La impregnacin de plata

Por favor leesoluciones de plata amoniacalyde trabajo seguro con la plata.

Aunque la tincin con colorantes es la forma ms comn de hacer estructuras de

tejido identificable al microscopio, no es la nica forma en que esto puede hacerse.
Depositando metales sobre o dentro de las estructuras es tambin muy comn. La
plata es el metal ms comnmente empleado, aunque tambin se han utilizado oro,
hierro y cobre. A pesar de ser una prctica estndar, que todava no se entiende
completamente en algunos aspectos. Diferentes impregnaciones de plata dependen
de procesos diferentes, y algunos de ellos todava parecen ser un tanto arbitraria,
mientras que otros se pueden entender casi en su totalidad. Para ilustrar, la
precipitacin de plata sobre aldehdos por reduccin de una solucin de plata
metenamina (mtodos Jones de Gomori o) es bastante fcil de comprender, pero la
impregnacin de las diversas clulas y sus procesos en el cerebro es todava en
gran parte un misterio.

la impregnacin de plata a menudo se habla de ella como si se tratara de un nico

proceso, invariable, es decir, en funcin de una nica base qumica que subyace en
todos los distintos procedimientos de impregnacin, pero que probablemente no es
el caso. Los diversos mtodos para diferentes estructuras pueden manipular
depsito de plata por diferentes mecanismos y estar basadas en diferentes bases
qumicas. El nico principio general subyacente es que la plata finamente dividido
se deposita y aparece de color marrn oscuro o como depsitos negros.

Cuando se habla de impregnaciones de plata, es habitual referirse a las estructuras

y sustancias como argentafines o argyrophil. deposicin de plata se explica como
argentafines si la estructura del tejido hace que la plata se deposite sin usar un
agente qumico reductor, y argyrophil si se utiliza un agente qumico reductor. Por
lo tanto, la melanina impregnado de una solucin de plata amoniacal se dice que
es argentafines y, utilizando la misma solucin de plata en conjuncin con
formalina diluida para impregnar reticulina, se dice que es argyrophil. No hay nada
incorrecto sobre esto, aunque es de utilidad limitada en la prctica. Para estos dos
deberamos, quizs, aadir una tercera, "argentafines inducida", es decir, la
produccin qumica de un material argentafines que luego se utiliza para reducir
los compuestos de plata y ennegrecer estructuras sin necesidad de utilizar un
agente reductor adicional. Los procedimientos de Gomori y Jones anteriormente
mencionados son ejemplos de esto, ambos de los cuales utilizan un agente oxidante
(cidos crmico y peridica respectivamente) para producir aldehdos que luego
reducen soluciones amoniacales o plata metenamina sin agentes reductores
qumicos adicionales.
Las discusiones sobre la impregnacin de plata a menudo tambin incluyen
mencin de reactivos explic como similar a mordientes o Accentuators en tincin
de colorante, refirindose a ellos por los nombres de "sensibilizadores" y
"aceleradores", aunque la distincin entre los dos no est claro. El hecho es que el
papel jugado por muchos de estos compuestos no se entiende completamente y el
mecanismo de cmo ayudan en la deposicin selectiva de plata realmente no se
conoce. Un ejemplo de un sensibilizador sera el uso de sulfato de amonio acuosa
frrico (alumbre de hierro) para tratar secciones se manche por el Gordon y mtodo
dulce por reticulina justo antes de tratamiento con la solucin de plata amoniacal.
En otros mtodos de una solucin acuosa de nitrato de plata se puede usar para el
mismo propsito. Es ms difcil de dar un ejemplo de un acelerador. Tal vez el ms
claro sera el uso de piridina en algunos mtodos para neuroglia. Es difcil, por
supuesto, para definir satisfactoriamente una sustancia cuando su funcin es
oscura.

argentafines
diaminohydroxide de plata se reduce fcilmente y puede ser utilizado para detectar
la reduccin de las sustancias en las secciones ya que la plata se deposita donde se
reduce. Esta es la base para el mtodo estndar Masson-Fontana para melanina,
enterocromafines y lipofuscina, aunque otras sustancias tambin pueden
demostrarse. Drury y Wallington punto a la presencia de compuestos fenlicos de
tirosina y como responsable de esto, pero la explicacin es vago. soluciones de
plata metenamina, descritos en el prrafo siguiente, se pueden utilizar tambin para
estas sustancias.

argentafines inducida
La oxidacin de secciones con cidos peridicas o crmico producir aldehdos,
que tambin son sustancias reductoras y tambin har que la precipitacin de plata
en su ubicacin. En su caso, sin embargo, la solucin de plata inestable se hace
generalmente con metenamina, formando un compuesto similar a la que con
hidrxido de amonio. Metenamina tambin se conoce como hexamina o
hexametilentetramina. La solucin de plata se forma se utiliza a un pH ligeramente
alcalino con un tampn de borato o brax. Esto se debe a la reduccin de plata
lleva algn tiempo, a menudo ms de una hora, y puede implicar un aumento de la
temperatura. soluciones fuertemente alcalinas, junto con aumento de la
temperatura son factores que causan secciones para desprenden de portaobjetos de
vidrio. soluciones de plata metenamina son menos alcalino que las soluciones de
plata amoniacal y son menos propensos a causar secciones para separar, incluso a
temperaturas ms altas. An as, algunos mtodos utilizan una solucin de plata
amoniacal para estas reducciones extendidas con resultados satisfactorios.
Hasta el momento las explicaciones para depositar la plata en los agentes, incluidos
aldehdos generados reduciendo, ha sido sencillo y es bastante conocido. Es una
reaccin de oxidacin-reduccin sencilla que implica una solucin de plata
inestable. El compuesto en la solucin de plata se reduce a plata metlica, o algn
otro compuesto de plata insoluble, y se deposita sobre el agente reductor en forma
muy finamente dividida. plata finamente dividido aparece negro o marrn oscuro
y que es lo que vemos. Sin embargo, existe la posibilidad de que la plata depositada
es algo distinto de s misma plata metlica. Algn tipo de xido se ha sugerido,
aunque se carece de pruebas en cuanto a su naturaleza exacta.

Argyrophil
Las tcnicas de impregnacin de plata restantes son menos conocidos. Estos son
los diferentes mtodos de demostracin de reticulina, y esas tcnicas utilizadas
para los elementos neurolgicos tales como las clulas nerviosas y sus procesos y
las diversas clulas de la glia y procesos.

De un tiempo a la selectividad de impregnaciones de plata para reticulina se

explic como debido a la produccin de aldehdos en las fibras de reticulina por
tratamiento cido permangnico, tambin conocido como un blanqueador Mallory,
que es un paso comn antes de aplicar la solucin de sensibilizador y plata. Sin
embargo, muchos impregnaciones son exitosos, ms o menos, incluso cuando se
omite este paso o si se aplica un bloque de aldehdo despus de la leja Mallory y
antes de la impregnacin, poniendo en duda como la explicacin. El blanqueador
Mallory puede aumentar o reducir la intensidad de la tincin y la impregnacin
dependiendo de si la oxidacin suave libera de coloracin e impregnacin sitios, o
los bloquea. Algunos son de la opinin de que el blanqueador de Mallory reduce
la deposicin de plata sobre estructuras de fondo, haciendo reticulina destacan por
un mayor contraste. No est claro qu material en los tejidos est siendo oxidado
por el cido permangnico y cul es su papel real en impregnaciones metlicos es.

Hasta cierto punto las explicaciones correspondientes a la selectividad observada

de impregnaciones de plata para reticulina son especulativos, y una explicacin
completa de las interacciones qumicas que tienen lugar que falta. Lo siguiente
debe entenderse dentro de ese contexto.

Los mtodos ms utilizados para la impregnacin de reticulina siguen el patrn de

abajo, o algo similar: -

1. La oxidacin suave del tejido, a menudo con cido permangnico hecha

mediante la mezcla de permanganato de potasio y cido sulfrico, o con
permanganato de potasio solo. Es posible que esta etapa de oxidacin
produce sitios de unin en la fibra y hace que las fibras de reticulina ms
 reactivo para el sensibilizador. Eso no es una declaracin muy satisfactoria
y hace que la explicacin algo mal definida, pero no es posible ser ms
definitivo que eso. Tambin es posible que esta oxidacin disminuye sitios
de unin en tejidos distintos de reticulina y, como consecuencia, tambin
disminuye la cantidad que reducen la solucin de plata, haciendo que la
impregnacin de reticulina tener un mayor contraste en comparacin.
Tambin podra ser que ambos procesos se llevan a cabo al mismo tiempo.
2. Blanquear la decoloracin producida por el permanganato, por lo general
con una solucin acuosa de cido oxlico, que es tambin un agente
oxidante suave. Cabe sealar, sin embargo, que no hay ninguna sugerencia
de que el cido oxlico se oxida ms componentes del tejido y se aplica
nicamente para eliminar la decoloracin marrn producido por el
permanganato.
3. Tratamiento con un "sensibilizador". A menudo esto es alumbre de hierro
(sulfato de amonio frrico), aunque otros sensibilizadores, incluyendo
nitrato de plata, tambin se han utilizado. No est claro lo que pase, pero la
explicacin ms comn es que el (frrico) hierro se combina con sitios de
unin liberado por la oxidacin con permanganato y se une a la fibra de
reticulina predominantemente, con cantidades mucho ms bajas de fijacin
a otros componentes. Este alumbre de hierro se lava luego apagado, pero
slo durante el tiempo suficiente para eliminar el exceso. El exceso de
lavado elimina de las fibras de reticulina y da como resultado una peor
calidad de impregnacin.
4. La aplicacin de la solucin de plata amoniacal por un corto tiempo, por lo
general alrededor de treinta segundos. Se cree que el compuesto de plata se
adhiere a las fibras de reticulina, tanto en un centro de coordinacin y de
manera no especfica. El accesorio focal es el hierro unido a las fibras, y la
unin no especfica es a las fibras de reticulina en general, aunque los
detalles no se explican. Tambin hay algo de unin no especfica al tejido
en general. La solucin de plata amoniacal exceso se enjuaga fuera lo
suficiente como para asegurar que no hay compuesto de plata libre restante
y las nicas sales de plata presentes estn unidos al tejido, pero no durante
el tiempo suficiente para eliminar cualquiera de las sales de plata
encuadernados. En esta etapa la mayor parte del compuesto de plata no se
reduce, pero aislado focos de plata reducida puede estar presente, tal vez en
los lugares donde el hierro unido durante la sensibilizacin. En esta etapa
los tejidos a menudo tienen una, de color marrn claro muy plido, aspecto
ligeramente translcido.
5. La reduccin con un agente reductor qumico, por lo general 10% de
formalina en agua del grifo. Es importante que la solucin salina formal o
 formalina tamponada neutra no pueden utilizar como las sales tampn y
cloruro de sodio interfieren con la reduccin. Se necesita formalina Llanura
diluido con agua. Esto reduce qumicamente la plata unida al tejido. Dado
que la mayora de ella se une a las fibras de reticulina, stos se impregnan
oscuro sobre un fondo mucho ms plido. Se cree que la plata unida
focalmente en asociacin con el hierro puede actuar como nodos para la
reduccin de la misma manera como la luz sensibilizado tomos de haluro
de plata en acto pelcula fotogrfica como nodos para la reduccin de todo
el grano de haluro de plata durante el desarrollo con reveladores fotogrficos
, que son agentes reductores qumicos.
6. Despus de la reduccin qumica con formalina, el exceso de productos
qumicos se eliminan y la impregnacin se estabilizaron con lavados de agua
o tratamiento con tiosulfato de sodio.
Claramente, esta explicacin no es satisfactoria, pero, en comparacin con la
explicacin de la impregnacin de elementos del tejido nervioso, es muy
informativo! Impregnaciones de las fibras nerviosas y clulas gliales son en gran
medida emprico. Ellos trabajan, a menudo bastante bien, pero la base qumica para
ellos no se entiende. No tiene sentido tener una descripcin detallada de los
procesos, ya que son en gran medida sigue siendo un misterio. En general, una
estrecha adhesin al mtodo publicado para cada tcnica es muy recomendable y
dar los resultados ms confiables. An as, a veces fallan las impregnaciones, sin
razn aparente, y la experiencia a menudo desempea un papel importante.

As como para los materiales argentafines anteriormente mencionadas, la

impregnacin de plata tambin se puede utilizar para elementos de tejido distintos
de reticulina y tejido nervioso, amiloide y espiroquetas son dos ejemplos. Muy
poco se sabe sobre la base qumica para estos, tampoco. Ni siquiera se sabe si hay
similitudes en las bases qumicas para cada una de las estructuras impregnable, por
no hablar de lo que esas bases son. Todo lo que realmente podemos decir con
certeza es que despus de algn tratamiento qumico de un material no
especificado en cada estructura impregnable har una de las siguientes: -

1. Reducir un compuesto de plata a plata metlica inestable o algn otro

compuesto de plata que se deposita en forma finamente dividida dentro o
sobre la estructura,
2. Preferentemente se combinan con la solucin de plata amoniacal y luego ser
reducido por un agente reductor externo a plata metlica o algn otro
compuesto de plata que se deposita en forma finamente dividida dentro o
sobre la estructura,
3. Una combinacin de ambos.
Viraje
Muchos impregnaciones de plata producen estructuras marrn oscuro sobre un
fondo ms claro de color marrn en lugar de negro sobre un fondo gris. Esto es a
menudo todo lo que se requiere y en muchos casos la identificacin de la estructura
en cuestin es bastante claro. Sin embargo, algunos microscopistas prefieren un
depsito negro puro sobre un fondo gris. El proceso conocido como "tonificacin"
lleva esto a cabo. Tonificacin implica el tratamiento de una seccin impregnado
con lo que se suele llamar "cloruro de oro". Esto tambin se conoce como "cloruro
de oro amarillo" o cloruro de oro de sodio (NaAuCl4), y es la sal de sodio del cido
clorourico (HAuCl4). cido clorourico s mismo se llama "cloruro de oro
marrn" y no se usa para tonificar, pero puede ser necesaria para algn otro cloruro
de oro impregnacin techniques.The utilizado para tonificacin histolgico no es
lo mismo como cloruro urico (Au2Cl6), que no se utiliza en histotecnologa.

El proceso de tonificacin implica la sustitucin de algunos de los tomos de plata

con tomos de oro. Finamente dividido oro generalmente aparece de color prpura.
Una superposicin de color prpura sobre un objeto marrn hace que se vea negro,
y que no es ms que lo que hace tonificacin. Por lo general, esto se lleva desde
unos pocos segundos (reticulina) a unos pocos minutos (algunas clulas
cerebrales). Si se aplica desde hace mucho tiempo, el cambio de color va ms all
de negro en gris y la plata depositada se vuelve prpura. No hay manera correcta
o equivocada acerca de tonificacin, es simplemente la aplicacin de una solucin
de cloruro de oro hasta que los colores de las estructuras impregnadas son del color
del microscopista prefiere. No hay ningn cambio a lo que se demuestran las
estructuras, slo un cambio en el color y, tal vez, el contraste.

Fijacin
Con el fin de reducir la probabilidad de deposicin no especfica de plata residual
y oro sobre secciones impregnadas, se acostumbra a tratarlos con reactivos que
eliminar las sales no reducidos a partir del tejido. El reactivo utilizado es
invariablemente una solucin al 2-5% de tiosulfato de sodio. Esto es a menudo
llamado "hipo", un trmino derivado de un nombre antiguo para l (hiposulfito de
sodio), y es el mismo producto qumico utilizado en la fotografa a base de plata
para la estabilizacin o "fijar" la imagen. Su eficacia se basa en la simple retirada
de compuestos de plata no reducidos mediante su disolucin en la solucin de
tiosulfato. Las secciones se lavan a continuacin a fondo para eliminar todos los
rastros de tiosulfato de sodio a fin de evitar cualquier posibilidad de disolver lejos
de plata o de oro depositado sobre las estructuras de tejido, con lo que el blanqueo
o la decoloracin de la impregnacin.
Referencia

Drury, RA, y Wallington, EA,(1967).

tcnica histolgica de Carleton., Ed. 5., p. 110.Oxford University Press, Londres,
Inglaterra.

Wallington, EA,, (1965),

Las propiedades explosivas de soluciones amoniacal-plata., J Med Lab Technol,
v 22, pgina 220-3.

Haciendo plata amoniacal

Por favor leede trabajo seguro con la plata.

Muchos impregnaciones de plata emplean soluciones de plata amoniacal, a veces

referido como soluciones diaminohydroxide plata. Estos estn hechos mediante la
adicin de hidrxido fuerte de amonio (amonaco concentrado, gravedad
especfica 0,88) a una solucin acuosa de nitrato de plata. Su preparacin se basa
en el hecho de que el hidrxido de amonio, cuando se aade a una solucin acuosa
de plata simple, provoca un precipitado de xido de plata a la forma. En la adicin
de ms hidrxido de amonio, las precipitado se redisuelve mediante la formacin
de un complejo con el amonaco. Se sabe diversamente como diaminohydroxide
plata, diamina de plata (con o sin la palabra "hidrxido" aadido), plata diamina,
de Tollen reactivo o, ms comnmente en la histologa, solucin de plata
amoniacal, y contiene compuestos basados en la siguiente estructura - [Ag ( NH3)
2] OH. El "diamin-" en los nombres puede ser escrito como "diammin-", es decir,
con un duplicado "m", pero todos ellos se refieren a la misma cosa.

El hidrxido de amonio debe ser saturado y debe tener un peso especfico de 0,88.
Esto asegura que es "fresco". soluciones de hidrxido de amonio emiten amoniaco
cuando se expone al aire y viejas soluciones pueden haber perdido una cantidad
distinta de su contenido de hidrxido de amonio como una consecuencia. Tales
soluciones empobrecido no deben ser usados para hacer las soluciones de plata
amoniacal. Las soluciones de plata amoniacal resultantes pueden no funcionar
correctamente y las impregnaciones pueden fallar. Es aconsejable abrir una botella
stock de hidrxido de amonio slo el tiempo suficiente para verter un poco en un
vaso de precipitados, a continuacin, volver a tapar de forma segura. La solucin
en el vaso puede entonces ser utilizado para hacer la solucin de plata amoniacal.
Descarte cualquier hidrxido de amonio que no se utiliza. No lo devuelva a la
botella de hidrxido de amonio.
Hay muchas variaciones para la produccin de estas soluciones, que difieren por
el volumen y la concentracin de nitrato de plata utilizada y la qumica usada para
producir el precipitado inicial de xido de plata, ya sea hidrxido de amonio,
hidrxido de sodio o carbonato de sodio. Algunas variaciones incluso lavar el
xido de plata con agua destilada antes de aadir hidrxido de amonio para
redisolver que, alegando que esto da un fondo ms limpio. La mayora son claro
que slo la cantidad mnima de hidrxido de amonio se debe aadir para redisolver
el xido de plata, que estipula que se debe aadir gota a gota desde una pipeta
Pasteur y que la etapa final debe hacerse lentamente, y puede implicar simplemente
agitando la pipeta sobre la superficie de la solucin para permitir que los vapores
de amonaco para disolver en ella. Este cuidado es necesario porque cualquier
exceso de amoniaco hace que la solucin ms alcalino y menos eficaz. Algunos
incluso estipulan que una pequea cantidad de nitrato de plata acuosa debe
aadirse a la solucin final despus de todo xido de plata ha disolvi de nuevo, a
continuacin, la solucin se filtr para retirar cualquier partcula de xido de plata
que produce la adicin. Esto asegura que no hay hidrxido de amonio libre residual
en la solucin. En cualquier caso, no debera haber un olor a amonaco fuerte en la
solucin de acabado, slo una tenue seal de ello. Cada mtodo proporciona sus
propias instrucciones para preparar la solucin, pero muchos de ellos puede
sustituir a la otra.

Trabajo seguro con la plata

A menudo no se aprecia que las soluciones de plata amoniacal pueden ser
explosivos y pueden causar graves daos. Hay informes ocasionales de
explosiones, por lo general con las soluciones que se han almacenado, a veces slo
por unos das. El compuesto explosivo es nitruro de plata, pero a veces se identifica
como fulminato de plata debido a la confusin sobre otro nombre para nitruro de
plata ser "plata fulminante". Dado que las formas compuestas explosivos en pie, la
probabilidad de una explosin puede ser eliminado, a todos los efectos, mediante
la disposicin de la solucin lo ms rpidamente posible.

Instrucciones para preparar las soluciones de plata amoniacal generalmente

especifican que la cantidad mnima de hidrxido de amonio debe aadirse para
provocar la disolucin del precipitado producido inicialmente cuando se aade
primero a la nitrato de plata, y que el olor a amonaco deben estar ausentes o slo
muy dbil . Esto es para asegurar que la solucin de plata es inestable y muy
fcilmente reducido. Con frecuencia, una fina espuma se desarrolla en la superficie
de la solucin o el recipiente puede tener un acabado de espejo depositado en l a
partir de la solucin, o ambos. Este material precipitado puede incluir el compuesto
explosivo, y su presencia aumenta la posibilidad de una explosin. Refrigeracin
no inhibe el peligro y tampoco lo hace un manejo suave. Algunos informes son de
las soluciones de plata amoniacal que estallan dentro de un refrigerador durante la
noche, es decir, mientras est en reposo y fro.

Se recomienda encarecidamente que las soluciones de plata amoniacal nunca se

pueden almacenar, pero recin hecho cada vez que se necesitan, entonces
desechado inmediatamente. Para descartar la solucin de forma segura, se aade
un volumen suficiente de cualquiera de una solucin al 20% de cloruro sdico o
una solucin diluida de cido clorhdrico para convertir los compuestos de plata a
cloruro de plata, que es insoluble e inmediatamente precipita. Un exceso debe
aadirse a asegurar la precipitacin completa de todos los diaminohydroxide plata.
Esto hace que la solucin no explosivo. Si se utilizan grandes volmenes de
solucin de plata el precipitado de cloruro de plata puede ser recogida y procesada
para recuperar la plata.

Por desgracia, esta recomendacin se sigue raramente, en gran parte debido al

costo de nitrato de plata. Hacer 50 ml de plata amoniacal slo para descartar 45 ml
de un par de minutos ms tarde ofende ms tecnlogos sentido de la frugalidad,
sobre todo cuando los presupuestos son limitados, por lo que la tendencia es que
sea para su uso justo hasta el da siguiente en la creencia errnea de que el
mantenimiento durante la noche no es tiempo suficiente para que se convierta
explosivo. Una vez que uno pasa un da sin incidentes, entonces se presume que es
seguro mantenerlo en segundo da, y as sucesivamente. Muy pronto va a guardar
durante semanas. Dado que, en la mayora de los casos, no hay explosin, entonces
se asume que las advertencias son exageradas. No lo son, y la naturaleza aleatoria
de las explosiones deja claro. Cualquier costo involucrado es el costo de la
seguridad y la seguridad es lo primero!

Referencia
Wallington, EA,, (1965),
Las propiedades explosivas de soluciones amoniacal-plata., J Med Lab Technol,
v 22, pgina 220-3.