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Estudio Histopatolgico e Inmunohistoqumico del

Tricoblastoma en el Conejo
Enlaces de autor abrir panel de
superposicinM.K. Kok *Cmaras JK *N. Ushio *A. Watamori Y. Miwa H. Nakayama *K. Uchida *
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https://doi.org/10.1016/j.jcpa.2017.06.005Obtener derechos y contenido

Resumen
El tricoblastoma es el tumor de piel ms comn en el conejo. El objetivo
del presente estudio fue caracterizar las caractersticas histolgicas e
inmunohistoqumicas del tricoblastoma en 27 conejos. Los lugares ms
comunes de la aparicin de tumores fueron el cuello (6/30, 20%), cabeza
(5/30, 16,7%), flanco (4/30, 13,3%) y miembro posterior (4/30,
13,3%). Histolgicamente, el tricoblastoma de conejo se clasific en tipos
de cinta (10/30, 33.3%), trabecular (8/30, 26.7%) y mixtos (12/30,
40%). El tejido tumoral mostr una estrecha interaccin con
el estroma circundante, donde la agregacin fibroblstica prominente ,
conocida como mesenquimal papilar(24/30, 80%). El estroma peritumoral
de todos los casos se ti con azul de Alcian (a pH 2,5 con tincin ms
dbil a pH 1,0). Inmunohistoqumica, las clulas en empalizada de tipo
basal perifricas del tumor fueron positivas para citoqueratina (CK) 14,
mientras que las clulas internas eran tpicamente positivo para CK17,
que difiere de la perfil inmunohistoqumico de la epidermis de conejo y el
pelo del folculo . El presente estudio sugiere que la tricognesis
embrionaria incontrolada est implicada en el desarrollo de tricoblastoma
en el conejo.

Artculo anterior en este nmero


Siguiente artculo en este nmero

Palabras claves
inmunohistoqumica
cuerpos mesenquimales papilares
Conejo
tricoblastoma
Introduccin
Los conejos ( Oryctolagus cuniculus ) han ido ganando popularidad como animal
domstico en todo el mundo ( von Bomhard et al. , 2007; Schepers et al. , 2009, Fisher,
2010; Rooney et al. , 2014 ). von Bomhard et al. (2007) proporcionaron un estudio
retrospectivo amplio, en el que se identific el tricoblastoma como el tumor cutneo ms
comn en conejos, representando el 19,3% de todos los tumores y las lesiones
tumorales. La incidencia de tumores del folculo piloso (en particular el tricoblastoma) es
mayor en los animales de compaa, como los perros, gatos y conejos, que en el hombre,
donde el carcinoma basocelular es predominante (Abramo et al. , 1999; Rubin et al. ,
2005; Bath - Hextall y col. , 2007; von Bomhard et al. , 2007 ).

Trichoblastoma, anteriormente denominado "tumor basocelular de origen epidrmico",


recibi su actual nomenclatura en la ltima clasificacin de la Organizacin Mundial de la
Salud (OMS) de tumores de animales domsticos, debido a su parecido histolgico con las
clulas epiteliales germinativas del folculo piloso durante morfognesis del folculo piloso
( Goldschmidt et al. , 1998 ). Microscpicamente, se ha descrito que el tricoblastoma
comprende la proliferacin de clulas epiteliales de tipo basal en cuerdas, dispuestas como
estructuras de palisadas o lobuladas separadas por estroma colagenoso , formando una
lesin tumoral bien demarcada sin invasin significativa de los tejidos circundantes
( Goldschmidt et al. , 1998; Brutoet al. , 2005; De Vico et al. , 2011 ). En animales
domsticos, el tricoblastoma puede clasificarse microscpicamente como cinta, medusoid,
slido, granular, trabecular o huso, basado en la disposicin de las clulas tumorales y la
morfologa celular ( Goldschmidt y Goldschmidt, 2017 ). En varios casos de tricoblastoma
canino, la formacin de tumores fue acompaada por una formacin abortiva de la papila
capilar ("el cuerpo mesenquimal papilar ") y la preservacin de la papila drmica durante el
desarrollo tumoral ( De Vico et al. , 2011, Campos et al , 2014, Mineshige et al. , 2014 ).

A pesar de ser la neoplasia cutnea ms comn en conejos, la histopatologa del


tricoblastoma de conejo no ha sido bien descrita. El objetivo del presente estudio fue
realizar un estudio patolgico exhaustivo sobre el tricoblastoma de conejo a travs de
evaluaciones histolgicas e inmunohistoqumicas de componentes de la piel normal de
conejo, as como del tricoblastoma.

Materiales y mtodos
Muestras
Se examinaron 30 muestras tumorales de piel fijadas con formalina de 27 conejos resecadas
quirrgicamente . La historia clnica de estos animales se presenta en la Tabla 1 . Tres
conejos desarrollaron tricoblastoma en dos ocasiones, cada vez involucrando diferentes
regiones del cuerpo. Estos seis tumores se evaluaron independientemente ( Tabla
1 ). Basndose en el examen microscpico, 29 muestras fueron diagnosticadas como
tricoblastoma y una como tricoblastoma maligno ( Tabla 1 ). Se realizaron exmenes
radiogrficos y ultrasonogrficos y no se detect ninguna metstasis de las clulas
tumorales en ningn caso de tricoblastoma.
Tabla 1 . Informacin clnica y clasificacin histolgica

Nmero de caso Raza Aos Sexo Ubicacin Subtipo histolgico


Tricoblastoma
1 Hola 5 aos F Tronco dorsal Cinta
2* Hola 5 aos METRO Cuello Cinta
3 Hola 9 aos F Inguinal Cinta
4 Hola 4 aos F Cuello Cinta
5 SEOR 6y5m METRO Cuello Cinta
6 Mezcla 7 aos F Hombro Cinta
7 Mezcla 8 aos F Cuello Cinta
8 Mezcla 9y7m METRO Hombro Cinta
9 Sin datos 10 y 4 m METRO Cuello Cinta
10 Sin datos 3 aos F Tronco dorsal Cinta
11 * SEOR 7y3m FN Axila Trabecular
12 * SEOR 8 aos FN Flanco Trabecular
13 DAKOTA DEL NORTE 8 aos METRO Tronco dorsal Trabecular
14 * Mezcla 5 aos F Abdomen Trabecular
15 Mezcla 5 aos F Cabeza Trabecular
diecisis Mezcla 6 aos METRO Miembro trasero Trabecular
17 Mezcla 5 aos METRO Cabeza Trabecular
18 Sin datos 12 aos F Forelimb Trabecular
19 * Hola 8 aos METRO Cabeza Mezclado
20 Hola 11 aos METRO Inguinal Mezclado
21 Hola 6 aos METRO Cuello Mezclado
22 DAKOTA DEL NORTE 7y6m F Miembro trasero Mezclado
23 DAKOTA DEL NORTE 9 aos FN Flanco Mezclado
24 DAKOTA DEL NORTE 4 aos F Base de la cola Mezclado
25 JW 8y5m METRO Flanco Mezclado
26 * Mezcla 5 aos F Miembro trasero Mezclado
27 Mezcla 4 aos METRO Cabeza Mezclado
28 Sin datos 6y6m METRO Cabeza Mezclado
29 Sin datos 12 aos METRO Miembro trasero Mezclado
Tricoblastoma maligno
Nmero de caso Raza Aos Sexo Ubicacin Subtipo histolgico
30 Mezcla 7y5m METRO Flanco Mezclado
HLE, Holanda lop ore; JW, Jersey lana; MR, mini Rex; ND, enano de Holanda; F, hembra; M,
macho; FN, mujer castrada .

*
Tricoblastoma ocurri dos veces en tres conejos (casos 2 y 19, 11 y 12, y 14 y 26, cada uno derivan
del mismo animal).

Histopatologa
Las muestras de tejido se fijaron en una solucin de formalina tamponada con fosfato al
10%, procesada rutinariamente y embebida en parafina . Las secciones (4 m) se tieron
con hematoxilina y eosina (HE), cido peridico-Schiff (PAS), tricrmico de Masson y azul
de Alcian (pH 1,0 y 2,5). El tricromo de Masson y las manchas azules de Alcian se
utilizaron para evaluar las propiedades histoqumicas del estroma tumoral . La tincin PAS
se us para detectar el glucgeno citoplasmtico en las clulas tumorales. Los tumores se
clasificaron de acuerdo con la Clasificacin Histolgica Internacional de Tumores de
Animales Domsticos de la OMS y su reciente actualizacin (Goldschmidt et al. , 1998;
Goldschmidt y Goldschmidt, 2017).

Inmunohistoqumica
Las secciones desparafinadas se sometieron a recuperacin de antgeno y las reacciones no
especficas se bloquearon sumergiendo las secciones en H $ $ O $ $ al 3% en metanol a
temperatura ambiente durante 5 min seguido de incubacin en leche desnatada al 8% a 37
C durante 30 min. Las secciones se incubaron con uno de los anticuerpos primarios ( Tabla
2 ) a 4C durante la noche y luego se lavaron tres veces con solucin salina tamponada con
Tris (TBS). Las secciones se incubaron despus con Dako EnVision + System peroxidasa
de rbano picante (HRP) marcado con polmero anti-ratn (Dako, Tokio, Japn) a 37 C
durante 40 min. Despus de lavar tres veces con TBS, las secciones se sometieron a
tratamiento con cromgeno con 0,05% de 3,3'-diaminobencidina y 0,03% de H 2 O 2en
tampn Tris-HCl, y se contrasta con la hematoxilina de Mayer. Para los controles
negativos, las secciones se incubaron con TBS en lugar de anticuerpos primarios, mientras
que el panel de anticuerpos en el presente estudio se utilizaron como controles de reactivos
irrelevantes para verificar la especificidad de cada anticuerpo ( Ramos-Vara y Miller,
2014 ).

Tabla 2 . Anticuerpos primarios y protocolos para inmunohistoqumica

Especificidad del Tipo Dilucin Recuperacin de antgeno Fuente


anticuerpo
CK AE1 / AE3 mAb (AE1 / RTU HIER (tampn citrato, pH 6,0), 121C, Dako, Tokio, Japn
AE3) 10 min
CK5 / 6 mAb (D5 / 16 1 en 100 HIER (Dako Target Retrieval Solution, Dako
B4) pH 9,0), 121C, 10 min
CK14 mAb (NCL - 1 en 50 HIER (tampn citrato, pH 6,0), 121C, Leica Biosystems, Reino
LL002) 10 min Unido
Especificidad del Tipo Dilucin Recuperacin de antgeno Fuente
anticuerpo
CK17 mAb (E3) 1 en 40 HIER (Dako Target Retrieval Solution, Dako
pH 9,0), 121C, 10 min
CK18 mAb (Ks18,04) RTU PIER (Proteinase K), temperatura Progen Biotechnik,
ambiente, 30 min Frankfurt, Alemania
CK19 mAb (b170) RTU PIER (Proteinase K), temperatura Leica Biosystems
ambiente, 30 min
Vimentina mAb (V9) 1 en 200 HIER (tampn citrato, pH 6,0), 121C, Dako
10 min
CK, citoqueratina; HIER, recuperacin de eptopo inducida por calor; mAb , anticuerpo monoclonal; PIER,
recuperacin de eptopo inducida por proteoltico; RTU, listo para usar.

Tanteo
La intensidad de la coloracin azul de Alcian (pH 2,5) en el estroma tumoral y en la
expresin de vimentina en los cuerpos mesenquimatosos papilares (PMBs) se clasific
como: -, negativa; +, dbilmente positivo; ++, moderadamente positivo; y +++, fuertemente
positivo. El estroma tumoral en todos los casos mostr una tincin positiva dbil con
tincin azul de Alcian a pH 1,0 y la puntuacin no era aplicable. La intensidad de la tincin
PAS y el marcado inmunohistoqumico distintos de la vimentina se clasificaron como: -,
0%; +, 1 - 10%; ++, 11-50%; +++, 51-75%; y ++++, 76-100% de clulas tumorales
positivas. La puntuacin inmunohistoqumica se realiz por consenso de dos Japanese
College of Veterinary Pathologistspatlogo certificado por la junta (KU, JKC) y
MKK. Cualquier desacuerdo fue revisado en conjunto para alcanzar una puntuacin de
consenso.

Resultados
Ocurrencia de Tumor
La informacin clnica se muestra en la Tabla 1 . Los 27 conejos fueron 14 machos y 13
hembras de 3 a 12 aos (mediana de 7 aos). Se observ una ocurrencia mltiple de
tricoblastoma en tres conejos en diferentes momentos y en diferentes reas del cuerpo. Las
razas incluyeron oreja de Holanda (6/27; 22.2%), enano de Holanda (4/27; 14.8%), mini
Rex (2/27; 7.4%) y jersey wooly (1/27; 3.7%). Ms de la mitad eran raza mixta o la raza no
se conoca (14/27, 51.9%). Los tumores surgieron en el cuello (6/30, 20%), cabeza (5/30,
16.7%), flanco (4/30, 13.3%), miembro posterior (4/30, 13.3%), tronco dorsal (3 / 30,
10%), hombro (2/30, 6,7%), regin inguinal (2/30, 6,7%), abdomen (1/30, 3,3%), / 30,
3,3%) o base de la cola (1/30, 3,3%).

Perfil histoqumico e inmunohistoqumico de la piel de conejo normal


Las caractersticas histoqumicas e inmunohistoqumicas de la piel de conejo normal se
resumen en la Tabla 3 . Se observ tincin PAS de la vaina de la raz externa de los
segmentos suprabulbar e istmo del folculo piloso en un patrn grueso y granular ( Fig.
1 A), mientras que el revestimiento drmico de estos dos segmentos fue moderadamente
positivo para el azul de Alcian a pH 2,5 Fig. 1 B) y dbilmente positivo a pH 1,0. La papila
drmicadel folculo piloso fue fuertemente positiva para el azul de Alcian a pH 1,0 y 2,5.

Tabla 3 . Caractersticas histoqumicas e inmunohistoqumicas de la piel normal de conejo

Tejido Manchar Inmunohistoqumica


AB PAS CK AE1 / CK5 / CK14 CK17 CK18 CK19 Vimentina
AE3 6
Epidermis interfolicular
Capa basal - - + + + + - - -
Capa - - + + + - - - -
suprabasal
Estrato crneo - - + - - - - - -
Folculo capilar
Infundbulo - - + + + + - - -
derechos
Istmo Todos los + + + + + - + -
reservados

Suprabulbar Todos los derechos + + + + + - + -


reservados

Bulbo - - + + + - - - -
Celda matriz - - - - - - - - -
Papila drmica + - - - - - - - +
Glndula sebcea
Borrar celdas - - + - + - - - -
Clulas basales - - + + + + - - -
AB, azul de Alcian (pH 2,5); CK, citoqueratina; PAS, cido peridico-Schiff.

*
El revestimiento drmico de las regiones suprabulbar e istmo fue moderadamente positivo para el
azul de Alcian a pH 2,5 y dbilmente positivo a pH 1,0.


Positivo en la capa basal de la epidermis y la vaina externa de la raz del folculo piloso. Adems, la
expresin tambin se observ en la capa suprabasal de la epidermis hiperplsica y las clulas
corticales por encima del bulbo piloso angeno.


Positivo en pocas clulas de la vaina de la raz externa del istmo y regin suprabulbar.
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Fig. 1 . Caractersticas histolgicas e inmunohistoqumicas (IHC) de la epidermis de conejo


y el folculo piloso . (A) La vaina externa de la raz es PAS positiva. (B)
El revestimiento drmico de los folculos pilosos es azul Alcian (pH 2,5) positivo. (C) Las
capas basal y suprabasal de la epidermis son fuertemente positivas para CK5 / 6. IHC. (D)
Las capas basal y suprabasal de la epidermis hiperplsica son positivas para
CK14. IHC. (E) La capa basal de la epidermis es positiva para CK17. IHC. (F) Algunas
clulas en la papila drmica son positivas para la vimentina. IHC. (G) La vaina externa de
la raz del folculo piloso es positiva para CK5 / 6. IHC. (H) Las clulas corticales que
surgen de las clulas de la matriz del bulbo angeno son positivas para CK14. IHC. (I) La
vaina externa de la raz del folculo piloso es positiva para CK17. IHC. (J) La vaina externa
de la raz del folculo piloso es parcialmente positiva para CK19. IHC. (K) La papila
drmica es positiva para vimentina. IHC. Barra, 40 \ mu m.
En la epidermis, la citoqueratina (CK) AE1 / AE3 se expres en todas las capas. CK5 / 6 se
expres en las capas basal y suprabasal ( Figura 1 C). CK14 se expres en la capa basal ,
as como la capa suprabasal de la epidermis hiperplstica ( Fig. 1 D). CK17 se expres en la
capa basal ( Figura 1 E). Vimentina fue expresada por algunas clulas en la papila drmica
subyacente ( Fig. 1 F).

En los folculos pilosos, CK AE1 / AE3 se expres en todas las capas, a excepcin de la
matriz del cabello y las clulas de la papila drmica. CK5 / 6 se expres en la vaina de la
raz externa del folculo piloso ( Figura 1 G). CK14 se expres en la vaina externa de la raz
y, ocasionalmente, en las clulas corticales que surgen de la matriz capilar del bulbo piloso
angeno ( Fig. 1 H). CK17 se expres en la vaina de la raz externa del folculo piloso ( Fig.
1 I). CK19 se expres con poca frecuencia en la vaina externa de la raz del folculo piloso
( Figura 1 J). La vimentina fue expresada por las clulas de la papila drmica dentro del
bulbo piloso ( Fig. 1 K).
En las glndulas sebceas , las clulas basales expresaron CK AE1 / AE3, CK5 / 6, CK14 y
CK17, mientras que las clulas claras diferenciadas expresaron CK AE1 / AE3 y CK14. En
el presente estudio, la expresin de CK18 no se detect en la epidermis y sus anexos.

Caractersticas histolgicas del tricoblastoma


Las caractersticas histolgicas de los casos presentes se resumen en la Tabla 4 . Casi todos
los tumores fueron diagnosticados como tricoblastoma, excepto en un caso, el cual fue
diagnosticado como tricoblastoma maligno. Los tipos de tumor fueron cintas (10/30,
33,3%), trabeculares (8/30, 26,7%) o mixtas (12/30, 40,0%). En general, las masas
tumorales estaban bien circunscritas, pero algunas masas drmicas ocasionalmente se
extendan al tejido subcutneo . En el tipo de cinta (casos 1-10), las clulas tumorales se
dispusieron en finas, ramificacin cuerdas de dos a cuatro capas celulares ( Figura 2 A]. En
el tipo trabecular (casos 11-18), las clulas tumorales proliferaron en un patrn lobular o
fascicular con un mnimo estroma del tejido conjuntivo circundante ( Fig.
2SEGUNDO). En el tipo mixto (casos 19-29), se observaron patrones trabeculares y de
cinta de proliferacin tumoral. En la mayora de los casos se observaron agrupamientos
multifocales de clulas estromales de tamao pequeo con ncleos basoflicos densos y
citoplasma indistinto, denominados " cuerpos mesenquimatosos papilares " (PMB)
( Brooke et al. , 1989 ) en la mayora de los casos (24/30 , 80%, casos 1-8, 10-12, 14 - 18,
20, 22, 24 y 26 - 30) ( figura 2C.A). Las PMB se tieron de azul con la tincin tricrmica
de Masson. En el caso 30, el tricoblastoma consisti en lbulos expansivos demarcados, de
mltiples lbulos, basales, proliferando en una mezcla de patrones de cinta, trabeculares y
slidos. En las reas slidas, los nidos de clulas tumorales densamente comprimidas
estaban en asociacin con la epidermis superpuesta y acompaados de abundantes papilas
drmicas debajo de los lbulos tumorales ( Figura 2D). Las clulas tumorales en nidos
slidos exhibieron un mayor grado de atipia celular y se expandieron continuamente a lo
largo del eje longitudinal de la epidermis con infiltracin frecuente en la dermis ms
profunda. Se observaron clulas tumorales en los mrgenes lateral y profundo. Basado en
el pleomorfismo celulary el crecimiento invasivo, el caso 30 fue diagnosticado como
tricoblastoma maligno. Se observaron grnulos gruesos PAS-positivos moderados en el
citoplasma de las clulas tumorales de la cinta (4/10, 40%, casos 1, 2, 6 y 10), trabecular
(8/8, 100%, casos 11-18 ) y tipos mixtos (6/12, 50%, casos 19, 20, 22, 23, 26 y 30),
respectivamente ( Figura 2 E). Todos los tumores en el presente estudio poseen estroma
peritumoral, que fue dbil a moderadamente positivo para azul Alcian a pH 2,5 ( Fig. 2 F),
pero ligeramente positivo a pH 1,0.

Cuadro 4 . Caractersticas histolgicas e inmunohistoqumicas de los tricoblastomas de conejo

Nmero Subtipo Presencia AB PAS Inmunohistoqumica


de caso histolgico de PMBs
CK CK5 CK14 CK17 CK18 CK19 Vimentin"
AE1 / /6
AE3
Tricoblastoma
1 Cinta + + + ++++ ++++ ++ ++ - - +++
2* Cinta + + ++ ++++ ++++ + + - - +++
Nmero Subtipo Presencia AB PAS Inmunohistoqumica
de caso histolgico de PMBs
CK CK5 CK14 CK17 CK18 CK19 Vimentin"
AE1 / /6
AE3
3 Cinta + + - ++++ ++++ + ++ - - +++
4 Cinta + + - ++++ ++++ + + - - +++
5 Cinta + + - ++++ ++++ +++ ++ - - +++
6 Cinta + + ++ ++++ ++++ + ++ - - +++
7 Cinta + + - ++++ ++++ + ++ - - +++
8 Cinta + + - ++++ ++++ + ++ - - +++
9 Cinta - + - ++++ ++++ ++ + - - DAKOTA
DEL
NORTE
10 Cinta + + ++ ++++ ++++ + ++++ - - +++
11 * Trabecular + + + ++++ ++++ ++ +++ - - +++
*
12 Trabecular + + + ++++ ++++ + ++ - - +++
13 Trabecular - + + ++++ ++++ ++ +++ - + DAKOTA
DEL
NORTE
14 * Trabecular + + ++ ++++ ++++ ++ ++ - - +++
15 Trabecular + + + ++++ ++++ +++ ++ - - +++
diecisis Trabecular + ++ ++ ++++ ++++ ++ +++ - + +++
17 Trabecular + + ++ ++++ ++++ ++ ++++ - + +++
18 Trabecular + ++ + ++++ ++++ + ++ - - +++
*
19 Mezclado - + ++ ++++ ++++ + ++++ - - DAKOTA
DEL
NORTE
20 Mezclado + ++ + ++++ ++++ +++ + - - +++
21 Mezclado - + - ++++ ++++ + ++ - - DAKOTA
DEL
NORTE
22 Mezclado + + ++ ++++ ++++ + ++ - - +++
23 Mezclado - + ++ ++++ ++++ ++ ++ - + DAKOTA
DEL
NORTE
24 Mezclado + + - ++++ ++++ + ++++ - - +++
25 Mezclado - ++ - ++++ ++++ ++ ++++ - - DAKOTA
DEL
NORTE
Nmero Subtipo Presencia AB PAS Inmunohistoqumica
de caso histolgico de PMBs
CK CK5 CK14 CK17 CK18 CK19 Vimentin"
AE1 / /6
AE3
26 * Mezclado + + ++ ++++ ++++ ++ ++ - - +++
27 Mezclado + + - ++++ ++++ ++ ++ - - +++
28 Mezclado + + - ++++ ++++ ++ ++ - - +++
29 Mezclado + + - ++++ ++++ ++ +++ - - +++
Tricoblastoma maligno
30 Mezclado + ++ ++ ++++ ++++ + ++++ - - +++
AB, Alcian blue pH 2,5; CK, citoqueratina; ND, no realizado (PMBs estaban ausentes en estos casos); PAS,
cido peridico-Schiff; PMBs, cuerpos mesenquimales papilares .

*
Tricoblastoma ocurri dos veces en tres conejos (casos 2 y 19; 11 y 12 y 14 y 26).


Presencia de PMBs en el estroma peritumoral: -, ausente; +, presente.


Las clulas tumorales fueron negativas para el azul Alcian (pH 1,0 y 2,5), mientras que el estroma
tumoral mostr tincin positiva. Puntuacin cualitativa del estroma tumoral para el azul de Alcian a
pH 2,5: -, negativo; +, dbil positivo; ++, positivo moderado; +++, positivo fuerte. A pH 1,0, el
estroma tumoral de todos los casos mostr tincin positiva dbil.


Porcentaje de clulas tumorales positivas: -, negativo; +, 1 - 10%; ++, 11-50%; +++, 51-75%; ++++,
76 - 100%.


Las clulas tumorales fueron negativas para la expresin de vimentina mientras que el estroma
tumoral y PMBs mostraron expresin positiva. El etiquetado positivo de vimentina en PMBs se
evalu cualitativamente y categorizado como: -, negativo; +, dbil positivo; ++, positivo
moderado; +++, positivo fuerte.
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Fig. 2 . Caractersticas histolgicas del tricoblastoma de conejo. (A) Tipo de cinta. Las
clulas tumorales estn dispuestas en finas ramificaciones con la presencia de PMBs
(flechas) en el estroma . L. Barra, 100 \ mu m. (B) Tipo trabecular. Las clulas tumorales
estn dispuestas en un patrn lobular y se observan PMBs prominentes (flechas) en la
periferia de los lbulos. L. Barra, 100 \ mu m. (C) Tipo trabecular. Mayor aumento de un
PMB que consiste en clulas con citoplasma escaso y prominente ncleo de forma
oval(flecha) en la periferia del lbulo tumoral. L. Barra, 25 \ mu m. (D) Tricoblastoma
maligno. El tejido tumoral (abajo) es contiguo con la epidermis superpuesta. L. Barra, 100
\ mu m. (E) Tipo mixto. Trabecular (izquierda) y ribbon (derecha). Las clulas de tipo basal
del tipo de cinta exhiben grnulos PAS-positivos. Bar, 50 \ mu m. (F) Tipo trabecular. El
parnquima tumoral est rodeado por el estroma positivo al azul de Alcian (pH 2,5). Barra,
100 \ mu m.

Caractersticas inmunohistoqumicas del tricoblastoma


Las caractersticas inmunohistoqumicas del tricoblastoma de conejo se resumen en
la Tabla 4 . Todos los tumores en el presente estudio mostraron una expresin
citoplasmtica uniforme e intensa de CK AE1 / AE3 y CK5 / 6 ( Figura 3 A). Palisading
clulas basales mostrar moderada a fuerte expresin citoplsmica de CK14 en cinta,
trabecular y tipos mixtos ( Fig. 3 B). En contraste, las clulas internas de estos tumores
fueron positivas para CK17 ( Fig. 3 C). La diferencia en la expresin de CK17 entre tipos
de tumor se atribuy a la proporcin de clulas internas dentro de las lesiones
examinadas. Slo cuatro casos (13, 16, 17 y 23) mostraron pocos reas inmunopositivas
dispersas para CK19, que se localizaron en el parnquima tumoral con diferenciacin hacia
las estructuras luminales (Fig. 3 D). CK18 no se expres en ningn caso. Intensa
inmunoreactividad a la vimentina se observ en el PMBs, mientras que el estroma tumoral
mostr una dbil a moderada reaccin ( Fig. 3 E). En el tricoblastoma maligno, se observ
un patrn inmunohistoqumico similar para todos los marcadores, excepto en algunas reas
de nidos de clulas tumorales densas y slidas . En estas reas, las clulas de tipo basal en
la periferia de los lbulos fueron dbilmente positivas para CK14. En contraste, se observ
una fuerte expresin de CK17, que se extiende desde la epidermis superpuesta y se ramifica
profundamente hacia la parte central de los lbulos tumorales ( Figura 3F).
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Fig. 3 . Caractersticas inmunohistoqumicas del tricoblastoma de conejo. (A) Tipo de


cinta. Fuerte CK5 / 6 expresin en el tumor, rodeado de CK5 / 6-negativo denso
PMBs. Barra, 100 \ mu m. (B) Tipo trabecular. Fuerte expresin de CK14 en las clulas
tumorales basales del palisado en la periferia del tumor. Barra, 100 \ mu m. (C) Tipo
mixto. CK17 en las clulas internas del tumor. Barra, 100 \ mu m. (D) Tipo
trabecular. CK19 en algunas partes del tumor. Barra, 100 \ mu m. (E) Tipo
trabecular. Vimentina se expresa fuertemente en las PMBs (flechas) y moderadamente en
el estroma tumoral (punta de flecha). Bar, 50 \ mu m. (F) Tricoblastoma
maligno. Inward invaginacin de las clulas tumorales CK17-positivos de la epidermis para
formar lbulos tumorales. Barra, 100 \ mu m.

Discusin
Los tricoblastomas de conejo en el presente estudio se localizaron principalmente en el
cuello, cabeza, flanco y tronco dorsal. No se observ ninguna predisposicin a la raza o
sexo. Se observ una presencia mltiple de tricoblastoma en tres conejos, lo que sugiere la
predisposicin de los conejos al desarrollo de este tumor.

Histopatolgicamente, los tricoblastomas eran de tipo cinta, trabecular o mixto, como se


observa en tumores caninos y felinos equivalentes. Estos patrones pueden ser explicados
por la intensidad de la proliferacin del estroma colgeno . Por ejemplo, el aumento de los
elementos estromales en el tipo de cinta puede limitar la proliferacin de clulas tumorales,
resultando en su disposicin similar a un cordn, mientras que menos tejido estromal en el
tipo trabecular permite un amplio espacio para que las clulas tumorales proliferen, dando
lugar a lobular, fascicular o estructuras nodulares ( De Vico et al. , 2011 ).

En el presente estudio, se observ una tincin PAS dbil a moderada de las clulas
tumorales en 18 (60%) de 30 tricoblastomas, lo que sugiere una diferenciacin ocasional de
las clulas tumorales con las de la vaina externa de la raz. Adems, tanto
el estromaperitumoral como el revestimiento drmico de los segmentos de folculos
pilosos normales mostraron una intensidad de azul Alcian ms intensa a pH 2,5 en
comparacin con pH 1,0, lo que sugiere que el cido hialurnico puede ser la
principal mucina cida en estas estructuras. Los hallazgos histoqumicos destacan un
posible origen del tricoblastoma de las regiones suprabulbar e istmo del folculo piloso en
conejos.

Las PMB son un rasgo histopatolgico caracterizado por distintos grupos


de fibroblastosespecializados en el estroma peritumoral, y estas estructuras se parecen
mucho a la papila drmica ( Brooke et al. , 1989; Campos et al. , 2014 ). En el hombre, los
PMBs han sido identificados en las lesiones de tricoepitelioma y fibroma tricoblstico
( Brooke et al. , 1989, Altman et al. , 1995; du Toit et al. , 2016 ), pero en animales los
PMBs se han descrito slo en unos pocos casos de tricoblastoma canino ( Campos et al. ,
2014, Mineshige et al. , 2014). En el presente estudio, se observaron PMBs abundantes en
la mayora de los tumores, lo que implica que la formacin de papila drmica aberrante es
ms prominente en tricoblastomas de conejo que en aquellos que surgen en otras especies.

Aunque la inmunohistoqumica (IHC) rara vez se requiere para llegar a un diagnstico


definitivo de tricoblastoma, el perfil CK es til para determinar el origen celular y la
diferenciacin de tumores tricoepiteliales ( Demirkesen et al. , 1995, Ohnishi y Watanabe,
1999, Walter, 2000, Kato et al. , 2007, Campos et al. , 2014 ). CK14 es una clula
basal marcador de la epidermis y del folculo piloso, mientras CK18 y CK19 se expresan en
las clulas luminales de glndulas apocrinas ( Walter, 2000; Kato et al. , 2007; Bragulla y
Homberger, 2009 ). CK17 se expresa en la vaina externa de la raz de los folculos pilosos
(Chu y Weiss, 2002; Bragulla y Homberger, 2009 ). En el hombre, CK17 y CK19 tambin
se conocen como marcadores epidrmicos de clulas madre y, en particular, la expresin de
CK17 se ha asociado con la formacin de placodos ectodrmicos durante la fase temprana
de la morfognesis del folculo piloso ( McGowan y Coulombe, 1998; Bragulla y
Homberger, 2009). ). Como se sabe que los tumores epiteliales conservan la CK asociada
con su clula de origen ( Moll et al. , 2008), Se usaron marcadores CK para investigar la
naturaleza del tricoblastoma de conejo. En el presente estudio, CK AE1 / AE3 y CK5 / 6,
que son marcadores generales para los tejidos epiteliales, se expresaron difusamente en los
tricoblastomas, as como en la epidermis normal y los folculos pilosos. Por el contrario,
CK14 y 17 se localizaron dentro de diferentes compartimentos tumorales, mientras que su
co-expresin se observ en la epidermis de conejo normal y vaina de la raz externa del
folculo piloso. En el tricoblastoma maligno, se observ la invaginacin hacia el interior de
las clulas tumorales positivas a CK17 de la epidermis ( Figura 2F ). Esta lesin fue
morfolgicamente similar a la aparicin de la formacin de folculos pilosos normales en
la piel fetal humana y murina, Donde hay expansin hacia abajo de las clulas CK17
positivas de la placoda que eventualmente forma el germen pelo primario ( McGowan y
Coulombe, 1998; Coolen . Et al , 2010 ).

El etiquetado diferencial de CK14 y CK17, incluyendo la invaginacin observada de


clulas tumorales positivas a CK17 de la epidermis (caso 30) y la presencia de PMB
peritumorales, que se asemejaba a la condensacin drmica en la morfognesis del folculo
piloso, sugiere que el desarrollo de tricoblastoma de conejo puede imitar el etapa
intermedia de la formacin embrionaria del folculo piloso. Se produjo una estrecha
interaccin entre las clulas tumorales de tricoblastoma y los componentes drmicos
adyacentes, lo que condujo a la agregacin de clulas mesenquimales drmicas y aumento
de la mucinosasustancia alrededor de los lbulos tumorales. El aumento de la densidad
celular drmica, la formacin de PMB y la produccin de mucina cida simulan la capa
drmica embrionaria y pueden proporcionar un microambiente ptimo para el desarrollo
continuo de un tumor epitelial ( Jahoda, 1992; Yang y Cotsarelis, 2010 ). En la etapa
posterior, los abundantes fibroblastos drmicos producen suficientes fibras de colgeno,
que eventualmente limitan el espacio disponible para la diferenciacin de
clulas tumorales y, como se mencion anteriormente, esto puede contribuir al diferente
patrn proliferativo y naturaleza bien delimitada del tricoblastoma.

La significacin de la expresin de CK19 en el folculo piloso de conejo y en


tricoblastomas no est clara, ya que la expresin se observ con poca frecuencia y, si la
hubo, la reactividad fue dbil. De acuerdo con un estudio previo de un tricoblastoma canino
( Campos et al. , 2014 ), la expresin de vimentina en PMBs, as como en las papilas
drmicas del folculo piloso, se observ en el presente estudio. Adems, PMBs se
localizaron con frecuencia dentro del estroma peritumoral y se tieron de azul con tincin
tricrmica de Masson. Tomados en conjunto, estos hallazgos sugieren que los PMB pueden
derivarse del germen de la papila drmica.

En conclusin, el presente estudio ha descrito las caractersticas histopatolgicas y el perfil


inmunohistoqumico del tricoblastoma de conejo, as como la piel de conejo normal. Al
igual que en otras especies, el tricoblastoma de conejo tiene un parecido
inmunohistoqumico con el folculo piloso embrionario. Adems, los PMBs observados
dentro del estroma peritumoral son una caracterstica histolgica importante del
tricoblastoma de conejo y estas estructuras se asemejan a la condensacin drmica
embrionaria durante el desarrollo del folculo piloso.

Expresiones de gratitud
Los autores agradecen a la Sra. S. Kato su valiosa asistencia tcnica. Esta investigacin no
recibi ninguna subvencin especfica de las agencias de financiamiento en los sectores
pblico, comercial o sin fines de lucro.

Declaracion de conflicto de interes


Los autores declaran que no existen conflictos de intereses potenciales relacionados con la
publicacin de esta investigacin.