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Reaccin en cadena de la

polimerasa y subtipos

Alumnos: Francisca Crcamo


Profesor: Solange Rivas
Natalia Landeros
Asignatura: Citogentica
Fecha: 3 de Octubre del 2017
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Es una tcnica que es capaz de generar cantidades ilimitadas de una secuencia


que deseamos estudiar. Entonces, la PCR es capaz de amplificar una secuencia
especifica de DNA o RNA millones de veces.

Esta tcnica, consta de tres etapas:


1. Desnaturalizacin: Consiste en separar las dos hebras del ADN por medio
de temperatura, aproximadamente a 94c.
2. Hibridacin o alineamiento: Proceso en el cual se unen los cebadores a sus
secuencias complementarias. Los cebadores, hibridan especficamente, es
decir, se unen a las dos hebras complementarias del segmento de ADN el
cual deseamos amplificar.
3. Extensin : Tambin se le llama sntesis del ADN, en la cual la enzima ADN
polimerasa, trifosfatos de desoxirribonucletidos alarga los cebadores,
incorporando los desoxinucletidos cuyas bases son complementarias a las
de la hebra que le sirve de molde. La extensin de las cadenas es en
direccin de la sntesis del ADN, es decir, de 5 a 3.
La temperatura ptima para la reaccin es de 72 C, ya que a esa
temperatura la enzima es funcional. Al final del ciclo, se habrn formado los
amplicones con un tamao dictado por el nmero total de pares de bases
que deber ser conocido por el investigador.

En la tcnica de PCR, se realizan entre 20 a 30 ciclos, y con esto se pueden


obtener varios millones de copias de secuencias o fragmentos de DNA.

Finalmente, para lograr una correcta visualizacin, los amplicones son


visualizados a travs de una electroforesis en geles de agarosa.

Esta tcnica, podra ser utilizada para el diagnstico de la fibrosis qustica.


RT-PCR:

Tambin denominada PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR, reverse


transcriptase PCR). Lo primero es la sntesis de un cDNA de cadena nica a partir
del mRNA de inters con la misma transcriptasa inversa utilizada para preparar
genotecas de clones de cDNA.

Luego se aaden cebadores de PCR y DNA polimerasa, como en el caso de la


PCR para DNA. Uno de los oligonucletidos ceba la sntesis de la segunda
cadena de cDNA que, en su forma de doble cadena, sirve como diana para la
amplificacin con PCR.

Esta tcnica, se puede utilizar para la Deteccin de secuencias del gen BCR-ABL
mediante RT-PCR en pacientes con leucemia

PCR cuantitativa:

Tcnica que determina en tiempo real el incremento en la cantidad del producto


PCR generado durante la reaccin PCR.

El objetivo de la PCR en tiempo real es detectar y cuantificar las secuencias


especficas de cidos nucleicos mediante el uso de reporteros fluorescentes
en la reaccin.

El fundamento de esta tcnica se basa en la PCR punto final, slo que la forma en
cmo se detectan y analizan los productos de la amplificacin es diferente. El
trmino en tiempo real se refiere a que la deteccin de los productos amplificados
sucede en cada ciclo de la reaccin. Adems, el trmino cuantitativo hace
referencia a que es posible cuantificar la cantidad de ADN en la muestra, a
diferencia de la PCR punto final en donde no es posible detectar en tiempo real ni
cuantificar la secuencia blanco.

La PCR cuantitativa, se puede utilizar para el diagnstico de las Leucemias.

PCR-multiplex:

Tambin denominadas PCR mltiples (multiplex-PCR o mPCR), son reacciones


que consiguen amplificar simultneamente en un nico tubo, es decir, una nica
reaccin a diferentes secuencias diana.
A menudo, esta variacin de la PCR se utiliza en microbiologa, y especficamente
se puede utilizar para la deteccin de enfermedades de transmisin sexual.

PCR-RFLP

Es un tipo de PCR, llamada tcnica de polimorfismo de longitud de fragmento de


restriccin (RFLP).

Esta Tcnica se basa en el corte con endonucleasas de restriccin de los


productos amplificados por PCR. Si dos amplicones presentan una variacin de la
secuencia nucleotdica, en los sitios de reconocimientos de las enzimas de
restriccin, generarn distintos patrones de fragmentos.

Un posible diagnostico a una patologa o mutacin gentica, es la determinacin


de CYP3A4*1B mediante PCR-RFL en la susceptibilidad del cncer de mamas.
Nested-PCR

Tambin conocidad como PCR anidada, variante de la PCR convencional que


trata de dos rondas de amplificacin con distintos pares de cebadores en cada
una, y que tiene por objetivo aumentar la sensibilidad y la especificidad de la
deteccin.
- Primero se realiza una reaccin con los cebadores externos para amplificar
una regin de ADN ms extensa, que contiene el segmento diana.
- Posteriormente, este producto de amplificacin se utiliza como molde de
una segunda PCR con los cebadores internos para amplificar la regin
especfica

Esta tcnica, se puede utilizar para el gen VHE.


Bibliografa

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