaki
(Cushing y Lawler, 1998) y puede expresarse como:
dC
= C (3.10)
dz
donde es el coeficiente caracterstico del filtro.
a) Marcos y placas
b) Cmara con elementos filtrantes (hojas, charolas o tubos)
Rt = w (3.11)
donde w es la cantidad de slidos base seca depositados por unidad de rea y
es la resistencia especfica de la torta. La ecuacin (3.11) puede ser expresada
en trminos de parmetros ms fcilmente medibles:
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 81
V
Rt = o (3.12)
A
donde o es la cantidad de masa slida seca por unidad de volumen libre de
slidos (o volumen de filtrado).
Combinando las ecuaciones (3.5) y (3.12) se tiene:
dV A P
= (3.13)
dt V
o + Rm
A
para t=0 V =0
y obtener la siguiente ecuacin:
A t o V Rm
= + (3.14)
V 2P A P
Otro caso particular de la filtracin por lotes con cada de presin constante
se produce cuando se desea asegurar una formacin uniforme de la torta evitando
flujos altos al inicio de una corrida, que inducen la penetracin de slidos sobre
el medio filtrante. En este caso la cada de presin se incrementa gradualmente
hasta alcanzar una cada de presin constante (Fig. 3.9).
Bajo estas condiciones la integracin de la ecuacin (3.13) se efecta en el
rango de cada de presin constante, con las condiciones iniciales
para t = ts V = Vs
y se obtiene la ecuacin:
82 CAPTULO 3. FILTRACIN
(t ts ) A o (V + Vs ) Rm
= + (3.16)
(V Vs ) 2P A P
Esta ecuacin nos permite calcular parmetros experimentales al graficar:
(t ts ) A V + Vs
vs
(V Vs ) A
Solucin:
Del anlisis de los datos se desprende que la resistencia del medio es des-
preciable, de tal manera que se realiza un ajuste del modelo lineal dado por la
ecuacin (3.14) a los datos, con una restriccin de la ordenada en el origen . El
programa MATLAB para realizar el ajuste se presenta en la Figura 3.10.
En la Figura 3.11 se presenta el resultado del programa, la lnea continua es
una recta ajustada que pasa por el origen.
a) Clculo de la resistencia del medio.
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 83
Datos
t (s) V (cm3 )
19 100
80 200
210 300
380 400
700 500
978 600
1215 650
Rm = 0
Solucin:
Del anlisis de los datos se desprende que la resistencia del medio es des-
preciable, de tal manera que se realiza un ajuste del modelo lineal dado por la
ecuacin (3.14) a los datos. El programa MATLAB para realizar el ajuste se
presenta en la Figura 3.12.
En la Figura 3.13 se presenta el resultado del programa, la lnea continua es
una recta ajustada.
a) Clculo de la cada de presin en el filtro, P .
kg m kg N
0.0029 4.0 1010 1.92 3
ms kg m kg m
s2 N
P = s = 3.38 105 2
2 329.51 2 m
m
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 85
Figura 3.11: Ajuste lineal de los datos de filtracin del Ejemplo 3.1.
Datos
t (min) V (L)
4 115
20 365
48 680
76 850
120 1130
kg
Rm s 0.0029 Rm
= 456.33 = m-s
P m m
N kg 2
3. 38 105 2 s
m N
kg m
s N s2
456.33 3. 38 105 2
Rm = m m N = 5.31 1010 m1
kg
0.0029
ms
Figura 3.12: Programa MATLAB para el nalisis por regresin lineal de los
datos del Ejemplo 3.2.
60 s
(A) (20 min) 3
min s 4000 L m s
3 = 329.51 2 + 456.33
m m A 10 L
3 m
(4000 L)
10 L
3
A = 3.0 m2
Figura 3.13: Ajuste lineal de los datos de filtracin del Ejemplo 3.2.
Ejemplo 3.3. Clculo del nmero de ciclos ptimo para una fil-
tracin por lotes.
En el procesamiento de un caldo micelial para la recuperacin de un an-
tibitico en un filtro de laboratorio de 110 cm2 de rea a una presin de
19.6 104 N/m2 , se obtuvieron los datos que aparecen en las columnas 1 y
2 de la Tabla 3.4. La viscosidad del caldo fue de 2 103 Ns/m2 y la masa de
slidos secos por unidad de volumen de filtrado de 40 kg/m3 .
Datos Clculos
t (s) V 104 m3 At/V (s/m) V /A (m)
9 1.0 990.0 0.009
46 2.0 2530.0 0.018
126 3.0 4620.0 0.027
240 4.0 6600.0 0.036
405 5.0 8910.0 0.045
610 6.0 11183.3 0.055
860 7.0 13514.3 0.064
Se pide estimar:
a) La resistencia especfica del caldo .
88 CAPTULO 3. FILTRACIN
(pendiente)(2)(P )
=
o
s N
198, 440 2 (2) 19.6 104 2
m m m
= = 9. 7 1011
N s kg kg
2 103 40 3
m2 m
24 h
Nmero de ciclos =
tc + 0.5
donde tc es el tiempo de filtracin por ciclo.
El volumen total de filtrado Vt se relaciona con el volumen de filtrado por
ciclo Vc mediante la siguiente expresin:
24 h
Vt = Vc
0.5 + tc
la resistencia del medio filtrante puede ser despreciada, entonces puede ser uti-
lizada la ecuacin (3.15) para obtener:
12
2A2 tc P
Vc =
o
de tal manera que:
12
24 2A2 tc P
Vt =
tc + 0.5 o
derivando la expresin anterior con respecto al tiempo del ciclo e igualando
el resultado a cero, se obtiene el tiempo de duracin del ciclo para el cual el
volumen total de filtrado es mximo, es decir:
dVt d tc 1 (tc 0.5)
= = =0
dt dtc tc + 0.5 2 tc (tc + 0.5)2
el tiempo ptimo tc es:
tc = 0.5 h
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 89
Se pide:
Estimar el nmero de marcos de 430 430 30 mm y el tiempo de filtracin
para procesar 40 kg/lote de peso seco de producto. Suponer que la bomba de
alimentacin produce una presin a la entrada del filtro de 0.68 kg/cm2 y que
descarga a la atmsfera.
Solucin:
a) Estimacin de parmetros a partir de datos de laboratorio.
De acuerdo con los datos de laboratorio es necesario utilizar la ecuacin
(3.15) arreglada de la siguiente forma:
tP A2
=
2o W2
donde W = o V es el peso seco de la torta.
Sustituyendo valores en la expresin anterior se obtiene:
2
kg 253
(9, 780 s) 1.01 cm4
cm2 12.5 s cm2
= = 1.01 109
2o (0.063 kg) 2 kg
90 CAPTULO 3. FILTRACIN
W2
t =
P A2
2o
9 s cm (40 kg)2
2
t = 1.01 10 = 206 s
kg kg 2 )2
0.68 (107, 242 cm
cm2
= P s (3.17)
donde es una constante relacionada principalmente con el tamao y forma
cero para una torta incompresible, a 0.8 para una torta altamente compresible
(la correlacin es aceptable para s 0.6 y P 0.2 atm).
La determinacin experimental de s y requiere la realizacin de varias
corridas de filtracin a cada de presin constante a varios niveles. Los datos
pueden ser correlacionados en una grfica log() vs log(P ). Entre mayor sea
el valor de s el efecto de la presin sobre la resistencia de la torta es ms severo,
en estos casos es recomendable utilizar ayudas-filtro.
Combinando las ecuaciones (3.14) y (3.17) se puede obtener la ecuacin
para describir la filtracin por lotes de tortas compresibles con cada de presin
constante:
At o V Rm
= + (3.18)
V 2P 1s A P
cm
1 = 4.13 1010
g
Corrida P
Nmero (atm) (cm/g)
1 0.68 4.13 1010
2 1.36 5.51 1010
3 2.04 6.61 1010
4 3.40 7.58 1010
Los datos de y P para cada una de las corridas pueden ser correlacio-
nados de acuerdo con la ecuacin (3.17) en una grfica log(P ) vs log(), tal
como aparecen en la Figura 3.14. Con la pendiente de la curva se puede estimar
el valor del ndice de compresibilidad:
s = 0.38
Formacin de la torta
En los procesos de filtracin por lotes el rea de filtracin es constante y el
espesor de la torta vara con el tiempo de filtrado. En la filtracin continua se
puede suponer que el espesor de la torta es constante y el rea de filtracin vara
con el tiempo.
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 93
Figura 3.14: Solucin grfica del Ejemplo 3.4. Resistencia especfica contra cada
de presin (log-log).
El tiempo que dura cada etapa de filtracin se puede relacionar con el ngulo
de filtracin y la velocidad de giro del tambor, mediante la ecuacin siguiente:
tf = (3.21)
2N
1/2
4NP 1s
Q = RL (3.22)
o
o en trminos de la velocidad de formacin de la torta Wt = o Q:
1/2
4NP 1s o
Wt = RL (3.23)
Las ecuaciones (3.22) y (3.23) pueden ser utilizadas para predecir cambios
de la velocidad de filtracin con respecto a cambios de las variables de diseo y
operacin en filtros continuos al vaco.
Lavado de la torta
Una vez que se ha formado la torta sobre la superficie del filtro, mediante
un lavado se remueve del soluto retenido en el lquido y en la masa celular de la
torta. Existen diferentes tcnicas de lavado, siendo la ms utilizada la de lavado
por desplazamiento. En esta tcnica el lquido de lavado se aplica directamente
sobre la superficie de la torta.
Las curvas de lavado, donde se grafica la concentracin adimensional de
soluto a la salida de la torta (C/C0 ) contra los volmenes de lavado (o el tiempo
de lavado), permiten analizar las operaciones de lavado (Fig. 3.15). En el caso
ideal donde slo existe el desplazamiento hidrulico, nicamente se requiere un
volumen de lavado para recuperar todo el soluto. En la prctica, inicialmente
el lquido de lavado produce un desplazamiento hidrulico del filtrado retenido
por la torta. Si el lavado contina parte del soluto contenido en el interior de la
biomasa puede pasar al lquido de lavado mediante mecanismos de transferencia
de masa.
En la etapa de lavado la cantidad de solutos que puede ser recuperada de-
pende del volumen del lquido de lavado que se emplee. Un factor de diseo es
el tiempo requerido para aplicar el lquido de lavado o tiempo de lavado, el cual
depende de la naturaleza de la torta. Debido a lo anterior el anlisis de la etapa
de lavado se efecta en dos pasos: a) clculo del volumen de lavado en funcin
de la recuperacin de soluto que se especifique y b) clculo del tiempo de lavado
necesario en funcin del tipo de torta.
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 95
r = (1 )n (3.24)
donde:
Masa de soluto retenido en torta
r =
Masa de soluto inicial en la torta
= Eficiencia de lavado.
Volumen de lquido de lavado
n =
Volumen del lquido retenido por la torta
Clculo del tiempo de lavado Para el clculo del tiempo de lavado se puede
suponer que el gasto durante la fase de lavado es constante dado que el lquido
de lavado no tiene slidos. Este gasto puede igualarse al gasto final de la fase
de filtrado. Con base a lo anterior, la ecuacin (3.13) con Rm = 0 y = P s
se escribe:
dV AP 1s
= (3.25)
dt V
o
A
El gasto cuando V = Vf es constante e igual a:
dV A2 P 1s
= (3.26)
dt o Vf
t=0 V =0
t = tL V = VL
donde VL es el volumen del lquido de lavado y tL es el tiempo de lavado re-
querido, se obtiene la siguiente ecuacin:
2
A P 1s
VL = tL (3.27)
o Vf
3.4. DISEO DE EQUIPO DE FILTRACIN 97
b) El gasto que puede manejar el filtro puede ser estimado por medio de la
ecuacin (3.22).
1/2
4NP 1s
Q = RL
o
por las caractersticas de la torta s = 0 y = , entonces la ecuacin anterior
se puede expresar como:
1/2
2N
Q = RL
o
2P
sustituyendo valores:
1/2
65
2 2 1.2 min1 cm3 L
360
Q = 150 cm430 cm s s = 4, 520 = 16, 272
29 60 s h
cm2 min
r = (1 )n
0.01 = (1 0.8)n
entonces,
Volumen de lavado
n = 2.86
Volumen retenido
tL = (9 s)(2)(2.86)(0.01) = 0.5 s
Filtro A Filtro B
V (L/m2 ) F T U P (psi) V (L/m2 ) F T U P (psi)
0.0 0.0 0.0 0.0 0.00 0.0
1.0 1.0 4.8 1.0 1.00 4.0
3.0 1.2 5.2 3.0 1.20 4.5
4.5 1.4 5.3 5.5 1.30 4.9
7.0 1.6 6.0 7.0 1.40 5.3
8.5 2.2 7.0 9.0 1.45 6.3
11.0 3.3 7.5 10.5 1.50 7.5
12.0 3.9 7.6 12.5 1.60 10.5
14.0 5.5 8.0 14.5 1.80 14.5
16.0 5.9 8.1 17.5 1.90 19.5
18.0 7.8 8.2 19.0 1.95 25.5
22.0 9.0 8.3
Figura 3.17: Curvas de filtracin del Ejemplo 3.7. a) Operacin limitada por la
ruptura y b) Operacin limitada por la cada de presin.
3.5. Sumario
3.6. Problemas
3.1. Escalamiento de filtracin. En la filtracin a nivel laboratorio de un
caldo para la recuperacin de gentamicina, la solucin present una viscosidad
de 1.2 cP y un contenido de slidos de 5 g/L. El rea de filtracin empleada fue
de 100 cm2 y el gradiente de presin de 1.8 m de agua. Los datos de filtracin
son los siguientes:
t (s) V (L)
10 0.60
20 0.78
30 0.95
40 1.10
o = 10.037 kg/m3
= 0.001 N s/m2
Marcos = 430 430 30 mm
Datos Clculos
P t V
3
(V + Vs )/A (t ts )/(V Vs )
2
N/m (s) m (m) s/m3
0.4 447 0.04 0.9 4609.3
0.7 1262 0.10 1.1 4484.4
1.1 1886 0.16 1.2 4757.1
1.3 2552 0.22 1.4 5244.8
1.5 3381 0.28 1.6 5642.5
1.5 3686 0.30
1.5 4043 0.32 1.7 6604.5
1.5 4793 0.36 1.8 6826.5
1.5 5652 0.40 1.9 7274.2
1.5 6610 0.44 2.0 7727.7
1.5 8680 0.52 2.2 8399.0
1.5 9256 0.54 2.3 8587.1
Se pide: Estimar a) y b) Rm
Resp. a) = 1.069 1011 m/kg; b) Rm = 6.61 1010 m1
rea = 89 cm2
P = 2.6 m de Hg
o = 0.34 g/100 cm3
t (s) V (L)
10 0.500
20 0.707
30 0.866
C 1n 1
= 0.5 1 + erf 1 (P ez ) 2
C0 2n 2
L
P ez =
DL
DL = DAB 0.707 + 55.5 (P ep )0.96
dp
P ep =
DAB
Propiedad Valor
Difusividad del soluto DAB = 1.5 109 m2 /s
Tamao promedio de partcula dp = 5.96 106 m
Resistencia especfica de la torta = 1.07 1011 m/kg
Porosidad de la torta L = 0.24
Resistencia del medio Rm = 6.5 1010 m1
Concentracin de slidos secos 0 = 105.2 kg/m3
Densidad de los slidos secos s = 2600 kg/m3
Densidad del agua H2 0 = 1000 kg/m3
Viscosidad del agua = 0.001 Ns/m2
Volumen del lquido en la suspensin Vs = 0.028 m3
filtrada para formar la torta
Se pide:
a) Estimar la razn de lavado n, utilizando la ecuacin (3.24).
b) Calcular el flujo de lavado, Q, utilizando la ecuacin (3.5) y considerando
que en el lavado el flujo se mantiene constante.
c) Estimar la velocidad intersiticial en el lecho.
d) Estimar la profundidad del lecho, L.
e) Obtener la expresin para la curva de lavado del sistema (C/C0 vs t)
utilizando el modelo de dispersin.
f) Graficar la curva de lavado del sistema.
g) Obtener la expresin de la curva de razn de lavado del sistema (r vs n).
h) Graficar la curva de razn de lavado del sistema.
Resp. a) n = 2; b) Q = 3.60 104 m3 /s; c) = 3 103 m/s; d) L = 2.
98 103 m; e) P ez = 9.94.
f) Pista: Utilizar la instruccin de MATLAB:
n
C
dn
Co
0
r =1
C
dn
Co
0
3.7. Bibliografa
Aiba, S.; Humphrey, A.E.; Mills, N.F. 1972. Biochemical Engineering. Acade-
mic Press. New York. 355-356.
Anderson, S.W.; Collins, M.; Muehl, M. 2009. Expanding Disposable Depth-
Filter Applications. GEN. 29, 1-4.
Brown, T.R. 1982. Designing batch pressure filters. Chem. Eng. 89, 58-63.
Choudhury, A.P.R.; Dahlstrom, D.A. 1957. Prediction of cake-washing results
with continuous filtration equipment. AICHE, J. 3, 433-438.
Cushing, R.; Lawler, D. 1998. Depth Filtration: Fundamental Investigation
through Three-Dimensional Trajectory Analysis. Environ. Sci. Technol.
32, 3793-3801.
EPA. 2003. Analytical Method for Turbidity Measurement Method 180.1
Gerstenberg, H.; Sitting, W. 1980. Recovery of fermentation products. Chem.
Eng. Technol. 52, 19-31.
Holdich, R.G. 2003. Solidliquid separation equipment selection and mod-
elling. Minerals Engineering 16, 7583.
Jornitz, M.W.; Meltzer, T.H. 2008. Filtration and Purification in the Bio-
pharmaceutical Industry. Vol 174. 2da Ed. Informa Healthare. New york.
NY.
Lutz, H.; Blanchard, M.; Abbott, I.; Parampalli, A.; Setiabudi, G.; Chiruvolu,
V.; Noguchi, M. 2009. Considerations for scaling-up depth filtration of
harvested cell culture fluid. Biopharm. 22, 58-63.
Marecek, N. 1980. Optimizing of performance of the leaf filters. Filtr. Separa-
tion. 17,34-50.
Martin, R.E.; Bouwer, E.J.; Hanna, L.M. 1992. Application of clean-bed filtra-
tion theory to bacterial deposition in porous media. Envlron. Scl. Technol.
26, 1053-1058.
Moir, D.N. 1982. Selecting batch pressure filters. Chem. Eng. 89, 47-57.
Olivier. J.; Vaxelaire, J.; Vorobiev, E. 2007. Modelling of Cake Filtration: An
overview. Sep. Sci. Tech., 42, 16671700.
Petrides, D.P.; Cooney, C.L.; Evans, L.B. 1989. An intoducction to biochemi-
cal process design. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology.
Shuler, M.L. (Ed.). AIChE. New York. 351-391.
Rajniak, P.; Tsinontides, S.C.; Pham, D.; Hunke, W.A.; Reynolds, S.D.; Chern,
R.T. 2008. Sterilizing filtrationPrinciples and practice for successful
scale-up to manufacturing. J. Memb. Sc. 325, 223237.
3.7. BIBLIOGRAFA 109
Rees, R.H.; Cain, C.W. 1990. Let Diatomite Enhance Your Filtration. Chem.
Eng. 97, 76-79.
Roush, D.J.; Lu, Y. 2008. Advances in primary recovery: Centrifugation and
membrane technology. Biotechnol. Prog. 24, 488-495.
Svarovsky, L. 2000. Solid-liquid separations. Butterworth Heinemann. 4th Edi-
tion. Woburn Ma.
Tiller, F.M. 1974. Bench-Scale design of SLS systems. Chem. Eng. 81, 117-119.
van Reis, R.; Zydne, A. 2007. Bioprocess membrane technology. J. Memb. Sc.
297, 1650.
Captulo 4
Centrifugacin
4.1. Introduccin
La separacin de substancias de diferente densidad mediante movimiento
giratorio se conoce como centrifugacin.
La centrifugacin es una de las principales operaciones utilizada para la se-
paracin de clulas de caldos biolgicos (Roush y Lu, 2008; Wiesmann y Bider,
1982), especialmente cuando los caldos no son fcilmente filtrables, o la adi-
cin de ayudas-filtro no es recomendable por razones de costos o de produccin
excesiva de desechos contaminantes.
La centrifugacin tambin es empleada en la remocin de desechos celulares
de caldos de clulas que han sido sujetas a rompimiento, en la separacin de
precipitados proteicos (Bell et al., 1983) y para la recuperacin de productos
insolubles como los cuerpos de inclusin. Estos ltimos debido a su tamao
(0.3 1 m) y alta densidad (1.3 1.5 g/cm3 ) pueden ser separados de los
restos celulares por centrifugacin en dos o tres pasos, utilizando agua de lavado
y detergentes para facilitar la separacin.
Cuando se utiliza la centrifugacin, la diferencia entre la densidad de los
slidos (clulas o partculas) y el caldo, se incrementa por la accin de las fuerzas
centrfugas que se generan por las altas velocidades de rotacin de los equipos
que se emplean (Bjurstrom, 1985).
En la seccin 4.2 de este captulo se presentan los fundamentos de la cen-
trifugacin que se derivan de la Ley de Stokes, la cual describe los aspectos
bsicos del movimiento de un slido en un lquido cuando existe un gradiente
de densidad.
Existen diferentes tipos de centrfugas que se utilizan tanto a nivel laborato-
rio como a escala industrial y su aplicacin depende de varios factores anlogos
a los mencionados para la filtracin en la Tabla 3.1. En la seccin 4.3 se hace
una descripcin general de estos equipos. La seccin 4.4 se centra en los aspectos
bsicos del diseo y seleccin de centrfugas.
112 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
La Ley de Stokes.
El factor G.
Figura 4.1: Factor de friccin para esferas. Fuente: Bird et al., 1964. Reproducida
c
con el p erm iso de Revert S.A. Copyright 1964. Todos los derechos reservados.
4.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIN 113
La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una partcula en
un medio continuo sta se acelera (F = ma), hasta que alcanza una velocidad a
la cual la resistencia a su movimiento iguala a la fuerza aplicada (mp d/dt = 0).
En una sedimentacin libre la fuerza que acta sobre la partcula es la de la
gravedad, mientras que en una sedimentacin centrfuga la fuerza es la del campo
centrfugo.
Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partculas pueden agruparse
en la fuerza de flotacin descrita por el principio de Arqumides y la fuerza de
arrastre (resistencia de forma y de friccin) descrita por la Ley de Stokes. De
acuerdo a lo anterior, el balance de fuerzas para una partcula en equilibrio en
un medio continuo se expresa de la siguiente manera (Fig. 4.2):
d3p p a d3p L a
= + 3dp (4.1)
6 6
donde:
dp : Dimetro de la partcula.[L].
p : Densidad de la partcula.[M/L3 ].
a: Aceleracin. [L/t2 ].
d3p a
3dp = p L (4.2)
6
La velocidad de sedimentacin de una partcula de acuerdo a la ecuacin
(4.2) es la siguiente:
d2p a
= (4.3)
18
donde: = p L
La Ley de Stokes implica que un proceso de sedimentacin puede ser mejora-
do incrementando el tamao de partcula o la diferencia de densidades, reducien-
do la viscosidad del medio o incrementando la aceleracin de las partculas. Esta
Ley ha sido desarrollada para partculas esfricas, que se mueven uniformemente
en fluidos newtonianos y que no se obstruyen entre s.
Se puede expresar la velocidad de sedimentacin de una partcula, en dos
casos lmites de inters: a) sedimentacin por accin de la gravedad y b) sedi-
mentacin por accin de una fuerza centrfuga.
d2p g
g = (4.4)
18
donde:
d2p 2 r
= (4.5)
18
donde:
d3p a d2p 1 24
= L 2
dp L
6 4 2
d3p a
= AKf
6
d3p a
f =
6AK
4.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIN 117
donde:
24
f= Re < 0.1
Re
Para valores mayores del nmero de Reynolds se tiene:
2
24
f= +0.5407 Re < 6000
Re
Figura 4.5: Centrifugacin diferencial. Adaptada de: Bailey y Ollis, 1986. Re-
c
producida con el p erm iso de M c Graw Hill Inc. Copyright 1986. Todos los derechos reservados.
Solucin:
De acuerdo a la ecuacin (4.5) y a la geometra del sistema, la velocidad de
sedimentacin est dada por:
dr d2p 2 r
r = =
dt 18
La expresin anterior puede ser utilizada para el clculo del tiempo de sedi-
mentacin integrando entre los lmites:
t=0 r = R1
t=t r = R2
una vez realizada la integracin se obtiene la expresin siguiente:
18 R2
t= 2 2
ln
dp R1
Aplicando la expresin anterior a cada partcula, (al ncleo N y a la mito-
condia M) se pueden obtener las siguientes proporciones:
4.2. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIN 119
tN (d2p )M
=
tM (d2p )N
(1 m)2 tM
tN = (tM ) =
(5 m)2 25
18 R2
t = ln
dp 2
2 R1
g
10
18 0.01 ln
cm s
3
t = 2
g 400 2
(10 10 ) cm (1.05 1)
4 2 2 s2
cm3 60
t = 2, 471 s
4.2.4. Factor G
En la caracterizacin y escalamiento de centrfugas frecuentemente se emplea
el factor G, que es una medida relativa de la velocidad de sedimentacin de una
partcula en un campo centrfugo con respecto a su velocidad de sedimentacin
en el campo gravitacional. De acuerdo a lo anterior mediante las ecuaciones
(4.4) y (4.5) se obtiene:
2r
G= = (4.6)
g g
G puede ser referida a un radio caracterstico el cual generalmente es el radio
exterior del campo centrfugo. Esto permite desarrollar expresiones prcticas
para estimar la G como la siguiente:
120 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
G = 5.6 107 N 2 D
donde N est en rpm, el dimetro del tazn de la centrfuga (o punto de inters)
D en mm y G es adimensional.
Centrfuga tubular
Las Centrfugas Tubulares (CT) consisten bsicamente de un tubo vertical
esbelto que gira a altas velocidades por la accin de un motor elctrico, o una
turbina de aire o vapor (Fig. 4.6a).
4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACIN 121
Figura 4.7: Centrugas de tazn triple. Fuente: Svarousky, 1979. Reproducida con
c
el perm iso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1979. Todos los derechos reservados.
Las centrfugas de cmara mltiple (Fig. 4.8) fueron creadas para incre-
mentar la capacidad de manejo de slidos de las centrfugas tubulares. Estas
centrfugas consisten de una serie de tazones concntricos con deflectores que
provocan un flujo en serie de la suspensin. Su operacin permite la clasificacin
de las partculas conforme pasan de una cmara a otra. El lquido claro se ob-
tiene por rebosamiento en la ltima cmara. Este arreglo permite un mayor
4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACIN 123
El dimetro de los equipos de cmara mltiple vara de 335 a 615 mm, con
velocidades de rotacin entre 5, 000 y 8, 400 rpm, produciendo campos entre
5, 000 y 9, 000 G, respectivamente. Los tipos ms comunes constan de 2 a 6
cmaras. La capacidad de manejo de slidos vara entre 2.5 y 60.0 L dependiendo
del material y el nmero de cmaras. La descarga de slidos y mantenimiento
de estos equipos es ms difcil que el de las centrfugas tubulares, ya que la
centrfuga tiene que ser desmantelada para sacar los slidos. Este tipo de equipo
no permite el lavado de la torta.
Centrfuga de discos
La centrfuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se monta un
conjunto de discos en forma de conos truncados, uno sobre otro. El rotor de la
centrfuga provoca el giro tanto de los discos como del tazn de la centrfuga
(Fig. 4.10).
Las centrfugas de discos son las ms utilizadas en BSL. Los discos constan
de bordos internos que permiten mantener pequeas separaciones entre ellos,
del orden de 0.5 a 2.0 mm. El ngulo que forman los conos con la vertical vara
entre 35 y 50 dependiendo de la aplicacin particular. Entre la pila de discos
y el tazn existe un espacio que permite la acumulacin de los slidos.
4.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACIN 125
Escalamiento de Centrfugas.
Diseo de Equipo de Filtracin Centrfuga.
Tiempo de residencia
En una centrfuga tubular la velocidad del fluido en el sentido axial est
dada por:
dz Q
z = = (4.7)
dt A
donde:
L tr
Q
dz = dt (4.9)
(R2o R12 )
0 0
donde:
(R2o R12 )L
tr = (4.10)
Q
dr d2p 2 r
r = = (4.11)
dt 18
en este caso, inicialmente la partcula se localiza en R1 y en el momento ts
alcanza la pared en Ro , de tal manera que:
130 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Ro ts
dr d2p 2
= dt (4.12)
r 18
R1 0
1/2
Ro2 + R12
R50 = (4.17)
2
La ecuacin (4.11) debe ser integrada para este caso con lmites nuevos para
expresarla en la forma siguiente:
50
Ro ts
dr d250 2
= dt (4.18)
r 18
R50 0
g Ro
50
ts = ln (4.20)
g 2 R2 + R2 1/2
o 1
2
La igualacin de las ecuaciones (4.10) y (4.20) permite obtener una expresin
para el flujo para este caso:
2 L Ro2 R12
Q50 = g (4.21)
g
Ro
ln
R2 + R2 1/2
o 1
2
donde Q50 es el flujo para sedimentar el 50 % de las partculas de dimetro d50
en una centrfuga tubular.
La ecuacin (4.21) puede ser expresada de otra forma considerando la si-
guiente igualdad:
2
2 Ro 1 Ro
ln 1/2
= ln 1/2
2 R +R
2 2 2 R +R
2 2
o 1 o 1
2 2
para obtener:
132 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
2
L R2 R21
Q50 = (2 g )
o 2
(4.22)
g 2Ro
ln
R2o + R12
Q = g
donde
2 L Ro2 R12
=
g Ro
ln
R1
o bien a partir de la ecuacin (4.22) de la siguiente manera:
Q50 % = 2 g (4.23)
donde:
2 L R2 R12
=
o 2
(4.24)
g 2Ro
ln
Ro2 + R21
La ecuacin (4.24) es la expresin bsica del concepto sigma, el cual es
una constante que contiene slo parmetros relacionados a la geometra de la
centrfuga y su velocidad angular (es independiente del tipo de caldo). Por otro
lado g se relaciona slo con las propiedades del caldo y es independiente del
tipo de centrfuga.
En la subseccin (4.4.2) se presenta para las centrfugas de discos un de-
sarrollo anlogo al efectuado para la centrfuga tubular, obtenindose tambin
una expresin para sigma. La aplicacin de este concepto a problemas de es-
calamiento se revisa en otra seccin.
kg m
(106 m)2 50 3 9.8 2
m s
g = kg
Ns ms
18 0.001 Ns
m2
m2
8 m 6 cm
g = 2.7 10 = 2.7 10
s s
Mediante ecuacin (4.15):
2
cm 2 20, 000
2.7 106 s2 (20 cm)
s 60
Q = cm
980 2
s
(2.2)2 (1.1)2 2
2.2 cm
ln
1.1
cm3 L
Q = 3.97 = 14.31
s h
b) Para el clculo del flujo a un corte del 50 % se utiliza la ecuacin (4.22),
sustituyendo valores se tiene:
134 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
2
6 cm 2 20, 000
2 2.7 10 s2 (20 cm)
s 60
Q50 = cm
980 2
s
(2.2)2 (1.1)2 2
2 (2.2)2 cm
ln
2.22 + 1.12
cm3 L
Q50 = 11.72 = 42.19
s h
por lo tanto:
L
Q50 42.19
= h = 2.94
Q L
14.31
h
Tambin puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.15) y (4.22) que:
Ro
2 ln
Q50 R1
=
Q 2R2o
ln
R2o + R12
.
Q50 = 2Q
c) Para facilitar los clculos se puede obtener el cociente de los flujos de cada
tipo de caldo empleando la ecuacin (4.15) y obtener:
d2R
QR
= 2R
QC dC
C
El flujo se alimenta de tal manera que fluye hacia arriba a travs de los
espacios de los discos. En el sentido angular se supone que el lquido gira a la
misma velocidad que los discos.
En el anlisis se supone que el flujo global Q se divide equitativamente entre
los espacios formados por todos los discos, de tal manera que el flujo en cada
espacio es Qn = Q/n, donde n es el nmero de espacios formados entre los
discos.
136 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
P d2 x
= 2 (4.25)
L dy
Esta expresin puede ser integrada dos veces entre los lmites:
a
Para y = , x = 0
2
a
Para y = , x = 0
2
y obtener la expresin:
2
P a2 2y
x = 1 (4.26)
8L a
P a3 r
Qn = (4.28)
6L
Combinando las ecuaciones (4.26) y (4.28) se tiene que:
2
3Qn 2y
x = 1 (4.29)
4ra a
dx
dtr = 2 (4.31)
3Q 2y
1
4nra a
dr 2r
= g (4.32)
dts g
por lo tanto:
gdr
dts = (4.33)
g 2 r
La condicin de diseo que establece que el tiempo de sedimentacin debe ser
menor o igual que el tiempo de residencia puede lograrse igualando las ecuaciones
(4.31) y (4.33) para obtener la expresin:
gdr dx
= 2 (4.34)
g 2 r 3Q 2y
1
4nra a
dy = cos dr
r = Ro xsen
con estas nuevas variables la ecuacin (4.34) se transforma en:
2
3 2y 2ng 2
1 dy = (Ro xsen )2 (cos dx) (4.35)
2a a Qg
a
Para x = 0 , y =
2
Ro R1 a
Para x = , y=
sen 2
obtenindose:
2n 2 3
Q = g (Ro R13 ) cot (4.36)
3g
La ecuacin anterior tambin puede ser expresada en funcin del parmetro
de la siguiente manera:
Q = g (4.37)
donde para este caso est definida por la expresin dentro del parntesis
cuadrado de la ecuacin (4.36).
Solucin:
2 g cm
0.8 104 cm (1.05 1.02) 980 2
g = cm 3 s
kg 103
g m
18 1.02 103 2
ms Kg 10 cm
6 cm
g = 1.02 10
s
en seguida se calcula de la ecuacin (4.36),
2
2 72 2 8400
= cm s2
3 980 2 60
s
(8.13 3.63 ) cm3 cot 38
= 7.39 107 cm2
cm
Q = 1.02 106 7.39 107 cm2
s
cm3 L
Q = 75.35 = 271
s h
4.4.3. Escalamiento
En el anlisis de la operacin de la sedimentacin centrfuga se han desa-
rrollado expresiones para el clculo del gasto manejable por una centrfuga de
una geometra particular. Este enfoque es debido a que los equipos disponibles
se construyen en tamaos especficos, de tal manera que gran parte del pro-
blema de separacin centrfuga se reduce a una seleccin del equipo ms que a
un diseo especfico para un trabajo particular. Por otro lado, las velocidades
de sedimentacin que se predicen con la Ley de Stokes pueden ser adecuadas
para el caso de las centrfugas tubulares, pero pueden resultar hasta dos veces
4.4. DISEO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIN 141
Tiempo equivalente
Este enfoque consiste en determinar el tiempo equivalente dado por el pro-
ducto Gt, donde G est dado por la ecuacin (4.6) y t es el tiempo necesario
para producir una centrifugacin aceptable, de tal manera que la igualdad:
G1 t1 = G2 t2 (4.39)
puede ser utilizada como un criterio de escalamiento. Los subndices 1 y 2 se
refieren a las escalas estudiadas.
Las pruebas de sedimentacin de las muestras se pueden realizar en el labo-
ratorio en una centrfuga de tubos o en una centrfuga de tazn. Las muestras
se hacen girar a velocidades especficas a diferentes tiempos hasta producir un
sobrenadante claro. El valor de Gt obtenido se usa para la seleccin de equipos
a escala industrial.
La consistencia de los slidos puede ser estudiada preliminarmente utilizando
una varilla de laboratorio sobre la torta despus de decantar el sobrenadante.
En la Tabla 4.1 se presentan valores de Gt caractersticos de algunas partculas
biolgicas.
Factor sigma
La expresin para calcular el factor Sigma de cada tipo de centrfuga es carac-
terstica de cada geometra particular (Axelsson, 1985). Esta rea caracterstica
o factor ha sido empleada para escalar equipos con similitud geomtrica. En
la Tabla 4.2 se presentan los rangos de los factores para diferentes tipos de
centrfugas.
El escalamiento utilizando el factor sigma supone que para una misma sus-
pensin, la velocidad de sedimentacin de las partculas es independiente de la
142 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Centrfuga (m2 )
Intermitente 20 - 200
Decantadora 150 - 2,500
Tubular 2,000 - 3,000
Discos 400 - 120,000
c
Reproducida con el p erm iso de McGraw-Hill Inc. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
( g )1 = (g )2
y utilizando la ecuacin (4.23) se obtiene:
Q150 Q2
= 50 (4.40)
1 2
Se debe recordar en este punto que la seleccin del equipo de centrifugacin
debe combinar la teora, la experimentacin directa con el material (incluyendo
pruebas a nivel piloto) y la experiencia (Moir, 1988).
En la Tabla 4.3 se presenta una gua general para la seleccin de centrfugas
sedimentadoras.
El tamao de partcula a que se refiere la Tabla 4.3 est basado en la sedi-
mentacin en agua de esferas de cuarzo de densidad relativa 2.65. Para calcular
el dimetro equivalente de las partculas de cuarzo, al de las partculas de inters
en una suspensin dada, se establece que las velocidades de sedimentacin son
iguales en ambos medios, obteniendo la siguiente expresin:
1/2
p L A d2p
dc = (4.41)
C A L
donde:
c
Reproducida con el permiso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
Solucin:
Q1 Q2
=
1 2
144 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
Gasto volumtrico Q
El gasto volumtrico a travs de la torta en una operacin de filtracin
centrfuga, est relacionado con la ecuacin de Darcy para medios porosos.
Debido a que la torta no es plana, el rea de filtrado vara con r, entonces la
ecuacin de Darcy debe expresarse en forma diferencial como:
dP
= o (4.42)
dr
L 2 2
P = Ro R12 (4.47)
2
2 L " 2
Ro R
2
1
Q= (4.48)
o Ro
ln
RT
t=0 RT = Ro
t=t RT = RT
se obtiene la siguiente solucin:
2
T RT2 Ro Ro
t= 1 2 ln (4.52)
2L 2 (Ro2 R12 ) RT RT
donde t es el tiempo necesario para obtener una torta de espesor (Ro RT ) .
De acuerdo a la ecuacin (4.52) el tiempo de filtrado es funcin de la resisten-
cia especfica de la torta entre otros parmetros. Debido a que la torta puede
4.5. SUMARIO 147
1/2
2 o V
RT = Ro
T "
g 3
1/2
0.02 1600 10 cm3
2
T R2T Ro Ro
t = 1 2 ln
2L 2 (Ro2 R21 ) RT RT
g 10 cm g
0.01 2.67 10 1.1 48.9 cm
2 2
cm s g cm3
t = 2
g 650 2
21 3 s2 (512 45.52 ) cm2
cm 60
2
51 51
1 2 ln
48.9 48.9
t = 8.6 min
4.5. Sumario
La centrifugacin se emplea para separar diversos tipos de slidos (clulas,
desechos, precipitados y cuerpos de inclusin) de caldos biolgicos. La teora de
148 CAPTULO 4. CENTRIFUGACIN
4.6. Problemas
4.1. Velocidad de sedimentacin. Una partcula de 5 m de dimetro
y 1, 100 kg/m3 de densidad, sedimenta en agua a 20 C con una viscosidad de
1.01 103 Ns/m2 y una densidad de 1,000 kg/m3 .
Se pide: Estimar la velocidad de sedimentacin cuando:
a) Sedimenta libremente.
b) Se localiza en un punto r = 0.15 m y gira a 3, 000 rpm.
Resp. a) 1.35 106 m/s y b) 2.04 103 m/s
iv) Separacin de los restos celulares del homogeneizado. Este paso debe ser
realizado en menos de 15 h para evitar degradacin del producto.
Se pide establecer:
a) El nmero de centrfugas con capacidad de 400 L/h de homogeneizado
para realizar el paso iv).
b) El tiempo necesario para el paso iv).
c) El tiempo necesario para realizar el paso i) con el mismo equipo.
d) De que otra forma se puede realizar este proceso.
Resp. a) 2; b) 11.25 h y c) 2.34 h
La centrfuga gira a 12, 000 rpm, tiene un radio externo Ro = 0.05 m y una
longitud L = 0.9 m.
La salida de la fase pesada en la centrfuga se localiza a una distancia radial
RB = 0.02 m. La salida de la fase ligera se localiza en RA = 0.022 m mediante
un arreglo que la coloca por encima de la fase ligera, de tal manera que la
interfase lquido-lquido se forma a una distancia Ri mayor que RA .
Se pide:
a) Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin generado
por la fase ligera al girar.
b) Desarrollar una expresin para obtener el gradiente de presin generado
por la fase pesada al girar.
c) Desarrollar una expresin para el clculo de la posicin de la interfase
suponiendo que los gradientes anteriores son iguales.
d) Calcular la posicin de la interfase.
Resp. d) 3.76 102 m
R1 5 cm
R0 25 cm
5000 rpm
Q 10 L/min
conc. celular 10 g/L
dimetro clulas 3 m
densidad clulas 1.03 g/cm3
viscosidad 1.1 cP
densidad del fluido 1.01 g/cm3
A nivel de produccin se requiere procesar 500 L/min del mismo tipo de cal-
do. La centrfuga que ser utilizada operar a 3500 rpm y tendr una geometra
similar a la centrfuga piloto, es decir el mismo nmero de discos y el mismo
ngulo de rotacin. Los radios de los discos, R0 y R1 , de la centrfuga grande
sern el doble de los utilizados en la centrfuga de nivel piloto.
Se pide:
Calcular el nmero de centrfugas necesarias a nivel de produccin.
Resp. 13
4.7. Bibliografa
Amirante, R.; Catalano, P. 2000. Fluid dynamic analysis of the solid-liquid
separation process by centrifugation. J. Agric. Engng. Res. 77, 193-201.
Ambler, C.M. 1961. Centrifugation equipment: Theory. Ind. Eng. Chem. 53,
6, 429-433.
Bell, D.J.; Hoare, M.; Dunnill, P. 1983. The formation of protein precipitates
and their centrifugal recovery. En: Advances in Biochemical Enginnering
/Biotechnology. Vol. 26, Downstream Processing. Springer-Verlag. New
York. 1-72.
Bird, R.B.; Stewart, W.E.; Lightfoot, E.N. 2002. Transport Phenomena. John
Wiley and Sons. New, York. 2da Edicin. p. 187.
Boychyn, M.; Doyle, W.; Bulmer, M.; J. More, J.; Hoare, M. 2000. Laboratory
scaledown of protein purification processes involving fractional precipita-
tion and centrifugal recovery. Biotech. Bioeng. 69, 2-10.
Jacobs, L.J.; Penney, W.R. 1987. Phase segregation. En: Handbook of Sepa-
ration Process Technology. Rousseau, R.W. (Ed.). John Wiley and Sons.
New York. 3, 129-196.
Rompimiento de Clulas
5.1. Introduccin
El rompimiento celular es una operacin unitaria de gran importancia in-
dustrial. Algunos de los productos biotecnolgicos producidos a escala industrial
son extracelulares y no requieren ser extrados de la clula. Cuando el producto
de inters es intracelular (Tabla 5.1), una vez realizada la cosecha de clulas
una operacin necesaria para la liberacin del producto es el rompimiento de la
clula misma (Petrides et al., 1989).
c
Reproducida con el p erm iso de Nature Publishing Co. Copyright 1992. Todos los derechos reser-
vados.
secrecin celular del producto de inters. Esto hace necesario contar con tcni-
cas de rompimiento celular eficientes y selectivas en la produccin de protena
intracelular.
La tcnica de rompimiento celular seleccionada determina el tamao de los
desechos resultantes y la influencia que stos tendrn en las operaciones que se
utilicen para su separacin. Asimismo, la tcnica es funcin del tipo de microor-
ganismo que contiene al producto de inters, particularmente en relacin a su
estructura externa (Asenjo, 1990).
En este captulo, en la seccin 5.2 se presentan los fundamentos de la ope-
racin de rompimiento. La seccin 5.3 se centra en los equipos de rompimiento
que se utilizan a nivel industrial. El diseo de estos equipos se discute en la
seccin 5.4.
5.2. Fundamentos
La recuperacin ptima de productos intracelulares requiere del conocimien-
to de la estructura de las capas externas que protegen a las clulas: la membrana
y la pared celular. Requiere adems del conocimiento de los sistemas que per-
miten a ciertas clulas secretar los productos de inters en forma activa, evitando
con sto la necesidad de romper la clula para recuperar el producto.
Existen varios mtodos para la recuperacin de productos intracelulares, los
ms drsticos involucran el rompimiento completo de la clula. Los mtodos de
recuperacin menos severos involucran una alteracin qumica de las cubiertas
celulares o permeabilizacin que facilita la salida del producto.
Esta seccin se centra en cuatro aspectos fundamentales para el anlisis de
la operacin de rompimiento:
Mtodos qumicos
Choque osmtico El rompimiento de clulas por medio de choque osmtico
se fundamenta en el conocimiento del fenmeno de smosis. Cuando una mem-
5.2. FUNDAMENTOS 161
c
Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright 1994. Todos los derechos reservados.
El potencial qumico externo del agua pura debe incluir un valor de referencia
y una correccin en la presin. El potencial qumico interno involucra un valor de
referencia, la correccin en la presin y una correccin para la concentracin de
la solucin; de tal manera que para una solucin ideal incompresible, la ecuacin
(5.1) se expresa como:
0H 2 O + V H2 O Pe = 0H 2 O + V H 2 O Pi + RT ln(1 x1 ) (5.2)
donde:
y finalmente:
Pe Pi = RT c1 (5.3)
Mtodos mecnicos
En el rompimiento de clulas a gran escala se han preferido los mtodos
mecnicos. Las tcnicas empleadas son: la molienda hmeda en molinos de perlas
agitados a alta velocidad (esfuerzo de corte slido) y la homogeneizacin a alta
presin (esfuerzo de corte lquido) (Bjustrom, 1985; Kula y Schtte, 1987).
El equipo que se utiliza en estas tcnicas originalmente fue diseado para
otros usos. El uso del molino de perlas se origin en la industria de la pintura
por la necesidad de obtener mezclas homogneas de los pigmentos constituyentes
de la pintura. El uso del homogeneizador se origin en la industria alimenticia,
particularmente en la homogeneizacin de leche y productos lcteos (obviamente
la ruptura celular no es una homogeneizacin). Estos equipos han sido adaptados
para utilizarse en la desintegracin celular.
La desintegracin celular no es una tarea fcil si se considera la alta re-
sistencia mecnica de las paredes celulares y el tamao tan pequeo de los
microorganismos (1 10 m). Para poder alcanzar rendimientos altos, esto es,
obtener un grado de desintegracin celular mayor que 90 %, con frecuencia se
requieren dos o tres pasos tanto en el homogeneizador como en el molino.
El paso repetido de la suspensin celular a travs de los equipos de rompimien-
to produce una distribucin amplia del tamao de los residuos de la pared celu-
lar, extendindose hasta por abajo de las 0.3 m. En esta operacin es impor-
tante controlar el tamao de los desechos celulares debido a que la separacin
slido-lquido posterior depende del tamao de las partculas.
Microfluidizadores.
168 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
Parmetros operacionales
El molino de perlas est caracterizado por un gran nmero de parmetros
operacionales (Kula y Schtte, 1987). Los ms importantes para la desinte-
170 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
Parmetros Operacionales
Velocidad del agitador
Velocidad de alimentacin de la suspensin celular
Diseo del agitador
Tamao de las perlas de vidrio
Carga de las perlas de vidrio
Concentracin celular
Temperatura
c
Reproducida con el permiso del American Institute of Chem ical Engineers. Copyright 1987
AIChE. Todos los derechos reservados.
Figura 5.9: Efecto de la geometra del tipo de agitador sobre el tiempo de re-
sidencia, a un flujo de alimentacin de 180 L/h. (+) de postes, (o) de discos
excntricos y () de discos dobles. Fuente: Kula y Schtte, 1987. Reproducida
c
con el permiso del Am erican Institute of Chemical Engineers. Copyright 1987 AIChE. Todos los
derechos reservados.
Carga de perlas La cantidad de perlas que debe ser cargada al molino de-
pende del tipo de clulas y del tamao de las perlas. Una carga baja de perlas
produce una eficiencia baja, mientras que una carga alta genera mayor consumo
de potencia y libera ms calor.
Empricamente se ha determinado que la carga ptima de un molino flucta
entre el 80 y 90 %. La carga recomendada para perlas de 0.5 mm y 1.0 mm es
de 85 % y 80 %, respectivamente.
La expresin para calcular la carga de perlas de un molino es la siguiente:
Vp
Carga = (5.5)
Vc
donde:
Vp
0.8 =
Vc
la fraccin vaca est dada por:
Parmetros operacionales
En la Tabla 5.4 se presentan los parmetros operacionales que tienen in-
fluencia en el rompimiento celular en el homogeneizador de alta presin (Kula y
Schtte, 1987). Como puede observarse el nmero de parmetros es menor que
los correspondientes al molino de perlas lo que facilita la optimizacin de este
tipo de procesos.
c
Reproducida con el p erm iso del Am erican Institute of Chem ical Engineers. Copyright 1987
AIChE. Todos los derechos reservados.
en un solo paso. Se puede observar que a 55 MPa hay tres veces ms enzima en
la fraccin libre de clulas, que a 30 MPa. Sin embargo, la enzima liberada en
un solo paso representa solamente cerca del 45 % de la cantidad total presente
en la suspensin.
5.3.3. Microfluidizador
El microfluidizador es un homogeneizador de alta presin que tiene un meca-
nismo de rompimiento celular diferente al del homogeneizador Manton-Gaulin.
Su mecanismo de rompimiento utiliza una bomba de alta presin manejada
con aire y una cmara especial de rompimiento conectada a un dispositivo de
contrapresin, como se muestra en la Figura 5.12.
La suspensin celular se divide en dos corrientes hacindola pasar a presin
a travs de dos microcanales de seccin transversal de 2 100 m. Seguida-
mente las corrientes son impactadas a alta velocidad y mezcladas en una pared
estacionaria de la cmara de rompimiento. Mediante este mecanismo la energa
de entrada se disipa casi instantneamente producindose la ruptura celular.
Los lmites de operacin del microfluidizador estn dados por: la presin de
aire requerida para manejar la bomba, las propiedades fisicoqumicas del lquido
bombeado y la presin mxima de trabajo permitida que es de 140 MPa.
Alguna ventajas que presenta el microfluidizador en comparacin con el ho-
mogeneizador Manton-Gaulin (Sauer et al., 1989) son las siguientes:
a) Es muy compacto, se puede montar sobre una charola de acero inoxidable
de 30 35 cm.
b) Permite un mayor enfriamiento del sistema: Adicionalmente a los ser-
pentines de enfriamiento que tambin presenta el Manton-Gaulin, la cmara de
rompimiento puede colocarse en un bao de hielo.
5.3. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 179
Parmetros operacionales
A continuacin se describe el efecto de la temperatura, del tamao de los
restos celulares y de la concentracin celular en el proceso de ruptura utilizando
un microfluidizador.
R t
dR
=k dt (5.7)
Rm R
0 0
Se pide calcular:
a) La constante cintica para la liberacin de protena.
b) La constante cintica para la liberacin de enzima.
Solucin:
Las constantes cinticas pueden ser obtenidas mediante el empleo de las
ecuaciones (5.8) y (5.9). Los clculos necesarios son los siguientes:
Rm Am
Tiempo (s) ln ln
Rm R Am A
00 0.0000 0.0000
15 0.1081 0.0979
30 0.2421 0.1883
45 0.2910 0.2877
60 0.4193 0.3870
k = 6.984 103 s1
b) De igual manera, para la liberacin de enzima la constante es:
k = 6.412 103 s1
Operacin continua
Durante la operacin continua del molino de perlas, la suspensin celular a
tratar es alimentada continuamente al molino en uno de sus extremos y retirada
continuamente en el extremo opuesto.
En el diseo de los molinos de perlas es necesario considerar el grado de
dispersin de los tiempos de residencia de las clulas en el molino. A diferencia
de la operacin por lotes, en una operacin continua el tiempo de residencia
vara para las diferentes clulas de la suspensin, generndose una distribucin
de tiempos de residencia de la poblacin celular. El tiempo de residencia medio
t de la distribucin de tiempos de residencia es diferente al tiempo de residencia
ideal tR dado por:
184 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
VM
tR =
F
donde:
VM dCN
= F (CN1 CN ) (5.10)
N dt
donde:
tF t
= =
VM tR
la ecuacin (5.10) puede expresarse como:
dCN
= N (CN1 CN ) (5.11)
d
5.4. DISEO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 185
<0 CN = 0 N = 1, 2, 3, ..N
=0 C1 = N C0
>0 CF = 0
C1
dC1
= N d (5.13)
C1
NCo o
CN N N N1
E() = = exp(N ) (5.16)
C0 (N 1)!
En los estudios de mezclado E() es una medida de la distribucin de tiempos
de residencia del fluido dentro del recipiente (Levenspiel, 1972).
La aplicacin prctica del desarrollo anterior puede visualizarse derivando la
ecuacin (5.16) respecto a e igualando el resultado a cero para obtener:
186 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
1
N= (5.17)
(1 max )
donde max es el tiempo adimensional al cual E es mxima. De tal manera que
el nmero de etapas a que equivale el grado de mezclado de un molino, puede
ser determinado a partir de los datos experimentales de concentracin contra
tiempo que resultan al aplicar un pulso de trazador.
Figura 5.15: Programa para obtener las curvas de respuesta del Ejemplo 5.3.
Puede observarse en la Figura 5.16 que entre mayor sea el nmero de etapas,
el sistema presenta menor dispersin del pulso.
VM dR1 VM
= F R1 + k(Rm R1 ) (5.18)
N dt N
donde:
tF
= (5.19)
N VM
y obtener,
dR1 kVM
= R1 + (Rm R1 ) (5.20)
d NF
=0 R1 = 0
188 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
=1 R1 = R1
y obtener:
kVM
R1 = Rm N F (5.21)
kVM
1+
NF
Rm kVM
= 1+ (5.22)
Rm R1 NF
Continuando con este procedimiento puede ser demostrado que para la etapa
N se tiene:
N
Rm kVM
= 1+ (5.23)
Rm RN NF
Se pide:
a) Calcular el tiempo de residencia ideal.
b) Estimar el valor de C0 .
c) Obtener la grfica de E vs .
d) Estimar el nmero de etapas N .
e) Calcular la eficiencia por etapa si k = 1.93 102 s1
f) Calcular la eficiencia global de las N etapas.
Solucin:
16325
C0 = = 118.1 Unidades
138.24
c) En las columnas (4) y (5) de la tabla anterior aparecen los clculos del
tiempo adimensional y la concentracin adimensional E. La Figura 5.17 mues-
tra un programa MATLAB para obtener la curva correspondiente.
max = 0.72
1
N =
(1 max )
1
N =
(1 0.72)
N 4
RN
= 0.87
Rm
dR
= k (Rm R) (5.24)
dN
donde:
N =0 R=0
N =N R=R
obtenindose la ecuacin:
Rm
ln =k N (5.25)
Rm R
Se ha determinado experimentalmente que la constante k tiene una depen-
dencia con la presin dada por:
k = k P a (5.26)
donde:
Microfluidizador
En el caso del microfluidizador la cintica de rompimiento presenta una cierta
dependencia no lineal con el nmero de pasos expresada mediante la ecuacin:
Rm
ln = k P a N b (5.28)
Rm R
donde b es un exponente que vara con el tipo de clula y toma valores entre
0.28 y 1.00 (Sauer et al., 1989).
* Actividad solubilizada
** Netzsch LM E 20
*** Gaulin M3
Adaptada de: Kula y Schtte, 1987
c
Reproducida con el permiso del American Institute of Chem ical Engineers. Copyright 1987
AIChE. Todos los derechos reservados.
1 63.0 0.994
2 79.0 1.560
3 88.0 2.120
5 96.0 3.219
10 99.9 6.908
Se pide:
a) Estimar el valor de la constante cintica de rompimiento considerando
que para este caso a = 2.2 y b = 1.
b) Estimar el nmero de pasos para liberar el 93 % de protena en este
proceso.
Solucin:
a) De acuerdo con la ecuacin (5.28) el grado de rompimiento para este caso
puede ser expresado como:
5.4. DISEO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 195
c
Reproducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1990. Todos los derechos reser-
vados.
Rm
ln = k P 2.2 N
Rm R
de tal manera que de la pendiente de la grfica de ln[Rm /(Rm R)] contra N
es posible estimar k . Los clculos necesarios se muestran en la columna (3) de
la tabla anterior. Mediante un ajuste por mnimos cuadrados de estos datos se
obtiene:
k P 2.2 = 0.688
y para P = 60 MPa,
1
ln
1.00 0.93
N= = 3.88 pasos (Se necesitan 4 pasos de molienda.)
0.000084 602.2
196 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
5.5. Sumario
El rompimiento celular es una operacin necesaria cuando el producto de
inters se localiza al interior de la clula. Existen varios mtodos para efectuar
esta operacin. A nivel industrial se emplean principalmente los molinos de
perlas agitados y los homogeneizadores de alta presin. El diseo de los molinos
est basado en ecuaciones empricas y en experimentos piloto.
5.6. PROBLEMAS 197
5.6. Problemas
5.1. Rompimiento celular en molino de perlas. En estudios de libe-
racin de protena intracelular en funcin de la velocidad del agitador empleando
un molino de perlas tipo Netzsch LME 4, con perlas de dimetro entre 0.55 y 0.85
mm , se utiliz una suspensin celular de concentracin de 50 % (peso/volumen),
un flujo de alimentacin de 50 L/h y una carga de perlas del 85 %. Bajo estas
condiciones se obtuvieron los siguientes datos:
Protena
liberada
rpm (mg/mL)
1200 15.88
1500 22.35
1750 22.90
2000 22.94
2250 23.00
Se pide:
a) Estimar la velocidad ptima para el agitador.
b) Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para velocidades su-
periores a la ptima.
Resp. a) 1500 rpm
Agitador 1 Agitador 2
Tiempo log[Rm /(Rm R)] Tiempo log[Rm /(Rm R)]
de residencia de residencia
(min) (min)
3 0.037 3 0.060
5 0.090 5 0.150
10 0.160 10 0.225
15 0.225 15 0.325
20 0.300 20 0.425
25 0.365 25 0.525
30 0.437 30 0.650
Se pide:
a) Estimar la constante cintica k para cada tipo de agitador.
b. Calcular el tiempo para el cual se obtiene el 80 % de rompimiento con
cada tipo de agitador.
198 CAPTULO 5. ROMPIMIENTO DE CLULAS
Se pide:
a) Estimar los parmetros cinticos del homogeneizador.
b) Comparar la energa por unidad de masa de alimentacin necesaria para
cada condicin.
c) Qu condicin se recomienda para realizar la ruptura.
Resp. a) k = 3.56 104 MPa1.87 y b) 67 % de diferencia.
Se pide:
a) Si se desea minimizar la inversin de capital, establecer el nmero y tipo
de equipo que se requiere si se realizan 1, 2, 3, 4 o 5 pasos de rompimiento
(completar tabla siguiente).
Tiempo Protena
(min) (g)
1 400
2 990
3 1,200
4 1,100
5 1,410
6 1,425
7 1,475
8 1,473
9 1,483
10 1,490
Se pide:
Si la operacin del molino cuyo volumen libre es de 100 L se realiza en forma
continua, alimentando el caldo a un flujo F , cal es la mxima velocidad de
dilucin (D = F/V ) que puede ser utilizada que permita obtener un 95 % de
liberacin de protena?. Se pude suponer que las levaduras contienen el 50 % en
peso seco de protenas y el molino 4 etapas.
Resp. 0.117 min1 .
5.7. BIBLIOGRAFA 201
5.7. Bibliografa
Agerkvist, I.; Enfors, S. 1990. Characterization of E. coli cell desintegrates
from a bead mill and high pressure homogenizers. Biotech. Bioeng. 36,
1083-1089.
Andrews, B.A.; Huang, R. B.; Asenjo, J.A. 1990. Differential product release
from yeast cells by selective enzymatic lysis. En: Separations for Biotech-
nology. Pyle, D. L. (Ed.). Elsevier Applied Science. England. 21-28.
Asenjo, J.A. 1990. Cell disruption and removal of insolubles. En: Separations
for Biotechnology. Pyle, D.L. (Ed.). Elsevier Applied Science. England.
11-20.
Datar, R.V.; Cartwright, T.; Rosen, C. 1993. Process economics of animal cell
and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasminogen
activator. Bio/Technology. 11, 349-357.
Harrison, S.T.; Dennis, J.S.; Chase, H. 1990. The effect of culture history on
the disruption of alcaligenes eutrophus by High Pressure Homogenisation.
En: Separations for Biotechnology. Pyle, D. L. (Ed.). Elsevier Applied
Science. England. 38-47.
Mayerhoff, Z.D.V.L.; Franco, T.T.; Roberto, I.C. 2008. A study of cell dis-
ruption of Candida mogii by glass bead mill for the recovery of xylose
reductase. Sep. Purif. Technol. 63, 706709.
Naglak, T.J.; Wang, H.Y. 1990. Protein release from the yeast Ichia pastoris
by chemical permeabilization: Comparison to mechanical disruption and
enzymatic Lysis. En: Separations for Biotechnology. Pyle, D. L.(Ed.). El-
sevier Applied Science. England. 55-64.
Ramanan, R.N.; Ling, T.C.; Ariff, A.B. 2008. The Performance of a glass bead
shaking technique for the disruption of Escherichia coli cells. Biotech.
Bioprocess Eng. 13, 613-623.
Ramanan, R.N.; Tey, B.T.; Ling, T.C. ; Ariff, A.B. 2009. Classification of pres-
sure range based on the characterization of Escherichia coli cell disruption
in high pressure homogenizer. A. J. Biochem. Biotech. 5, 21-29.
Sauer, T.; Robinson, C.; Glick, B. 1989. Disruption of native and recombinant
E. coli in a high-pressure homogenizer. Biotech. Bioeng. 33, 1330-1342.
Schtte, H.; Kula, M.R. 1990. Bead mill disruption. En: Separations Processes
in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker. New York. 5, 107-
141.
Wang, D.I.C. 1988. Biotechnology: Status and Perspectives. AIChE. 84, 1-21.
Zaragoza, A.; Aranda, F.J.; Espuny, M.J. Teruel, J.A.; Marques, A.; Manresa,
A.; Ortiz, A. 2009. Mechanism of membrane permeabilization by a bacte-
rial trehalose lipid biosurfactant produced by Rhodococcus sp. Langmuir.
25, 78927898.
Parte III
Extraccin
6.1. Introduccin
La extraccin lquido-lquido (E L-L) es una operacin que permite la re-
cuperacin de un soluto de una solucin mediante su mezcla con un solvente.
El solvente de extraccin debe ser insoluble o soluble en grado limitado en la
solucin que se va a extraer y el soluto a extraer debe presentar una elevada
afinidad por el solvente de extraccin. La extraccin lquido-lquido se realiza
bsicamente en dos pasos (Fig. 6.1): a) mezcla ntima del solvente de extraccin
con la solucin a procesar y b) separacin de la mezcla en dos fases lquidas
inmiscibles.
G0 = RT ln Kp (6.6)
donde G0 es el cambio en energa libre en el estado estndar. El logartmo
natural del coeficiente de particin Kp es proporcional a la diferencia de los
potenciales qumicos en los estados estndar de las fases puras.
En la Tabla 6.1 se muestran los valores del coeficiente de particin Kp para
algunos solutos de inters en sistemas especficos.
c
Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reser-
vados.
Cambios en el solvente
Lo primero que puede hacerse para mejorar un sistema de extraccin es
cambiar el solvente de extraccin, esto es, elegir uno cuyo potencial qumico en el
estado estndar est ms prximo a 0 (R). Desafortunadamente esto no es fcil
de lograr debido a que la teora termodinmica no puede predecir con seguridad
los potenciales qumicos para determinar el mejor solvente. Sin embargo, es
posible utilizar enfoques aproximados para el clculo de coeficientes de particin,
basados en la estimacin de 0 (E) utilizando parmetros de solubilidad. De
acuerdo con este enfoque, el coeficiente de particin Kp dado por la ecuacin
(6.4) puede ser expresado como:
VR ( A R )2 VE ( A E )2
ln Kp = (6.7)
RT VA
donde V son los volmenes molares parciales del solvente pesado R, el solvente
ligero E y el soluto A, respectivamente. son los parmetros de solubilidad
correspondientes.
El grado de disolucin de slidos en lquidos vara considerablemente con
la naturaleza del slido y del lquido, la temperatura y en grado menor con
la presin. En todos los casos el lmite de solubilidad es la saturacin. En un
sistema de un solvente y un soluto particular, la concentracin de saturacin a
una temperatura y presin dadas es constante y no depende de la manera en
que se prepara la solucin.
La influencia de la temperatura sobre la solubilidad de un soluto en un
solvente particular es generalmente muy pronunciada, debido a que la mayora de
las sustancias absorben calor al disolverse y son ms solubles a una temperatura
elevada.
Para estimar el parmetro de solubilidad del soluto de inters A , es nece-
sario realizar dos extracciones con diferente solvente cada una de ellas y cuyas
solubilidades sean conocidas. Una vez determinado A se pueden estimar los
coeficientes de particin para nuevos solventes a partir de los valores i conoci-
dos. Estas son slo estimaciones que pueden servir de gua para nuevos experi-
mentos. En la Tabla 6.2 se muestran los parmetros de solubilidad para algunos
solventes.
Cambios en el soluto
Cuando no es factible cambiar el solvente para mejorar una extraccin ya
sea por razones econmicas o tcnicas, entonces es necesario ver la posibilidad
de realizar cambios en el soluto. Dado que el soluto es el producto que se de-
sea obtener mediante la extraccin, los posibles cambios deben ser de carcter
reversible.
esta ionicidad sin alterar el soluto, entonces la unin del soluto a este material
permitir aumentar la solubilidad del soluto en el solvente de extraccin.
Los cambios a solutos empleando contraiones se basan en el hecho de que un
soluto que es inico en el agua, formar un par-in sin carga neta en un solvente
orgnico.
Esta formacin de par-in se puede ejemplificar cuando en una solucin
acuosa de cloruro de tetrabutilamonio se extrae el catin utilizando cloroformo:
N(C4 H9 )+4 en cloroformo
Kp = = 1.3 (6.8)
N(C4 H9 )+4 en agua
c
Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reser-
vados.
RCOOH RCOO + H+
Cuando este cido dbil se distribuye entre dos fases, una orgnica E y una
acuosa R, el coeficiente de particin aparente agrupa las concentraciones de
la forma ionizada y no ionizada del cido en la fase acuosa. En este caso el
coeficiente de particin se expresa como:
[RCOOH]E
Kp = (6.11)
[RCOOH]R + [RCOO ]R
Ki
Kp = (6.12)
Ka
1 +
[H+ ]R
donde Ki es el coeficiente de particin intrnseco de las especies no ionizadas
definido por:
[RCOOH]E
Ki = (6.13)
[RCOOH]R
se sabe que pKa = log Ka , entonces si se combinan las ecuaciones (6.12) y
(6.13) se obtiene:
Ki
log10 1 = pH pKa (6.14)
Kp
Kp (A)
= (6.16)
Kp (B)
Ka (B)
1 +
Ki (A)
[H+ ]
=
Ki (B) Ka (A)
1 +
[H+ ]
c
Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reser-
vados.
1
[H + ] = = 1.16 103 M
antilog(2.935)
6.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIN 219
1.16 103 M
GD = 100 = 1.16 %
0.1 M
Kp (K) = 79.68
Kp (F ) = 100.0
se tiene entonces que:
220 CAPTULO 6. EXTRACCIN
Kp (F ) 100.0
1 = = = 1.26 a pH = 3
Kp (K) 79.68
2 = 2.67
Los resultados obtenidos para las dos penicilinas con los pHs respectivos se
muestran en la siguiente tabla:
Kp (F )
pH Kp (K) Kp (F ) =
Kp (K)
3.0 79.68 100.00 1.3
4.0 12.00 32.00 2.7
Selectividad.
Coeficiente de particin adecuado para el producto.
Grado de solubilidad.
Facilidad de recuperacin.
Densidad.
Tensin superficial.
Estabilidad para el soluto.
Inocuidad.
c
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
Diagramas de fases
Los sistemas de dos fases acuosas pueden ser caracterizados mediante diagra-
mas de fases nicos donde se grafican la composicin de las fases en el equilibrio.
Comnmente, los ejes se especifican en unidades de concentracin del polmero o
la sal en porcentaje en peso de mezcla. En la ordenada se grafica la concentracin
del polmero 1 (que origina la fase superior) y en la abscisa la concentracin
del polmero 2 o la sal (que origina la fase inferior).
La Figura 6.3 muestra un diagrama de fases para el sistema PEG 3400/Dex-
trano T-5000/Agua. La curva binodal caracterstica de estos sistemas pasa por
los puntos CPD.
Figura 6.3: Curva binodal para un sistema de dos fases acuosas inmiscibles PEG
3400/Dextrano T-5000/Agua. Adaptada de: Huddleston et al., 1991. Reproducida
c
con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright 1991. Todos los derechos reservados.
M = ME + MR (6.17)
el balance de PEG es:
MqM = ME qE + MR qR
combinando las dos ecuaciones anteriores se obtiene:
ME qM qR
= (6.18)
MR qE qM
ME BD
= (6.19)
MR BC
donde BD y BC son las longitudes de los segmentos entre los puntos respectivos.
Cuando la densidad de las fases es muy prxima, la relacin de volmenes
de las fases est dada por:
E BD
= (6.20)
R BC
donde E y R son los volmenes de la fase superior e inferior, respectivamente.
[P ]1
Kp = (6.23)
[P ]2
donde [P ]1 y [P ]2 son las concentraciones de soluto en las fases 1 y 2, respecti-
vamente. Esta ecuacin es equivalente a la ecuacin (6.4).
Debido a la dependencia del coeficiente de particin Kp de los factores arriba
mencionados, ste se puede expresar como el producto de varias contribuciones:
226 CAPTULO 6. EXTRACCIN
Figura 6.4: Factores que afectan al coeficiente de particin. Adaptada de: Hud-
dleston et al., 1991. Reproducida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1991.
c
Todos los derechos reservados.
Figura 6.5: Efecto del peso molecular de los componentes sobre el coeficiente
de particin. a) Tamao del soluto en un sistema PEG 6000-dextrano 500 y b)
Tamao de los polmeros sobre la particin de una enzima. Sistema 12 % PEG y
1 % Dextrano. Fuente: Baskir, 1989. Reproducida con el p erm iso de John Wiley and Sons.
c
Copyright 1989. Todos los derechos reservados.
entre las fases. sta resulta de las preferencias de los diferentes iones de la sal
por las diferentes fases lo que puede afectar fuertemente la particin de las
biomolculas cargadas .
* M -S M ezclador-Sedim entador
Figura 6.6 se muestran algunos de los equipos utilizados para este tipo de extrac-
cin. En la Figura 6.6(a) se muestra un mezclador sedimentador tpico donde
el mezclador o agitador est completamente separado del sedimentador. Las fa-
ses se alimentan al mezclador y posteriormente se separan en el sedimentador.
En la Figura 6.6(b) se muestra una combinacin de mezclador-sedimentador.
Los mezcladores sedimentadores pueden combinarse en serie para extraccin en
etapas mltiples o a contracorriente.
pender del flujo a ser procesado y de las propiedades fsicas de ambos lquidos.
Cuando la extraccin involucra reacciones qumicas el tiempo de contacto puede
ser muy importante. Algunos extractores de etapas mltiples como los Westfalia
y los Robatel emplean fuerzas centrfugas para separar las fases durante la ex-
traccin.
Extraccin continua.
Extraccin fraccionaria.
concentracin final del soluto puede ser obtenida en algunos casos en forma
analtica mediante el empleo de dos ecuaciones.
La primera de ellas es una relacin de equilibrio para las soluciones que
intervienen en el proceso y la segunda es un balance de masa para el soluto.
Cuando la relacin de equilibrio es lineal se tiene:
x = Ky (6.28)
donde:
x: Concentracin del soluto en la fase ligera E.
y: Concentracin del soluto en la fase pesada R.
K: Constante de equilibrio.
La ecuacin (6.28) es la ecuacin de una recta que pasa por el origen.
La segunda relacin es un balance de masa que establece que en el proceso
de extraccin:
Ro yA + Eo xo = Ry + Ex (6.29)
donde:
yA : Concentracin de soluto en la alimentacin o fase pesada.
y: Concentracin de soluto en el refinado, esto es, la concentracin del soluto
que permanece en la alimentacin despus de la extraccin.
xo : Concentracin inicial de soluto en el solvente de extraccin y general-
mente es igual cero.
x: Concentracin de soluto en el extracto al final de la operacin.
Las unidades de concentracin pueden estar en % en peso, fraccin mol o
masa/volumen (E y R en unidades consistentes). En este desarrollo se supone
que E y R son constantes.
Para encontrar una expresin para calcular la concentracin al final de la
extraccin o de equilibrio, se sustituye el valor de x dado por la ecuacin (6.28)
en la ecuacin (6.29). El valor para y se obtiene de manera similar. Esta com-
binacin de ecuaciones conduce a:
KyA
x= (6.30)
1 +F
yA
y= (6.31)
1 +F
donde F es el factor de extraccin y est dado por:
KE
F = (6.32)
R
Ro yA + Eo xo = Ry + Ex
como inicialmente en el solvente de extraccin la concentracin del producto es
cero, el balance de masa del soluto queda como:
Ro yA = Ry + Ex (a)
combinando la ecuacin anterior con la ecuacin de equilibrio x = Ky y supo-
niendo Ro = R, se obtiene la concentracin del soluto en el solvente de extraccin
en el equilibrio. Esta concentracin est dada por:
KyA KE
x= con F =
1 + F R
sustituyendo los datos del problema se tiene:
KE 20 L
F = = =2
R 10 L
la concentracin x es:
g
20 (10 )
x=
KyA
= L = 66.6 g
1 + F 1 + 2 L
y la fraccin extrada p es:
F 2
p= = = 0.666
1 + F 1 + 2
despus de la extraccin el porcentaje del producto en el extracto es de 66.6 %
y en el refinado es de 33.3 %. Si se desea extraer casi todo el producto se de-
bern realizar ms etapas de contacto entre las fases o aumentar el volumen del
solvente de extraccin.
Vo Co = xE + yR
combinando ambas expresiones se obtiene:
Vo y Vo
GC = =
xE + yR R(1 + F )
donde:
Kp E
F =
R
Vo + V = E + R
entonces,
E = Vo + V R
E = (3 103 + 1 104 5 105 ) m3 = 3.05 103 m3
3 103 m3
GC = = 58.57
(4 104 ) (3.05 103 m3 )
(5 105 m3 ) 1 +
5 105 m3
yR
p=
xE + yR
y en trminos del grado de concentracin:
R 5 105 m3
p = (GC) = (58.57) = 0.976
Vo 3 103 m3
x = f(y) (6.35)
De acuerdo con la Figura 6.11, la ecuacin para el balance de masa del soluto
(solvente libre de soluto) es:
Ro yA = Ry + Ex
consecuentemente:
R
x= (yA y) (6.36)
E
x2 = (0.001 M ) (y)
240 CAPTULO 6. EXTRACCIN
Ro yA + Eo xo = Ry + Ex
E
y= (xo x)
R
sustituyendo valores se obtiene:
y = 4.7(0.006 x)
y = 0.012 M
Ry (1.0 L) (0.012 M )
p= = = 0.43
Exo (4.7 L) (0.006 M )
En este esquema cada etapa est identificada por un nmero, iniciando con el
nmero 1 a la derecha. La solucin pesada Ro (alimentacin) entra a la cascada
por la parte inferior izquierda y el solvente puro o fase ligera Eo entra por la
parte superior derecha.
Las concentraciones de las fases a la salida de cada etapa son las correspon-
dientes al equilibrio. Por ejemplo, el lquido ligero que deja la primera etapa
tiene una concentracin de equilibrio x1 con y1 . El lquido pesado que deja la
segunda etapa tiene una concentracin de equilibrio y2 .
Dos mtodos son comnmente utilizados para analizar este tipo de opera-
ciones: a) el analtico y b) el grfico.
xn = Kyn (6.37)
6.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 243
Cuando las concentraciones de las corrientes de salida de cada etapa son las
de equilibrio y el solvente est libre de soluto xo = 0, las ecuaciones (6.37) y
(6.38) se combinan para obtener:
y2 = (1 + F ) (y1 ) (6.39)
como se mencion anteriormente F = KE/R es el factor de extraccin.
Para la segunda etapa el balance de masa es:
y3 = (1 + F ) (y2 ) F y1
combinando la ecuacin anterior con la ecuacin (6.39) se obtiene:
y3 = (1 + F + F 2 ) (y1 ) (6.41)
mediante este procedimiento se puede obtener una expresin para el clculo
de la concentracin de soluto en la fase pesada a la salida en funcin de la
concentracin a la entrada, el factor de extraccin y el nmero de etapas, de la
forma:
(F ) (F n 1)
p= (6.44)
F n+1 1
F (F n 1) 2 (23 1)
p= = = 0.93
F n+1 1 24 1
6.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 245
n+1
yn+1 F 1
=
y1 F 1
g
20 n+1
L = 5 1
g 5 1
0.1
L
n = 3.15 4
xn = f (yn ) (6.45)
450
xn = (yn+1 y1 ) = 12.2 yn+1 31.62 [mg/L]
37
la relacin de equilibrio para este caso est dada por:
xn = 57yn
L
(57)(37 )
F = h = 4.69
L
450
h
de tal manera que:
yn+1 (4.69)n+1 1
= 100 =
0.01 yn+1 4.69 1
rearreglando y tomando logaritmos se tiene:
ln (370) = (n + 1) ln (4.69)
por lo tanto
248 CAPTULO 6. EXTRACCIN
n = 2.8
se requieren tres etapas para esta extraccin lo que coincide con el resultado
obtenido por el mtodo grfico.
xn = Kyn
AX =B
donde:
(1 + F ) 1 0 0 0
..
F (1 + F ) 1 0 .
.. ..
0 F (1 + F ) 1 . .
A= .
. . . .. .. .. .. ..
. . . . . . .
.
.. . ..
F (1 + F ) 1 0
.. ..
. . F (1 + F ) 1
0 0 F (1 + F )
x1 F x0
x2 0
x3 0
X = ; B=
.. ..
. .
xn Kyn+1
Este sistema puede ser resuelto de varias formas. En la Figura 6.18a se
presenta un programa MATLAB para resolver el sistema.
n xn yn
1 13.3 0.67
2 40.0 2.00
3 93.3 4.67
p = 0.93
En la Figura 6.18b se muestra como vara el rendimiento con el nmero
de etapas para este sistema. Los rendimientos marginales son muy pequeos
despus de la etapa 3, para las condiciones estudiadas. El comportamiento de-
pender de todos los parmetros de un sistema particular.
Se desea escalar esta columna a nivel industrial para manejar 150, 000 L de
caldo de fermentacin en 12 h y lograr una extracin donde la concentraciones
en el refinado sea y1 /yn+1 = 0.03.
Se pide calcular:
a) Las dimensiones de la columna industrial: D2 y L2 .
b) La velocidad reciprocante de la columna industrial: V R2
Solucin: a)
Paso 1. Se calcula las HET S1 , para lo cual es necesario calcular F1 y n1 .
mL
KE1 7.5 105
F1 = = min = 11.25
R1 mL
70
min
Sabemos que:
F n+1 1
yn+1 = (y1 )
F 1
entonces se puede despejar n,
252 CAPTULO 6. EXTRACCIN
yn+1
ln [(F 1)] + 1
y1
n = 1
ln (F )
1
ln (11.25 1) + 1
0.07
n1 = 1 = 1.06
ln (11.25)
A nivel piloto la altura equivalente de una etapa terica es:
L1 1.83 m
(HET S)1 = = = 1.73 m
n1 1.06
Paso 2: Se calcula D2 , para lo cual primero se calcula E/R y Q2 .
La relacin de fases es,
mL
E2 E1 105
= = min = 1.5
R2 R1 mL
70
min
de tal manera que:
150, 000 L L
Q2 = E2 + R2 = 1.5R2 + R2 = 2.5R2 = 2.5 = 520.8
60 min min
12 h
h
Se puede calcular el D2 , mediante la ecuacin del flux,
Q2 Q1
= 2
D22 D1
$
%
# % 520.8 L (2.54 cm)2
Q2 D12 % min
D2 = =% & = 138.6 cm
Q1 mL L
175 3
min 10 mL
Paso 3. Se calcula L2 , para lo cual es necesario calcular n2 y HT P S2 .
1
ln [(11.25 1)] + 1
0.03
n2 = 1 = 1.41
ln (11.25)
0.38 0.38
D2 138.6 cm
(HET S)2 = (HET S)1 = 1.73 m = 7.91 m
D1 2.54 cm
0.14 0.14
D1 ciclos 2.54 cm ciclos
(V R)2 = (V R)1 = 280 = 160
D2 min 138.6 cm min
x = Ky (6.52)
donde y es la concentracin hipottica de soluto en la fase pesada en equilibrio
r = ka(y y ) (6.57)
donde a es el rea superficial de contacto por unidad de volumen, y es la concen-
tracin hipottica de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentracin
6.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 255
Las tres relaciones descritas se relacionan entre s para obtener una ecuacin
de diseo.
La ecuacin (6.58) est en funcin del diferencial dz. Esto permite calcular
la longitud del extractor diferencial utilizando para ello las ecuaciones (6.52) y
(6.54).
De acuerdo a la ecuacin (6.58) la longitud del extractor diferencial puede
ser obtenida mediante la siguiente expresin:
L yL
R dy
L= dz =
kaA (y y )
0 yo
ExL = R(yL yo )
6.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 257
ExL yo
p = =1
RyL yL
yo = yL (1 p)
o bien como:
p
1
R F F
L= ln
kaA F 1 (1 p)
cm3
KE 0.331 76.8
F = = h = 1.324
R cm3
19.2
h
el coeficiente de transferencia de masa est dado por:
cm3 h 0.9997
19.2 1.324 1
ka = h 3600 s
ln
1.324
(64 cm)(4.43 102 cm2 ) 1.324 1 1 0.9997
ka = 5.15 102 s1
Se pide calcular:
a) La fraccin mol de penicilina en el extracto de salida.
b) El nmero de etapas tericas de la operacin.
Solucin:
a) La fraccin de soluto en el extracto de salida puede ser obtenida mediante
la ecuacin (6.54),
R
xL = (yL yo )
E
mol
70 mol
xL
= min
3.3 104 (0.1)(3.3 104 )
mol mol
3.5
min
moles de penicilina
xL = 5.94 103
moles de solvente
1.25 1
0.1 = n+1
(1.25) 1
n = 4.6
xn = Kyn (6.62)
r = ka(yn yn ) (6.63)
ka
(1 + ka) yn yn+1 xn = 0 (6.67)
K
C X + (Rka) Y = D (a)
Rka
+ E 0 0
K
Rka ..
E +E 0 .
K
C= .. .. ..
0 . . 0 .
.
.. Rka
E +E 0
K
Rka
0 0 E +E
K
6.4. DISEO DE EQUIPO DE EXTRACCIN 261
0 EX0 x1 y1
0 0 x2 y2
0
B= ; D = 0 ; X = x3 ; Y = y3
.. .. .. ..
. . . .
yn+1 0 xn yn
Puede ser demostrado que para este sistema se cumple que (Elnashaie y
Uhlig, 2007):
. 1 / 1
ka ka
[C] [A] + [Rka] Y = CB + D (c)
K K
CX = D RkaY (d)
Para el clculo de las composiciones, primero se obtiene Y de la ecuacin (c)
y posteriormente con la ecuacin (d) se obtiene X. En la Figura 6.20 se presenta
un programa MATLAB para el clculo.
p = 0.89
Las concentraciones en g/L son:
262 CAPTULO 6. EXTRACCIN
n xn yn
1 15.74 1.10
2 42.72 2.68
3 88.98 5.37
Perfil de concentracin
n!
f(r, n) = pnr (1 p)r (6.68)
r!(n r)!
donde:
F
p=
1+F
EK
F =
R
r = 0, 1, 2, 3.... n
6.5. Sumario
La extraccin es una operacin que se emplea para concentrar solutos de in-
ters a partir de caldos biolgicos diluidos. Se basa en la diferencia de solubilidad
de los solutos entre dos fases: el caldo biolgico y el solvente de extraccin.
En la extraccin se emplean diversos solventes que pueden ser seleccionados
combinando criterios establecidos y la teora que se dispone. En el caso de pro-
ductos como las protenas se utilizan sistemas de dos fases acuosas inmiscibles
que permiten el manejo de estos productos en forma ms apropiada.
Existe una gran variedad de equipos para realizar la operacin de extraccin
y sta puede realizarse en forma por lotes o continua. Los mtodos de diseo de
los extractores pueden ser grficos o analticos y estn basados en relaciones de
equilibrio y balances de masa.
6.6. PROBLEMAS 267
6.6. Problemas
6.1. Selectividad de solvente. En la separacin de Ajmalicina de pKa =
6.3 y Serpentina de pKa = 10.8, dos alcaloides vegetales de estructura muy se-
mejante; se dispone de un solvente en el cual el coeficiente de particin intrnseco
es igual para ambas especies.
Se pide:
a) Calcular el valor de Kp /Ki para ambas especies a los pH de 2, 4, 6, 8, 10
y 12.
b) Calcular la selectividad de Ajmalicina a los pH de 2, 4, 6, 8, 10 y 12.
c) Qu sistema recomienda a para realizar la extraccin?
Resp. b)
pH 2 4 6 8 10 12
31,621 31,465 21,065 620 7.3 1.1
6.2. Clculo de pKa . Una solucin de cido actico al 0.01 M presenta una
disociacin del 4 % a 25 o C.
Se pide calcular:
a) La constante de disociacin.
b) El pKa
Resp. b) 4.77
Se pide calcular:
a) La eficiencia de recuperacin de cada etapa.
b) La eficiencia de recuperacin global al final de cada etapa.
c) La relacin de fase acuosa a fase orgnica empleada en cada etapa (R/E).
6.6. PROBLEMAS 269
6.11. Extraccin diferencial. Las protenas pueden ser extradas sin ser
desnaturalizadas con soluciones de iso-octano que contengan el detergente aerosol
OT. Las protenas se solubilizan dentro de las miscelas que forma el detergente.
Debido a que la cantidad de protena solubilizada depende fuertemente del pH,
las protenas pueden ser extradas con el solvente orgnico a un pH dado cercano
al punto isoelctrico, y posteriormente desorberse a un pH diferente.
Se est estudiando una solucin acuosa que contiene 0.2 % de protena, cuya
relacin de equilibrio est dada por:
x = 2.9y
donde x es la concentracin de protena en la fase orgnica y y es la concen-
tracin de equilibrio en la fase acuosa. La relacin volumtrica entre las fases es
de 6.8 L de solucin acuosa por cada 3.8 L de solucin orgnica.
Se pide: Calcular la concentracin del refinado a la salida y la fraccin
extrada cuando se utiliza una columna de extraccin diferencial de 2.0 m. en
la cual el HT U (basado en la concentracin acuosa) es 0.85 m.
Resp. y = 0.04 % y p = 0.8.
6.12. Clculo del nmero de etapas. A partir del programa del Ejemplo
6.9, escribir un programa que calcule las etapas necesarias para alcanzar un
determinado rendimiento en una cascada a contracorriente con equilibrio lineal.
6.7. Bibliografa
Albertsson, P.; Johansson, G.; Tjerneld, F. 1990. Aqueous two-phase sepa-
rations. En: Separation Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.).
Marcel Dekker Inc. New York. 287-319.
Chethana, S.; Rastogi, N.K.; Raghavarao, K.S.M.S. 2007. New aqueous two
phase system comprising polyethylene glycol and xanthan. Biotech. Let-
ters. 28: 2528.
Ding, H.B.; Carr, P.W.; Cussler E.L. 1992. Racemic leucine separation by
hollow-fiber extraction. AIChE J. 38, 1493-1498.
Elnashaie, S.; Uhlig, F. 2007. Numerical Techniques for Chemical and Biolo
gical Engineers Using MATLAB R
. Springer Science and Business Media,
LLC. New York, NY.
Huddleston, J.; Veide, A.; Kohler, K.; Flanagan, J.; Enfors, S.; Lyddiatt, A.
1991. The molecular basis of partitioning in aqueous two-phase systems.
TibTech. 9, 381-388.
Karr, A.E. 1980. Design, scale-up, and applications of the reciprocating plate
extraction column. Sep. Sci. Tech. 15, 877 - 905.
6.7. BIBLIOGRAFA 273
Mazzola, P.G.; Lopes, A.M.; Hasmann, F.A.; Jozala, A.F.; Penna, T.C.V.;
Magalhaes, P.O.; Rangel-Yagui, C.O.; Pessoa A. 2008. Liquid-liquid ex-
traction of biomolecules: an overview and update of the main techniques.
J. Chem. Technol. Biotech. 83, 143-157.
Mattiasson, B.; Ling, T.G.I. 1987. Extraction in aqueous two-phase systems for
biotechnology. En: Separations for Biotechnology. Verral, M.S. y Hudson,
M.J. (Eds.). Ellis Horwood Limited. New York. 270-292.
Mattiasson, B.; Rajni, K. 1991. Extractive bioconversions in aqueous two-
phase systems. En: Extractive Bioconversions. Mattiasson, B.; Holst, O.
(Eds.). Marcel Dekker Inc. New York. 173-188.
Naganagouda, K.; Mulimani, V.H. 2008. Aqueous two-phase extraction (ATPE):
An attractive and economically viable technology for downstream process-
ing of Aspergillus oryzae a-galactosidase. Process Biochem. 43,12931299.
Patil, T.A.; Jafarabad, K.R.; Sawant, S.B.; Joshi J.B. 1991. Enzime mass
transfer coefficient in aqueos two phase system using packed extraction
column. Canad. J. Chem. Eng. 69, 548-556.
Porto, T.S.; Silva, G.M.M.; Porto, C.S.; Cavalcanti, M.T.H.; Neto, B.B.; Lima-
Filho, J.L.; Converti, A.; Porto, A.L.F.; Pessoa, A. 2008. Liquidliquid
extraction of proteases from fermented broth by PEG/citrate aqueous
two-phase system. Chem. Eng. Processing. 47, 716721.
Shao, Z.; Kong, F.; Cao, X. 2009. Phase diagram prediction of recycling aque-
ous two-phase systems formed by a light-sensitive copolymer and dextran.
Korean J. Chem. Eng. 26, 147-152.
Shibukawa, M.; Ichikawa, R.; Baba, T.; Sakamoto , R.; Saito, S.; Oguma, K.B.
2008. Separation selectivity of aqueous polyethylene glycol-based separa-
tion systems: DSC, LC and aqueous two-phase extraction studies. Poly-
mer. 49, 41684173.
Stella, A.; Mensforth, K.H.; Bowser, T.; Stevens, G.W.; Pratt, H.R.C. 2008.
Mass transfer performance in Karr reciprocating plate extraction columns.
Ind. Eng. Chem. Res. 47, 39964007.
Wisniak, J.; Schorr, G.; Zcovsky, D.; Belter S. 1990. Extraction of mercury(II)
with sulfurized jojoba oil. Ind. Eng. Chem. Res. 29, 1907-1914.
Captulo 7
Adsorcin
7.1. Introduccin
La adsorcin es una de las operaciones ms utilizadas en la etapa de con-
centracin de caldos acuosos diluidos. Mediante la adsorcin las molculas de
un soluto se concentran en una superficie slida por la accin de fuerzas inter-
moleculares entre el soluto y el slido. Debido a la naturaleza de estas fuerzas el
fenmeno es fcilmente reversible. La adsorcin es esencialmente un fenmeno
de superficie y debe distinguirse de la absorcin la cual implica la penetracin
de una sustancia en el cuerpo de otra.
La concentracin de uno o varios solutos de un caldo mediante una operacin
de adsorcin requiere cuatro pasos (Fig. 7.1). Primero el adsorbente y la solucin
se ponen en contacto. Al efectuarse la adsorcin el soluto se une preferentemente
a la superficie del adsorbente respecto a otros solutos. Una vez concluida la
adsorcin es necesario lavar la columna con una solucin que no provoque la
desorcin del soluto de inters. Al terminar el lavado se efecta la recuperacin
del soluto utilizando un fluido que favorezca la desorcin, operacin conocida
como elucin. Finalmente, se trata la columna para restablecer su condicin
inicial mediante una regeneracin. Esta operacin puede incluir un tratamiento
de limpieza con una solucin alcalina.
Es importante resaltar que el anlisis ingenieril de las etapas de adsorcin,
lavado y elucin, es anlogo. En este captulo slo se revisa lo referente a la
etapa de adsorcin por considerarse que los principios aqu expuestos pueden
extenderse al anlisis de las otras etapas.
En el anlisis de la operacin de adsorcin, al igual que en otras operaciones
de transferencia de masa, se utilizan modelos para el diseo, anlisis de alterna-
tivas (columnas en serie vs. columnas en paralelo), optimizacin, o simplemente
para la obtencin de datos experimentales. La formulacin de algunos de estos
modelos requiere:
a) El establecimiento de las relaciones de equilibrio y de la capacidad de
adsorcin de los sistemas.
276 CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.1: Las etapas de la adsorcin como proceso unitario. Adsorcin, Lavado,
Elucin y Regeneracin. Fuente: Clonis,1990. Reproducida con el p erm iso de Marcel
c
Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
7.2. Fundamentos
Las operaciones de adsorcin son utilizadas en la obtencin de varios tipos de
productos biotecnolgicos como aminocidos, antibiticos, vitaminas, protenas
y DNA. Tambin son muy empleadas con otros propsitos como la remocin de
partculas virales en procesos de obtencin de farmacuticos como anticuerpos
monoclonales (Strauss et al., 2009). Debido a lo anterior, cada vez existe una
7.2. FUNDAMENTOS 277
Adsorbentes fsicos
Actualmente se utilizan diferentes tipos de adsorbentes en la operacin de
adsorcin. En el caso de la adsorcin fsica, el adsorbente ms utilizado en
bioseparaciones es el carbn activado (vegetal) y la slica gel (Fig. 7.3a). Existen
varias formas de slica gel como la de borosilicato poroso y las aereogeles.
Tambin son utilizadas como adsorbentes fsicos resinas sintticas. Las resinas
no polares derivadas del estireno-divinilbenceno son utilizadas para la adsorcin
de solutos no polares a partir de solventes polares. Las resinas basadas en steres
acrlicos tienden a ser ms efectivas para remover solutos polares de solventes
no polares.
Adsorbentes inicos
Los adsorbentes utilizados en intercambio inico pueden ser inorgnicos, sin-
tticos u orgnicos. Los inorgnicos como las zeolitas son poco utilizados para
aplicaciones biotecnolgicas (Fig. 7.3b). Los adsorbentes inicos sintticos estn
formados por matrices de polmeros unidos lateralmente, como la poliacrilamina,
polimetacrilato y el poliestireno devinilbenceno. A la matriz se le unen grupos
funcionales que le dan la capacidad de intercambio inico.
7.2. FUNDAMENTOS 279
Adsorbentes hidrofbicos
Los adsorbentes hidrofficos se fabrican de carbohidratos como la agarosa
entrecruzada (Sefarosa), dextrano (Sefadex) y celulosa (Celufine). Tambin se
utilizan matrices de slica y polmeros sintticos. Los ligandos pueden ser alcanos
lineales de 1 a 8 carbonos tpicamente, grupos aromticos como el fenilo y ligan-
dos de hidrofobicidad media como el polietilengligol (PEG), polipropilenglicol
(PPG) y politetrametilenglicol (PTMG).
Adsorbentes de afinidad
En la adsorcin por afinidad el adsorbente consta de dos partes, el soporte
o matriz y el ligando. El ligando se une a la matriz por medio de un brazo que
evita impedimentos estricos en un determinado arreglo (Fig. 7.5).
Las matrices utilizadas en la adsorcin por afinidad son fabricadas de polmeros
naturales y sintticos como: Celufine, poliacrilamida (o derivados), Sefadex y Se-
farosa (Fig. 7.6).
280 CAPTULO 7. ADSORCIN
Material
Propiedad Slice Celulosa Poliacrilamida Agarosa
Estabilidad buena buena buena buena
Reactividad alta alta alta baja
Permeabilidad buena baja buena buena
Especificidad baja baja baja alta
No. de ligandos bajo bajo alto alto
Costo bajo bajo medio alto
Tipos de ligandos Los ligandos son molculas de alta afinidad por el soluto
de inters y pueden ser de varios tipos (Fig. 7.8).
a) Bioespecficos estrictos:
Sustratos para adsorcin de enzimas.
Antgenos para adsorcin de anticuerpos.
Sondas para obtencin de cidos nucleicos.
Protenas acarreadoras para obtencin de hormonas.
b) Bioespecficos amplios: Cofactores y lectinas.
c) Pseudoespecficos biolgicos: Aminocidos.
d) Pseudoespecficos no biolgicos: Colorantes y metales.
Langmuir y d) lineal (Hall et al., 1966). Las isotermas irreversibles son caracte-
rsticas de sistemas altamente especficos. Las isotermas tipo Freundlich normal-
mente se presentan en sistemas de adsorcin por intercambio inico. La adsor-
cin por afinidad generalmente presenta isotermas tipo Langmuir. La isoterma
lineal es menos comn, pero puede ser utilizada para aproximar otras isotermas
en la regin de baja concentracin de soluto.
q = Kcn (7.1)
donde q es la cantidad de soluto adsorbida (incluyendo el soluto en el lquido
de los poros del adsorbente) por cantidad de adsorbente, c es la concentracin
de soluto en la solucin, n es una constante adimensional y K es una constante
cuyas unidades dependen de n. Tanto K como n deben ser obtenidas experi-
mentalmente. En este tipo de experimentos generalmente se pone en contacto
cantidades iguales del adsorbente con soluciones de soluto de diferentes concen-
traciones y se mide las concentraciones una vez alcanzado el equilibrio.
Las constantes de la isoterma de Freundlich pueden ser obtenidas por medio
de una grfica log-log de los datos experimentales, determinndose K con la
ordenada en el origen y n de la pendiente de la recta que se obtiene.
Cuando las isotermas de adsorcin son cncavas hacia el eje de las abscisas
o sea cuando n < 1, la isoterma se llama favorable, ya que se puede obtener una
7.2. FUNDAMENTOS 283
q = Kc (7.2)
qm c
q= (7.3)
Kd + c
donde qm es la capacidad mxima del adsorbente y Kd es la constante de equi-
librio de desorcin. Estas constantes deben ser obtenidas experimentalmente.
En este caso es preferible manejar los datos experimentales utilizando la forma
recproca (mtodo del doble recproco) de la ecuacin (7.3):
1 Kd 1 1
= + (7.4)
q qm c qm
de tal manera que en una grfica cartesiana de 1/q vs 1/c, se puede obtener una
recta de pendiente Kd /qm y ordenada en el origen 1/qm . Las unidades de qm y
Kd de esta isoterma son las mismas que las de q y c, respectivamente.
284 CAPTULO 7. ADSORCIN
k1 [soluto][sitios vacos]
Kd = = (7.6)
k1 [sitios ocupados]
7.2. FUNDAMENTOS 285
[sitios totales][soluto]
[sitios ocupados] = (7.8)
Kd + [soluto]
debido a que q es proporcional a la concentracin de sitios ocupados y qm a la
concentracin de sitios totales, la ecuacin (7.3) puede ser obtenida a partir de la
expresin (7.8), es decir este mecanismo fundamenta la expresin de Langmuir.
[Na+ ][HR]
Kd = (7.10)
[NaR][H+ ]
La concentracin de radicales R totales en la superficie del adsorbente est
dada por:
[R ][Na+ ]
[NaR] = (7.12)
Kd [H+ ] + [Na+ ]
como q es proporcional a [NaR] y qm es proporcional a [R ], la adsorcin inica
monovalente puede ser descrita por medio de una expresin tipo Langmuir,
siempre y cuando la concentracin [H+ ] permanezca constante; como en el caso
de que se utilice una solucin amortiguadora. En el caso de adsorciones inicas
no monovalentes el anlisis anlogo frecuentemente conduce a expresiones tipo
Freundlich.
286 CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.10: Solucin grfica del Ejemplo 7.1. a) Datos experimentales, b) Isoter-
ma de Freundlich, c) Isoterma de Langmuir y d) Datos y modelo ajustado de
Lagmuir.
Mecanismos de transporte
Figura 7.11: Diseo de adsorbedores. Adaptada de: Wang, 1990. Reproducida con
c
el perm iso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
ficie interior del poro es mucho mayor que la superficie exterior, generalmente
la adsorcin se efecta principalmente dentro del poro, por lo que el soluto debe
difundir a travs del lquido al interior de los poros.
d) Resistencia a la reaccin en la superficie. El soluto una vez situado en el
sitio de adsorcin se une a ste por medio de una reaccin de superficie, la cual
es un proceso finito pero generalmente ms rpido que los procesos anteriores.
6
a= (7.14)
dp
kL dp
Sh = (7.16)
DAB
dp L
Rep = (7.17)
L
L
Sc = (7.18)
L DAB
En el caso de adsorcin de biomolculas se han utilizado las siguientes co-
rrelaciones para estimar kL :
En tanques agitados (Geankoplis, 1983):
2/3 1/3
2DAB L g
kL = + 0.31 (7.19)
dp L DAB 2L
En columnas (Foo y Rice, 1975):
Sh = 2 + 1.45Re1/2
p Sc
1/3
(7.20)
T
DAB = 9.4 1015 (7.21)
L (MA )1/3
y para pDNA (Prazeres, 2008):
T
DAB = 3.31 1015 (7.22)
L (pb)2/3
donde:
: Viscosidad. [kg/ms].
T : Temperatura. [ K].
q
= ks a(q q) (7.24)
t
donde q es una concentracin hipottica de equilibrio con la concentracin de
soluto en el seno de la fase lquida, y el parmetro ks es el coeficiente de trans-
ferencia de masa que se correlaciona con la difusividad mediante la ecuacin:
60Ds
ks a = (7.25)
d2p
En el caso en que la acumulacin del soluto al interior del poro sea mucho
menor que la velocidad de la adsorcin, la ecuacin (7.26) puede ser escrita
como:
2
qi i ci 2 ci
= Di + (7.27)
t 1 i r2 r r
para lquidos la difusividad Di puede ser expresada como:
DAB
Di = (7.28)
o
donde o es la tortuosidad del adsorbente (una medida de la estructura de
los poros) y DAB es la difusin molecular del soluto en un lquido libre de
adsorbente.
qi
= kp a(q q) (7.29)
t
donde q es una concentracin hipottica de equilibrio con la concentracin de
soluto en el seno de lquido , q es la concentracin promedio de soluto en el
adsorbente. El coeficiente kp a puede correlacionarse con la difusividad efectiva
del poro mediante la siguiente expresin:
60i Di
kp a = (7.30)
d2p
q
= k1 c k1 q (7.31)
t
Cintica reversible de segundo orden:
q
= k1 c(qm q) k1 q (7.32)
t
donde k1 y k1 son las constantes cinticas de adsorcin y desorcin, respecti-
vamente. El parmetro qm es la capacidad mxima de adsorcin del adsorbente.
7.2. FUNDAMENTOS 293
Efectos de mezclado
La velocidad de adsorcin efectiva tambin puede disminuir por efectos de un
mezclado imperfecto. Esta situacin es caracterstica de columnas largas donde
se presentan irregularidades en el flujo (canalamiento) o en el mezclado (espacios
muertos, difusin molecular o dispersin axial).
En la construccin de algunos modelos de adsorcin no se consideran los
efectos de mezclado y de flujo no ideal. Sin embargo, debido a que en el proce-
so de escalamiento de columnas este efecto puede ser importante, es necesario
considerar algunos aspectos fundamentales de este fenmeno.
Uno de los modelos ms utilizados para describir la desviacin del compor-
tamiento ideal del flujo al interior de columnas, es el modelo de flujo tapn con
dispersin (Fig. 7.13), donde los efectos de la dispersin axial debida a remolinos
y de la difusin molecular, se agrupan en el concepto del coeficiente efectivo de
dispersin axial, en funcin del cual se puede definir un coeficiente aparente de
transferencia de masa dado por:
Figura 7.13: Modelo de flujo tapn con dispersin. Adaptada de: Levenspiel,
1962. Reproducida con el perm iso de John Wiley and Sons. Copyright 1962.
c Todos los derechos
reservados.
2
kd a = (7.33)
Dax
donde:
Dax : Coeficiente de dispersin axial. [L2 /t].
: Velocidad superficial de flujo. [L/t].
Es conocido que para flujo laminar de lquidos en lechos empacados (caso
ms comn) el nmero de Reynolds basado en el dimetro de las partculas del
lecho es menor a 10. Bajo esta consideracin el nmero de Peclet (el cual es una
medida del grado de dispersin en la columna) toma un valor constante de 2
(Fig. 7.14) entonces,
dp
Pe = = 0.5 (7.34)
Dax
donde P e es el nmero de Peclet (adimensional). Las ecuaciones (7.33) y (7.34)
permiten obtener una expresin para el coeficiente aparente de transferencia de
294 CAPTULO 7. ADSORCIN
q
= kd a(c c ) (7.35)
t
Figura 7.15: Sistemas de adsorcin tipo tanque agitado. a) Por lotes y b) Con-
tinuo.
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 295
En el anlisis que sigue se considera que cada etapa es una etapa ideal, por lo
tanto el adsorbente y la solucin estn en equilibrio al trmino de la operacin
(o bien una etapa real si se utilizan curvas de equilibrio modificadas). Bajo esta
consideracin el anlisis de este tipo de operacin se simplifica, y slo requiere
de la combinacin de las expresiones de equilibrio y los balances de masa, ya
sea en forma grfica o en forma analtica.
La expresin de equilibrio es la isoterma que depende de cada tipo de adsor-
cin, por ejemplo:
q = Kcn (7.36)
El balance de masa del soluto de acuerdo a la Figura 7.18 puede ser expresado
como:
F
q2 = q0 + (c0 c2 ) (7.38)
S
La solucin grfica de las ecuaciones (7.36) y (7.38) se representa en la Figura
7.18b, donde la curva de equilibrio utilizada refleja una adsorcin favorable
(n < 1). La interseccin de la curva de equilibrio con la lnea de operacin
permite calcular las concentraciones de equilibrio (c2 , q2 ) al final del proceso.
S(q2 q0 ) = F (c0 c2 )
con los valores: q0 = 0; q2 = 1.56 g/g; c2 = 0, se puede calcular S:
g
F c0 100, 000 L 6
S= = L = 384, 615 g de adsorbente
q2 g
1.56
g
Como puede observarse se requiere una gran cantidad de adsorbente. Esto
implica que sera adecuada una operacin continua, sin embargo el problema
que significa el movimiento continuo de los slidos, conlleva a utilizar con ms
frecuencia operaciones semi-continuas.
donde q tiene unidades de g/g y c de g/L. En una operacin por lotes se ponen
en contacto 300 g de adsorbente con 2.0 L de solucin que contiene 15 g/L de
fenilalanina.
Se pide estimar:
a) Las composiciones en el equilibrio.
b) El porcentaje de recuperacin.
Solucin:
Utilizando el mtodo grfico el balance de masa para esta operacin (ecuacin
7.38), permite encontrar la ecuacin de la lnea de operacin.
2
q2 = 0 + (15 c2 )
300
a) La curva de operacin y de equilibrio se grafican en la Figura 7.19, el
punto donde intersectan representa las condiciones al final de la operacin, por
lo tanto:
q2 = 0.042 g/g
c2 = 8.6 g/L
b) El porcentaje de recuperacin puede ser expresado como:
F c0 F c2 c0 c2 15 8.6
RE = 100 = 100 = 100 = 43 %
F c0 c0 15
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 301
q = 0.087c
donde q est en g/g y c en g/L.
Se pide:
Si se utiliza un proceso por lotes en equilibrio, qu cantidad de adsorbente
es necesario agregar a 2.0 L de una solucin de DAC-C con una concentracin
de 2 g/L, para recuperar el 90 % de la impureza?
Solucin:
Debido a que la isoterma es lineal se facilita una solucin analtica al pro-
blema. Del balance de masa se obtiene:
2
q2 = (2 c2 )
S
en el equilibrio:
q2 = 0.087 c2
y de acuerdo con la recuperacin deseada, c2 = 0.1c0 .
Combinando las dos expresiones anteriores se puede encontrar la interseccin
de la curva de operacin con la de equilibrio,
c2 = 0.2 g de soluto/L
del balance de masa,
S = 206.9 g
Teora cintica
Gran parte de la informacin necesaria para evaluar el comportamiento de los
procesos adsorcin est contenida en las curvas de los perfiles de concentracin
(c vs t). Estas curvas pueden ser utilizadas para determinar: a) la capacidad
del adsorbente que ha sido utilizada, b) la cantidad de soluto que no se adsorbe
al final de la operacin y c) el tiempo de proceso. Asimismo, para estudiar
el efecto de las variables de operacin sobre el comportamiento del sistema.
Un modelo matemtico que pueda usarse para predecir apropiadamente este
comportamiento dinmico, proporciona una forma prctica de obviar muchos
experimentos, adems de ayudar en el diseo y escalamiento de los procesos de
adsorcin.
302 CAPTULO 7. ADSORCIN
dc
b V= V R (7.39)
dt
el balance de soluto en el adsorbente:
dq
V (1 b ) =VR (7.40)
dt
y las condiciones iniciales
en t = 0 c = co ; q=0 (7.41)
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 303
dc 3 (1 b )
= kL (c ci )|r=rm (7.42)
dt rm b
La ecuacin para describir el cambio de concentracin de soluto en el fluido
de los poros del adsorbente puede ser obtenida mediante un balance de soluto
en la partcula,
ci qi 2 ci 2 ci
i + (1 i ) = i Di + (7.43)
t t r2 r r
donde i simboliza el interior del poro del adsorbente.
Generalmente se utilizan modelos simplificados para describir las complejas
interacciones entre el soluto y el adsorbente. En estos modelos se utiliza una
expresin cintica reversible de segundo orden, donde se supone que el soluto
interacciona en forma monovalente con el adsorbente,
P + S PS
donde P es el soluto en la solucin, S es el sitio de adsorcin y P S es el complejo
soluto-ligando.
La velocidad de adsorcin de este tipo de interaccin se representa frecuente-
mente por la expresin de Langmuir,
304 CAPTULO 7. ADSORCIN
qi
= k1 ci (qmi qi ) k1 qi (7.44)
t
donde: qmi es la capacidad mxima de adsorcin del adsorbente por volumen
slido; k1 y k1 son las constantes cinticas de adsorcin y desorcin, respecti-
vamente.
Al inicio de la operacin la concentracin de soluto en el seno del lquido es
co y el sistema se encuentra libre de soluto, por tanto se utilizan las condiciones
iniciales siguientes:
en t = 0 c = co (7.45)
en t = 0 ci = 0, 0 r rm (7.46)
en t = 0 qi = 0, 0 r rm (7.47)
Debido a la simetra de la partcula, se considera la condicin de frontera
siguiente:
0
ci 00
en r = 0 =0, t>0 (7.48)
r 0r=0
Mediante un balance de soluto en la boca de un poro de la partcula, se
obtiene una segunda condicin de frontera,
0
ci 00
en r = rm kL (c ci )|r=rm = i Di , t>0 (7.49)
r 0r=rm
Este modelo de tres resistencias en serie no tiene una solucin analtica, debe
ser resuelto por mtodos aproximados.
dq
= k1 c (qm q) k1 q (7.50)
dt
Mediante el balance de soluto se obtiene la lnea de operacin del sistema:
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 305
b V
q= (c0 c) (7.51)
(1 b )V
Sustituyendo la ecuacin anterior y su derivada en la ecuacin (7.50) se
obtiene:
dc (1 b ) b (c0 c) b k1 (c0 c)
= k1 c qm (7.52)
dt b (1 b ) (1 b )
La solucin analtica de la ecuacin anterior est dada por:
2a (1 b ) (k1 t)
(b + a) 1 exp
c (1 b ) b
=1 (7.53)
co b co
b+a 2a (1 b ) (k1 t)
exp
ba b
donde:
2 2 co b
a =b qm (7.54)
(1 b )
1 co b Kd b
b= + qm + (7.55)
2 (1 b ) (1 b )
a = 10.74
de tal manera que:
c (56. 95) [1 exp (0.213k1 t)]
= 1 1. 979 4 102
co (1. 605 6) exp (0.213k1 t)
Figura 7.22: Perfil de concentracin de ImG del ejemplo 7.5. (o) datos ex-
perimentales. () ajuste del modelo de parmetros agrupados con k1 = 0.001
mL/mgs.
qm c
q= (C)
Kd + c
y las condiciones iniciales
en t = 0 c = c0 ; q=0 (D)
donde c es una concentracin hipottica de soluto en el lquido, en equilibrio
con la concentracin de soluto en el adsorbente.
Las ecuaciones (A-D), pueden ser resueltas utilizando un mtodo de inte-
gracin numrico, para obtener la variacin de la concentracin con el tiempo.
308 CAPTULO 7. ADSORCIN
Adsorbente dp 90 106 m
p 1028 kg/m3
Protena MA 150, 000 Da
Solucin L 1000 kg/m3
L 9.5 104 kg/ms
T
DAB = 9.4 1015
L (MA )1/3
298 m2 11 m
2
DAB = 9.4 1015 = 5.5 10
(9.5 104 ) (150, 000)1/3 s s
2/3 1/3
2DAB L L g
kL = + 0.31
dp p DAB 2p
m2
2 5.5 1011
s
kL = +
90 106 m
2/3
4 kg
9.5 10
+ 0.31
ms
2
kg m
1028 3 5.5 1011
m s
1/3
kg 4 kg m
28 m3 9.5 10 ms
9.8 2
s
2
kg
1028 3
m
m
kL = 4 106
s
6 6
a= = = 6.67 104 m1
dp 90 106 m
En la Figura 7.23 se presenta un programa MATLAB para la solucin de las
ecuaciones (A-D). Utilizando el valor calculado de kL = 4106 m/s, se obtuvo
un perfil muy alejado de los datos experimentales, que sugiere que el fenmeno
es ms lento que lo que pronostica el modelo (Fig. 7.24a). Utilizando un valor
10 veces menor de kL = 4 107 m/s se logr un mejor ajuste, sin embargo la
cintica experimental presenta un comportamiento diferente a la pronosticada
por el modelo (Fig.7.24b).
Ejemplo 7.7. Adsorcin de Inmunoglobulina G (ImG) en protena
A inmovilizada en una matriz de agarosa en un sistema por lotes.
Modelo de tres resistencias.
Para analizar el procesos de adsorcin de ImG descrito en el Ejemplo 7.5
utilizando el modelo de 3 resistencias se tienen los siguientes datos adicionales.
Adsorbente i = 0.96
s = 0.4
Figura 7.23: Programa principal y funcin para la solucin del Ejemplo 7.6
Figura 7.24: Perfil de concentracin de ImG del Ejemplo 7.6. (o) datos experi-
mentales. () ajuste del modelo de resistencia en la pelcula con: a) kL = 4106
m/s y b) kL = 4 107 m/s.
q = Kc (7.60)
El modelo se integra con las ecuaciones (7.56-7.60) y su solucin es:
314 CAPTULO 7. ADSORCIN
Figura 7.27: Perfil de concentracin de ImG del Ejemplo 7.7. (o) datos exper-
imentales. () ajuste del modelo de tres resistencias con kL = 4 106 m/s,
k1 = 1.0 mL/mgs y Di = 6.0 1012 m2 /s.
c0 c r2 er1 t r1 er2 t
= (7.61)
c0 (r2 r1 ) (r2 r1 )
B + B 2 4AC
r1 =
2A
B B 2 4AC
r2 =
2A
A = 1
F kL a(1 b ) b
B = + 1+
b V b (1 b )K
F kL a
C =
b KV
Solucin:
a) Las constantes A, B y C estn dadas por:
A = 1.0
L
3 312 h1 0.2 0.8
B = h + 1+ = 84.59 h1
0.8 1.0 L 0.8 0.2 110
L
312 h1 3
C = h = 10.63 h2
0.8 110 1.0 L
"
(84.59 h1 ) (84.59 h1 )2 4(1.0)(10.63 h2 )
ri =
2
1
r1 = 0.126 h
r2 = 84.46 h1
t t t t
c V c
F c0 dt F cdt V c dt dt
c0 F c0
0 0 0 0
Recuperacin = =
t t
F c0 dt dt
0 0
t t
r2 er1 t r1 er2 t
dt 1 + dt
r2 r1 r2 r1
0 0
Recuperacin =
t
dt
0
V r2 er1 t r1 er2 t
1 +
F r2 r1 r2 r1
t
dt
0
efectuando la integracin,
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 317
r2 r1
t t (er1 t 1) + (er2 t 1)
r1 (r2 r1 ) r2 (r2 r1 )
Recuperacin =
t
V r2 er1 t r1 er2 t
1 +
F r2 r1 r2 r1
t
sustituyendo valores,
t = 1.2 h
b) La expresin de la concentracin adimensional a la salida del tanque es:
c 84.46e0.126t 0.126e84.46t
= 0.1 = 1 +
c0 84.46 + 0.126 84.46 + 0.126
de tal manera que
t = 0.85 h
La recuperacin en este tiempo es del 0.92. Existe un tiempo ptimo para
realizar este tipo de operaciones.
dq
V (1 b ) = VR (7.63)
dt
las condiciones iniciales,
318 CAPTULO 7. ADSORCIN
en t = 0 c = 0; q=0 (7.64)
Utilizando la expresin de Langmuir se pueden obtener las siguientes ecua-
ciones diferenciales ordinarias acopladas del modelo:
dc F (c0 c) (1 b ) Kd q
= kL a c (7.65)
dt b V b (qm q)
dq Kd q
= kL a c (7.66)
dt (qm q)
Estas ecuaciones pueden ser resueltas utilizando un integrador ODE de
MATLAB.
La Figura 7.30 fue obtenida mediante la solucin del modelo anterior fijando
una concentracin a la salida del tanque de c/c0 = 0.1. Puede observarse en esta
figura que conforme aumenta el flujo de la alimentacin, la recuperacin obteni-
da (mg adsorbidos/mg alimentados) y el grado de utilizacin del adsorbente
(q/qm ) disminuyen. La produccin obtenida en el proceso (mg/min) aumenta
con el flujo hasta que ste alcanza un valor aproximado de 0.4 mL/min.
Curva de ruptura
En la descripcin de la adsorcin en columna se utilizan grficas de la
variacin de la concentracin de soluto a la salida de la columna con el tiempo,
llamadas curvas de ruptura. La prediccin del comportamiento real de la curva
de ruptura (anlisis frontal), permite disear columnas para lograr cierto grado
de recuperacin, estimar las prdidas y determinar el tiempo tR de cada ciclo,
as como para estimar dimensiones y arreglos de los equipos para la fase de ad-
sorcin. Esta es la informacin requerida para optimizar la separacin (Arnold
et al., 1985; Yang y Tsao, 1982). En la Figura 7.31 se presenta un esquema de
adsorcin en una columna de longitud L (la columna se presenta acostada slo
para efectos explicativos).
F c0 t = qm S
despejando t y sustituyendo valores se tiene:
g
1.56 10, 000 g
qm S g
t = = = 4.3 h
F c0 L g 60 min
10 6.0
min L h
En la Figura 7.32 se presenta un esquema de la columna y de la curva de
ruptura para este ejemplo.
Produccin
F =
c0
g ao da
8 109
F = ao 310 da 24 h = 5.37 104 L
g h
20
L
322 CAPTULO 7. ADSORCIN
Anlisis aproximado
El mtodo de anlisis aproximado es especialmente til cuando las isotermas
del sistema son favorables. Bajo estas condiciones, se supone que la adsorcin se
desarrolla formndose una zona de transferencia de masa dentro de la columna
con un perfil de concentracin constante que viaja a lo largo de la columna
(Fig. 7.33).
cR = 0.1c0 y cS = 0.9c0
donde c0 es la concentracin de soluto en la solucin a la entrada.
Si se supone que la zona de transferencia de masa (ZTM) se mueve a lo largo
del lecho con una velocidad constante , en el tiempo tR existe una zona en la
324 CAPTULO 7. ADSORCIN
Ze = tR t (7.67)
donde
L
=
tR
y L la longitud de la columna.
Combinando las expresiones anteriores se obtiene:
t
Ze = L 1 (7.68)
tR
La longitud de la ZTM, ZA , est dada por:
t
ZA = L (7.69)
tR
Se pueden utilizar estas relaciones para estimar la fraccin de lecho que
est utilizado cuando termina la operacin o sea en el tiempo tR , considerando
simtrica la curva de ruptura, de tal manera que:
En la zona de saturacin:
q = f(c0 )
y en la ZTM:
1
q = f (c0 )
2
donde la funcionalidad depender del tipo de isoterma.
Con base a lo anterior la fraccin de lecho utilizado est dada por:
t 1 t
f(c0 ) L 1 + f(c0 ) L
tR 2 tR
=
f (c0 ) L
t
=1 (7.70)
2 tR
La fraccin de lecho utilizado dada por la ecuacin (7.70) debe ser obtenida
experimentalmente y puede ser utilizada para escalamiento. En este proceso, la
longitud de la columna y la velocidad de alimentacin deben permanecer iguales
en ambas escalas para mantener el mismo patrn de adsorcin. Esto conduce al
diseo de columnas poco esbeltas con poca cada de presin en las cuales debe
asegurarse una distribucin uniforme del lquido.
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 325
Teora de platos
Cuando se utiliza la teora de platos el modelo conceptual de la columna con-
siste en una serie de etapas en equilibrio (Fig. 7.34). En cada etapa la cantidad
de adsorbente est fija y el lquido fluye a travs de todas las etapas transportan-
do al soluto. El empleo de esta teora permite disear columnas en forma muy
sencilla.
Una limitacin del empleo de la teora de platos es que slo puede ser uti-
lizada para sistemas con isotermas lineales. Adems, en su forma original esta
teora es de uso limitado por su incapacidad de predecir el nmero de etapas o la
altura real de cada etapa y el efecto del cambio de las condiciones de operacin
sobre el comportamiento de la columna.
Considerando el arreglo que se muestra en la Figura 7.34, el balance de masa
de soluto en la fase lquida en la etapa n, puede expresarse en palabras como:
n: Nmero de etapa.
326 CAPTULO 7. ADSORCIN
El modelo supone que cada etapa est en equilibrio de tal manera que para
isotermas lineales:
qn = Kcn (7.72)
combinando las ecuaciones (7.71) y (7.72) se obtiene:
dcn
{[ + (1 )K] V } = F (cn1 cn ) (7.73)
dt
donde el trmino entre corchetes de la izquierda de la expresin anterior repre-
senta un volumen hipottico.
V = [ + (1 )K]V
La ecuacin (7.73) puede ser resuelta con las siguientes condiciones:
dcn c0 n1 e
= (7.77)
d (n 1)!
que representa una distribucin de Poisson. Puede observarse en la Figura 7.35a
que conforme se incrementa el nmero de etapas, la distribucin de Poisson
se aproxima a una distribucin normal, entonces se puede efectuar la siguiente
aproximacin:
2
dcn . c0 1 o
= 1 exp (7.78)
d (2) 2 A 2 A
De acuerdo a la definicin de media y desviacin estndar, con ayuda de
la ecuacin (7.77) se puede encontrar quela ecuacin (7.78) tiene una media
o = N y una desviacin estndar A = N cuando n = N (a la salida de la
columna).
La forma integrada de la ecuacin (7.78) para el caso de n = N , conduce a
una expresin de la siguiente forma:
c(L, ) 1
= [1 + Erf()] (7.79)
c0 2
donde:
o
= 1
2 2 A
328 CAPTULO 7. ADSORCIN
1 dc(L, )
c0 d
La ecuacin (7.79) puede ser expresada en funcin del tiempo real utilizando
la definicin de para obtener:
c(L, t) 1
t t
o
= 1 + Erf 1 (7.80)
c0 2 2 2 to
N
La ecuacin (7.80) describe la curva de ruptura que predice la teora de
platos. Esta permite caracterizar columnas mediante el ajuste de datos experi-
mentales y la determinacin de los parmetros hipotticos N y HET P dados
por la ecuacin:
L
HET P = (7.81)
N
donde HET P es la altura equivalente de un plato terico (de sus siglas en
ingls).
La teora de platos no permite predecir la forma de la curva de ruptura
cuando cambian las condiciones de operacin. Sin embargo, con este propsito
suelen combinarse frecuentemente los resultados de la teora de platos con los
de la teora cintica que se presenta en la siguiente seccin.
Teora cintica
Los modelos de columnas de adsorcin que se enmarcan dentro de la teora
cintica se desarrollan mediante la combinacin de balances de masa, relaciones
de equilibrio, relaciones de transferencia de masa entre las fases y las condiciones
iniciales y de frontera del sistema.
El modelo fsico de la teora cintica consiste en la adsorcin isotrmica de
un soluto que fluye a travs de un lecho fijo empacado con partculas difusivas
de radio promedio, rm , y porosidad, i (Fig. 7.36a). La concentracin de soluto
en la solucin a la entrada de la columna es, co , la concentracin transiente de
soluto en el sistema es, c(z, t), y fluye con una velocidad intersticial, , a travs
de la columna de altura, L, y una porosidad de lecho, . Las concentraciones
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 329
de soluto en las fases lquida y slida del adsorbente son, ci (r, z, t) y qi (r, z, t),
respectivamente. La dispersin del flujo en la columna se caracteriza por el
coeficiente de dispersin axial, Dax .
V c |t+t V c |t
= F c |z F c |z+z
t
c c
+ Dax A |z Dax A |z+z
z z
RV
c 2c c R
Dax 2 + = (7.82)
t z z
donde R es la velocidad de transferencia de masa entre las fases por unidad de
volumen de lecho (adsorbente y lquido).
330 CAPTULO 7. ADSORCIN
c 2c c 3 (1 )
Dax 2 + = kL (c ci )|r=rm (7.87)
t z z rm
La ecuacin para describir el cambio de concentracin del soluto en los poros
del adsorbente puede ser obtenida mediante un balance de soluto en la partcula,
2
ci qi ci 2 ci
i + (1 i ) = i Di + (7.88)
t t r2 r r
qi
= k1 ci (qm qi ) k1 qi (7.89)
t
donde qm es la capacidad de adsorcin mxima.
Las ecuaciones del modelo pueden ser resueltas utilizando las siguientes
condiciones iniciales y de frontera:
Al inicio de la operacin no hay soluto presente en el sistema, de tal manera
que las condiciones iniciales del sistema son,
en t = 0 c = 0, 0zL (7.90)
en t = 0 ci = 0, 0 r rm (7.91)
en t = 0 qi = 0, 0 r rm (7.92)
Las condiciones frontera que se utilizan para la columna son las de Danck-
werts (Danckwerts, 1953) que consideran dispersin a la entrada de la columna
y mezclado perfecto a la salida,
0
c 00
en z = 0 c|z=0 Dax = co t>0 (7.93)
z 0z=0
0
c 00
en z = L = 0, t>0 (7.94)
t 0z=L
Debido a la simetra de la partcula,
0
ci 00
en r = 0 = 0, t>0 (7.95)
r 0r=0
En la boca del poro de las partculas se cumple que,
0
ci 00
en r = rm kL (c ci )|r=rm = i Di , t>0 (7.96)
r 0r=rm
c c q
+ = (1 ) (7.97)
t z t
donde q es la concentracin promedio de soluto en el adsorbente.
La forma general de la cintica controlante es:
q
= f(c, q) (7.98)
t
Las condiciones iniciales y de frontera son:
en t = 0 q=0 (7.99)
en z = 0 c = co (7.100)
Efectuando el cambio de variable t = t z/, el balance en la columna se
Kd ( 1)
T = (7.103)
(1 )qm
donde es el factor de separacin y es el tiempo adimensional dados por:
co t
=1+ ; = (7.104)
Kd L
En el anlisis se define un nmero de unidades de transferencia N (tambin
conocido como N T U ), como el cociente del coeficiente de transferencia de masa
y el tiempo de residencia. Este nmero que caracteriza la forma y empinacin
de la zona de transferencia de masa y est dado por:
L
N= (7.105)
donde es un coeficiente de transferencia de masa, una constante de adsorcin
o simplemente una constante cintica agrupada.
La expresin especfica de N cuando controla la cintica, la pelcula o el poro
es:
334 CAPTULO 7. ADSORCIN
(1 )qm k1 L
Nk = (7.106)
(1 )kL aL
NL = (7.107)
15(1 )i Di L
Np = 2
(7.108)
rm
Conforme se aumenta la longitud de la columna o se disminuye la velocidad
aumenta el nmero de unidades de transferencia N , producindose una curva
de ruptura ms empinada y una mayor capacidad de operacin de la columna.
El efecto es ms pronunciado con isotermas favorables. En la prctica, se tiene
que buscar un ptimo entre la capacidad dinmica alcanzada en una operacin
y el rendimiento espacio-tiempo del proceso (Gebauer et al., 1997).
No existe una solucin analtica general del modelo no dispersivo. Las solu-
ciones particulares que han sido obtenidas describen la concentracin de salida
de la columna en funcin de los nmeros adimensionales en la forma:
X = f (T, N, ) (7.109)
Cuando la expresin del mecanismo limitante adopta la forma de una fuerza
impulsora lineal para la difusin en el poro, la cintica de Langmuir o la resisten-
cia en la pelcula, el modelo adimensional toma la siguiente forma (Vermeulen
et al., 2007):
Y X
= (7.110)
NT N N NT
N
J , NT
(T, N ) =
N NT 1
J , N T + 1 J N, exp (1 )(N N T )
(7.112)
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 335
Variable Valor
Conc. de lisozima a la entrada co = 7.14 103 mol/m3
Flujo F = 1.67 108 m3 /s
Longitud de la columna L = 0.014 m
Dimetro de la columna CD = 0.01 m
Porosidad del lecho = 0.39
Radio de las partculas rm = 5 105 m
Constante de equilibrio Kd = 1.748 103 mol/m3
Capacidad de adsorcin mxima qm = 1.333 mol/m3
Figura 7.37: Programa MATLAB para obtener la curva de ruptura del Ejemplo
7.11.
o en forma adimensional,
X=Y (7.115)
de esta manera se reduce considerablemente la complejidad del modelo (Helf-
ferich y Carr, 1993). Matemticamente, la operacin de patrn constante ase-
meja una operacin a contracorriente con una lnea de operacin con pendiente
de 45 (Vermeulen et al., 2007).
Cuando una isoterma es favorable, slo en la regin inicial de la columna la
ZTM se ensancha conforme avanza, pero a cierta distancia alcanza una forma
asinttica como ZTM estable sin cambios adicionales. La forma de la curva de
ruptura depende slo del paso limitante de la adsorcin.
Tericamente es posible alcanzar un patrn constante slo cuando el equili-
brio es favorable, dado que es el nico tipo de equilibrio que tiende a compactar
la ZTM y compensar los efectos dispersivos de la resistencia a la transferencia de
masa. En la prctica, la suposicin de patrn constante es generalmente vlida
para sistemas de equilibrio muy favorables o irreversibles (Yang yTsao, 1982).
Cuando el equilibrio es de tipo Langmuir c > Kd y el factor de separacin > 1.
En equilibrios irreversibles c >> Kd y . En este caso la concentracin
adimensional a la salida de la columna se reduce a:
X = f (T, N ) (7.116)
Hall et al., 1996 resolvieron el modelo no dispersivo bajo la suposicin de
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 337
Figura 7.38: Curva de ruptura del Ejemplo 7.11. (o) datos experimentales. ()
ajuste del modelo de Thomas con k1 = 0.286 m3 /mols.
Np 1
Np (T 1) = (ln X + 1) + 2.44 3.66 (1 X) 2 (7.117)
NL
Cuando slo controla la difusin en el poro (Np 0), la ecuacin anterior
se simplifica a:
2
2 Np (T 1)
X =1 (7.118)
3 3.66
Cuando la resistencia en la pelcula es la limitante (Np ), (dividiendo
la expresin entre Np ) entonces,
q = Kc (7.120)
t = 0, z, q = 0
t > 0, z = 0, c = c0
q q
(1 ) = (1 )kL a c (7.125)
t K
(1 )kL aL
N =
z
kL a t
NT =
K
c
X =
c0
q
Y =
Kc0
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 339
X
= (X Y ) (7.126)
N
Y
= (X Y ) (7.127)
N T
o bien
Y X
= (7.128)
N T N
con las condiciones:
N T = 0, Y = 0, N
N = 0, X = 0, N T
N 2
X =1 e(NT +N) Jo 2i (N ) (N T ) dN (7.129)
0
donde i = 1, y Jo es una funcin Bessel de primer tipo y orden 0.
En la Figura 7.39 se presenta una solucin grfica de la ecuacin (7.129).
Esta grfica puede ser usada para evaluar kL a a partir de datos de laboratorio o
predecir curvas de rompimiento utilizando correlaciones para kL a. Sin embargo,
es importante recordar que las consideraciones del modelo deben ser aplicables
al caso particular.
Cuando el equilibrio es lineal estos resultados son anlogos para cada uno
de los casos donde un mecanismo es el controlante, de tal manera que N o el
nmero de unidades de transferencia que se puede utilizar en la ecuacin (7.129)
es cualquiera de los establecidos en las ecuaciones (7.106)-(7.108), debido a que
para un equilibrio lineal (Y Y ) = (X X ). La curva de ruptura tiene igual
forma independientemente del mecanismo controlante (Hall et al., 1966).
Este modelo puede ser utilizado para predecir curvas de ruptura a partir
de correlaciones para kL a y para obtener valores de este coeficiente a partir de
datos experimentales de curvas de ruptura utilizando la Figura 7.39.
340 CAPTULO 7. ADSORCIN
F (c 0) = S(q 0) (7.130)
que es la curva de operacin del sistema. S es un flujo hipottico de adsorbente.
De acuerdo a la ecuacin (7.82) y las suposiciones del modelo, el balance de
soluto es un balance de estado estacionario y est dado por:
dc
= (1 ) kL a(c c ) (7.131)
dz
L c
(1 ) kL a dc
dz =
(c c )
0 c0
integrando se obtiene:
c0
dc
L= (7.132)
(1 ) kL a (c c )
c
o bien,
L = [HT U][N T U ]
donde HT U es la altura de una unidad de transferencia y N T U es el nmero
de unidades de transferencia.
La aplicacin de este mtodo requiere una integracin numrica de datos
de laboratorio para evaluar kL a, con el cual se pueden efectuar estudios de
escalamiento.
kL aL
N
1
a
dp
entonces,
L
N 3/2
1/2 dp
L
N
d2p
si el mecanismo de control es la difusin del soluto al interior del poro,
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 343
L
N
d2p
en el caso que el mecanismo controlante sea la dispersin,
L
N
dp
De tal manera que para el modelo combinado lineal se puede generalizar que:
L
N (7.134)
n dn+1
p
Con:
n = 1/2 para control de la pelcula.
n = 1 para control de la difusin en el slido.
n = 1 para control de la difusin al interior del poro.
n = 0 para control de la dispersin.
Se pide:
t
cdt
0
Prdidas =
t
c0 dt
0
t (tS tR ) (200 110)
=1 =1 = 1 = 0.60
2tR 2tR 2 110
c
Para = 0.5 to = 140 min
c0
c
Para = 0.1 tR = 110 min
c0
A = 23.33 min
Clculos:
rea de la seccin transversal de la columna:
Dc 1.0 cm2
A= = = 0.785 cm2
4 4
Velocidad superficial:
cm3
0.4
=
F
= min = 8.3 105 m
A 0.785 cm2 s
6 5 m kg 1/2
90 10 m 8.3 10 1000 3
= 2 + 1.45 s m
kg
9.5 104
ms
kg 1/3
9.5 104
ms
2
kg m
1000 3 5.5 1011
m s
6 m
kL = 3 10
s
6 6
a= = = 66, 666 m1
dp 90 106 m
m
kL a = 3 106 66, 666 m1 = 0.2 s1
s
Variables adimensionales:
7.4. DISEO DE ADSORBEDORES 347
c q c q 1/(c c)
1.7099 42.5250 1.7009 42.5274 111.7
1.7095 42.5150 1.6657 42.5273 022.8
1.7090 42.5026 1.6236 42.5272 011.7
1.7050 42.4031 1.3498 42.5261 002.8
0.5000 12.4349 0.0077 41.4258 002.0
0.2000 04.9740 0.0025 39.2694 005.1
0.1000 02.4870 0.0012 36.1345 010.1
0.0500 01.2435 0.0006 31.1594 020.2
0.0300 00.7461 0.0003 26.3265 033.7
0.0100 00.2487 0.0001 14.8276 101.1
0.0050 00.1243 0.0001 08.9583 202.2
7.5. Sumario
La operacin de adsorcin permite procesar soluciones diluidas para con-
centrar solutos mediante su inmovilizacin reversible en slidos especializados
llamados adsorbentes. En el estudio de la adsorcin son de fundamental impor-
tancia cuatro aspectos: los tipos de adsorbentes disponibles, los mecanismos de
adsorcin de acuerdo al tipo de interaccin soluto-adsorbente, las relaciones de
equilibrio de los sistemas y la cintica de la adsorcin.
La operacin de adsorcin puede realizarse en forma por lotes o continua
en tanques agitados, pero se realiza ms frecuentemente en columnas de lecho
fijo. La descripcin de la dinmica de la adsorcin es relativamente compleja y
puede ser abordada mediante diferentes enfoques que conducen a diseos que
varan desde los puramente empricos hasta los muy sofisticados.
350 CAPTULO 7. ADSORCIN
7.6. Problemas
7.1. Parmetros de equilibrio. La Figura 7.45 muestra los datos de equi-
librio del sistema para el sistema albmina-S Sefarosa FF a pH = 5 y T = 25
C.
Se pide: Calcular las constantes kd y qm del sistema.
Figura 7.45: Curva de equilibrio para albmina. Fuente: Skidmore et al., 1990.
c
Reproducida con el p erm iso de Elsevier Science Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reserva-
dos.
q = 25c1/2
donde q est en g/L de resina mientras que c en g/L de solucin.
Se pide: Determinar la altura necesaria de la columna si el objetivo es
recuperar el 96 % de cefalosporina.
Resp. L = 0.6 m
q = 20c1/2
y la lnea de operacin est dada por:
q = 5(c 0.1)
Se pide: Estimar el flujo manejable por la columna.
352 CAPTULO 7. ADSORCIN
q = 65c
Los parmetros de la adsorcin son:
kL = 5 106 m/s
= 0.99
dp = 105 106 m
c0 = 2 mg/mL
q = 130c (aprox.)
kL = 5.6 106 m/s
= 0.35
dp = 105 106 m
c0 = 1 mg/mL
Dc = 1 cm
L = 2.3 cm
F = 1 cm3 /min
dp = 0.01 cm
= 0.011 cm/s
L = 16.5 cm
= 0.6
qR /c0 = 18.1
q = 40c
donde c y q tienen unidades de mg/mL.
Se pide: Calcular el coeficiente de transferencia de masa kL a utilizando
el modelo cintico de equilibrio lineal y fuerza impulsora lineal en el lquido.
Pista: Obtener expresiones de N y NT en funcin de kL a y resolver por prueba
y error en la solucin grfica del modelo en el punto (9.5, 0.1) o bien utilizar la
ecuacin aproximada del Ejemplo 7.12.
354 CAPTULO 7. ADSORCIN
Resp. kL a = 100 h1
Adsorbente
Etapa Tipo A Tipo B
Adsorcin qm = 0.7 g/L qm = 0.4 g/L
Kd = 0.001 g/L Kd = 0.0001 g/L
Elucin qm = 0.005 g/L qm = 0.001 g/L
Kd = 0.001 g/L Kd = 0.05 g/L
Se pide:
a) Estimar los parmetros de equilibrio qm y Kd ajustando el modelo de
Langmuir a los datos experimentales, por regresin lineal utilizando el mtodo
del doble recproco.
b) Estimar los parmetros de equilibrio qm y Kd ajustando el modelo de
Langmuir a los datos experimentales, utilizando una regresin no lineal.
c) Graficar los datos experimentales, la curva ajustada mediante regresin
lineal y la curva ajustada mediante regresin no lineal, en un sistema coordenado
q vs c. Pista: Se puede utilizar el programa MATLAB de la Figura 7.46.
7.21 Tiempo medio. Demostrar que en el punto medio de la curva de
ruptura de acuerdo al modelo de platos se cumple que:
L 1
t0 = 1+ K
356 CAPTULO 7. ADSORCIN
7.7. Bibliografa
Aboudzadeh, M.R.; Jiawen1, Z.; Bin, W. 2006. Modeling of protein adsorp-
tion to DEAE sepharose FF: Comparison of data with model simulation.
Korean. J. Chem. Eng. 23, 124-130.
Arnold, F.H.; Blanch, H.W.; Wilke, C.R. 1985. I.- Predicting the performance
of affinity adsorbers. II.- The characterization of affinity columns by pulse
techniques. Chem. Eng. J. 30, B9-B36.
Bird, R.B.; Stewart, W.E.; Lightfoot, E.N. 2002. Transport Phenomena. John
Wiley and Sons. New, York. 2da Edicin. p. 755.
Draeger, N.M.; Chase, H.A. 1990. Modelling of protein adsorption in liquid flu-
idized beds. En: Separations for Biotehnology 2. Pyle, D.L.(Ed.). Elsevier
Applied Science. London. 325-334.
Foo, S.C.; Rice, R.G. 1975. On the prediction of ultimate separation in para-
metric pumps. AIChE J. 21, 1149-1158.
Gailliot, F.P.; Gleason, C.; Wilson, J.J.; Zwarik, J. 1990. Fluidized bed ad-
sorption for whole broth extraction. Biotech. Prog. 6, 370-375.
Hall, K.R.; Eagleton, L.C.; Acrivos, A.; Vermeulen, T. 1966. Pore and solid dif-
fusion kinetics in fixed-bed adsorption under constant-pattern conditions.
IEC Fundamentals. 5, 212-223.
Horstmann, B.J.; Chase, H.A. 1989. Modelling the affinity adsorption of im-
munoglobulin G to protein A inmobilised to agarosa matrices. Chem. Eng.
Res. Des. 67, 243-254.
Una vez que los caldos biolgicos han sido concentrados el paso siguiente
dentro de un esquema general de separacin, es la purificacin del producto de
inters. En esta Parte IV del libro se presentan los principios generales de las
operaciones ms utilizadas para efectuar esta purificacin: la cromatografa por
elucin, la precipitacin, la ultrafiltracin y la electroforesis.
En el Captulo 8 se presenta la operacin de cromatografa por elucin que
puede analizarse empleando gran parte de los conceptos utilizados para describir
la adsorcin en lecho fijo revisada en el captulo anterior. En el Captulo 9 se
presenta la operacin de precipitacin, que requiere un enfoque fuertemente fisi-
coqumico muy caracterstico de esta operacin. En los Captulos 10 y 11, se
presentan las operaciones de ultrafiltracin y electroforesis dado que sus princi-
pios permiten un enfoque unificado.
Captulo 8
8.1. Introduccin
La mayora de los bioprocesos involucran al menos una operacin cromatogr-
fica que frecuentemente es la clave para la factibilidad tcnica del proceso de
separacin. Aunado a que es una operacin relativamente cara, se debe tener
un especial cuidado en su escalamiento.
La cromatografa por elucin es un mtodo para separar en sus componentes
(resolver) una mezcla de solutos y es empleada con el propsito de purificar
productos de inters (Asenjo y Andrews, 2009). sta se efecta en columnas
empacadas con adsorbentes que pueden ser slidos, slidos porosos o geles. El
adsorbente constituye la fase estacionaria de la columna.
En la operacin de una columna cromatogrfica se aplica una pequea canti-
dad de muestra en la parte superior de la columna. Una vez colocada la mezcla se
hace pasar un lquido que favorezca la desorcin llamado eluyente (fase mvil).
Conforme avanzan los solutos sobre la columna stos se separan permitiendo su
purificacin.
En la cromatografa por elucin isocrtica la composicin del eluyente se
mantiene constante durante el proceso. En la elucin por gradiente la composi-
cin del eluyente se vara gradualmente.
La operacin de una columna cromatogrfica es similar a la de una columna
de adsorcin. Sin embargo, en la cromatografa por elucin la columna no se
satura completamente con soluto, sino que slo se carga en forma controlada
una porcin de sta.
La decisin entre emplear adsorcin frontal o cromatografa por elucin en
una separacin, radica principalmente en la dilucin del soluto. Por ejemplo, si
se desea remover de una solucin acuosa diluida dos compuestos orgnicos A
y B muy similares, la operacin apropiada es una adsorcin frontal. Por otro
lado, si estos mismos compuestos se desean separar entre s con una alta pureza
a partir de una muestra concentrada, la seleccin apropiada es la cromatografa
por elucin. Entre estos dos casos extremos de separaciones en columna, se han
364 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
Figura 8.2: Cromatograma tpico. Adaptada de: Belter et al., 1988. Reproducida
c
con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
8.2. Fundamentos
Existen varias tcnicas cromatogrficas basadas en la interaccin de una fase
mvil lquida y una fase estacionaria. Cinco aspectos fundamentales permiten
distinguir las semejanzas y diferencias entre ellas:
La cintica de la adsorcin.
Cromatografa lquido-lquido
En la cromatografa lquido-lquido se utiliza un adsorbente slido impreg-
nado con un lquido que funciona como fase estacionaria. La separacin de los
solutos es resultado de las diferencias en los coeficientes de particin de cada
uno de los solutos de la mezcla entre las fases lquidas (estacionaria y mvil).
8.2.2. Matrices
Actualmente diversos tipos de materiales o matrices son utilizados para fabri-
car los soportes (empaques) de las columnas cromatogrficas. En algunos casos
estos materiales se modifican qumicamente para incrementar su especificidad.
Alrededor del 90 % de las matrices que se emplean actualmente estn hechas de
materiales que forman geles de alto poder hidratante, los cuales se comercializan
en forma de pequeas esferas cuyo dimetro vara entre 10 y 100 m.
La Figura 8.3 muestra la estructura qumica de algunas de las matrices
empleadas en cromatografa. En general los materiales de las matrices pueden
ser de cuatro tipos:
1. Materiales inorgnicos: slica porosa, vidrio de poro controlado (marca
Spherosil) e hidroxiapatita.
8.2. FUNDAMENTOS 367
1. Difusin del soluto del seno del lquido a travs de una pelcula de lquido
que rodea al adsorbente.
2. Difusin del soluto dentro del poro del adsorbente.
3. Reaccin reversible del soluto con el adsorbente (la reaccin puede involu-
crar adsorcin, reaccin y desorcin de superficie).
4. Contradifusin del soluto en el poro hacia la superficie del adsorbente.
5. Contradifusin del soluto de la superficie del adsorbente hacia el seno del
lquido, a travs de la pelcula de lquido.
Figura 8.8: Columna cromatogrfica. Adaptada de: Nicoud y Perrut, 1991. Re-
c
producida con el p erm iso de Kluwer Academic Publishers. Copyright 1991. Todos los derechos
reservados.
El modelo de la columna.
dcn dqn
VE = F cn1 F cn (1 )VE (8.1)
dt dt
donde:
F : Flujo de alimentacin.
qn = Kcn (8.2)
Combinando las ecuaciones (8.1) y (8.2) se obtiene:
dcn
{[ + (1 )K] VE } = F (cn1 cn ) (8.3)
dt
[ + (1 )K]VE que contiene al soluto de las fases lquida y slida (de tal
manera que la expresin (8.3) es equivalente a un balance de masa de un tanque
de volumen V con entrada y salida).
La ecuacin (8.3) puede ser resuelta con las siguientes condiciones:
1. Inicialmente ninguna etapa contiene soluto.
para t = 0, c1 = cA
(lo anterior corresponde a considerar que la masa de soluto que se alimenta
a la primera etapa en el tiempo cero es M = V cA ).
donde:
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS 377
M = F cdt (8.8)
0
.
M= F cdt (8.9)
2
1 1 ( o )
M = (2) 2 A (V co ) exp d (8.10)
(2) 12 A 2 2A
o = N (8.13)
y
2A = N (8.14)
Mediante la ecuacin (8.5) se puede definir un o , dado por:
N F to
o = (8.15)
[ + (1 )K]Vc
como o = N , entonces:
[ + (1 )K]Vc
to = (8.16)
F
V
t= (8.18)
F
Vo
to = (8.19)
F
y entonces,
2
V
1
Vo
c = co exp (8.20)
2
N
L
HET P = (8.21)
N
Asimismo, dichas ecuaciones han demostrado ser tiles en el anlisis de la
dispersin y la resolucin de los picos de un cromatograma. Sin embargo, no
pueden ser utilizadas para predecir el nmero de etapas o la altura equivalente
de un plato terico, ni para predecir en que forma el cambio de las condiciones
de operacin de la columna afecta su comportamiento.
N = 2, 287
Es importante hacer notar que entre ms ancho sea el pico del cromatogra-
ma, N ser ms pequea y por lo tanto HET P ms grande, y viceversa. Con-
secuentemente, la HET P es una medida de la amplitud de un pico cromatogr-
fico (eficiencia de la columna). Entre menor sea HET P , mayor eficiencia de la
columna.
16 t2o
N= (8.22)
W2
donde W es el ancho de la base del cromatograma medido entre las rectas
tangentes que pasan por los puntos de inflexin del cromatograma. La teora de
platos es muy utilizada debido a que permite una rpida caracterizacin y una
comparacin sencilla entre columnas.
y el tiempo de retencin,
to = 41 min
sustituyendo valores,
para 0 p , c0 = c0
para > p , c0 = 0
donde p es la duracin del pulso referido a un tiempo adimensional dado por:
Ft
=
Vc
Una vez aplicada la muestra sta se eluye mediante un gradiente salino que
puede expresarse como:
(1 ) n
i = ie para ( p ) 1 + K
N
i (1 ) n
i = ie + ( p ) 1 + K
N
382 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
(1 ) n
para ( p ) > 1 + K
N
donde i es la fuerza inica y Kes una constante de equilibrio de referencia.
Bajo esta condiciones la relacin de equilibrio es funcin de la fuerza inica
y la concentracin de tal manera que:
q = K(c, i)c
Se pide:
a) Utilizando el modelo de platos obtener la expresin de la variacin de la
concentracin de soluto con el tiempo adimensional.
b) Obtener los perfiles de concentracin en la columna utilizando los datos
siguientes:
K= 0.9 ie = 0.7
N = 20 i/ = 0.001
C0 = 0.8 p = 0.5
= 0.4
(1 )
H=
utilizando la regla de la cadena para desarrollar el trmino dqn /d de la ecuacin
anterior se obtiene:
(1 ) dK(c, i) di
N (Cn1 Cn ) Cn
dCn di d
=
d (1 ) dK(C, i)
1+ K(C, i) + Cn
dCn
donde:
c
C=
c0
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS 383
Teora cintica
Los modelos basados en la teora cintica describen el comportamiento de
una cromatografa mediante los perfiles de concentracin de los solutos obtenidos
mediante balances de masa, relaciones de equilibrio y expresiones cinticas. Este
enfoque resulta ms complejo que el de la teora de platos pero permite mejorar
la descripcin y comprensin de estos sistemas.
Para iniciar la revisin de algunos modelos cinticos es conveniente describir
cuatro comportamientos generales de una columna cromatogrfica operando en
modo elucin isocrtica, descritos en la Figura 8.15.
Caso 3 Un pulso que contenga un soluto que pueda ser adsorbido, sufrir un
retardo y un cierto grado de dispersin al pasar por la columna. La dimensin de
estos efectos depender de la naturaleza de la adsorcin. La tcnica cromatogr-
fica se basa en el hecho de que diferentes solutos pueden sufrir diferentes retardos
en un mismo adsorbente.
c 2c c R
Dax 2 + = (8.23)
t z z
donde:
Modelo cintico lineal Este modelo supone que slo una resistencias con-
trola la transferencia de masa. En el caso que la resistencia en la pelcula sea
la controlante, la velocidad de transferencia de masa del lquido al adsorbente
puede ser expresada como:
dc
R = (8.26)
dz
Combinando las ecuaciones (8.25) y (8.26) se obtiene:
dc
(1 )kL a(c c ) = (8.27)
dz
Esta ecuacin puede ser integrada para obtener la longitud de la columna,
L cA
dc
L = dz = (8.28)
(1 )kL a (c c )
0 c
L = HT U NT U (8.29)
Los modelos cuando la resistencia controlante es otra son anlogos.
c 2c c R
Dax 2 + = (8.30)
t z z
En la expresin anterior, R es la velocidad de transferencia de masa de soluto
entre el lquido y el adsorbente por unidad de volumen de lecho, dada por:
3(1 ) ci
R= i Di |r=rm (8.31)
rm r
donde:
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS 387
mn = c(t, L)tn dt (8.35)
0
c(t, L)tn dt
mn
n = = 0 (8.36)
mo
c(t, L)dt
0
y el momento central n,
c(t, L)(t 1 )n dt
0
n = (8.37)
c(t, L)dt
0
c(t, L)tdt
1 = 0 (8.38)
c(t, L)dt
0
tp L
1 =
2
8.4. DISEO DE COLUMNAS CROMATOGRFICAS 389
. 2
2L Dax K
2 = 2 + (1 ) (i ) 1 + + (1 ) (8.41)
() i
2 2 2 /
K2 dp i K 1 10
+ 1+ +
k1 60 i i Di kL dp
t2p
+
12
La ecuacin anterior muestra que la dispersin del pico respecto al tiempo
de elucin o segundo momento central, es funcin de varios parmetros como
el coeficiente de transferencia de masa en la pelcula, el coeficiente de difusin
efectiva al interior del poro, la constante cintica de adsorcin, la constante de
equilibrio, el coeficiente de dispersin y los parmetros del empaque.
El mtodo de momentos elimina la necesidad de una solucin numrica del
sistema de ecuaciones de conservacin de la columna. Sin embargo, su uso est
restringido a sistemas que presenten isotermas y expresiones de transferencia de
masa lineales.
Una de las principales aplicaciones del modelo es en la estimacin de parme-
tros para diseo, pero slo de aquellos que no varan con la escala, como la difu-
sividad efectiva de partcula, las constantes cinticas de adsorcin y la porosidad
de la partcula. Sin embargo, los coeficientes de dispersin que se determinen
en una columna de laboratorio pueden ser muy diferentes a los de una columna
industrial.
Para Albmina:
tp L
1 = 0.69
2
La porosidad de la columna se estim utilizando datos de tiempo de residen-
cia de azul de dextrano (molcula que no penetra en los poros del adsorbente
ni se adsorbe) y fue de = 0.35.
Se pide: A partir de estos resultados estimar la porosidad del empaque i .
Solucin:
En el caso que no existe adsorcin (K = 0), la ecuacin (8.39) se puede
expresar como:
L tp
1 = [ + (1 )i ] +
2
entonces,
tp L
1 = [ + (1 )i ]
2
sustituyendo valores en la expresin anterior para el caso de la mioglobulina se
tiene:
(1 )kL aL
N = NTU = (8.42)
y combinando esta ecuacin con la ecuacin (8.17) se puede obtener el perfil de
concentracin en funcin de las variables de operacin,
2
(1 )kL aL t
c = co exp 1 (8.43)
2 to
En la ecuacin (8.43) la desviacin estndar del pico est dada por:
12
= to (8.44)
(1 )kL aL
por otro lado se sabe que:
L
HET P = (8.45)
N
y se puede expresar la HET P no slo en trminos de un parmetro hipottico
N, sino en funcin de caractersticas fsicas del sistema,
2L
HET P = = 2 (8.46)
(1 )kL a to
Se pide calcular:
392 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
(0.41 cm)2
Vc = 25 cm = 3.30 cm3
4
cm3
1 to F 1 62 min 2
K= =
min 0.38
= 60
(1 ) Vc (1 0.38) 3.30 cm3
L 25 cm
HET P = = = 0.0585 cm
N 427
cm3 min
2
= min 60 s = 0.25 cm
0.132 cm2 s
0.42
cm g
cm 0.0045 cm 0.25 1.0
kL = 1.17 0.25 s cm3
s g
0.01
cm s
g 0.67
0.01
cm s
g 5
cm2
1.0 0.7 10
cm3 s
3 cm
kL = 5.67 10
s
El clculo del rea interfacial es:
6 6
a= = = 1333.33 cm1
dp 0.0045 cm
entonces,
cm
(1 )kL aL 5.67 103 826.67 cm1 25 cm
N= = s = 468
cm
0.25
s
De acuerdo a la ecuacin (8.46),
12
62 min
= to = = 2.86 min
(1 )kL aL 468
De la ecuacin (8.46),
2L (2.86 min)2 25 cm
HET P = = = 0.052 cm
t2o (63 min)2
d) Para resolver este inciso necesariamente se tiene que hacer uso del modelo
combinado lineal. Esta es la ventaja de este tipo de modelo; es decir, nos permite
hacer predicciones con la variacin de ciertos parmetros.
Una columna de 20 cm representa la reduccin de un 20 % en longitud de
tal manera que:
cm
5.67 103 826.67 cm1 20 cm
N= s = 374
cm
0.25
s
por otra parte:
0.132 cm2 20 cm
to = [0.38 + (1 0.38) 60] = 49.6 min
cm3
2
min
De la misma manera se pueden efectuar los clculos para L = 30 cm (+20 %).
394 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
2
2DAB K
HET P = 2" + + 2 (1 )(i ) 1 +
i
d2p 1 10
+
60(1 ) i Di kL dp
2 () (8.47)
K
+ (1 )(i ) 1 +
i
donde:
1 = to
y
2 = 2
de tal manera que:
L
HET P = 22
1
La expresin anterior conjuntamente con las ecuaciones (8.39), (8.41), (8.48)
y las condiciones particulares:
tp = 0
K2
= 0
k1
conducen a:
B
HET P = A + + C () (8.49)
()
donde:
Resolucin
En la cromatografa por elucin un objetivo puede ser el separar los compo-
nentes de una muestra en forma satisfactoria. La medida del grado de separacin
de dos componentes en una operacin cromatogrfica se conoce como resolucin
o eficiencia de separacin.
La resolucin de una columna depende de dos factores: a) la selectividad de
la columna que es una medida de la afinidad de los solutos por el adsorbente
dada por el factor de separacin o selectividad = K2 /K1 y b) la eficiencia de la
columna que est relacionada con el grado de dispersin de los picos (HET P ).
La separacin de dos solutos (Fig. 8.17a ) puede aumentarse mejorando el factor
de separacin (Fig. 8.17b ), aumentando el nmero de platos (Fig. 8.17c ) o
combinando ambos efectos.
2(to2 to1 )
Rs = 2 (8.50)
W1 + W2
y
W = 4 (8.51)
La ecuacin (8.50) puede ser utilizada conjuntamente con los modelos cro-
matogrficos apropiados para analizar este tipo de acciones y generar las deci-
siones correspondientes. Por ejemplo, se puede estimar la longitud necesaria de
una columna para alcanzar una determinada resolucin.
Anticuerpo Impureza
to (h) 6.42 7.600
(h) 0.80 0.175
co 82 43
W2 = 4 2 = (4)(0.175 h) = 0.7 h
la resolucin se calcula con la ecuacin (8.50),
(7.60 6.42)
Rs = = 0.3
3.2 + 0.70
esta resolucin es muy baja.
Pureza
Cuando se tiene una resolucin muy baja debido a propiedades muy seme-
jantes entre los solutos de una mezcla o por cuestiones de productividad, existe
un compromiso entre el rendimiento alcanzable y la pureza deseada. Entre mayor
sea la pureza requerida, menor rendimiento puede ser obtenido.
Es posible efectuar un anlisis de pureza y rendimiento de columnas em-
pleando los modelos revisados (Azevedo et al., 2009). Considerando que en una
operacin cromatogrfica la masa eluida del soluto j de una mezcla, en el inter-
valo de t a t est dada por:
t
SEj = F cj dt (8.52)
t
donde:
t
F cj dt
t
P Rj = t
(8.53)
n
1
F ci dt
i=1 t
Rendimiento
El rendimiento de una operacin cromatogrfica puede ser definido como
la cantidad de soluto recuperado en un cierto intervalo, respecto a la cantidad
aplicada en la muestra original.
La masa total de soluto j inyectada a la columna est dada por:
STj = F cj dt (8.54)
0
La proporcin de soluto j recuperada en el intervalo de t a t o rendimiento REj
puede entonces expresarse como:
t
F cj dt
SEj
REj = = t (8.55)
STj
F cj dt
0
Las ecuaciones (8.53) y (8.55) combinadas con los modelos que describen los
perfiles de concentracin en las columnas, nos permiten calcular y/o predecir
(segn el tipo de modelo) rendimientos y pureza en columnas.
t
(t t01 )2
F co1 exp dt
2 21
SE1
RE1 = = t
ST1 (t to1 )2
F co1 exp dt
2 21
0
t
(t to1 )2
F co1 exp dt
2 21
t
P R1
t t
(t to1 )2 (t to2 )2
F co1 exp dt + F co2 exp dt
221 2 22
t t
402 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
(co1 ) RE1
P R1 =
(co1 ) RE1 + (co2 ) RE2
sustituyendo valores en las expresiones desarrolladas se tiene:
1 t 6.42
RE1 = 1 + Erf
2 2(0.8)
1 t 7.60
RE2 = 1 + Erf
2 2(0.175)
82 RE1
P R1 =
82 RE1 + 43 RE2
Los resultados sobre los clculos de los rendimientos y la pureza de anticuer-
po se muestran en forma grfica en la Figura 8.20. Se puede constatar en la
figura el hecho de que en una operacin de separacin generalmente se pueden
obtener altas purezas o altos rendimientos, pero no ambos.
Por otro lado, para productos de alto volumen o que van a competir con pro-
ductos existentes, el diseo del proceso debe ser ms cuidadoso (la oferta excede
la demanda y el costo controla).
El escalamiento de una columna cromatogrfica consiste generalmente en
determinar el diseo de la columna que permita cumplir con una productivi-
dad mayor a la de la columna empleada en la obtencin de los datos para el
diseo. En general las tcnicas de escalamiento surgen del reconocimiento de la
imposibilidad del diseo de este tipo de equipo mediante modelos estrictamente
tericos (Gibbs y Lighfoot, 1986).
Factores de escalamiento
150(1 )L
P = (8.56)
2 d2p
4F
= (8.57)
Dc2
donde Dc es el dimetro de la columna.
5. Geometra. Los parmetros bsicos que define la geometra de una
columna y que pueden ser modificados son: dp , Dc y L.
6. Dinmica de la columna. En el proceso de escalamiento es fundamen-
tal tomar en cuenta los grupos adimensionales que se derivan de la expresiones
diferenciales que describen los perfiles de concentracin en la columna; de par-
ticular importancia son el tiempo t/to y el nmero de unidades de transferencia
N T U o de etapas tericas N.
7. Optimizacin. En el proceso de escalamiento generalmente tambin se
busca optimizar la columna fijando criterios de mxima productividad o mnimo
costo.
igual en ambas escalas. En este caso lineal los perfiles gaussianos estn dados
por la relacin ya conocida,
2
t
1
t
c = co exp o
2
N
L
N= (8.58)
k ()n dn+1
p
L
to = [ + (1 )K] (8.59)
Como primer alternativa se puede considerar incrementar Dc , dp y L; sin
embargo, no es posible hacer este cambio sin alterar el perfil de concentracin
dado que el valor de N cambia con todos estos parmetros, independientemente
del valor que tome n en la ecuacin (8.58) o mecanismo controlante de la cintica.
Tambin se puede considerar incrementar Dc y dp , de tal manera que su
razn se mantenga constante; sin embargo esto tambin conduce a un cambio
en el valor de N .
Como tercera alternativa se puede considerar mantener dp igual para ambas
escalas e incrementar y L, de tal manera que la relacin L/ sea igual en
ambas escalas, lo que permite mantener to y N constantes entre las escalas, en
casi todos los casos de un slo mecanismo controlante. Sin embargo, incrementar
simultneamente L y produce un efecto dramtico sobre la cada de presin,
de acuerdo a lo que establece la ecuacin (8.56).
La solucin comnmente empleada consiste en usar columnas poco esbeltas
con dp , L y iguales a las de la columna de escala laboratorio. Esto permite
aumentar la produccin (no la productividad), al aumentar el rea de flujo o
dimetro de columna.
En el caso de que en el proceso de escalamiento pudiera disminuirse el
dimetro del empaque utilizado a nivel laboratorio dp , es posible realizar el es-
calamiento y obtener una mejor resolucin, con una columna de menor volumen
y conservando la misma cada de presin (Wankat y Koo, 1988).
406 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
Transferrina Sales
to (min) 41 88
(min) 4 4
Se pide:
a) Calcular el tiempo necesario para obtener el 90 % de rendimiento de trans-
ferrina.
b) Si se desea incrementar la productividad de la columna manteniendo la
misma geometra y suponiendo que la etapa controlante es tal que la desviacin
1
estndar es proporcional a () 2 , calcular la velocidad de alimentacin m-
xima y el tiempo del ciclo necesario para obtener un rendimiento de 99 % de
transferrina con 98 % de pureza (transferrina = 1 y sales = 2; escalas I y II).
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin desarrollada en el Ejemplo 8.8,
1 t to1
RE1 = 1 + Erf
2 21
sustituyendo valores,
1 t 41
0.90 = 1 + Erf
2 24
de tal manera que,
masa de transferrina
P R1 =
masa total
(masa de transferrina)(RE1 )
P R1 =
(masa de transferrina)(RE1 ) + (masa de sal)(RE2 )
12
Por otro lado, como () , se pueden desarrollar la siguientes rela-
ciones:
12
II I
=
I 1 II
12
II I
=
I 2 II
utilizando la ecuacin (8.59), se obtiene:
toII I
=
toI 1 II
toII I
=
toI 2 II
Sustituyendo valores se puede establecer el siguiente sistema de ecuaciones:
(0.8) (REII )1
0.98 =
(0.8) (REII )1 + (0.2) (REII )2
1 t toII
0.99 = 1 + Erf
2 2 II 1
1 t toII
(REII )2 = 1 + Erf
2 2 II 2
12.65
(II )1 = 1
( II ) 2
12.65
(II )2 = 1
( II ) 2
410
(toII )1 =
II
880
(toII )2 =
II
El sistema anterior de ecuaciones puede ser resuelto mediante el siguiente
mtodo de clculo:
1. Suponer una II .
408 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
cm
II = 93
h
t = 7.4 min
8.5. Sumario
La cromatografa por elucin se utiliza para obtener productos biotecnolgi-
cos con un alto grado de pureza. Existen varias formas para llevar a cabo una
operacin cromatogrfica que dependen del tipo de adsorbente empleado y las
condiciones en las que se realiza.
Las operaciones cromatogrficas se desarrollan generalmente en columnas
empacadas fabricadas en diversos tipos de materiales y operadas tanto a pre-
siones moderadas como a altas presiones.
Las columnas cromatogrficas han sido escaladas principalmente a partir de
columnas de laboratorio, pero existe una creciente necesidad de apoyar el dise-
o de las columnas mediante el empleo de modelos. Hoy los bioprocesos bien
establecidos utilizan modelos matemticos en la optimizacin y simplificacin de
la validacin de las operaciones de cromatografa. La modelacin y simulacin
de esta operacin puede ayudar a reducir tiempos y costos, en el desarrollo y
operacin de los bioprocesos.
412 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
8.6. Problemas
8.1. Nmero de platos tericos. El ancho W de un pico es de 50 s y el
tiempo de retencin es de 50 min.
Se pide: Calcular el nmero de platos tericos de la columna bajo estas
condiciones.
Resp: 57,600.
(Vo )A = Vc + KpA Vi
(Vo )B = Vc + KpB Vi
donde Vc es el volumen total del lecho de la columna y KpA y KpB son los
coeficientes de particin.
El volumen de los poros Vi puede ser calculado con la expresin:
Vi = aWr
donde a es la masa seca de gel y Wr la capacidad hidratante del gel.
Se desea escalar la operacin de esta columna a una columna de 0.06 m de
dimetro y 3 m de lecho manteniendo la relacin de volumen vaco a volumen
total constante (Vc /Vc ) = Cte., y la relacin de volumen de los poros a volumen
total constante.
Se pide:
a) Determinar los volmenes de elucin de la ASB y de la glucosa en la nueva
columna.
b) La masa del adsorbente a emplear en la segunda columna.
c) Demostrar que en cromatografa en gel el modelo de van Deemter conduce
a:
Vc (1 )p
Kp =
Vi
d) Cul es el significado fsico de Kp ?
e) Comparar la ecuacin (8.16) con la (8.39) para su uso en cromatografa
en gel.
Resp. a) (Vo )A = 2.834 103 m3 y b) 1.76 kg.
Se pide:
a) Obtener una expresin del impacto del costo del adsorbente sobre el costo
del producto.
b) Graficar CA vs P para valores de S/nt de 0.1, 0.5 y 1.0, en el rango de
0 P 0.05
c) En una operacin cromatogrfica el adsorbente tiene un costo de $10.00/kg
y tiene una vida de 2, 000 h. La operacin se efecta de tal forma que se inyecta
una muestra cada 2.5 h y la productividad promedio P es de 0.02 kg de produc-
to/kg de adsorbente-ciclo. Estimar el impacto del costo del adsorbente sobre el
producto.
Resp. c) CA = $0.625/kg de producto.
LR : Ciclos/ciclo de regeneracin.
Albmina Hemoglobina
Conc. mxima 0.25 g/L 0.22 g/L
Tiempo de elucin 680 s 820 s
Conc. en un tiempo t 0.11 g/L 0.10 g/L
Tiempo t 600 s 670 s
donde:
T : Temperatura = 293 K.
I II
Ciclos/lote 5 5
Volumen colectado (L/ciclo) 1350 1800 1350 1600
Conc. promedio (g/L) 21.3 36.8
Ciclos /ao 18 20
418 CAPTULO 8. CROMATOGRAFA POR ELUCIN
8.7. Bibliografa
Arnold, F.H.; Blanch, H.W.; Wilke, C.R. 1985. Analysis of affinity separations.
Chem. Eng. J. 30, B9-B23.
Azevedo A.M.; Rosa, P.A.J.; Ferreira, I.F.; de Vries, J.; Visser, T.J.; Aires-
Barros, M.R. 2009. Downstream processing of human antibodies inte-
grating an extraction capture step and cation exchange chromatography.
J. Chromatog. B. 877, 50-58.
Bird, R.B.; Stewart, W.E.; Lightfoot, E.N. 2002. Transport Phenomena. John
Wiley and Sons. New, York. 2da Edicin.
Boyer, P.M.; Hsu, J.T. 1992. Experimental studies of restricted protein diffu-
sion in agarose matriz. AIChE, J. 38, 259-272.
Cowan, G.H.; Gosling, J.F.; Sweetenham, W.P. 1987. Modeling for scale-up
and optimisation of packed-bed columns in adsoption and chromatogra-
phy. En: Separations for biotechnology. Verral, M.S.; Hudson, M.S. (Eds.).
Ellis Horwood. England. 10, 152-175.
Fulton, S.P.; Meys, M.; Vrady, L., Jansen, R.; Afeyan, M.B. 1991. Anti-
body quantification in seconds using affinity perfusion chromatography.
Biotechecniques. 11, 226-231.
Furusawa, T.; Suzuki, M.; Smith, J.M. 1976. Catal. Rev. Sci. Eng. 13, 43-76.
Precipitacin
9.1. Introduccin
Precipitacin es el proceso en el que un soluto soluble se separa en forma de
slido insoluble de una solucin mediante la accin de un agente precipitante.
Algunos productos biotecnolgicos presentan solubilidades que varan con la
temperatura, el pH, la fuerza inica y con la constante dielctrica del medio.
Esta propiedad puede ser utilizada para concentrar y purificar estos productos
mediante la operacin de precipitacin. A nivel industrial puede ser utilizada
para la obtencin de productos proteicos y nucleicos.
Tericamente la precipitacin debe producir un soluto concentrado y relati-
vamente puro, por lo que es una operacin que se usa con frecuencia al inicio de
un proceso de bioseparacin. Los agentes precipitantes seleccionados no deben
producir desnaturalizacin del soluto y deben proveer una mayor estabilidad del
soluto en el precipitado que en la solucin.
La precipitacin de protenas y la subsecuente recuperacin del precipitado,
son de las operaciones ms importantes para la recuperacin y purificacin de
protenas tanto a nivel laboratorio como a escala industrial.
Las ventajas de usar la precipitacin para la concentracin y purificacin de
solutos son, entre otras, las siguientes:
1. Es relativamente barata.
2. Es una operacin que se adapta fcilmente a gran escala.
3. Puede realizarse en forma continua.
4. El equipo que se utiliza es sencillo.
5. Se dispone de diversos agentes precipitantes y en muchos casos stos son
baratos.
9.2. Fundamentos
La precipitacin de protenas puede realizarse empleando diferentes princi-
pios (Tabla 9.1).
Afinidad Ligandos
(P n1 H2 O) + P n2 H2 O + (AB)sal (9.4)
P P + A+ n1 H2 O + B n2 H2 O
La Figura 9.4 muestra un esquema del efecto de una sal en la precipita-
cin de protenas (insolubilizacin por salado) basado en el proceso descrito
anteriormente.
I: Fuerza inica.
: Constante caracterstica.
donde:
Ci : Concentracin del in.
Zi : Carga del in.
La ecuacin de Cohn se puede escribir en forma simplificada como:
NH+ +
4 > K > Na
+
3. Seleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentraciones que
requiere el mtodo.
4. Seleccionar una sal que produzca un precipitado cuya densidad sea dife-
rente a la de la solucin para facilitar su separacin.
S Concentracin
(mg/mL) sulfato de amonio (M)
0.0064 2.85
0.0140 2.80
0.0700 2.60
0.0300 2.50
0.3700 2.45
0.8000 2.38
1.1000 2.34
Se pide:
a) Determinar los parmetros de la ecuacin de solubilidad A y m.
b) Calcular la solubilidad de la enzima predicha por el modelo a una con-
centracin 2.34 M de sulfato de amonio.
Solucin:
a) Parmetros de solubilidad. De acuerdo a la ecuacin (9.7) la solubilidad
de la enzima est dada por:
S = 1.2 mg/mL
Precipitacin isoelctrica
Otra tcnica muy utilizada para precipitar protenas se basa en la disminu-
cin de su solubilidad en el punto isoelctrico.
Figura 9.8: Efecto del pH sobre la concentracin de protena de soya que per-
manece en solucin, expresada como una fraccin de la concentracin inicial del
extracto acuoso. Fuente: Bell et al., 1983. Reproducida con el p erm iso de Springer-Verlag.
c
Copyright 1983. Todos los derechos reservados.
Protena pH
Pepsina 1.0
Ovoalbmina 4.6
Seroalbmina 4.0
Ureasa 5.0
-Lactoglobulina 5.2
1 - Globulina 6.6
Hemoglobina 6.8
Mioglobina 7.0
Ribonucleasa 9.6
Lisozima 11.0
Lquido D
Agua 80.0
Metanol 33.0
Etanol 24.0
Acetona 21.4
Benceno 2.3
Hexano 1.9
K
log S = log So + (9.8)
Ds2
donde:
Ds : Constante dielctrica de la mezcla solvente-agua, misma que vara de-
pendiendo de la cantidad de solvente agregada.
K : Constante que toma en cuenta la constante dielctrica original del medio
acuoso.
So : Solubilidad extrapolada.
Ve = 1 10KC
Vd = 10KC
S = k 10KC
donde k es una constante de proporcionalidad. La ecuacin anterior puede ser
escrita en forma ms conveniente como:
log S = log k KC
o bien como:
log S = X KC (9.11)
que es la ecuacin de una recta con pendiente K y ordenada en el origen X.
El uso de la ecuacin (9.11) proporciona un resultado similar (Juckes, 1971)
al que se obtiene utilizando el volumen disponible expresado en la ecuacin (9.9).
La ecuacin (9.11) es equivalente a la ecuacin correspondiente a la precipitacin
por insolubilizacin por salado.
El modelo de Ogston que se deriva de una simplificacin termodinmica, es-
tablece que la protena permanece en solucin siempre que su potencial qumico
en solucin sea menor que su potencial en la fase precipitada. Considera que el
potencial qumico de la protena i en presencia de un polmero, est dado por:
(i oi )
= ln S + f S + aC (9.13)
RT
donde:
S: Solubilidad de la protena.
C: Concentracin de polietilenglicol.
f : Coeficiente de interaccin protena-protena.
a: Coeficiente de interaccin protena-polietilenglicol.
436 CAPTULO 9. PRECIPITACIN
ln S + f S = X aC (9.14)
donde:
i o
X=
RT
En este sistema puede suponerse que el trmino f S es mucho ms pequeo
que ln S entonces la ecuacin (9.14) puede ser escrita como:
ln S = X aC (9.15)
d[P ]
= k[P ] (9.16)
dt
donde:
P
= exp(kt)
Po
440 CAPTULO 9. PRECIPITACIN
ln(0.5)
k= = 0.0693 min1 = 1.155 103 s1
10 min
(k)323 o K ln(0.5)
= = 6.58
(k)T10 % ln(0.9)
combinando el resultado anterior con la ecuacin (9.17) se obtiene:
(k)323 o K E 323 T
= exp
(k)T10 % R 323 T
J
400, 000 323 T
6.58 = exp mol
J 323 T
8.31
mol K
la temperatura es:
T10 % = 46 C
Desnaturalizacin por pH
Debido a que ciertas protenas de inters son estables a pHs extremos, se ha
utilizado esta propiedad para purificarlas mediante la precipitacin por desna-
turalizacin selectiva de sus protenas contaminantes.
La desnaturalizacin por pH ocurre tanto por la formacin en la molcula
de protena de regiones con cargas iguales que tienden a repelerse, como por el
rompimiento de las fuerzas de atraccin que le dan su conformacin (Fig. 9.12).
La velocidad de desnaturalizacin a pHs extremos ya sean cidos o bsicos
depende del tiempo que tarde la protena en abrirse y perder su conformacin.
Este proceso es esencialmente similar al que ocurre en la desnaturalizacin por
temperatura.
Mezclado inicial
Una vez que se agrega el agente precipitante (sal, solvente o polmero no
inico) a la solucin de protenas, se requiere que ste se difunda rpidamente
para obtener una mezcla homognea. Es importante promover los choques entre
el producto y el agente precipitante lo ms rpido posible.
El tiempo requerido para obtener una mezcla homognea en un tanque bien
agitado esta dado por:
l2
t= (9.19)
4D
donde:
D: Coeficiente de difusin. [cm2 /s].
l: Dimetro promedio de los remolinos ocasionados por la agitacin. [cm].
De acuerdo a la teora de difusin de remolinos de Kolmogoroff el dimetro
de stos est dado por:
1/4
3
l= (9.20)
P/V
donde:
: Densidad de la solucin. [g/cm3 ].
: Viscosidad cinemtica. [cm2 /s].
P/V : razn de potencia por unidad de volumen del sistema de agitacin.
[HP/cm3 ].
Combinando las ecuaciones (9.19) y (9.20) se pueden estimar tiempos de mez-
clado mediante parmetros del sistema. Este tiempo es una medida del tiempo
necesario para obtener una mezcla homognea y de inicio de la precipitacin.
446 CAPTULO 9. PRECIPITACIN
Nucleacin
Durante la nucleacin se producen partculas de tamao ultramicroscpico
una vez que la mezcla se sobresatura. En esta fase del proceso se inicia la forma-
cin de las pequeas partculas de precipitado (ncleos) que aparecen despus de
agregar el agente precipitante. En algunos casos como en los sistemas coloidales
esta etapa es instantnea, por lo que el tiempo en que esto ocurre puede despre-
ciarse. En esta etapa las partculas de precipitado se encuentran dispersas en el
lquido.
dyi
= kyi2 (9.21)
dt
donde:
t: Tiempo. [s]
1 1
= kt (9.22)
yi yio
donde yio es la concentracin inicial de partculas de soluto i.
La ecuacin (9.22) describe una recta con ordenada al origen 1/yio y pen-
diente k.
Debido a que es difcil medir la concentracin yi la ecuacin (9.22) puede
escribirse en trminos del peso molecular promedio del precipitado utilizando
un balance de masa. Esto es:
yi M = yio Mo (9.23)
combinando las ecuaciones (9.22) y (9.23), se puede obtener la siguiente expre-
sin:
9.4. DISEO DE PRECIPITADORES 447
k = 8DdN (9.25)
donde:
d es el dimetro de la molecula de soluto; D, es el coeficiente de difusin; y
N, es el nmero de Avogadro.
El valor del coeficiente de difusin de la ecuacin anterior es un valor prome-
dio de todas las partculas en el sistema, de tal forma que a medida que la
partcula crece, el valor del coeficiente de difusin disminuye. De acuerdo a la
ecuacin (9.25) an cuando esto suceda, el valor de la constante no se altera pues
la disminucin en D tiene como causa un incremento en la misma proporcin
del dimetro de la partcula d, de tal manera que el producto Dd permanece
constante, y en consecuencia k permanece constante. Es decir, la determinacin
experimental de k puede ser aplicada a diversos sistemas.
Generalmente el tiempo de formacin de las partculas primarias es mucho
menor que el tiempo global del proceso de precipitacin.
448 CAPTULO 9. PRECIPITACIN
Floculacin
La aglomeracin o floculacin de las partculas de precipitado es la ltima
fase del proceso de precipitacin.
Durante la agregacin ortocintica el crecimiento es funcin directa del mez-
clado. Sin embargo, este mismo mezclado puede causar el rompimiento de los
flculos formados. Debido a lo anterior la fase de floculacin generalmente se
realiza a bajas velocidades de agitacin y en ocasiones sin agitacin, proceso
conocido como envejecimiento del precipitado.
La floculacin espontnea de la suspensin puede ser estimulada por la adi-
cin de agentes floculantes, en este caso la velocidad de floculacin depender
del mezclado del agente con la solucin de protenas, de la velocidad de difusin
y de la unin del agente floculante a la superficie de la molcula de protena.
Todas estas etapas determinan el tiempo de espera antes de que la floculacin
comience. Estos aspectos deben tomarse en consideracin en el diseo del pre-
cipitador.
Separacin
Una vez que los flculos alcanzan un dimetro apropiado se remueven de
la solucin mediante un mtodo de separacin slido-lquido como la centrifu-
gacin. El uso de esta operacin requiere que los flculos sean de tamao ade-
cuado y estables.
Solucin:
Se tienen los siguientes datos:
s = 1.032 g/cm3
p = 1.367 g/cm3
= 0.01 cm2 /s
P = 1.0 HP= 746 107 gcm2 /s3
V = 1000 L
yio = 0.1 g/L
M = 27, 000 Da
d = 0.002 104 cm
D = 8.5 107 cm2 /s
= 0.08
1/2
1 3
t =
4D P/V
1/2
3
1.032 g cm2
0.01
1 cm3 s
t =
cm2 7 g cm2
4 8.5 107 746 10
s
s3
106 cm3
t = 3.46 s
1 1
= + (8DdN)t
yi yio
g
27, 000
mol + 8 8.5 107 cm
2
1
= g
yi 0.1 3 s
10 cm3
4 23 1
(0.002 10 cm) 6.02 10 (3.46 s)
mol
12 cm
3
1 1
= + 8.9 10
yi cm3 mol
3.7 109
mol
entonces,
mol
yi = 1.12 1013
cm3
yi Mo
=
yio M
y el peso molecular promedio M de las partculas de 50 m es:
d3
M = N
6
3
g 23 partculas 50 104 cm3
M = 1.367 6.023 10
cm3 mol 6 partcula
g
M = 5.39 1016
mol
entonces,
g
yi 27, 000
= mol = 5 1013
yio 16
g
5.39 10
mol
la fraccin de volumen de soluto en la solucin es:
9.4. DISEO DE PRECIPITADORES 453
1 cm3
1.367 g
= = 7.31 105
103 cm3
0.1 g
sustituyendo estos valores en la ecuacin (A) anterior se tiene:
ln(5 1013 )
t = 1/2
7 g cm
2
5
746 10
4 0.08 7.31 10 s3
2
g cm
106 cm3 1.032 0.01
cm3 s
t = 4, 474 s
Precipitadores continuos
En un reactor tubular cuando se tiene un buen mezclado en el punto donde
se agrega el agente precipitante, la protena se ubica rpidamente a las condi-
ciones finales en que ocurre la precipitacin. Las fuerzas de corte a las que estn
sujetas las partculas pueden ser las que produce el flujo laminar, aun cuando
la velocidad media de corte puede exceder a la de un tanque agitado.
En un reactor continuo tipo tanque agitado la protena es puesta en contacto
instantneamente con el agente precipitante, alcanzndose al mismo tiempo las
condiciones finales de precipitacin. Las condiciones de corte son muy parecidas
a las de un precipitador por lotes, y las partculas estarn sujetas a las fuerzas
de corte durante el tiempo de residencia en el reactor (Glatz, 1990).
La Figura 9.18 muestra la influencia del tipo de reactor sobre la curva de
insolubilizacin por salado de la fumarasa (Bell et al., 1983). Puede observarse
que existe un desplazamiento en la curvas, que puede ser debido a diferencias
locales en el pH, provocadas por la forma como se agrega el sulfato de amonio.
El mismo corrimiento se observa cuando hay variacin en el grado de mezclado
en un tanque agitado.
Los resultados anteriores sugieren que un factor importante a considerar en
el diseo del reactor, es la agitacin que se proporciona a la solucin en la que se
encuentra la protena de inters. Esto es particularmente importante cuando se
desea escalar el proceso debido a la relacin que hay entre potencia y agitacin.
Para visualizar el diseo de precipitadores continuos, se puede partir de un
sistema sencillo donde se cuenta con una suspensin diluida (< 20 g/L) y ve-
locidades de agitacin moderadas, de tal manera que el rompimiento de los
agregados pueda ser despreciado (Rohani y Chen, 1993). Bajo estas condiciones
es posible utilizar balances poblacionales para derivar expresiones de las veloci-
dades de nucleacin, crecimiento y agregacin a partir de datos experimentales.
Las correlaciones empricas que se obtienen son de la siguiente forma:
454 CAPTULO 9. PRECIPITACIN
Figura 9.18: Influencia del tipo de contacto sobre la curva de insolubilizacin por
salado de fumarasa. () contacto intermitente con sulfato de amonio slido; ()
contacto intermitente con solucin saturada de sulfato de amonio; () contacto
continuo = 96 s , V = 0.38 L y solucin saturada de sulfato de amonio; ()
contacto continuo = 918 s, V = 1.87 L y solucin saturada de sulfato de
amonio. Bell et al, 1983. Reproducida con el p erm iso de Springer-Verlag. Copyright 1983.
c
Todos los derechos reservados.
Eb
B o = kB exp a I b c d (9.32)
RT
EG
G = kG exp e I f g h (9.33)
RT
EA
Iagg = kA exp p I q r s (9.34)
RT
donde:
o 16 16540
B = 4.8 10 exp 5.723 I 0.1 0.905 0.215
RT
2860
G = 0.7 exp 0.67 I 0.091 0.625 0.833
RT
470
Iagg = 1.2 exp 0.007 I 0.003 0.004 0.008
RT
Se pide estimar:
a) La velocidad de nucleacin, la velocidad de crecimiento y el ndice de
agregacin cuando la precipitacin se efecta a las condiciones siguientes: =
0.6246, = 0.048 h, = 270 rpm, I = 0.027 mol/L y T = 295 K.
456 CAPTULO 9. PRECIPITACIN
kJ
16540
Bo
= 4.8 1016 exp mol
kJ K
8.314 295
mol o K
5.723
(0.6246) (0.027) 0.1
(270)0.905 (0.048)0.215
num
Bo = 1.67 1015
Lh
kJ
2860
G = 0.7 exp mol
kJ
8.314 295 K
mol K
(0.6246)0.67 (0.027)0.091 (270)0.625 (0.048)0.833
m
G = 93.3
h
kJ
470
Iagg
= 1.2 exp mol
kJ K
8.314 295
mol K
0.007
(0.6746) (0.027)0.003 (270)0.004 (0.048)0.008
Iagg = 0.99
Np = B o (1 Iagg )
nm
Np = 1.67 1015 (0.048 h) (1 0.99)
Lh
nm
Np = 8.016 1011
L
9.5. Sumario
La precipitacin es una operacin empleada tanto para la concentracin como
para la purificacin de soluciones de biomolculas.
9.5. SUMARIO 457
9.6. Problemas
9.1. Parmetros de precipitacin. En la precipitacin de alcohol deshidro-
genasa con sulfato de amonio utilizando un volumen de 30 mL, en determina-
ciones realizadas en el sobrenadante se obtuvieron los resultados siguientes:
9.7. Bibliografa
Bell, D.J.; Hoare, M.; Dunnill, P. 1983. The formation of protein precipitates
and their centrifugal recovery. En: Downstream Processing. Advances in
Biochemical Engineering. Springer-Verlag. New York. 26, 1-72.
Chan, M.Y.Y.; Hoare, M.; Dunnill, P. 1986. The kinetics of protein precipita-
tion by different reagents. Biotech. Bioeng. 27, 387-393.
Cheng, Y.; Lobo, R.F.; Sandler, S.I.; Lenhoff, A.M. 2006. Kinetics and equi-
libria of lysozyme precipitation and crystallization in concentrated ammo-
nium sulfate solutions. Biotech. Bioeng. 94, 177-188.
Foster, P.R.; Dunnill, P.; Lilly, M.D. 1973. The precipitation of enzimes from
cell extracts of Saccharomyces cerevisiae by polyethylene glycol. Biochem.
Biophys. Acta. 317, 505-516.
Janson, J. 1984. Large-scale affinity purification. State of the art and future
prospects. Trends Biotech. 2, 31-38.
Luong, J.H.T.; Nguyen, A.L.; Male, K.B. 1987. Recent developments in down-
stream processing based on affinity interactions. Tibtech. 5, 281-286.
Mondal, K.; Gupta, M.N.; Roy, I. 2006. Affinity-Based Strategies for protein
purification. Anal. Chem. 78, 3499-3504.
Ultrafiltracin
10.1. Introduccin
La ultrafiltracin (UF) es una operacin que emplea membranas especiales
en diferentes tipos de arreglos para separar macromolculas en solucin de con-
taminantes ms pequeos, por medio de un gradiente de presin.
La ultrafiltracin es utilizada en la etapa de purificacin de caldos biolgicos.
En esta etapa los caldos sujetos a purificacin contienen al soluto de inters en
forma ms concentrada y pura que el caldo original, debido a sto los volmenes
a tratar son menores que los correspondientes a las primeras etapas del proceso.
Para describir un proceso de membrana es necesario poder establecer el
movimiento relativo de los componentes de la mezcla a travs de la membrana,
causado por la fuerza originada por el gradiente de presin. Generalmente se
realiza una descripcin fenomenolgica donde la membrana se considera como
una caja negra, es decir, el mecanismo microscpico de flujo (y rechazo) no es
explicado en este enfoque. Este tratamiento es caracterstico del enfoque de los
fenmenos de transporte.
La ultrafiltracin forma parte de un conjunto de operaciones con membranas
que son empleadas en diferentes etapas de los procesos de bioseparacin. Es im-
portante hacer notar que los principios bsicos de estas operaciones son comunes.
En la seccin 10.2 de este captulo se efecta una descripcin general de los
diferentes procesos con membranas existentes con el propsito de establecer las
principales similitudes y diferencias de stos con respecto a la ultrafiltracin. Se
resalta la importancia que tiene la operacin en flujo tangencial para este tipo de
sistemas. Se presenta tambin en esta seccin la teora de la ultrafiltracin que
permite analizar el efecto de los diversos parmetros sobre el comportamiento
de esta operacin. En la seccin 10.3 se describen las caractersticas ms im-
portantes de los principales equipos utilizados en los procesos con membranas.
La seccin 10.4 presenta los fundamentos del diseo de equipos de UF haciendo
nfasis en el clculo de reas y tiempo de UF de dichos sistemas. Se presenta
una discusin sobre las condiciones ptimas de operacin de un sistema en el
462 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
10.2. Fundamentos
Para el tratamiento de la operacin de UF es conveniente establecer primero
el marco donde se desarrolla. Asimismo, es conveniente revisar los fundamen-
tos tericos de la operacin que facilitan su uso y correcta aplicacin. En este
sentido, esta seccin hace nfasis en tres aspectos:
Los procesos con membranas.
Flujo cruzado o tangencial.
La teora de UF.
MF UF OI D
Fuerza impulsora P P P C
Presin de op eracin (kPa) 100-500 100-500 700-20,000 -
Tipo de m embrana M icro- Micro- Semip er- Dilisis
porosa p orosa m eable
Simtrica Asimtrica Asimtrica Sim trica
Flux L/m 2 h 50-1000 10-200 1-20 -
Rango de retencin
Esp ecie Peso Tamao
molecular
Da nm
Hongos 103 104 X
Levaduras 103 104 X
Bacterias 300 104 X X
Coloides 300 103 X X X
Virus 30 - 300 X X
Protenas 104 106 2-10 X X
Polisacrido 104 106 2-10 X X
Enzimas 104 106 2-5 X
Antibiticos 300 103 0.6 - 1.2 X
Azcar 200 - 400 0.8 - 1 X
c. Orgnico 100- 500 0.4 - 0.8 X
In inorgnico 10 - 100 0.2 - 0.4 X
c
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
Ultrafiltracin
La ultrafiltracin utiliza membranas generalmente asimtricas o anisotrpi-
cas para separar macromolculas y partculas, de molculas pequeas y solventes
(Fig. 10.2a). El dimetro de los poros de este tipo de membranas vara entre
0.001 0.1 m.
Microfiltracin
La microfiltracin (MF) emplea membranas con poros ms grandes que los
utilizados en UF ( 0.1 10 m), ya sean de tipo convencional o asimtricas.
464 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
smosis inversa
La smosis inversa (Fig. 10.2c) es una operacin que utiliza membranas
semipermeables que permiten el paso slo del solvente (generalmente agua), para
separar ste de solutos de bajo peso molecular. La fuerza impulsora es un gra-
diente de presin que debe vencer la presin osmtica normal de las soluciones,
es decir, invertir el flujo espontneo. Las presiones utilizadas en esta opera-
cin son relativamente altas del orden de 700 20, 000 kPa. Las membranas
utilizadas en OI son pelculas que permiten el paso del solvente a travs de
espacios entre los polmeros que conforman la membrana. Los iones no pueden
estar solvatados en estos pequeos espacios y por lo tanto no son transportados.
Los flujos caractersticos en la OI son del orden de 1 20 L/m2 h.
Dilisis
La dilisis (Fig. 10.2d) emplea membranas de poro muy pequeo (menor
que las membranas de UF). Esta operacin se utiliza para separar solutos de
sus soluciones, con base a su peso molecular y posiblemente a su conformacin
y carga. El o los solutos a separar de la solucin de alimentacin fluyen hacia la
solucin de lavado o dializado a travs de la membrana, slo por la accin de un
gradiente de concentracin. El papel fundamental de la membrana es impedir el
10.2. FUNDAMENTOS 465
Flux
En UF se utiliza la variable J para describir el flux de permeado o velocidad
del permeado a travs del lecho filtrante, mientras que en la filtracin conven-
cional se utiliza la variable para el mismo efecto, es decir,
Q Gasto volumtrico
J = = =
A rea
10.2. FUNDAMENTOS 467
(Pi + Po )
P T M = Pf (10.1)
2
o bien,
P
P T M = + Po Pf
2
donde:
P = Pi Po
entonces
kg kg
Po = (1.70 0.68) = 1.02
cm 2 cm2
y
(1.7 + 1.02) kg kg
P T M = = 1.36
2 cm2 cm2
J = Lp (P T M ) (10.2)
donde:
Lp : Coeficiente de permeabilidad.
: Contrapresin osmtica.
J: Flux de permeado.
470 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
Modelo basado en la ley de Darcy Por otro lado, cuando se utiliza la ley
de Darcy como se hizo en el caso de la filtracin convencional (Captulo 3) se
obtiene la siguiente expresin:
P T M
J= (10.3)
(Rm + Rs )
donde:
Rm : Resistencia de la membrana.
CP
=1 (10.4)
CB
donde:
1
Lp = (10.5)
(Rm + Rs )
P T M
J= (10.6)
(Rm + Rs )
10.2. FUNDAMENTOS 471
dC
J C = DAB + J CP (10.7)
dx
donde:
P T M : Constante.
x: Coordenada espacial.
x = 0; C = CB
x = ; C = CW
DAB CW CP
J = ln (10.8)
CB CP
: Densidad. [M/L3 ].
1/3
U
J (10.13)
L
o bien cuando se usa el esfuerzo cortante definido como:
dt
U= (10.14)
2
entonces,
1/3
J (10.15)
L
donde es el esfuerzo cortante del fluido sobre la membrana.
2. Para flujo turbulento:
J U 0.83 (10.16)
CG
J = ks ln (10.17)
CB
donde CG es la concentracin lmite que es una constante para un sistema
dado. ks es el coeficiente de transferencia de masa dado por las correlaciones ya
presentadas [ecuaciones (10.11) y (10.12)].
Concentracin % peso
P T M (kg/cm2 ) 1 5 10 20
0.00 00.00 00.00 00.00 0.00
0.33 18.00 17.50 17.00 7.00
0.66 33.00 30.00 21.80 7.33
1.00 47.00 36.00 22.20 7.66
1.33 50.00 36.50 22.60 8.00
1.66 52.00 37.00 23.00 8.33
2.00 54.00 37.50 23.40 8.66
CG = 30 %
Se puede resumir con base a la discusin de los dos modelos anteriores, que
en la ultrafiltracin el flux J se puede controlar por medio de la P T M y la
velocidad de flujo cruzado. El flux aumenta linealmente con P T M en su fase
inicial, posteriormente empieza a disminuir la rapidez de aumento, y finalmente
cuando ocurre la polarizacin J se hace independiente de P T M y permanece
constante.
El flux puede mejorarse incrementado la velocidad del flujo cruzado, lo cual
implica un incremento en el esfuerzo cortante sobre la superficie de la membrana.
Incrustacin de la membrana
Uno de los problemas que se observa durante la operacin de un sistema
de UF es la reduccin progresiva en el flux manejable conforme aumenta el
478 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
d dm
(V CB ) = A
dt dt
donde m es la masa de soluto retenida por la membrana.
Este balance est sujeto a las siguientes condiciones:
dm
Para J J = CB J km
dt
dm
Para J > J = CB J
dt
donde k es una constante que depende del tamao y distribucin de las partculas
y el potencial de su adhesin a la membrana. El trmino km es la velocidad de
desprendimiento de la torta. El parmetro J es un flux crtico. La remocin
del gel por flujo cruzado slo es efectiva si el flux J es menor que J .
Tambin se cumple que:
dV
= JA
dt
Combinando las ecuaciones anteriores se obtiene:
dCB Akm
Para J J =
dt V
dCB
Para J > J =0
dt
El flux se puede expresar como:
P T M P T M P T M
J= = =
(Rm + Rs ) (Rm + m) (bRm0 + m)
10.3. EQUIPOS DE ULTRAFILTRACIN 479
Figura 10.11: Programa MATLAB para la solucin del Ejemplo 10.3. a) progra-
ma principal y b) funcin.
Figura 10.12: Resultados del Ejemplo 10.3. a) Variacin del flux con el tiempo
y b) Acumulacin de volumen de permeado.
Figura 10.13: Sistema tpico de UF por lotes. Fuente: Belter et al., 1988. Repro-
c
ducida con el permiso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
10.3.1. Membranas
La parte central de los procesos con membranas es la membrana misma.
En general la membrana debe reunir algunas caractersticas importantes: a)
una alta permeabilidad hidrulica, es decir, permitir altos flujos de permeado
bajo gradientes de presin razonables, b) un peso molecular de corte preciso, es
decir, retener especies de determinado peso molecular, pero permitir el paso de
las de menor peso molecular, c) buena resistencia mecnica, qumica y trmica,
d) baja tendencia a incrustamiento, e) facilidad de limpieza, f) capacidad de
esterilizacin y g) larga vida activa.
10.3. EQUIPOS DE ULTRAFILTRACIN 481
c
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
10.3.2. Mdulos
La filtracin en membranas en flujo cruzado se puede desarrollar en varios
tipos de configuraciones mediante mdulos que contienen las membranas. Estos
mdulos estn diseados para satisfacer las especificaciones: a) mecnicas nece-
sarias para asegurar la separacin de las corrientes, soportar las membranas,
permitir el retrolavado y una presin de operacin razonable, b) hidrodinmi-
cas para minimizar la cada de presin, la polarizacin, el taponamiento y la
incrustacin en la membrana y c) econmicas para proveer una alta densidad
de empaque (rea/volumen) y reducir los costos de operacin.
Los mdulos utilizados en los equipos de separacin con membrana presentan
diferentes geometras que se pueden dividir en tres tipos bsicos:
1) Mdulos de hojas: a) hoja plana, b) hoja plegada y c) hoja enrollada en
espiral.
2) Mdulos de tubos y carcaza: a) tubos normales y b) fibras huecas.
3) Mdulos dinmicos: a) cilindros giratorios, b) discos giratorios y c) sis-
temas vibratorios.
482 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
Mdulos dinmicos
Los mdulos dinmicos o de esfuerzo de corte aumentado, utilizan para in-
crementar el esfuerzo de corte una parte mvil como una membrana cilndrica
giratoria, un disco girando en las proximidades de una membrana circular fija
o la vibracin de la membrana (Fig. 10.17). Este modo de filtracin permite
484 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
c
Reproducida con el p erm iso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
El objetivo de la UF.
10.4.1. Objetivo de la UF
Un sistema de UF puede ser empleado con distintos propsitos entre los
cuales se pueden mencionar los siguientes: a) concentracin de una solucin
diluida, b) diafiltracin de una solucin con solutos indeseables pequeos y c)
purificacin de una solucin que contiene solutos indeseables grandes.
Diafiltracin
En la diafiltracin se separan macromolculas de una solucin, de molculas
pequeas como sales, azcares o alcoholes por medio de un equipo de UF. El
permeado que sale del sistema es reemplazado con agua desionizada o buffer
(Fig. 10.18b).
Purificacin
La UF donde el objetivo es recuperar el permeado que contiene un solvente
de inters o una solucin con solutos de bajo peso molecular se conoce como
purificacin (Fig. 10.18c).
10.4. DISEO DE EQUIPOS DE UF 487
(Pi + Po )
P T M = Pf
2
Figura 10.19: Variacin del flux con P T M . a) Datos Ejemplo 10.4 con presin
de entrada fija y la velocidad de recirculacin variable y, b) Regin de operacin
factible. Adaptada de: Tutunjian, 1985b. Reproducida con el p erm iso de Elsevier Science
c
Inc. Copyright 1985. Todos los derechos reservados.
Q = 29.41 P
donde P tiene unidades de kg/cm2 y Q de L/min (rea fija).
Se pide:
a) Encontrar la regin de operacin factible.
b) La combinacin P T M y P que permita el mximo flux.
Solucin:
a) Regin de operacin factible. Al fijar la presin de entrada Pi a un valor
mximo de 1.7 kg/cm2 , tanto la P como la P T M se restringen a un rango
posible de valores, en funcin de la presin de salida Po la cual puede ser regulada
mediante la vlvula de salida.
En la Tabla 10.5 se presentan algunos valores de este rango. La Figura 10.19b
muestra la regin de operacin factible con base a estos datos.
b) Flux mximo. En la Figura 10.19a se puede observar que para cada com-
binacin de Pi con Po o P con P T M , existe un flux factible alcanzndose
un mximo cuando:
10.4. DISEO DE EQUIPOS DE UF 489
Tabla 10.5: Clculo de la regin de operacin factible. Datos del Ejemplo 10.4.
kg/cm2 L/min
Pi Po P P T M Q JA
1.70 0.00 1.70 0.85 50 2.30
1.70 0.34 1.37 1.02 40 2.80
1.70 0.68 1.02 1.19 30 2.90
1.70 1.02 0.68 1.36 20 2.40
1.70 1.36 0.34 1.53 10 1.70
1.70 1.70 0.00 1.70 00 0.00
Operacin continua
La diferencia entre una operacin por lotes y una continua es que en esta
ltima, el retenido es retirado continuamente del sistema a la concentracin final
deseada (Fig. 10.21a). En estado estacionario el flux es constante y mnimo. Para
contrarrestar esta limitacin de la operacin continua, los sistemas utilizados son
generalmente de etapas mltiples (Fig. 10.21b).
V = Vo CB = CBo
V =V CB = CB
conduce a:
CB
dCB
V = Vo exp (10.20)
(CB CP )
CBo
La ecuacin (10.23) puede ser utilizada para calcular el rea necesaria para
realizar una concentracin de CBo a CBf en un tiempo t o para calcular dicho
tiempo dada el rea de UF disponible. Este clculo requiere la evaluacin de la
parte derecha de la ecuacin (10.23), lo cual puede realizarse utilizando un pro-
grama adecuado o calculando el rea bajo la curva de los datos experimentales
graficados como:
1 1
vs
J CB
Se pide calcular:
a) El rea de UF necesaria.
b) El nmero de tubos necesarios (diseo modular).
c) El flux promedio.
Solucin:
a) Clculo de rea. Con los datos y la ecuacin (10.23) se obtiene la expresin:
1 1
2 2
1 1 dx
A = 1000 d = 1000
15 CB 8 ln (15x)
1 8 ln 1
10 CB 10
10.4. DISEO DE EQUIPOS DE UF 493
A = 1000 0.04 m2 = 40 m2
rea total 40 m2
N= = = 884 tubos
rea por tubo 0.012 m 1.2 m
Vo Co = Vf Cf
de tal manera que,
10, 000 2 L
Vf = = 2000 L
10
con estos datos se puede calcular el flux promedio:
Concentracin continua
Los sistemas de UF continuos se utilizan para procesar volmenes conside-
rables o cuando se tiene una alimentacin continua.
494 CAPTULO 10. ULTRAFILTRACIN
Pn = AJn (10.26)
10.4. DISEO DE EQUIPOS DE UF 495
Fn1 = Pn + Fn (10.27)
Se pide calcular:
a) El rea necesaria para un procesamiento por lotes y el flux promedio.
b) El rea necesaria para un procesamiento continuo de 5 etapas y el flux
promedio.
c) La variacin del rea total de la UF con el nmero de etapas.
Solucin:
a) rea UF por lotes. Utilizando la ecuacin (10.23) se puede llegar a la
siguiente expresin:
1
2
1 1
Ap or lotes = 10, 000 d
30 CB
1 20 ln
20 CB
Ap or lotes = 10, 000 0.0134 m2 = 134 m2
Tabla 10.6: rea para procesamiento continuo en 5 etapas. Datos del Ejemplo
10.6.
Fn Cn Jn Pn
n (L/h) ( % en peso) (L/m2 h) (L/h)
5 500.00 20.00 8.11 266.59
4 766.59 13.04 16.66 547.57
3 1314.17 7.61 27.44 901.97
2 2216.14 4.51 37.89 1245.55
1 3461.69 2.89 46.81 1538.79
0 5000.00 2.00
Total 4,500.00
L
4500 L
Jprom = h = 27.38
164.375 m2 m2 h
Tabla 10.7: Clculos para diferentes nmero de etapas. Datos Ejemplo 10.6.
Figura 10.24: Variacin del rea total de UF con el nmero de etapas. Datos del
Ejemplo 10.6.
CI = CIo VD = 0
CI = CI VD = VD
VD
CI = CIo exp (10.31)
VR
Se pide:
a) Calcular el efecto sobre la pureza de la solucin, de la razn del volumen
de diafiltracin a volumen de retenido o ndice de lavado.
b) Calcular el rea de diafiltracin necesaria para lograr una pureza del 99 %
en un tiempo de 10 h.
c) El volumen de solucin de lavado de diafiltracin para el inciso b).
Solucin:
a) Variacin de la pureza con el ndice de lavado. Utilizando la ecuacin
(10.31) se pueden obtener los resultados que se presentan en la Tabla 10.8.
b) rea de diafiltracin. Utilizando la ecuacin (10.35) y los datos se tiene
que:
10.4. DISEO DE EQUIPOS DE UF 499
30 L
20(A)(10 h) ln 15 m2 h
0.05 = exp
5000 L
de donde se obtiene:
A = 108 m2
30 L
VD = JAt = 20 ln 108 m2 (10 h) = 15, 000 L
15 m h
2
P : Flujo de permeado.
VD
J=
At
la ecuacin (10.39) se puede rearreglar de la siguiente forma:
1/n
CIo
1 VR
CIn
At = (10.40)
J
donde A es el rea de UF por etapa.
El producto At es mnimo cuando el lado derecho de la ecuacin (10.40) es
mnimo.
De acuerdo a la ecuacin (10.39) al aumentar el ndice de lavado VD /VR se
incrementa la purificacin. De acuerdo a la ecuacin (10.40) el rea necesaria
para efectuar una determinada purificacin disminuye al incrementar el nmero
de etapas, o bien el incremento del nmero de etapas reduce la cantidad de
lquido de lavado y el rea necesaria por etapa.
En la Tabla 10.9 se presentan los clculos para otras relaciones de VDT /VR
los cuales se muestran en forma grfica en la Figura 10.26.
Es necesario hacer notar que VDT es el volumen total de lquido de lavado,
por lo que en el caso de la operacin continua dicho volumen se reparte equi-
tativamente entre las etapas. La operacin por lotes es la que requiere menor
volumen de lavado (rea), entonces cuando sto sea el objetivo de la operacin
debe seleccionarse este tipo de operacin.
Diafiltracin a contracorriente
En la diafiltracin a contracorriente (Fig. 10.27) es posible lograr una ma-
yor purificacin con menos lquido de lavado, sin embargo, esto depende de la
concentracin alcanzable de la especie no permeable (Fane y Radovich, 1990).
10.4. DISEO DE EQUIPOS DE UF 503
% de eliminacin de impurezas
VDT /VR Intermitente Continua
1 2 3
0 0.0 0.0 0.0 0.0
2 86.5 66.7 75.0 78.4
4 98.2 80.0 88.9 92.1
6 99.8 85.7 93.8 96.3
8 100.0 88.9 96.0 98.0
10 100.0 90.9 97.2 98.8
VD CIo 5
= ln = ln = 4.6
VR CI 0.05
VD 4.6VR
t= =
JA 27
500 ln
CB
1000
4.6
X
t=
27
500 ln
2X
10.5. Sumario
La ultrafiltracin se utiliza para concentrar y purificar caldos biolgicos me-
diante el uso de membranas especializadas para lograr la separacin deseada.
Los equipos de ultrafiltracin presentan caractersticas distintivas en arreglos
modulares de varios tipos que operan bajo la modalidad de flujo cruzado de la
alimentacin. Las operaciones pueden ser efectuadas en forma intermitente o
continua ya sea para concentrar, purificar o diafiltrar una solucin.
El diseo de los equipos de ultrafiltracin est basado en una combinacin
de la teora y la experimentacin, para estimar reas de los equipos, las etapas
necesarias o el tiempo requerido de un proceso.
10.6. PROBLEMAS 507
10.6. Problemas
10.1. UF con polarizacin y gel. En la concentracin de una solucin
de Factor VIII antihemoflico utilizando mdulos de fibra hueca (Mitra y Ng,
1986), se obtuvieron los siguientes datos:
Se pide: Estimar ks y CG .
CG
C=
e
donde e es la base de los logaritmos naturales.
Se pide:
a) Calcular el rea mnima para una operacin por lotes a volumen constante.
b) Calcular el rea total para una operacin continua en cascada con 3 etapas
de igual rea.
Resp. a) 321 m2 y b) 410 m2 .
0.001 LQ2
P =
d5
donde:
Se pide calcular:
a) La presin a la salida del tubo.
b) La cada de presin transmembrana.
c) El flux de permeado.
Resp. a) 0.264 atm, b) 1.132 atm y c) 146 L/m2 h.
10.7. Bibliografa
Belfort, G. 1987. Membrane separations technology: An overview. Ad. Biochem.
Engin. Bungay, H.R.; Belfort, G. (Eds.). John Wiley and Sons. New York.
10, 239-297.
Bird, R.B.; Stewart, W.E.; Lightfoot, E.N. 2002. Transport Phenomena. John
Wiley and Sons. New, York. 2da Edicin. p. 92.
Fane, A.G.; Radovich, J.M. 1990. Membrane Systems. En: Separation Proce-
sses in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). New York. Marcel Dekker. 8,
209-262.
Lightfoot, E.N.; Root, T.W.; ODell, J.L. 2008. Emergence of ideal membrane
cascades for downstream processing. Biotechnol. Prog. 24, 599-605.
Electroforesis
11.1. Introduccin
Electroforesis es el movimiento de las partculas cargadas contenidas en un
medio debido a la influencia de un campo elctrico. La electroforesis constituye
una de las tcnicas ms poderosas para la purificacin de molculas biolgicas.
Gran parte de la teora y de los equipos de electroforesis han sido desarro-
llados para ser utilizados en la separacin de protenas globulares, sin embargo
pueden ser aplicados igualmente a otro tipo de protenas, as como a cidos
nucleicos, clulas o partculas coloidales.
En la separacin de protenas por medio de un campo elctrico, la carga
y la naturaleza anfotrica de stas juega un papel fundamental. Sin embargo,
existen otros factores tanto microscpicos como macroscpicos que afectan el
movimiento de una partcula en un campo elctrico, que han conducido al de-
sarrollo de diferentes formas y tcnicas para el desarrollo de las separaciones
electroforticas. Estos aspectos fundamentales de la electroforesis se revisan en
la seccin 11.2 de este captulo.
La electroforesis no est limitada a la escala analtica. Actualmente existen
varios tipos de equipo en diversos arreglos que permiten el uso de esta tcnica
a escala preparativa. En la seccin 11.3 se presenta una descripcin general de
este tipo de equipos.
La seccin 11.4 presenta una discusin sobre los principios bsicos del diseo
de equipos de electroforesis.
11.2. Fundamentos
La forma ms sencilla de realizar una operacin de electroforesis es el mto-
do de electroforesis de zona (Fig. 11.1). En este mtodo se coloca una pequea
banda de muestra de la solucin que contiene el soluto de inters, sobre una
matriz generalmente rectangular, de celulosa, almidn, agar o poliacrilamida, la
514 CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
cual se encuentra inmersa en un electrolito que sirve como buffer. Dichas matri-
ces tienen la propiedad de constituir medios porosos altamente hidratados, que
proporcionan resistencia mecnica y disminuyen los efectos del calor generado
por el paso de corriente al aplicar el gradiente de potencial a la celda.
En la electroforesis de zona cada componente de la mezcla se mueve a diferen-
te velocidad, separndose los componentes de la mezcla sobre la matriz. Cuando
esta tcnica se utiliza con fines cualitativos, despus de un tiempo apropia-
do para desarrollar la electroforesis, las matrices son teidas para observar los
componentes de la muestra.
Tal como se muestra en la Figura 11.2, la carga neta de una protena depende
entre otros factores del pH al que sta se encuentre. A un pH relativamente
bajo existen ms grupos NH+ 3 y COOH y la protena tiene una carga neta
positiva; a un pH relativamente alto la protena tiene ms grupos NH2 y
COO y se encuentra cargada negativamente. Existe un pH particular para
cada protena donde la carga neta de sta es cero, a este pH se le conoce como
punto isoelctrico.
La carga que adquiere una protena en determinado pH, as como el punto
isoelctrico de sta, son dos propiedades que se utilizan para la correcta sepa-
racin electrofortica de protenas.
Figura 11.2: Cambio de la carga neta de un protena con el pH. El punto isoelc-
trico en este caso se alcanza a pH = 4.0.
Un balance de las fuerzas que actan sobre la partcula cuando sta se mueve
a una velocidad constante (en equilibrio), despreciando los efectos difusivos y
gravitacionales, establece que la fuerza que acta sobre la partcula debida al
campo elctrico, es igual a la fuerza debida al arrastre de la partcula, es decir:
FK = FE (11.1)
La expresin de la fuerza cintica FK en el caso de un flujo viscoso lento
alrededor de una esfera (flujo reptante) se conoce como Ley de Stokes y est
dada por (Bird et al., 2002):
FK = 3d (11.2)
donde:
z1 FE
FE = (11.3)
No
donde:
kB T
DAB = (11.6)
3d
DAB z1 FE
= (11.7)
RT
La movilidad m de una partcula en un campo elctrico se define como la
velocidad de la partcula por unidad de campo elctrico,
m= (11.8)
E
En este caso particular del modelo de esfera, la movilidad est dada por:
DAB z1 F
m= (11.9)
RT
Se ha observado experimentalmente que la movilidad de una partcula no
depende slo de su carga intrnseca, como predice modelo de esfera en la forma
de la ecuacin (11.9). El ambiente inico que se forma alrededor de la partcula
en solucin tiene una influencia importante sobre la movilidad y las propiedades
electrostticas de la partcula. El modelo de la doble capa para interfases slido-
lquido electrolito, ha sido empleado para explicar estos efectos.
Figura 11.3: Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada. Adap-
tada de: Ivory, 1990. Reproducida con el p erm iso de Marcel Dekker Inc. Copyright 1990.
c
Todos los derechos reservados.
Radio medio de la capa difusa El radio de la capa difusa tambin tiene una
influencia importante sobre la movilidad de la partcula. Utilizando la teora de
Debye-Hckel ha sido calculado el radio medio de la capa difusa o la longitud de
Debye D . Esta longitud vara inversamente con la raz cuadrada de la fuerza
inica I (Castellan, 1971), es decir,
1
D
I
donde la fuerza inica es una medida de la concentracin y valencia de los iones
que rodean la partcula, y est dada por:
n
11
I= Ci zi2 (11.10)
2 i=1
donde:
Ci : Concentracin de la especie i.
zi : Valencia de la especie i.
C + = C = Co ; z + = z = zo
se tiene:
12
RT
D = (11.11)
2zo2 F 2 Co
donde:
: Constante dielctrica del medio. [C2 /Nm2 =F/m].
FK = FE (11.12)
siendo FK la fuerza de arrastre sobre la partcula esfrica formada por la super-
ficie de corte, de tal manera que:
FK = 3dc (11.13)
La fuerza elctrica FE que acta sobre la partcula es proporcional al campo
que acta sobre sta y al potencial Z (que es una medida de la carga aparente
de la misma).
De acuerdo con la Ley de Coulomb la fuerza entre dos cargas est dada por:
1 q1 q2
FE = (11.14)
r2
en este caso:
FE = rc E (11.17)
y las ecuaciones (11.12), (11.13) y (11.17) conducen a:
6 = E (11.18)
de tal manera que la movilidad m = /E est dada por la ecuacin conocida
como de Hckel,
11.2. FUNDAMENTOS 521
m= (11.19)
6
Esta movilidad es menor a la esperada si slo se considera la carga real de
la partcula y es aplicable cuando la relacin de radio de corte a longitud Debye
es muy pequea (rc /D << 1).
q = 1.6 1019 C
r = 31 1010 m
1 1 N m2
= = 9 109
4o C2
Se Pide: Estimar el campo sobre la superficie de un protn:
Solucin:
El campo est dado por la ecuacin siguiente:
1 q
E=
4o r2
sustituyendo los datos se tiene:
9 Nm 1.6 1019 C
2
E = 9 10
C2 (31 1010 )2 m2
V
E = 1.5 108
m
V
E = 1.5 106
cm
El campo que produce el protn debido a la relacin de la carga con la
distancia es muy grande. Una batera de 100 V produce un campo de slo
10 V/cm.
Difusin
En una electroforesis generalmente existe algo de dispersin de la mezcla
debida a la difusin molecular, sin embargo este fenmeno normalmente no es
la causa principal de la dispersin. De acuerdo a Jorgenson y Lukacs (Rudge
y Ladisch, 1986), la desviacin estndar de una muestra dispersada slo por
difusin est dada por:
2
= 2DAB t (11.22)
T
DAB = 9.4 1011 (11.23)
(MA )1/3
donde:
T : Temperatura. [ K].
Electrosmosis
Otra causa de dispersin en una operacin electrofortica es la electrosmosis
(Ahmadzadeh et al., 2008). sta es el resultado del movimiento convectivo de
iones de la capa difusa que se forma cuando una superficie slida con carga
11.2. FUNDAMENTOS 525
d2 1 d 1
+ = 2 Senh () (A)
dr2 r dr
con la condicin de frontera de simetra,
d
en r = 0 =0 (B)
dr
y de la superficie del tubo,
526 CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
en r = 1 = (C)
donde r = r/Rt ; = D /Rt ; = zF/RT ; = zF/RT son las varia-
Gradientes de conductividad
Si la conductividad de la muestra es mayor que la del buffer, cuando el
campo se incrementa arriba de un valor crtico, puede provocarse una distorsin
en forma de puntas de la interfase. El buffer puede presentar una menor
conductividad que la muestra por efecto de los iones que contiene.
Entre menor sea el valor del Ra, menor es el efecto de la conveccin natural.
De acuerdo con la ecuacin (11.24) sto se puede lograr de varias formas. La
ms empleada a nivel laboratorio es incrementar de la viscosidad mediante el
uso de geles de soporte.
En equipos industriales que operan en forma continua se utilizan membranas
porosas para separar regiones de electroforesis de diferente pH. Esto tiende a
disminuir la conveccin al disminuir la longitud caracterstica l.
528 CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
Medios anticonvectivos
log(P M ) = A B m
Modos de la electroforesis
disolucin que contiene los analitos o las molculas a separar y el buffer o medio
electroltico que es el encargado de conducir la corriente. El electrolito controla
el pH y la fuerza inica del medio donde se realiza la separacin. La separacin
se basa en el tamao, la forma y la carga de los solutos a separar. Debido a su
alta relacin de rea a volumen la disipacin de calor es ms fcil.
Bajo la accin del campo elctrico, los iones migran a travs del tubo con
diferentes velocidades y alcanzan el punto de deteccin en diferentes tiempos.
De esta manera, los perfiles de concentracin pueden ser detectados y graficados
en forma de electroferogramas de los picos de los solutos.
Equipos electrocromatogrficos.
A d a p t a d a d e : E b y, 1 9 9 1 .
c
Reproducida con el p erm iso de Nature Publishing Co. Copyright 1991. Todos los derechos reser-
vados.
Pelcula delgada
Los equipos de electroforesis de pelcula delgada han sido estudiados des-
de los aos cincuenta (Hamel y Hunter, 1990). En tales sistemas se inyecta
una corriente continua y puntual de muestra sobre una pelcula de buffer que se
mueve verticalmente en flujo laminar entre dos placas (Fig. 11.12). En las partes
laterales de este arreglo se sitan los electrodos en forma de placas. La mues-
tra emigra horizontalmente conforme pasa por la cmara. Los solutos forman
bandas discretas de acuerdo a sus movilidades electroforticas, y son eluidos
continuamente por el fondo de la cmara y colectados por medio de una bomba
de canal mltiple. El calor generado es removido por medio de refrigerantes que
enfran las paredes laterales.
534 CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
Electroforesis anular
La electroforesis de flujo libre tambin se ha conducido en arreglos anula-
res basados en el diseo de Philpot-Harwell (Fig. 11.13). En estos sistemas el
cilindro interno es fijo y funciona como ctodo, mientras que el exterior gira a
velocidades hasta de 150 rpm. Este movimiento permite neutralizar los efectos
convectivos radiales. La muestra y el buffer son inyectados en la base del anillo
y se mueven axialmente hacia el colector mltiple situado en la parte superior.
apropiadamente las zonas. Cada cmara posee una posicin para alimentar la
muestra y una para descargarla, lo cual se efecta por medio de vaco.
El campo elctrico se provee por medio de dos electrodos situados en los
extremos de la cmara. El enfriamiento se realiza por medio de un tubo de
cermica por el cual fluye el lquido de enfriamiento por el interior del tambor.
grande; y en direccin contraria cuando el soluto tenga una movilidad tal que
logre tener un desplazamiento mayor que el provocado por el movimiento de la
recirculacin.
La teora de platos.
La teora cintica.
donde:
t: Tiempo. [t].
E: Campo. [V/L].
V : Voltaje. [V].
L
t= (11.27)
entonces se combinan las ecuaciones (11.25), (11.26) y (11.27) para obtener:
11.4. DISEO DE EQUIPO DE ELECTROFORESIS 539
12
2DL2
= (11.28)
mV
2
HET P = (11.29)
L
12
1 mV m1 m2
RS = (11.33)
4 2D m
donde m1 y m2 son las movilidades del soluto 1 y 2, respectivamente y:
m1 + m2
m=
2
c) La resolucin de la separacin.
Solucin:
a) La distancia puede ser calculada mediante la expresin
L = t = mEt
cm2 V 3600 s
L1 = 3.38 105 1.8 7.5 h = 1.64 cm
Vs cm h
y,
cm2 V 3600 s
L2 = 1.33 105 1.8 7.5 h = 0.64 cm
V cm cm h
L1 L2 = 1.0 cm
2D
HET P =
mE
7 cm
2
2 2 10
s
(HET P )1 = = 6.57 103 cm
cm 2
V
3.38 105 1.8
Vs cm
7 cm
2
2 2 10
s
(HET P )2 = = 1.67 102 cm
cm 2
V
1.33 105 1.8
Vs cm
5 cm
2
(3.38 + 1.33) 10
= 2.334 105 cm
2
m1 + m2 Vs
m= =
2 2 Vs
12
cm2 V
1 2.334 10 5
1.8 2 cm
RS = Vs cm
4 cm 2
2 2 107
s
5 cm 2
(3.38 1.33) 10 Vs
cm 2
2.334 105
Vs
RS = 3.18
c c c 2c
x (y) + mE + z (y) = D 2 + So (x) (11.34)
x z z z
donde x es la velocidad parablica axial y z es la velocidad osmtica lateral.
So (x) es un trmino que describe la distribucin del flujo de soluto inyectado.
La ecuacin (11.34) es una ecuacin difusiva, convectiva tridimensional, cuya
forma ms sencilla es su solucin asinttica (Gobie y Ivory, 1986).
Electrocromatografa
En el caso de electrocromatografa en columna si se supone que mE es inde-
pendiente de la concentracin, en ausencia de electrosmosis el modelo empleado
es:
11.5. SUMARIO 543
c c c 2c
= x + mE D 2 +R (11.35)
t x x x
rearreglando,
c c 2c
= ( x + mE) D 2 +R (11.36)
t x x
donde R es la acumulacin de soluto en la fase slida y x es la velocidad del
flujo convectivo. Este resultado indica que las soluciones a la ecuacin de diseo
de las columnas cromatogrficas, pueden ser aplicadas a la electrocromatografa,
sustituyendo x por ( x + mE).
11.5. Sumario
La electroforesis es una operacin que permite la purificacin de solutos por
la accin de un campo elctrico.
Uno de los problemas que se presenta normalmente en las operaciones elec-
troforticas es la dispersin que sufre la muestra conforme la operacin se desa-
rrolla. Para abordar esta dificultad se han desarrollado diversas formas y medios
para efectuar la operacin, lo cual se ha traducido en una variedad de equipos
disponibles a escala preparativa.
El diseo de los equipos de electroforesis se realiza mediante enfoques simi-
lares a los utilizados en cromatografa de columna, y actualmente su desarrollo
es incipiente y basado fuertemente en las pruebas de laboratorio.
544 CAPTULO 11. ELECTROFORESIS
11.6. Problemas
11.1. Carga y pH. Se realiza una separacin electrofortica de zona con
campo unidireccional a un de pH = 7.1, de una mezcla que contiene cido
glutmico (pI = 3.2), arginina (pI = 10.8) y valina (pI = 6.0).
Se pide definir el (o los) aminocido que:
a) Migra hacia el ctodo.
b) Migra hacia el nodo
c) Migra ms rpido hacia el nodo.
11.7. Bibliografa
Ahmadzadeh, H.; Prescott, M.; Muster, N.; Stoyanov, A. 2008. Revisiting elec-
troosmotic flow: An important parameter affecting separation in capillary
and microchip electrophoresis. Chem. Eng. Comm. 195, 129-146.
Bier, M. 1986. Scale-Up isoelectric focusing. En: Separation, Recovery and Pu-
rification in Biotechnology. Asenjo J.A.; Hong, J. (Eds). ACS Symposium
Series 314. ACS. Washington, D.C. 13, 185-192.
Bier, M.; Palusinski, O.A.; Mosher, R.A.; Saville, D.A. 1983. Electrophoresis:
Mathematical modeling and computer simulation. Science. 219, 1281-1286.
Bird, R.B.; Stewart, W.E.; Lightfoot, E.N. 2002. Transport Phenomena. John
Wiley and Sons. New, York. 2da Edicin. p. 61.
Brinton, C.C.; Lauffer, M.A. 1959. The electrophoresis of virues, bacteria, and
cells, and the microscope methods of electrophoresis. En: Electrophoresis:
Theory, Methods, and Applications. Bier, M. (Ed.). Academic Press. New
York. 10, 427-492.
Kohlheyer, D.; Eijkel, J.C.T.; Berg, A.; Schasfoort, R.B.M. 2008. Miniaturi-
zing free-flow electrophoresis. Electrophoresis. 29, 977-993.
Maule, J. 1998. Pulsed-Field Gel Electrophoresis. Molec. Biotechnol. 9, 107-
126.
Nelson, D.L.; Cox, M.M. 2005. Lehninger: Principios de bioqumica. Cuarta
Edicin. Ed. Omega. 92-93.
Rudge, S.R.; Ladisch, M.R. 1986. Process considerations for scale-up of liquid
chromatography and electrophoresis. En: Separation, Recovery and Purifi-
cation in Biotechnology. Asenjo J.A.; Hong, J. (Eds.). ACS Symposium
Series 314. ACS Washington, D.C. 10, 122-152.
Varennea, A.; Descroix, S. 2008. Recent strategies to improve resolution in
capillary electrophoresis. Anal. Chim. Acta. 628, 9-23.
Parte V
Operaciones de Acabado
549
Cristalizacin
12.1. Introduccin
La operacin de cristalizacin consiste en separar un soluto de una solucin
mediante la formacin de cristales. Una vez formados, los cristales se separan
de la solucin obtenindose el soluto con un alto grado de pureza.
Durante el proceso de cristalizacin los cristales deben formarse primero
y luego crecer. Al fenmeno de formacin de pequeos cristales se le llama
nucleacin y a la formacin capa por capa del cristal se le llama crecimiento.
La sobresaturacin es la fuerza impulsora tanto de la nucleacin como del
crecimiento de los cristales. Si la solucin slo est saturada, los cristales no se
transforman ni crecen, mientras que si est subsaturada stos tienden a disol-
verse.
La cristalizacin es muy utilizada a nivel industrial para recuperar sales como
cloruro de sodio y sulfato de amonio a partir de soluciones acuosas. Algunas sus-
tancias orgnicas como la sacarosa y la glucosa tambin son obtenidas mediante
procesos que involucran una operacin de cristalizacin.
Varios productos biotecnolgicos de uso masivo como algunos antibiticos y
cidos orgnicos, as como algunos productos teraputicos, son comercializados
en forma de cristales. Esta diversidad de procesos se traduce en una gran varia-
bilidad en la capacidad de los cristalizadores industriales que oscila de gramos
a cientos de toneladas por da.
La cristalizacin es una operacin ampliamente utilizada en los procesos
biotecnolgicos debido a que ofrece entre otras, las siguientes ventajas: a) se
puede obtener en una sola etapa un producto de una pureza de hasta un 99 %,
b) se puede controlar la operacin de tal manera que se produzcan cristales
uniformes que faciliten su manejo, empaque, almacenamiento, c) mejora la pre-
sentacin o apariencia del producto para su comercializacin y d) es una o-
peracin que puede llevarse a cabo a temperaturas moderadas. En el caso de
protenas teraputicas, su forma cristalizada puede ofrecer ventajas en su ad-
ministracin (Hekmat et al., 2008).
552 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
12.2. Fundamentos
Para evaluar el uso de la operacin de cristalizacin como alternativa para la
purificacin de un producto, es necesario contar con determinada informacin
bsica relacionada con el producto y sus soluciones como:
Tipo de cristales que forma el producto.
Pureza de los cristales en el producto.
Equilibrio: Solubilidad y sobresaturacin de soluciones del soluto en agua
u otro solvente.
Modos de operacin posibles para generar la sobresaturacin de la solucin
del soluto.
Cintica: Velocidad con que se originan (nucleacin) y aumentan de tamao
los cristales en la solucin (crecimiento).
Distribucin de tamaos en poblaciones de los cristales.
las distancias caractersticas (largo, ancho y alto) como los tres ngulos carac-
tersticos son iguales. Otros tipos de sistemas difieren de este comportamiento
originando los sistemas tetragonal, ortorrmbico, hexagonal, monoclnico, tri-
clnico y trigonal.
Desde el punto de vista industrial el trmino hbitat del cristal se refiere a
los tamaos relativos de las caras del cristal. El hbitat de un cristal es de gran
importancia: los cristales largos como agujas se rompen muy fcilmente durante
su centrifugacin y secado; los cristales en forma de disco son difciles de lavar
durante su centrifugacin y difciles de filtrar. Los cristales esfricos son los ms
fciles de manejar.
Figura 12.3: Curva de solubilidad. Tomada de: Belter et al., 1988. Reproducida con
c
el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
S = 146.13 + 8.083 TC
donde TC es la temperatura en grados centgrados y S es la solubilidad de la
l-serina en g/1000 g de agua.
La solubilidad de l-serina tambin fue obtenida a partir de la teora de las
soluciones ideales que es aplicable a sistemas donde existe similitud qumica
entre el soluto y el solvente, y se expresa como:
f
1 Hm Tm
ln = 1
X2 RTm T
donde:
donde M1 =18 y M2 =105.1 en g/mol, son los pesos moleculares del agua y la l-
serina , respectivamente; con estos valores la expresin anterior puede ser escrita
como:
X2
S = 5, 838.89
1 X2
combinando ambas expresiones, la solubilidad terica de la l-serina es:
5, 838.89
S=
501
exp 4.25 1 1
T
En la Figura 12.4 se muestra una comparacin de los datos experimentales
de solubilidad de l-serina con los que predice la teora de las soluciones ideales.
Sobresaturacin
Pudiera pensarse que una solucin con una concentracin de soluto mayor a
la de saturacin forma inmediatamente cristales pequeos o ncleos. Sin embar-
go, actualmente es bien conocido que bajo diferentes condiciones una solucin
puede contener ms soluto que el correspondiente a la saturacin, formando lo
que se conoce como solucin sobresaturada. El estudio del fenmeno de sobre-
saturacin es fundamental en el diseo de cristalizadores.
La curva de solubilidad (Fig. 12.5) separa dos regiones: a) la regin de sub-
saturacin donde una solucin es capaz de disolver ms soluto a las condiciones
dadas y b) la regin de sobresaturacin.
558 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
Los principales modos para generar la sobresaturacin (Fig. 12.6) son por:
a) enfriamiento, b) enfriamiento evaporativo, c) evaporacin trmica y d) eva-
poracin trmica al vaco.
Nucleacin
La velocidad de nucleacin afecta el tamao que los cristales pueden alcanzar
en un cristalizador por lotes. Conforme mayor sea la velocidad de nucleacin
menor es el tamao de los cristales obtenidos. En el caso de una cristalizacin
12.2. FUNDAMENTOS 561
dN
B= = kn (c c )i (12.4)
dt
donde:
kn : Parmetro emprico.
562 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
i: Parmetro emprico.
(c c ): Sobresaturacin. [M/L3 ].
Crecimiento
El crecimiento de cristales es un fenmeno cuya fuerza impulsora tambin es
la sobresaturacin. El crecimiento de un cristal es un proceso de adicin capa
por capa. En la Figura 12.8 se muestra el proceso donde un cristal cbico ideal
crece por adicin de pequeos cubos sobre su superficie.
dMc
= Kc A(c c )g (12.5)
dt
en la ecuacin anterior Kc est dada por:
12.2. FUNDAMENTOS 563
1
Kc = (12.6)
1 1
+
kL kS
donde:
t: Tiempo. [t].
g: Parmetro emprico.
(c c ): Sobresaturacin. [M/L3 ].
Mc = c Vc (12.7)
donde c y Vc son la densidad y el volumen de un cristal, respectivamente.
Si se supone que el cristal mantiene una similitud geomtrica durante su
crecimiento, una longitud caracterstica del cristal que sea seleccionada manten-
dr una proporcin constante con las otras dimensiones. Con base a lo anterior,
la ecuacin (12.7) puede ser expresada en funcin de esta longitud caracterstica
de la siguiente manera:
Mc = c (V l3 ) (12.8)
donde V es un factor geomtrico que relaciona la longitud caracterstica l del
cristal, con su volumen Vc = V l3 .
De igual manera el rea del cristal puede relacionarse con la longitud carac-
terstica mediante:
A = A l2 (12.9)
donde A es un factor geomtrico de rea.
Ejemplo 12.2. Longitud caracterstica y factores geomtricos.
Se pide: Determinar la longitud caracterstica y los factores geomtricos de
rea y volumen para:
a) Una esfera.
b) Un cubo.
Solucin:
a) El rea y volumen de una esfera de dimetro d son:
3
A = d2 ; V = d
6
de tal manera que:
l = d; A = ; V =
6
b) En el caso de un cubo de lado L,
A = 6L2 ; V = L3
de tal manera que:
l = L; A = 6; V = 1
12.2. FUNDAMENTOS 565
d(c V l3 )
= (Kc )(A l2 )(c c )g (12.10)
dt
o bien,
dl Kc A
= (c c )g (12.11)
dt c 3V
La ecuacin (12.11) puede escribirse en forma simplificada de la siguiente
manera:
dl
= kg (c c )g (12.12)
dt
donde kg es la constante cintica de crecimiento de un cristal.
La velocidad de crecimiento expresada en funcin de una longitud caracters-
tica se simboliza como G, de tal manera que:
G = kg (c c )g (12.13)
Las ecuaciones (12.4) y (12.13) describen la velocidad de formacin y creci-
miento de cristales, respectivamente. Ambos fenmenos dependen de la sobre-
saturacin pero son independiente del tamao de los cristales ya formados.
Ley delta L: L
Se ha demostrado experimentalmente que todos los cristales de un material
que son geomtricamente similares, cuando crecen en una misma solucin crecen
a una velocidad constante e igual para todos los tamaos de cristal, cuando la
velocidad es medida en funcin de una longitud caracterstica. Es decir este tipo
de cristales cumplen con la ecuacin (12.13).
Figura 12.9: Curva de densidad poblacional. Adaptada de: Belter et al., 1988.
c
Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1988. Todos los derechos reser-
vados.
l
lk [n(l)] dl
k = o (12.15)
lk [n(l)] dl
o
donde n(l) es la densidad poblacional para el tamao l. Existen cuatro casos
particulares de inters:
a) Para k = 0, el momento fraccionario 0 representa la fraccin del nmero
de cristales de una poblacin que tiene un tamao entre 0 y l,
12.2. FUNDAMENTOS 567
l
[n(l)] dl
0 = o (12.16)
[n(l)] dl
o
l
l [n(l)] dl
1 = o (12.17)
l [n(l)] dl
o
l
A l2 [n(l)] dl
o
2 = (12.18)
A l2 [n(l)] dl
o
l
c V l3 [n(l)] dl
o
3 = (12.19)
c V l3 [n(l)] dl
o
568 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
Por lotes.
Continua.
Figura 12.10: Cristalizador por lotes. Adaptada de: Bennett, 1988. Reproducida
c
con el p erm iso de McGraw-Hill Inc. Copyright 1988. Todos los derechos reservados.
producindose la sobresaturacin.
Figura 12.13: Cristalizador con tubo de tiro y mampara. Adaptada de: Bennett,
1988. Reproducida con el permiso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1988.
c Todos los derechos
reservados.
Balance poblacional
(nG)
(V n) = FA nA F n V (12.20)
t l
Si consideramos un cristalizador por lotes donde:
a) No hay entrada ni salida de cristales.
b) El volumen es constante.
c) El cristalizador est perfectamente agitado y no existen prdidas de sol-
vente.
d) No existe variacin del nmero de cristales por aglomeracin o rompi-
miento.
e) Todos los cristales crecen a la misma velocidad.
El balance poblacional en el cristalizador por lotes es:
n n
+G =0 (12.21)
t l
El balance de masa de soluto en el cristalizador se puede expresar como:
dC p
= A G nl2 dl (12.22)
dt Mp
0
Las ecuaciones anteriores estn acopladas y tienen que ser resueltas si-
multneamente mediante mtodos numricos apropiados (Kumar et al., 2009;
Qamara et al., 2006). Los mtodos utilizados se pueden dividir en seis tipos:
a) momentos, b) caractersticas, c) colocacin ortogonal, d) simulacin Monte
Carlo, e) diferencias finitas y f) volumen finito.
23
p NA Cs
= 0.414kB T ln
Mp C
Mp C
s
Cm =
Mp C
1
p
Los valores de las variables y parmetros del sistema son las siguientes:
V octaedros 3/2
Se pide:
a) Establecer el balance de la densidad poblacional en el cristalizador.
b) Desarrollar el balance de masa de soluto en el cristalizador.
c) Discretizar la ecuacin del balance de la densidad poblacional empleando
el mtodo de diferencias finitas de Runge-Kutta de primer orden.
d) Discretizar la ecuacin del balance de soluto empleando el mtodo de
diferencias finitas de Runge-Kutta de primer orden.
e) Desarrollar un programa MATLAB para resolver el sistema de ecuaciones
acopladas y graficar la curva de densidad poblacional a intervalos de 15 min
cuando la cristalizacin se opera por espacio de 10 h.
Solucin:
576 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
n n
+G =0
t l
En ausencia de cristales sembrados, la condicin inicial de la ecuacin ante-
rior es:
t=0 n=0 l
La condicin de frontera se expresa como:
B
l=0 n0 = t
G
b) El balance de masa de soluto es el siguiente:
dC p
= A G nl2 dl
dt Mp
0
t=0 C = C0
c) El balance poblacional en forma discreta es:
o bien,
1
p
C (ti+1 ) = C (ti ) G(ti )A n (lj , ti ) lj2 l t
Mp j=1
dc AT
0=V + (c c ) (12.23)
dt 1 1
+
kL kS
donde AT es el rea de todos los cristales, variable que depende de la velocidad
de crecimiento, por lo tanto,
rea
AT = (nmero de cristales) (12.24)
cristal
MS
AT = A (ls + Gt)2 (12.25)
c V ls3
donde:
dc dc dT
= (12.28)
dt dT dt
combinando (12.27) y (12.28),
Ms
dT 3G
= V (ls + Gt)2 (12.29)
dt dc ls3
dT
La ecuacin anterior permite obtener la variacin de temperatura para man-
tener una velocidad de crecimiento de cristales constante. Esta expresin puede
simplificarse si se considera un intervalo corto de temperatura donde la variacin
de la solubilidad sea constante; en este caso la ecuacin (12.29) puede ser in-
tegrada para obtener:
Ms 2
V 3Gt Gt 1 Gt
T = To 1+ + (12.30)
dc ls ls 3 ls
dT
donde To es la temperatura a la cual los cristales inician su crecimiento.
La ecuacin anterior puede expresarse adimensionalmente utilizando la ex-
presin de la longitud final del cristal,
lf = ls + Gtf (12.31)
donde tf es el tiempo necesario para alcanzar lf . A partir de la ecuacin (12.31)
se define un tiempo adimensional dado por:
Gt
= (12.32)
(lf ls )
y se define una longitud adimensional que caracteriza las veces que se incre-
menta la longitud del cristal respecto a su tamao inicial dada por:
(lf ls )
= (12.33)
ls
sustituyendo (12.32) y (12.33) en (12.30) se obtiene:
Ms
V 1 2
T = To (3) 1 + + ( ) (12.34)
dc 3
dT
De acuerdo a la ecuacin (12.34) la masa final de los cristales menos la masa
sembrada de los cristales est dada por:
dc
Mf = V (To Tf ) (12.35)
dT
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES 581
Ms 1
3 (12.38)
Mf
y la ecuacin (12.36) se puede aproximar a:
To T
3
= (12.39)
To Tf
que es la expresin de la curva de enfriamiento que permite mantener un creci-
miento constante y evitar la nucleacin inicial excesiva.
3
(30 T ) t
=
(30 20) 120
10 t3
T = 30
(120)3
(V n) = 0 (12.40)
t
e) La alimentacin no contiene cristales,
nA = 0 (12.41)
(nG) G n n
=n +G =G (12.43)
l l l l
Considerando las ecuaciones (12.40) - (12.43), la ecuacin (12.20) se simpli-
fica a la forma siguiente:
dn nF
G + =0 (12.44)
dl V
como el tiempo de residencia promedio en el cristalizador est dado por:
584 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
V
= (12.45)
F
entonces la ecuacin (12.44) puede ser expresada como:
dn n
G + =0 (12.46)
dl
Cuando l es muy pequea (tiende a cero) la densidad poblacional n(0) se
deriva preferentemente de la nucleacin de nuevos cristales, entonces,
dN
Bo
n(0) = no = dt = (12.47)
dl G
dt
La ecuacin (12.47) puede utilizarse como condicin de frontera para la in-
tegracin de la ecuacin (12.46), obtenindose la ecuacin:
o l
n = n exp (12.48)
G
o bien,
Bo l
n= exp (12.49)
G G
La ecuacin (12.49) puede ser utilizada para: a) estimacin de parmetros
en un cristalizador RPMSM y b) diseo de cristalizadores RPMSM.
MT W
n= (12.51)
lc V l3
donde:
c
Reproducida con el p erm iso de M cGraw-Hill Inc. Copyright 1973. Todos los derechos reservados.
g
450 0.044
n20 = L
g cm3
0.349 mm 1.335 1 1.016 mm3 3
cm 3 10 mm3
nmero de cristales
n20 = 40, 521
mm L
ln (n20 ) = 10.61
Los clculos para las otras mallas aparecen en la Tabla 12.1 en las columnas
(5), (6), (7) y (8).
Los datos de ln (n) vs l se presentan en la forma grfica en la Figura 12.18.
Los parmetros de la recta ajustada son:
B o = no G
como:
ln (no ) = 19.765
entonces,
nmero de cristales
no = 3.838 108
mm L
y la velocidad de nucleacin es:
o 8 nmero mm nmero
B = 3.838 10 0.0327 = 1.255 107
mm L h Lh
c
Reproducida con el p erm iso de John W iley and Sons. Copyright 1987. Todos los derechos reser-
vados.
B o = kn (c c )i
G = kg (c c )
ln (B o ) = ln (kN ) + i ln (G)
de tal manera que los datos de ln (B o ) vs ln (G) se pueden ajustar a una recta
de pendiente i y ordenada en el origen ln (kN ).
En la Figura 12.19 se presenta la grfica correspondiente a los datos de la
Tabla 12.2, de la cual se obtiene:
l
NT = no exp dl
G
o
NT = no G (12.53)
l
o l
Nl = n exp dl
G
o
l
Nl = no G 1 exp (12.54)
G
de tal manera que la fraccin del total de la poblacin es:
o l
n G 1 exp
G
fraccin = o
= 1 exp(X) (12.55)
n G
donde X es una longitud adimensional dada por:
l
X=
G
Empleando un procedimiento similar al anterior se pueden obtener los o-
tros momentos. En la Tabla 12.3 se presentan las expresiones de los momentos
restantes.
dM = c V l3 ndl (12.56)
de la Tabla 12.3 la masa total de cristales por unidad de volumen es:
MT = 6V c no (G)4 (12.57)
combinando las dos expresiones anteriores se tiene:
592 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
dW l3 n
= (12.58)
dl 6(G )4 no
donde W es la fraccin masa de cristales. Las ecuaciones (12.48) y la (12.58)
conducen a:
dW l3 l
= exp (12.59)
dl 6(G )4 G
La densidad de la masa de cristales mxima se obtiene derivando con respecto
a l la ecuacin (12.59) e igualando a 0, entonces se tiene:
lD = 3G (12.60)
(l16 l84 )
CV = (12.61)
2lD
En el caso de la distribucin para el RPMSM este valor es aproximada-
mente del 50 %. Tal dispersin es muy amplia para ser aceptable para algunos
productos cristalinos como el azcar comn.
MT = 6V c no (G )4
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES 593
o bien,
Bo
MT = 6V c (G )4
G
sustituyendo valores,
7 nm
g cm 3 1.255 10
MT = 6 1 1.335
Lh
cm3 103 mm3 mm
0.0327
h
mm 4
0.0327 3.38 h (12.62)
h
g
MT = 458
L
.
El valor experimental de MT = 450 g/L y el calculado de MT = 458 g/L
sugieren consistencia de los datos.
El siguiente ejemplo muestra como una vez obtenidos los parmetros cinti-
cos, stos pueden ser utilizados para caracterizar una cristalizacin.
Solucin:
a) De acuerdo a la ecuacin (12.60) el tamao de cristal dominante es:
mm 100 L
lD = 3G = (3) 0.056 = 0.336 mm
h L
50
h
594 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
lD
N = ndl
o
o bien
N = (no G ) 1 eX
Bo lD
con no = y X= =3
G G
N = (B o ) 1 eX
sustituyendo valores,
nm 100 L nm
N = 1.88 107 1 e3 = 3.57 107
Lh L L
50
h
(1 e3 ) = 0.95
MT = 6V c no (G )4
sustituyendo valores con no = B o /G,
7 nm
g cm 3 1.88 10
MT = (6) (1) 1.769
Lh
cm3 1000 mm3 mm
0.056
h
4
mm 100 L
0.056
h L
50
h
g
MT = 560
L
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES 595
Modelo combinado
En el caso de un modelo combinado de remocin ideal de finos y gruesos
llamado modelo RZ , los balances poblacionales conducen (Moyers y Rousseau,
1987) a las tres expresiones de intervalo siguientes:
1. Para l lf :
o Rl
n = n exp (12.63)
G
2. Para lf l lc
(R 1)lf l
n = no exp exp (12.64)
G G
3. Para l lc
(R 1)lf (Z 1)lc Zl
n = no exp exp exp (12.65)
G G G
donde:
Fs Ra SRc
Rendimiento = (12.66)
Fs Ra
donde:
Balances de masa
Para sistemas binarios es posible desarrollar expresiones para el rendimiento
y las composiciones de las corrientes en funcin de: a) las condiciones de entrada,
b) la cantidad de solvente evaporado y c) las condiciones dentro del cristalizador.
A continuacin se presenta este procedimiento.
De acuerdo a la Figura 12.20 el balance de masa total en el sistema est
dado por:
Fs Ra = C + SRc (12.68)
y el balance de solvente por:
Fs = Fs Rse + S (12.69)
C
Rendimiento = (12.72)
Fs Ra
sustituyendo la ecuacin (12.71) en la (12.72),
Ra Rc (1 Rse )
Rendimiento = (12.73)
Ra
C
ST = (12.74)
Fs + Fs Ra Fs Rse
combinando (12.71) y (12.74) se obtiene:
Ra (1 Rse )Rc
ST = (12.75)
1 + Ra Rse
Ra Rc
Rendimiento = (12.77)
Ra
Ra Rc
ST = (12.78)
1 + Ra
600 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
Ra = Rc (12.79)
Ra Rse
ST = (12.81)
1 + Ra Rse
donde:
Con base a lo anterior las ecuaciones de diseo para cristalizacin con en-
friamiento adiabtico son:
f (Ra Rc ) + Cp T (1 + Ra )
Rse = (12.83)
v f Rc
Ra (1 Rse )Rc
Rendimiento = (12.84)
Ra
Ra (1 Rse )Rc
ST = (12.85)
1 + Rc Rse
Balances y cintica
En el diseo de un cristalizador es necesario combinar las expresiones de
la cintica de la cristalizacin con los balances de masa y energa. El uso de la
cintica de la cristalizacin para el anlisis y diseo provee una nueva dimensin
602 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
B o = 42, 699(G)0.46
donde las unidades son:
nm
m
nm cm3 min
Bo ; G ; kN m 0.46
cm3 min min
min
Se pide: Disear el cristalizador.
Solucin:
El diseo del cristalizador se efecta mediante los siguientes pasos:
a) Elaboracin de los balances de masa y energa.
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES 603
Presin T Cristalizador Rc
m asa soluto
mm Hg C masa solvente
160 65 0.100
135 60 0.072
90 50 0.043
60 40 0.028
40 30 0.018
Ra (1 Rse )Rc
ST =
1 + Ra Rse
sustituyendo valores,
Rse = 0.65
Este resultado indica que es necesario remover el 65 % del solvente que entra
para cumplir con ST = 0.5.
El balance de masa del sistema de acuerdo a la Figura 12.21 puede desarro-
llarse de la siguiente manera:
12.4. DISEO DE CRISTALIZADORES 605
En la corriente de salida,
kg
masa de cristales 455
0.5 = = h
masa total kg
(S + SRc ) + 455
h
como Rc = 0.043 (Tabla 12.7, T = 50 C) entonces ,
kg de solvente
S = 436.24
h
kg de soluto disuelto
SRc = 18.76
h
Fs Ra = C + SRc
de tal manera que:
kg
(455 + 18.76)
Fs = h = 1250 kg
kg h
0.379
kg
kg
Fs Ra = 473.76
h
kg
Fs Rse = 812.5
h
kg kg cal 1000 g
Q = 1250 0.65 100
h kg g kg
kg cal 1000 g
(0.379 0.043) 33.3
kg g kg
kg cal 1000 g
1 + 0.379 0.556 (100 50) C
kg g kg
kg kg cal 1000 g
0.043 0.65 33.3
kg kg g kg
cal
Q = 1.818 107
h
Bo = kN (G)i
Bo
no =
G
MT = 6V c no (G)4
1
MT (i + 3)
G=
6V c kN 4
C
MT =
(Fs Fs Rse )
s
kg
455 g
MT = h = 0.87
kg cm3
[1250 (1250 0.65)]
h
g
0.84
cm3
1
12 3
10 m
3.46
0.87
cm3
G = 0.46
nm min
4
6 1.23 42, 699 (107 min)
cm3 min m
m
G = 0.328
min
608 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
(2.85)2 (2.85)3 2.85
Frac. masa = 1 1 + 2.85 + + e = 0.32
2 6
En la Tabla 12.9 se muestran los resultados del resto de los clculos del efecto
de la variacin del tiempo de residencia sobre la velocidad de crecimiento, el
parmetro X y la fraccin masa de cristales de longitud menor a 100 m.
Tabla 12.9: Efecto del tiempo de residencia sobre la fraccin masa de cristales
menor a 100 m.
G X F rac. masa
min m/min Adim < 100 m
107 0.328 2.8 0.32
315 0.094 3.4 0.44
630 0.042 3.8 0.52
1260 0.019 4.2 0.60
2520 0.009 4.7 0.68
Figura 12.22: Sensibilidad del tamao del producto al tamao de corte de finos.
Tomada de: Moyers y Rousseau, 1987. Reproducida con el permiso de John W iley and
c
Sons. Copyright 1987. Todos los derechos reservados.
h kg
Masa de cristales = (315 min) 455 = 2, 388.75 kg
60 min h
2388.75 kg
Masa de suspensin = = 4, 777.5 kg
kg
0.5
kg
2388.75 kg
Vsusp. =
g 1000 cm3 kg
1.23
cm 3 L 1000 g
2388.75 kg
+
g 1000 cm3 kg
0.84
cm 3 L 1000 g
Vsusp. = 4, 786 L
kg
455
Productividad = h = 0.095 kg
4, 786 L Lh
Figura 12.23: Diseo conceptual que satisface las condiciones de diseo del Ejem-
plo 12.10. Tomada de: Moyers y Rousseau, 1987. Reproducida con el p erm iso de John
c
W iley and Sons. Copyright 1987. Todos los derechos reservados.
12.5. SUMARIO 611
12.5. Sumario
La cristalizacin es una operacin de acabado ampliamente utilizada a nivel
industrial que permite purificar un soluto mediante la formacin de cristales. La
fuerza impulsora de la cristalizacin es la sobresaturacin de la solucin. Existen
varias formas para generar la sobresaturacin en la solucin de inters, las cuales
se basan ya sea en el enfriamiento de la solucin o en su calentamiento al vaco.
La sobresaturacin que se logra en el cristalizador es la fuerza impulsora
tanto de la nucleacin (origen de los cristales) como de su crecimiento. Ambos
fenmenos se asocian con la cintica de la cristalizacin.
Actualmente se han logrado avances importantes en la modelacin de cris-
talizadores para su anlisis, diseo y optimizacin, en aplicaciones a situaciones
de importancia industrial.
612 CAPTULO 12. CRISTALIZACIN
12.6. Problemas
12.1. Cristalizador RPMSM. En el estudio cintico de la cristalizacin
por enfriamiento de Na2 SO4 5H2 O (Graber y Taboada, 1991) en un cristali-
zador RPMSM de forma cilndrica de 15.2 cm de dimetro y 39 cm de altura,
cuando el cristalizador operaba en estado estacionario, se obtuvo una muestra
de cristales contenidos en 2.04 L de solvente, con las siguientes caractersticas:
Tamao de
abertura de Masa en la
malla malla
Malla No. (mm) (g)
16 1.180 9.12
18 1.000 32.12
20 0.850 39.82
30 0.600 235.42
40 0.425 89.14
50 0.300 54.42
70 0.212 22.02
100 0.150 7.22
140 0.106 1.22
Fondo 0.50
12.2. Cristalizacin por lotes. Se realiza una cristalizacin por lotes en-
friando una solucin de cido ctrico de 60 a 40 C. En esta regin, la variacin
de la solubilidad de equilibrio del cido ctrico es de 0.006 g/cm3 C (Bohlin
y Rasmuson, 1992).
Los cristales al sembrarse tienen una longitud caracterstica inicial de 90 m,
con factores geomtricos de rea y volumen de 3.1 y 0.52, respectivamente.
La densidad de los cristales es de 1.54 g/cm3 , la concentracin de cristales
sembrados de 7.7 105 g/cm3 y el tamao final del cristal fue de 1, 000 m.
La sobresaturacin esperada durante la cristalizacin es de 0.2 g/cm3 . El cre-
cimiento de los cristales est controlado por la difusin con un coeficiente de
transferencia de masa de 4.5 105 cm/s.
12.6. PROBLEMAS 613
Se pide calcular:
a) El incremento adimensional del tamao de cristal .
b) La velocidad de crecimiento de los cristales.
c) El tiempo necesario del proceso.
d) La expresin de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin (12.34).
e) La expresin de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuacin (12.39).
Resp. a) 10.11, b) 0.042 cm/h y c) 2.18 h.
12.7. Bibliografa
Abbas, A.; Romagnoli, J.A. 2007. Multiscale modeling, simulation and vali-
dation of batch cooling crystallization. Sep. Purif. Tech. 53, 153-163.
Bakar, M.R.A.; Nagy, Z.K.; Saleemi, A.N.; Rielly, C.D. 2009. The Impact of
direct nucleation control on crystal size distribution in pharmaceutical
crystallization processes. Cryst. Growth Des. 9, 1378-1384.
Bennett, R.C. 1988. Matching crystallizer to material. Chem. Eng. 95, 118-
127.
Bohlin, M.; Rasmuson, A.C. 1992. Application of controlled cooling and seed-
ing in batch crystallization. Canadian J. Chem. Eng. 70, 120-126.
Kumar, J.; Warnecke, G.; Peglow, M.; Heinrich, S. 2009. Comparison of nu-
merical methods for solving population balance equations incorporating
aggregation and breakage. Powder Technology. 189, 218-229.
Lindenberg, C.; Krattli, M.; Cornel, J.; Mazzotti, M. 2009. Design and opti-
mization of a combined cooling/antisolvent crystallization process. Cryst.
Growth Des. 9, 1124-1136.
Martino, P.D.; Censi, R.; Malaj, L.; Capsoni, D.; Massarotti, V.; Martelli, S.
2007. Influence of solvent and crystallization method on the crystal habit
of metronidazole. Cryst. Res. Technol. 42, 800-806.
Omar, W.; Mohnicke, M.; Ulrich, J. 2006. Determination of the solid liquid
interfacial energy and thereby the critical nucleus size of paracetamol in
different solvents. Cryst. Res. Technol. 41, 337-343.
Qamara, S.; Elsne, M.P.; Angelov, I.A.; Warnecke, G.; Seidel-Morgenstern, A.
2006. A comparative study of high resolution schemes for solving popu-
lation balances in crystallization. Comp. .Chem. Eng. 30, 1119-1131.
Qiu, Y.; Rasmuson, A.C. 1991. Nucleation and growth of succinic acid in batch
cooling crystallizer. AIChE J. 37, 1293-1304.
Wierzbowska, B.; Piotrowski, K.; Koralewska, J.; Matynia, A.; Hutnik, N.;
Wawrzyniecki, K. 2008. Crystallization of vitamin C in a continuous DT
MSMPR crystallizer Size independent growth kinetic model approach.
Cryst. Res. Technol. 43, 381-389.
Yu, L.; Lionberger, R.; Raw A.; DCosta R.; Wu H.; Hussain A. 2004. Appli-
cations of process analytical technology to crystallization processes. Ad.
Drug Deliv. Rev. 56, 349-369.
Captulo 13
Secado
13.1. Introduccin
El secado es el ltimo paso en la recuperacin de ciertos productos biotec-
nolgicos. Consiste bsicamente en la reduccin del contenido de solvente en el
producto por medio de una evaporacin o una sublimacin. Tiene como propsi-
to estabilizar el producto, preservar su actividad, reducir su volumen o recuperar
el solvente.
Existen varias formas de secar un material. En el caso de productos biolgi-
cos una limitante en la seleccin del mtodo de secado, es la temperatura que
puede soportar el material de inters sin perder actividad, de tal manera que
las alternativas para estos materiales son ms limitadas.
En la prctica de secado el solvente generalmente es agua y el medio hacia
donde sta se elimina es aire. Por esta razn, el anlisis del secado se basa
fundamentalmente en los sistemas aire-agua, sin embargo los resultados que se
logran pueden ser generalizados a otros sistemas.
Siendo el secado una operacin limitada por el equilibrio en la seccin 13.2
sobre fundamentos del secado, se revisan los conceptos bsicos del equilibrio
de los sistemas agua-aire y las formas de efectuar una operacin de secado.
Asimismo, se revisan las expresiones bsicas para el clculo de la velocidad de
secado y de la velocidad de desactivacin de compuestos trmicamente lbiles.
En la seccin 13.3 sobre equipo de secado, se presentan los principales tipos de
secadores utilizados en los procesos biotecnolgicos. Los principios de diseo de
algunos tipos de secadores se presentan en la seccin 13.4.
13.2. Fundamentos
El anlisis de la operacin de secado requiere conocer las relaciones de equi-
librio que implica la distribucin de agua entre dos fases: a) la slida del mate-
rial a secar y b) la gaseosa del aire seco que sirve como medio para tal efecto.
Adems, es necesario conocer las diferentes formas en que puede ser conducida
618 CAPTULO 13. SECADO
g agua
% Humedad no ligada = (0.28 0.20) 100 = 8 %
g peso seco
620 CAPTULO 13. SECADO
Carta psicomtrica
En la operacin de secado se requiere conocer, a diferentes temperaturas y
presiones, las propiedades trmicas y las relaciones de equilibrio entre el solvente
en el slido y el aire que se utilice para secar. Debido a que el agua no ligada se
comporta como agua pura, las relaciones de equilibrio de los sistemas aire-agua
pueden ser utilizadas para tal efecto. Asimismo, estas relaciones de equilibrio
agua-aire son requeridas para describir el comportamiento del aire que se utiliza
en la operacin de secado, dado que ste generalmente es calentado antes de
usarse.
Las relaciones de equilibrio vapor de agua-aire se presentan en forma de una
carta psicomtrica como la Figura 13.2, la cual ha sido desarrollada a la presin
de una atmsfera.
masa agua
H= (13.3)
masa aire seco
Utilizando la ecuacin general de los gases ideales se puede expresar la
ecuacin (13.3) como:
PA MA
H= (13.4)
PT PA MB
donde:
kg
12 mm de Hg 18
H =
kmol
(760 12) mm de Hg kg
29
kmol
kg de agua
H = 0.01
kg de aire seco
kg
17.5 mm de Hg 18 kg agua
HS =
kmol = 0.0146
(760 17.5) mm de Hg kg kg aire seco
29
kmol
c) El porcentaje de humedad se pude calcular utilizando la ecuacin (13.6)
y los resultados anteriores,
0.01
%H= 100 = 68.4 %
0.0146
d) La humedad relativa se calcula con la ecuacin (13.1),
12 mm de Hg
% Hr = 100 = 68.57 %
17.5 mm de Hg
CS = CB + HCA (13.7)
donde:
CB : Capacidad calorfica del aire seco. 1.005 kJ/ (kg aire seco K).
Q = mB CS T (13.9)
kJ kJ
CS = 1.005 + (1.884)(0.08) = 1.156
kg aire seco K
kg aire seco K
kJ
Q = 5 kg aire seco 1.156 15 K = 86.7 kJ = 363 kcal
kg aire seco K
13.2. FUNDAMENTOS 625
Ent = CS (T To ) + Ho (13.11)
Cuando To = 0 C el calor latente o = 2, 502 kJ/kg y la ecuacin (13.11)
se expresa como:
kJ
Ent = (1.005 + 1.884H)T + 2502H (13.12)
kg aire seco
en la ecuacin anterior T est en C.
CS (T TS ) + HS = CS (TS TS ) + HS S (13.13)
combinado las ecuaciones (13.8) y (13.13) se tiene:
(H HS ) CS (1.005 + 1.884H)
= = (13.14)
(T TS ) S S
Las curvas de saturacin adiabtica de la carta psicomtrica (Fig. 13.2) han
sido construidas utilizando la ecuacin (13.14).
En el caso que el contacto no sea suficiente para alcanzar HS y TS a la salida,
la mezcla presentar una temperatura y una humedad menor, localizadas sobre
la misma lnea de saturacin adiabtica.
Mtodos adiabticos
Estos mtodos consisten en el secado por medio de adicin de calor con aire
caliente. Los secadores por aspersin y los secadores de tipo instantneo operan
de acuerdo a este mtodo. Son utilizados para secar partculas que no toleran
altas temperaturas como protenas unicelulares y enzimas.
t = to Pr = Pro
t = t Pr = Pr
genera la expresin:
Pro E
ln = ko exp t (13.16)
Pr RT
Entre menor sea la temperatura y el tiempo de secado, menor es el grado de
desnaturalizacin. Generalmente es ms conveniente utilizar una combinacin
de una temperatura baja con un tiempo alto de secado, para evitar una desna-
turalizacin excesiva.
Pro E
ln = ko exp
cal (10 min)
(Pro 0.63 Pro ) K
1.99 310
mol K
Pro E
ln = ko exp
cal (30 min)
(Pro 0.28 Pro )
1.99 293 K
mol K
resolviendo las expresiones anteriores se obtiene:
cal
E = 23, 453
mol
ko = 3.22 1015 min1
630 CAPTULO 13. SECADO
cal
Pro 23453
ln =
3.22 1015 min1 exp mol
(90 min)
Pr cal K
1.99 277
mol K
Pr
= 0.91
Pro
Secadores adiabticos.
Secadores no adiabticos.
Figura 13.4: Secado por aspersin. Tomada de: Brocklebank, 1990. Reproducida
c
con el permiso de M arcel Dekker Inc. Copyright 1990. Todos los derechos reservados.
Secador instantneo
Los secadores instantneos o flash (Fig. 13.5) son utilizados para secar sli-
dos de baja humedad o slidos difciles de manejar por formar partculas muy
pequeas o ser muy pegajosos en forma seca (protenas y almidn).
En un secador instantneo el material slido que se va a secar se alimenta
conjuntamente con aire caliente a un ducto, a travs del cual el slido viaja
y se seca por accin del aire. Al final del ducto la corriente de aire-slido se
separa por accin de un cicln. Parte de la corriente es recirculada para secar
las partculas grandes que son ms difciles de secar. Si debido a su tamao
las partculas de la alimentacin no pueden ser transportadas por el secador,
el secador puede incorporar un molino desintegrador a la entrada del ducto de
secado.
Secador de charolas
Los secadores de charolas (Fig. 13.7), son utilizados a escala piloto o para
producciones bajas de productos de alto valor econmico, susceptibles a tem-
peraturas elevadas o a dao por manejo mecnico excesivo.
En el secador de charolas la muestra se coloca en las charolas que se intro-
ducen a una cmara. Las charolas son calentadas por medio de chaquetas de
13.3. EQUIPOS DE SECADO 633
Liofilizadores
Los liofilizadores son utilizados para obtener slidos secos de alto valor co-
mercial. Se emplean cuando los slidos son muy lbiles o frgiles para ser trata-
dos por un mtodo convencional de secado o una filtracin, o bien son muy
634 CAPTULO 13. SECADO
solubles (sales de sodio) de tal manera que no pueden ser obtenidos por preci-
pitacin o cristalizacin. La liofilizacin ha sido empleada para la obtencin de
enzimas, hormonas y otro tipo de protenas de uso farmacutico.
En un proceso de liofilizacin (Fig. 13.9) la solucin a secar, con una con-
centracin entre 5-25 % peso/volumen, se alimenta a un sistema de filtrado (0.2
m) para ser esterilizada y entrar al secador que opera en forma estril. En el
proceso de secado la solucin primero se congela, y posteriormente se deshidrata
mediante un sistema de calentamiento y un sistema de vaco, acoplados de tal
manera que el agua de la muestra siempre est en forma slida y su prdida sea
slo por sublimacin.
Recientemente se ha investigado el uso de liofilizadores que operan a la at-
msfera como una alternativa a los liofilizadores al vaco con el propsito de
reducir los costos de operacin en el secado (Claussen et al., 2007).
Secado de slidos
Para obtener experimentalmente la velocidad de secado de un material sli-
do, se procede a colocar una muestra en una charola, de tal manera que slo se
exponga la superficie del slido a la corriente de aire que se utilice para secar.
La variacin de la humedad del slido puede medirse por medio de una balanza.
Las condiciones de secado deben ser constantes y aproximadamente iguales a
las que se utilizarn a gran escala.
a evaporarse dentro del slido y el vapor a difundirse a travs del slido hasta
el aire. Este proceso es ms lento y por lo tanto retarda la velocidad de secado.
Debido a la situacin descrita anteriormente, el tiempo de secado de un proceso
debe ser calculado sumando los tiempos de los periodos de secado constante y
de secado decreciente.
q = hA(T Ti ) (13.17)
donde:
638 CAPTULO 13. SECADO
J = k(Ci C) (13.18)
J = k (Hi H) (13.19)
donde:
J: Flux de agua. [M/ L2 t ].
Ci : Concentracin de agua en la superficie del slido. [M/L3 ].
C: Concentracin de agua en el seno del aire. [M/L3 ].
k: Coeficiente de transferencia de masa en la pelcula estancada de aire sobre
el slido. [L/t].
: Densidad de aire seco. [kg aire seco/ L3 de mezcla ].
: 1/VH
dW k A
= (Hi H) (13.21)
dt m
El resultado anterior es difcil de utilizar debido a que generalmente las
humedades no son medidas directamente. Entonces las humedades de la ecuacin
(13.21) se expresan en funcin de temperaturas combinando esa ecuacin con el
balance de energa.
En un proceso adiabtico la transferencia de calor del aire al slido es igual
al total del calor latente de evaporacin, de tal manera que:
q = () (JA) (13.22)
Combiando las ecuaciones (13.17), (13.21) y (13.22) se obtiene la siguiente
expresin:
dW hA
= (T Ti ) (13.23)
dt m
La ecuacin anterior es equivalente a la ecuacin (13.21), pero est expresada
en funcin de dos temperaturas fcilmente medibles: la temperatura de bulbo
seco del aire T y la temperatura de saturacin adiabtica o temperatura de
bulbo hmedo Ti .
Se puede calcular el tiempo de secado en el periodo de velocidad de secado
constante integrando la ecuacin (13.23) entre los lmites siguientes:
t=0 W = Wo
t = tc W = Wc
obtenindose:
m
tc = (Wo Wc ) (13.24)
hA(T Ti )
donde tc es el tiempo para alcanzar la humedad crtica del slido, que es la
humedad a la cual termina el periodo de velocidad de secado constante.
Para el clculo de tc es necesario calcular h. Este coeficiente depende de la
geometra del secador.
En el caso de secado con flujo de aire paralelo a la superficie de un slido
y una temperatura entre 45 150 C, el coeficiente de transferencia de calor
puede ser evaluado con la ecuacin,
t = tc W = Wc
13.4. DISEO DE SECADORES 641
t=t W =W
obtenindose la ecuacin siguiente:
1 Wc
t tc = ln (13.28)
a W
m dW h
= (T Ti )
A dt
El empleo de esta ecuacin requiere calcular Ti , h y .
a) Clculo de Ti .
Para una humedad de H = 0.01 agua/kg de aire seco y una temperatura de
bulbo seco de 65.6 C, mediante la carta psicomtrica y utilizando la lnea de
saturacin adiabtica se puede encontrar,
Ti = 28.9o C
b) Clculo de h.
Se puede utilizar la ecuacin (13.25) con G = .
Para el clculo de la densidad del aire se necesita calcular el volumen hmedo
del aire. Utilizando la ecuacin (13.10),
642 CAPTULO 13. SECADO
m3 mezcla
VH = (0.00283 + 0.00456H)(T + 273)
kg aire seco
3
m mezcla
VH = (0.00283 + 0.00456 0.01)(65.6 + 273)
kg aire seco
m3 mezcla
VH = 0.974
kg aire seco
La densidad de 1.0 kg de aire seco y 0.01 kg de agua acompaante es:
1 + 0.01 kg
= = 1.037 3
0.974 m
El flujo msico es:
m kg 3600 s kg
G = 6.1 1.037 3 = 22, 770 2
s m h m h
El coeficiente de transferencia de calor se puede calcular con la ecuacin
(13.25):
W 2W
= Def (13.30)
t y 2
La solucin analtica de esta ecuacin para secado es (Crank, 1975):
W We 8 1 1 (2i + 1)2 2
= 2 exp Def t (13.31)
W0 We i=0 (2i + 1)2 4L2
dW 2 Def
= (W We ) (13.33)
dt 4L2
dW 2 Def
= (W We )
dt 4L2
El efecto de la temperatura sobre el coeficiente de difusin se describe me-
diante una ecuacin tipo Arrhenius:
644 CAPTULO 13. SECADO
Ed
Def = D0ef exp
RTa
Modelo de variacin de la temperatura del producto:
Para describir el cambio de la temperatura en las placas experimentales de
pimiento rojo se utiliza el siguiente balance de energa:
dTS aV
= [JHV + hg (Ta Ts )]
dt S Cps
El clculo del flux de agua se realiza utilizando la siguiente igualdad:
dW JA JaV
= =
dt m S
El modelo considera la variacin de las propiedades del producto con la
humedad del producto.
La variacin de la densidad del pimiento rojo est dada por:
W W W
S = 2798 exp 15.83 + 845.2 exp 0.125 para 0.1
W 0
W0 W0
W W
S = 1138 exp 2.33 para < 0.1
W0 W0
2 3
W W W
aV = aV 0 5.149 18.813 + 28.684 14.02
W0 W0 W0
dAa
= ka Aa
dt
donde:
13.4. DISEO DE SECADORES 645
Eaa
ka = k0a exp
RTs
Eaa
= K3a + K4a W
R
Figura 13.14: Esquema del sistema de secado por aspersin del Ejemplo 13.11.
kg slidos kg kg slidos
F 0.25 = 316 0.95
kg totales h kg totales
kg
F = 1, 200
h
b) La cantidad de agua evaporada puede calcularse mediante un balance de
agua en los slidos.
kg agua
H1 = 0.005
kg aire seco
El balance de energa est dado por:
kg kg slido kcal
1200 0.25 0.4 (15 0) C +
h kg kg slido C
kg kg agua kcal
1200 0.75 1.0 (15 0) C
h kg kg agua C
kcal
= 15, 300
h
La entalpia del producto es:
kg kg slido kcal
316 0.95 0.4 (60 0) C +
h kg kg slido C
kg kg agua kcal
316 0.05 1.0 (60 0) C
h kg kg agua C
kcal
= 8, 152.8
h
La entalpia del aire a la entrada puede calcularse utilizando la ecuacin
(13.12),
kg aire seco
G {[1.005 + (1.884)(0.005)] (150) +
h
kJ kcal
(2502)(0.005)}
kg aire seco 4.187 kJ
kcal
= 39.33 G
h
de igual manera la entalpia de aire a la salida es:
kg aire seco
G {[1.005 + (1.884)(H2 )] (75)+
h
kJ kcal
(2502)(H2 )}
kg aire seco 4.187 kJ
kcal
= 18 G + 631.3 GH2
h
El balance de energa puede ser expresado como:
kcal
(15, 300) + (39.33 G) = (8152.8) + (18 G + 631.3 GH2 )
h
resolviendo simultneamente las ecuaciones de balance de masa y energa se
obtiene:
650 CAPTULO 13. SECADO
1.0341 g
Mprom = = 28.33
0.0341 1 mol
+
18 28.9
La densidad de la mezcla a la salida es:
g kg
1 atm 28.33
PM mol 103 g kg
sal = = = 0.993 3
RT atm m 3 m
82. 106 348 K
mol K
entonces el flujo volumtrico de aire hmedo es:
D2 D2
V = H = 0.8D = 307 m3
4 4
De tal manera que:
D = 7.87 m; H = 6.3 m
q = hA(To TZ ) (13.34)
que para el caso de slidos puede ser expresado como:
652 CAPTULO 13. SECADO
q= A(To TZ ) (13.35)
Z
donde:
h: Coeficiente de transferencia de masa. [cal/ L2 t ].
: Conductividad trmica. [cal/ (L t )].
To : Temperatura en la base de la charola. [ ].
En forma de ecuacin:
d(AZ)
q = o (13.36)
dt
donde:
t=0 Z =l
t=t Z =Z
se obtiene:
2(To TZ )
Z 2 = l2 t (13.37)
o
Al final de la operacin cuando t = tf , todo el slido est seco y Z = 0, la
ecuacin (13.37) se puede expresar como:
1 o l2
tf = (13.38)
2 (To TZ )
13.5. SUMARIO 653
1
Z 2(To TZ ) 2
= = 1 t (13.39)
l o l2
El anlisis anterior es sencillo y til como punto de partida en el diseo de
secadores no adiabticos.
Esta ecuacin supone que las condiciones a nivel piloto son iguales a las de
nivel industrial: temperaturas, niveles de vaco y el porcentaje del volumen total
que es ocupado por el slido (50-65 %).
13.5. Sumario
El secado es una operacin empleada en la preparacin final de los bio-
productos. Consiste en una reduccin del contenido de humedad de los slidos
con el propsito de mejorar su estabilidad, reducir su volumen y preservar su
actividad.
Los mtodos para efectuar una operacin de secado se clasifican en adiabti-
cos y no adiabticos. En el secado adiabtico se agrega aire caliente directamente
sobre el material que se desea secar. El secado no adiabtico se realiza mediante
un calentamiento indirecto del material de inters.
Existen diversos equipos de secado, los cuales se pueden clasificar mediante
la forma en que se realiza el secado. Los secadores adiabticos ms utilizados
son el de aspersin, el secador instantneo y el de lecho fluidizado. Entre los no
654 CAPTULO 13. SECADO
adiabticos se pueden citar los secadores tipo charola, de doble cono, tambor
rotatorio y los liofilizadores.
El diseo de los secadores est basado en una combinacin de la teora de
secado y datos experimentales obtenidos directamente con el material de inters.
13.6. PROBLEMAS 655
13.6. Problemas
13.1. Humedad de aire. El aire de una habitacin tiene una humedad H
de 0.021 kg de agua/ kg aire seco, se encuentra a 32.2 C y a una atmsfera de
presin.
Se pide calcular:
a) El porcentaje de humedad del aire de la habitacin.
b) El porcentaje de humedad relativa.
Resp. a) 67.5 % y b) 68.9 %.
Se pide:
a) Graficar los datos de humedad del slido W contra el tiempo.
b) Obtener la velocidad de secado en cada punto y graficarla contra la
humedad del slido.
c) Estimar la velocidad de secado en el periodo de velocidad constante.
d) Estimar la humedad crtica.
e) Estimar la humedad de equilibrio.
f)Estimar el tiempo para disminuir la humedad del slido de 0.25 a 0.09
kg/kg.
Resp. c) 0.996 kg/hm2 , d) 0.17 kg/kg e) 0.05 kg/kg y f) 4.1 h.
13.7. BIBLIOGRAFA 657
13.7. Bibliografa
Belter, P.A.; Cussler, E.L.; Hu, W. 1988. Bioseparations: Downstream Process-
ing for Biotechnology. John Wiley and Sons. New York. 11, 307-333.
Claussen, I.C.; Ustad, T.S.; Strmmen, I.; Walde. P.M. 2007. Atmospheric
freeze drying-A review. Drying Technology. 25, 957-967.
Crank, J. 1975. The mathematics of diffusion (2nd ed.). London. Oxford Uni-
versity Press. 347 p.
Di Scala, K.; Crapiste, G. 2008. Drying kinetics and quality changes during
drying of red pepper. Food Sci. Tech. 42, 789-795.
Gong, Z.; Mujumdar, A. 2008. Software for design and analysis of drying
systems. Drying Technology. 26, 884-894.
Katekawa, M.E.; Silva, M.A. 2006. A review of drying models including shrink-
age effects. Drying Technology. 24, 5-20.
Oakley, D.E. 2004. Spray dryer modeling in theory and practice. Drying tech-
nology. 22, 1371-1402.
Porter, H.F.; Mc Cormick, P.Y.; Lucas, R.L.; Wells, D.F. 1973. Gas-solid
systems. En: Chemical Engineers Handbook. Perry, R.H. y Chilton C.H.
(Eds.). 5th Ed. McGraw-Hill. New York. 20, 1-121.
Quinn, J.J. 1983. Adiabatic drying. En: Fermentation and Biochemical En-
gineering Handbook. Principles, Process Design, and Equipment. Vogel,
H.C. (Ed.). Noyes Publications. New Jersey. 12, 331-362.
Schlunder, E.U. 2004. Drying of porous material during the constant and
the falling rate period: A critical review of existing hypotheses. Drying
Technology. 22, 1517-1532.
Sloth, J.; Jrgensen, K.; Bach, P.; Jensen, A.D.; Kiil, S.; Dam-Johansen, K.
2009. Spray drying of suspensions for pharma and bio products: Drying
kinetics and morphology. Ind. Eng. Chem. Res. 48, 3657-3664.
658 CAPTULO 13. SECADO
Thybo, P.; Hovgaard, L.; Lindelv, J.S.; Anders Brask, A.; Andersen, S.K.
2008. Scaling up the spray drying process from pilot to production scale
using an atomized droplet size criterion Pharm. Research. 25, 1610-1620.
Tsotsas, E.; Gnielinski, V.; Schluender, E. 2003. Drying of solid materials.
En: Bohnet, M. Ullmanns encyclopedia of industrial chemistry. Vol. 11 :
Diuretics to energy management in chemical industry. 6. Wiley-VCH. S.
47 - 82
Treybal, R.E. 1980. Operaciones de Transferencia de Masa. McGraw-Hill. 2
ed. Mxico. 12, 723-791.
Turhan, M.; Turhan, K. N.; Sahbaz, F. 1997. Drying kinetics of red pepper.
J. Food Proc. Preservation. 21, 209-223.
Wang, S.; Langrish, T. 2009. A review of process simulations and the use of
additives in spray drying. Food Res. Int. 42, 13-25.
Parte VI
14.1. Introduccin
El anlisis de un bioproceso consiste en la evaluacin y comparacin de
diagramas de flujos alternativos para la obtencin del producto de inters,
integrados por las operaciones unitarias seleccionadas durante la sntesis del
bioproceso.
El diseo de un bioproceso puede desarrollarse a diferentes niveles de detalle
que varan en su objetivo, precisin, costo y tiempo para efectuarse. El objetivo
vara tpicamente desde un estudio de factibilidad hasta uno de comercializacin.
La precisin aumenta con el grado de desarrollo del bioproceso desde la escala
laboratorio hasta el nivel de planta piloto. El costo y el tiempo del estudio
generalmente aumenta conforme el grado de precisin aumenta.
En este captulo, en la seccin 14.2, se presenta la metodologa general del
anlisis de bioprocesos y los principales aspectos tcnicos a considerar en este
tipo de estudios. El uso de paquetes computacionales para el diseo de bioproce-
sos se describe en la seccin 14.3. En la seccin 14.4 se presenta un caso prctico
sobre el uso de esta metodologa.
14.2. Fundamentos
El diseo, desarrollo y evaluacin econmica de un bioproceso se basa en
la demanda comercial o social del producto, su sustentabilidad y las especifi-
caciones regulatorias que es necesario cumplir (Freitas et al., 2009; Nfor et al.,
2008). Este tipo de trabajos precisan la integracin de informacin y conocimien-
to de varias disciplinas ingenieriles y cientficas (Fig. 14.1).
Un enfoque comnmente utilizado para lograr esta integracin consiste en: a)
establecer la escala y modo de operacin del bioproceso, b) desarrollar un modelo
conceptual del bioproceso constituido por los submodelos biolgico, fsico y de
costos, c) resolver los balances de masa y energa del bioproceso y d) realizar la
evaluacin econmica y anlisis de resultados correspondientes.
664 CAPTULO 14. ANLISIS DEL BIOPROCESO
kg
Demanda [Participacin ( %)]
ao
V P rd = (14.1)
kg
Productividad [Rendimiento global ( %)]
L ao
En el caso de productos intracelulares, la productividad del bioproceso de-
pende de la concentracin celular alcanzable (kg/L) o rendimiento volumtrico y
de la concentracin especfica del producto en la clula (kg/kg) o rendimiento es-
pecfico. Tambin depende del tiempo de procesamiento para sistemas por lotes
o del tiempo de residencia para sistemas continuos. Entre menores sean estos
tiempos mayor productividad. La productividad anual se estima considerando
el tiempo anual de operacin (TAO), de tal manera que,
kg
Productividad =
L ao
14.2. FUNDAMENTOS 665
kg kg h
Rend. volumtrico Rend. especfico TAO
L kg ao
=
[Tiempo de procesamiento (h)]
(14.2)
Submodelo biolgico
El submodelo biolgico comprende generalmente la cintica, la termodinmi-
ca (calor de reaccin y equilibrio) y la estequiometra de las biorreacciones. sta
es la informacin bsica para el diseo de las operaciones previas del bioproceso
(biorreactor, esterilizador de aire, preparacin de medio). La cintica determina
el tiempo necesario para lograr una conversin especificada, la termodinmica
permite calcular la cantidad de calor que es necesario remover en el biorreactor
y la estequiometra es la base para desarrollar los balances de masa del bio-
proceso. Esta informacin es obtenida a partir de los datos de laboratorio y/o
planta piloto, as como de la literatura.
Submodelo fsico
El submodelo fsico se basa en el diagrama de flujo desarrollado en la sn-
tesis del bioproceso, organizado por secciones, v.g. fermentacin, recuperacin,
concentracin, purificacin y empaque. Incluye todas las operaciones y procesos
unitarios necesarios para la obtencin del producto. Las operaciones unitarias
son los pasos bsicos en el bioproceso como la esterilizacin, la fermentacin
y la cromatografa. Los proceso unitarios comprenden un conjunto de acciones
que se desarrollan secuencialmente para llevar acabo una operacin unitaria.
Por ejemplo, equilibrar, adsorber, lavar, eluir y regenerar una columna durante
la operacin cromatogrfica. El submodelo fsico tambin requiere de datos de
todos los materiales que entran y salen del proceso, incluyendo sus principales
propiedades fsicas y qumicas.
Submodelo de costos
El submodelo de costos involucra los costos unitarios y los mtodos de esti-
macin de costos necesarios para calcular los costos de inversin y operacin de
un bioproceso dado. Esta informacin se obtiene a partir de los proveedores o
bien de bancos de datos disponibles.
666 CAPTULO 14. ANLISIS DEL BIOPROCESO
Ingresos
Costo operacin
Utilidad bruta
ISR
Utilidad neta
+ Depreciacin
Flujo de efectivo
donde:
F0 : Inversin inicial.
Ft : Flujo neto de efectivo del periodo t.
i: TIR
Cuando la tasa interna de rendimiento es mayor al TREMA (T IR > T REM A),
la rentabilidad del bioproceso es mayor al TREMA y es un indicador positivo
para la evaluacin.
14.3.1. Plsmidos
Los plsmidos son molculas extracromosmicas de DNA cerradas y de doble
hlice, presentes en bacterias. Se caracterizan porque se pueden replicar de ma-
nera independiente del DNA genmico (gDNA). Actualmente, el desarrollo de
nuevas vacunas y terapias gnicas utilizando DNA plasmdico ha generado una
gran demanda de estas macromolculas biolgicas en condiciones de alta pureza,
de acuerdo con los lineamientos de los organismos reguladores para su adminis-
tracin en seres vivos (Freitas et al., 2006).
Concepto Cantidad
Demanda 1.16 107 ampolletas/ao
Dosis 2 mg/ampolleta
Rend. global 0.65
Rend. volumtrico 7 g de biomasa/L
Rend. especfico 0.007 g de plsmido/g de biomasa
Demanda anual
Con los datos anteriores es necesario calcular la demanda de plsmido,
670 CAPTULO 14. ANLISIS DEL BIOPROCESO
Compuesto Composicin
Triptona 16.0 g/L
Extracto de levadura 10.0 g/L
Cloruro de sodio 5.0 g/L
Kanamicina 0.1 g/L
amp mg kg kg
Demanda = 1.16 107 2 6 = 23.2
ao amp 10 mg ao
kg 103 g ao
23.2
ao kg 7920 h L
V = g g = 4, 415
7 0.007 lote
L g
h 0.65
48
lote
El volumen de operacin se ajusta considerando una prdida por evaporacin
de aproximadamente 2 %, de tal manera que:
L
4, 415 L
V = lote = 4, 500
(1 0.02) lote
Entradas al bioproceso
Para realizar la simulacin es necesario establecer las entradas de masa al
bioproceso (agua, medio slido y antibitico) tomando como base el volumen de
operacin y la composicin del medio de cultivo (Tabla 14.2). En este caso se
utilizan 4, 226 L de agua y 131 kg de medio por cada lote.
Recuperacin primaria
La biomasa se cosecha en una centrfuga (P-10) que remueve el 98 % de la
biomasa y concentra el caldo 20 veces aproximadamente. Despus de la cen-
trifugacin la pasta se resuspende y se somete a un proceso de lisis alcalina con
NaOH en el biorreactor (P-11). Al final de la lisis la solucin se neutraliza con
acetato de potasio que permite precipitar restos celulares, DNA genmico y pro-
tenas contaminantes. Este precipitado es removido por un sistema de filtracin
(P-12, P-13 y P-14).
Recuperacin intermedia
Para lavar, purificar parcialmente y concentrar el caldo se utiliza una unidad
de diafiltracin (P-15). El caldo se concentra primeramente 5 veces, despus se
lava diez veces y finalmente se concentra de nuevo dos veces.
Purificacin final
La purificacin final del caldo se realiza en 5 columnas de membranas de
intercambio inico que operan en paralelo a razn de 4 ciclos por lote (P-16).
La operacin se realiza en forma frontal en la etapa de adsorcin y eluyendo
con gradiente salino. Para su preparacin final la solucin de plsmido eluida
de la columna se concentra 2 veces, se lava 10 veces y se vuelve a concentrar 5
veces, en el equipo de diafiltracin (P-17). Finalmente, la solucin se esteriliza
mediante filtracin (P-18).
672 CAPTULO 14. ANLISIS DEL BIOPROCESO
Empacado
Concepto Valor
Precio $10.00/caja
Financiamiento Slo operacin
Vida del proyecto 15 aos
Periodo de arranque 3 aos
Plan de produccin (aos 4-15) 100 % anual
Depreciacin lineal 10 aos
Valor de salvamento 10 %
Impuesto sobre la renta 40 %
TREMA 7%
I. Costos de Operacin
Directos Variables
A. Materias primas y suministros a. Materias primas:
Base de datos y usuario
b. Costo de operacin: 0.06 T P DC
c. Mantenimiento: 0.10 P C
B. Mano de obra y supervisin a. Horas equipo
C. Servicios a. Vapor: $4.20/100 kg
b. Electricidad: $0.1/ kWh
c. Agua: $0.10/1000 kg agua fra
d. Tratamiento de desechos: $0.3/m3
II. Costos Fijos
A. Depreciacin a. 0.1 DF C
14.4. DESARROLLO DEL DISEO 677
Balances de masa
En la Tabla 14.6 se presentan algunos datos del balance de masa global del ca-
so de diseo en kg/ao y en kg/lote, considerando la produccin de 164 lote/ao
y una duracin de 48 h/lote. Estos reportes tambin pueden ser obtenidos por
seccin del bioproceso.
Evaluacin econmica
Una vez efectuados los balances de masa y energa se puede proceder a
calcular el flujo de efectivo correspondiente y realizar la evaluacin econmica
del bioproceso. En la Tabla 14.7 se presentan algunos datos de la evaluacin
econmica relacionados al caso de diseo, de los rubros de flujo de efectivo,
inversin total requerida e ndices de evaluacin.
Figura 14.4: Anlisis de sensibilidad del TIR () y el periodo de retorno (). a)
Efecto del precio de venta y b) Efecto de la concentracin celular alcanzada en
el biorreactor.
14.5. SUMARIO 679
14.5. Sumario
El anlisis de un bioproceso consiste en la evaluacin y comparacin de
diagramas de flujos alternativos para la obtencin del producto de inters,
integrados por las operaciones unitarias seleccionadas durante la sntesis del
bioproceso.
La metodologa requiere considerar por un lado aspectos de mercado co-
mo el precio y la demanda especfica del producto. Por otro lado, aspectos
tcnico-econmicos como la produccin anual, las dimensiones de los equipos,
las necesidades de insumos, los costos asociados, la inversin proyectada y el
impacto ambiental. Actualmente, es altamente recomendable el uso de simu-
ladores computacionales para facilitar la representacin y el anlisis de todo el
bioproceso. El uso de estas herramientas se describe mediante el desarrollo de
un caso de un bioproceso por lotes para la obtencin de plsmidos para uso
mdico a partir de caldos fermentados con E. coli como bacteria hospedera.
680 CAPTULO 14. ANLISIS DEL BIOPROCESO
14.6. Problemas
14.1. Produccin de tPA. Se desea evaluar un bioproceso para la purifi-
cacin de tPA a partir de leche de cabra transgnica (Goldman et al., 2002). En
la siguiente tabla se presentan los datos de mercado y de costos.
Concepto Valor
Demanda anual tPA 100 kg
Dosis 100 mg
Precio $350/dosis
Concentracin 20 g de tPA/L de leche
Costo leche $4, 000/L
Se pide:
a) Desarrollar el diagrama de flujo del bioproceso consultando la literatura
(v.g. Morcol y Bell, 2001).
b) Calcular el TIR y el VPN del proyecto.
c) Evaluar el efecto sobre el TIR de la variacin del costo de la leche en 20
y 10 %.
Concepto Valor
Demanda anual ASH 150 ton
Precio $3.56/g
Concentracin 200 g de ASH/L de extracto
Costo extracto $100/L
Peso molecular 66,500 Da
14.7. Bibliografa
Freitas, S.; Canrio, S.; Santos, J.A.; Prazeres, D.M. 2009. Alternatives for the
intermediate recovery of plasmid DNA: performance, economic viability
and environmental impact. Biotechnol J. 4, 265-278.
Freitas, S.; Santos, J.; Prazeres, M. 2006. Plasmid DNA. En: Heinzle, E.;
Biwer, P.; Cooney, C. Development of Sustainable Bioprocesses Modeling
and Assessment. John Wiley and Sons, Ltd. p. 270-285.
Goldman, I.L.; Kadulin, S.G.; Razin, S.V. 2002. Transgenic goats in the world
pharmaceutical industry of the 21st century. Russian J. Genetics. 38, 1-14.
Harrison, R.G.; Todd, P.W.; Rudge, C.R.; Petrides, D. 2003. Bioseparations
science and engineering. Cap. 11. Oxford University Press.
Holler, C.; Zhang, C. 2008. Purification of an acidic recombinant protein from
transgenic tobacco. Biotech. Bioeng. 99, 902-909.
Marcol, T.; Bell, S.J.D. 2001. Method for processing milk. US6183803.
Nfor, B.K.; Ahamed, T.; van Dedem, G.W.; van der Wielen, L.A.; van de Sandt,
E.J.; Eppink, M.H.; Ottens, M. 2008. Design strategies for integrated
protein purification processes: challenges, progress and outlook. J. Chem.
Technol. Biotechnol. 83,124132.
Petrides, D.; Koulouris, A.; Siletti, C.; Jimnez, J.; Lagonikos, P. 2010. The
role of simulation and scheduling tools in the development and manufac-
turing of active pharmaceutical ingredients. am Ende, D.J. (Ed.). Chemical
Engineering in the Pharmaceutical Industry: From R&D to Manufactur-
ing. John Wiley and Sons.
ERRNVPHGLFRVRUJ
ndice alfabtico
smosis inversa, 464 crecimiento, 562
velocidad de crecimiento, 562
Actividad especfica, 17 nucleacin, 560
Adsorbentes hidrofbicos, 279 primaria, 561
Adsorcin, 275 secundaria, 561
columna velocidad de nucleacin, 561
patrn constante, 335 Coagulacin, 71
Adsorcin fsica, 278 Coeficiente de particin, 211
Adsorcin por afinidad, 279 Coeficiente de transferencia de masa,
Anlisis del bioproceso, 663 289
balances de masa y energa, 666 Costo de adquisicin de equipo, 46
escala y modo de operacin, 664 Cristales
evaluacin econmica, 666 anlisis de momentos, 566
modelo del bioproceso, 665
densidad del magma, 592
submodelo biolgico, 665
distribucin de tamao, 565
submodelo de costos, 665
ley delta, 565
submodelo fsico, 665
longitud caracterstica, 564
Ayudas-Filtro, 71
pureza, 554
Bacterias, 158 tamao dominante, 591
Gram negativas, 158 tipos, 553
Gram positivas, 158 Cristalizacin, 551
Bioprocesos, 6, 7 curvas de solubilidad, 554
anlisis, 22 estrategia de diseo, 552
sntesis, 22 modo de operacin, 559
tpico, 9 sobresaturacin por enfriamien-
Bioseparaciones, 6, 13 to, 560
tendencias, 23 sobresaturacin por enfriamien-
to evaporativo, 560
Capa de Gody-Chapman, 518 sobresaturacin por evaporacin
Carga de perlas, 174 trmica, 560
Caso de diseo, 667 sobresaturacin por evaporacin
Centrifugacin, 111 trmica al vaco, 560
Cintica de la adsorcin, 286 sistema, 552
Cintica de la cristalizacin, 560 sobresaturacin, 557
NDICE ALFABTICO 683
El texto se divide en seis partes. La primera parte constituye una introduccin a los
procesos de bioseparacin. En las siguientes cuatro partes: Recuperacin del Producto,
Concentracin, Puricacin y Acabado; se abordan las principales operaciones de biosepa-
racin siguiendo una secuencia tpica de un bioproceso, tratando con ello de conservar un
enfoque unitario ms que describir procesos particulares. La ltima parte se relaciona con el
Diseo del Bioproceso e integra los aspectos que se revisan en las partes previas.
Aspectos relevantes