Politcnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid. Facultad de Ciencias Bsicas, Sociales y Humanas.

Tecnologa en Qumica Industrial y de Laboratorio. Laboratorio de anlisis instrumental.

Johana Monsalve Giraldo CC. 1036395140

ANLISIS DE COMPUESTOS LQUIDOS, SLIDOS Y EN FASE VAPOR

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RESUMEN

La tcnica de espectrometra por UV/VIS tiene varias aplicaciones, se utiliza habitualmente en la

determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy
conjugados, en este trabajo la utilizamos para la cuantificacin de protenas por medio de una solucin
biuret. La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un
complejo de Cu2+. En esta prctica se determina la cantidad de protena en un salchichn marca Zen,
preparando estndares de soluciones de una protena de albumina suero bovina, realizando una curva de
calibracin por medio de la absorbancia, nuestra muestra no estn entre los estndares preparados.

PALABRAS CLAVES

Espectrometra UV/VIS, iones metlicos, compuestos orgnicos, cuantificacin de protenas, biuret,

salchichn, estndares.

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ABSTRACT

The technique of UV / VIS spectrometry has several applications, is usually used in the quantitative
determination of solutions of transition metal ions and highly conjugated organic compounds, in this work
we use it for the quantification of proteins by means of a biuret solution. The reaction is based on the
formation of a violet compound, due to the formation of a Cu 2+ complex. In this practice, the amount of
protein in a Zen salami is determined by preparing standard solutions of a bovine serum albumin protein,
making a calibration curve through absorbance, our sample is not among the standards prepared.

KEY WORDS:

UV / VIS spectrometry, metal ions, organic compounds, protein quantification, biuret, salchichon, standards.

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 1. INTRODUCCIN Preparar distintos estndares de diferentes
concentraciones.
La tcnica consiste en analizar la radiacin
Determinar la concentracin de acuerdo a
infrarroja que es absorbida al atravesar esta un
un rea y un tiempo de retencin.
compuesto dado, de tal manera que el espectro
infrarrojo registra la radiacin transmitida frente a
la frecuencia de la radiacin incidente.

Para que las molculas absorba radiacin IR que

induzcan vibracin en los enlaces, debe existir un 2. REPORTE DE RESULTADOS
cambio en el momento dipolar de la molcula y
TRATAMIENTO DE DATOS Y REPORTE DE
sus vibratos.
RESULTADOS
La vibraciones en el IR son ms fuertes cuanto
mgsto
mayor sea el cambio en el momento dipolar (C-O ppm=
Lsln
mas fuerte que C-C). (1)

La tcnica consiste en analizar la radiacin gsto

C=
infrarroja que es absorbida al atravesar esta un Lsln
compuesto dado, de tal manera que elespectro
infrarrojo registra la radiacin transmitida frente a Solucin madre
la
1000 mg
25 mL x =25 mg=0,025 g
frecuencia de la radiacin incidente. 1000 mL

Para que las molculas absorba radiacin IR que

induzcan vibracin Concentracin soluciones

en los enlaces, debe existir un cambio en el Cinicial x V final

cf =
V final
momento dipolar de la

molcula y sus vibratos. Para 2 ml

La vibraciones en el IR son ms fuertes cuanto 10 g 1000 mg
mayor sea el cambio 2,0 ml x X
10 L 1g
Cfinal= =2000 ppm
10 ml
en el momento dipolar (C-O mas fuerte que C-C).

2. OBJETIVOS Para 1,6 ml

2.1 GENERAL: Cuantificar la cantidad de 10 g 1000 mg

1,6 ml x X
cafena contenida en una bebida comercial 10 L 1g
Cfinal= =1600 ppm
mediante cromatografa lquida de alto 10 ml
rendimiento o HPLC por sus siglas en ingls.

2.2 ESPECFICOS:
Para 1,2 ml
Distinguir los componentes bsicos de un
equipo de cromatografa liquida de alta
resolucin.
 10 g 1000 mg y18016 109404618016
1,2 ml x X x= = =33,1218
10 L 1g 32487 32487
Cfinal= =1200 ppm
10 ml

Para 0,8 ml

10 g 1000 mg
0,8 ml x X ANALISIS DE RESULTADOS
10 L 1g
Cfinal= =800 ppm
10 ml
En anlisis instrumental para la cuantificacin o
determinacin de una analito en una muestra por
Para 0,4 ml lo general siempre se realiza una curva de
calibracin como marco de referencia, en este
10 g 1000 mg
0,4 ml x X caso en particular se realiz con la preparacin de
10 L 1g
Cfinal= =400 ppm varias soluciones estndares a diferentes
10 ml
concentraciones, los valores fueron
2000,1600,1200,800,400 ppm. Para esta prctica
CONCENTRACIN AREA
en partculas se realiz dichas preparaciones de
2 ppm 126604
una solucin madre de albmina suero bovino, y
20 ppm 614081
40 ppm 1346258 que nos sirvi para calcular la concentracin de
60 ppm 1900693 una muestra problema, en esta prctica se utiliz
80 ppm 2664866 salchichon Zenu.
MUESTRA 1094046
Tabla 2. Concentraciones estndares. Existen diferentes mtodos para la cuantificacin
de protenas. [3]Muchos de estos mtodos se
basan en: a) la propiedad intrnseca de las
protenas para absorber luz en el UV, b) la
3000000 formacin de derivados qumicos, o c) la
capacidad que tienen las protenas de unir ciertos
2500000 f(x) = 32487.23x + 18016.26
colorantes. Especficamente, el mtodo de Biuret
R = 1
2000000 es uno de los mtodos ms utilizados debido a su
simplicidad. Se basa en la formacin de un
1500000 complejo coloreado en medio bsico entre el
Linear () Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos.
1000000
Para la cuantificacin de protenas como se dijo
500000 anteriormente existen varios mtodos, en la
mayora de estos se utiliza la determinacin por
0
colorimetra, es decir existe una relacin
0 102030405060708090
directamente proporcional entre la magnitud
analizada y la intensidad del color, lo cual genera
Figura 1. Curva de calibracin que a mayor concentracin o cantidad de protena,
mayor ser la intensidad del color, para esta
prctica en especfico es un tono violeta el cual se
CONCENTRACION DE LA RECTA intensifica en el caso de las soluciones, a las
cuales se le adiciono en mayor cantidad la
Y =32487 x +18016 protena de suero bovino.

Para la determinacin de la prctica se generaron

varios errores, en primer lugar se deba pesar
exactamente 1,5 gramos de el salchichon , y esto
se realiz en una gramera convencional y no en
una balanza analtica que es lo indicado e ideal, de
esto se puede generar que la cantidad de protena
necesaria para la medicin de la absorbancia no
fuera suficiente; en segundo la solucin que se le
deba adicionar a nuestra muestra problema la
solucin buffer no estaba fra, esta estaba a
temperatura ambiente.
La adicin de la solucin buffer fra se debe a que
con esta se trata de aislar la protena de otros
componentes que contenga el salchichon; el
siguiente paso fue macerar la muestra, con esto se
garantiza el rompimiento de las clulas y la
liberacin de la mayor cantidad de protena.
Para la cuantificacin de dicha protena se utiliz
el mtodo mencionado anteriormente biuret, el
cual contiene CuSO4, EDTA, KI, NaOH, para
esto el fundamento es que se forma una complejo
de coordinacin entre los iones Cu2+ y el H de los
compuestos nitrogenados(NH) de las aminas que
contiene los aminocidos de la protena dando as
el color violeta mostrado.
[5]El porcentaje de transmitancia se define como
la cantidad de energa que atraves la muestra sin
ser absorbida, es inversamente proporcional a la
absorbancia y a la concentracin, por esto las
soluciones estndares de alta concentracin tienen
baja transmitancia.
Al construir la primera curva de calibracin el
R2= 0,973, esto puede indicar varias cosas, la
linealidad no muy correcta pero que se tiene una
lnea de tendencia muy cercana a 1. A pesar de
tener una curva de calibracin apropiada, al
interpolar la concentracin desconocida de la
protena en el salchichn, esta sale del rango
establecido. Esta situacin no es la ms indicada y
no se previ con anticipacin, ya que para que d
un valor exacto debe estar dentro del rango y no
fuera de este; como se puede observar al calcular
la concentracin con la ecuacin de la recta, nos
dio un valor muy bajo y negativo; lo que indica
que est bien hecha la curva pero que nuestra
concentracin no se puede medir por la frmula
que nos da la recta. Esto pudo ocurrir por diversos
factores como el pesaje y la preparacin de la
soluciones. Se debieron corregir las
concentraciones de las soluciones estndares
preparndolas a concentraciones ms bajas; por
eso las concentraciones de mi muestra dan valores
errneos en el clculo de la concentracin.
La segunda grafica se realiz con los mismos
valores de la primera grafica pero se le adiciono
otro punto, el cual no es el ms correcto, pero se
puede suponer, diciendo que a concentracin= 0,
la absorbancia= 0, como se puede observar el R 2
nos dio muy bajo con un valor de 0,4762, lo que
indica la no linealidad de la curva y que nos esta
construida de una forma correcta, pero al calcular
la concentracin con la ecuacin de la recta, nos
dio un valor ms coherente respecto con la
prctica, sin embargo no es del todo confiable,
porque no se tomaron las precauciones correctas
al darnos cuenta que nuestra muestra no estaba en
el rango deseado.
CAUSAS DE ERROR
CONCLUSIONES
En esta prctica se tuvieron varios errores
en las mediciones ya que ciertos factores
influyeron en la cuantificacin de la
muestra.
La absorbancia de la muestra nos dio por
fuera de la curva de calibracin, lo que
indica que se hizo un tratamiento adecuado
de los estndares, pero no de la muestra
La idea de un laboratorio es poder
aprovecharlo al mximo y utilizar los
instrumentos, en estas prcticas el uso d
estos es muy restringido.
Las curvas de calibracin sirven para
observar que tan acordes estn cada uno de
nuestros puntos entre s, con esta prctica
se realizaron una curva de calibracin pero
esa nos dio con un coeficiente de
correlacin muy bajito quiere decir que se
realiz de manera inadecuada la utilizacin
del instrumento o las muestras preparadas
REFERENCIAS
1. http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/
2. Segal, C. (2005) Manual de prcticas de
biologa molecular de la clula. Editorial
publidisia.
3. Bernal de Ramrez,I. 1993. Anlisis de
alimentos, Academia Colombiana de ciencias
exactas, fsicas y naturales Coleccin Julio
Carrizosa Valenzuela, No 2. Bogot.
4. CASTRO EUSSE, Federman. Anlisis
Instrumental I, Prcticas de Laboratorio. 2da Ed.
2003
5. Mtodos para la cuantificacin de protenas
Emilio Fernndez Reyes y Aurora Galvn Cejudo.
Departamento de Bioqumica y Biologa
Molecular, Campus Universitario de Rabanales,
Edificio Severo Ochoa, 14071-Crdoba